补肾活血方对兔NPMSCs移植治疗退变椎间盘P 38 MAPK信号通路的影响

目的探讨补肾活血方对兔髓核间充质干细胞(nucleus pulposus-derived mesenchymal stem cells,NPMSCs)移植治疗退变椎间盘P 38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,P 38 MAPK)信号通路的影响。方法选取128只SPF级健康新西兰大白兔,其中2例用于NPMSCs的获取、纯化及培养,选取24只为假手术组(A组);兔退变椎间盘模型成功100只,模型组(B组,24只)、补肾活血方组(C组,24只)、NPMSCs移植组(D组,24只)、补肾活血方+NPMSCs移植组(E组,24只),死亡6只。每组在治疗前、治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周4个时间点均处死6只兔,取相应椎间盘,采用酶联免疫测定每组大兔不同时间点椎间盘P 38 MAPK、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP-3)、基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinase 7,MMP-7)的表达。结果(1)各组变化趋势:A组、B组组内不同时间点P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达差异无统计学意义(P>0.05);C组、D组、E组P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达与治疗前、治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周呈下降趋势,各组组内差异有统计学意义(P<0.01)。(2)与A组比较:B组、C组、D组、E组P38MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗前、治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周均升高,组间差异有统计学意义(P<0.01)。(3)与B组比较:C组、D组、E组P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗前差异无统计学意义(P>0.05);在治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周均降低,组间差异有统计学意义(P<0.01)。(4)与C组比较:D组P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗前、治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周时同期差异无统计学意义(P>0.05);E组P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周均降低,组间差异有统计学意义(P<0.01)。(5)与D组比较:E组P 38 MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周均降低,组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论补肾活血方对兔NPMSCs移植治疗退变椎间盘具有协同作用;其机制可能与抑制P 38 MAPK信号通路,下调MMP-3、MMP-7蛋白相关。

黄芪甲苷通过激活JNK/p38 MAPK信号通路对急性脑梗死模型大鼠神经功能的影响

目的分析黄芪甲苷通过激活c-Jun氨基末端激酶(JNK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路对急性脑梗死模型大鼠神经功能的影响。方法选取50只健康SPF级SD大鼠,10只作为对照组,其余40只建立急性脑梗死模型,其中30只大鼠建模成功,将30只大鼠随机分为模型组、药物对照组、黄芪甲苷组,每组10只对建模成功的大鼠进行给药处理,对照组、模型组大鼠采用0.9%氯化钠溶液灌胃,药物对照组给予20 mg/kg阿托伐他汀灌服,黄芪甲苷组给予70 mg/kg黄芪甲苷应用液灌服,均灌胃12周。观察4组大鼠病理组织学、神经功能[神经元特异性烯醇化酶(NSE)、星形胶质源性蛋白(S100β)]、氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)]、炎性因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、C反应蛋白(CRP)]、JNK/p38 MAPK通路相关mRNA表达量、JNK/p38 MAPK通路。结果与对照组比较,模型组、药物对照组、黄芪甲苷组SOD、CAT降低,NSE、S100β、MDA、ROS、TNF-α、IL-1β、CRP、JNK、p38 MAPK mRNA、JNK、p38 MAPK升高(P<0.05);与模型组比较,药物对照组、黄芪甲苷组SOD、CTA升高,NSE、S100β、MDA、ROS、TNF-α、IL-1β、CRP、JNK、p38 MAPK mRNA、JNK、p38 MAPK降低,(P<0.05);与药物对照组比较,黄芪甲苷组SOD、CTA升高,NSE、S100β、MDA、ROS、TNF-α、IL-1β、CRP、JNK、p38 MAPK mRNA、JNK、p38 MAPK降低(P<0.05)。结论采用黄芪甲苷对急性脑梗死模型大鼠干预,可改善大鼠氧化应激指标,降低炎性反应,使大鼠神经功能得到改善,其作用机制可能与调控JNK/p38 MAPK信号通路有关。

丹参酮ⅡA通过调控p38MAPK/NF-κB信号通路减轻糖尿病雄性大鼠生殖损伤实验研究

目的:探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对糖尿病雄性大鼠生殖损伤的影响及其机制。方法:随机选取43只雄性SD大鼠中的35只通过高糖高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病动物模型,并分为模型组、TanⅡA(6 mg/kg)组、SB203580[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂,2 mg/kg]组和TanⅡA+SB203580(6 mg/kg+2 mg/kg)组,每组8只;剩余8只设为正常组。给药治疗4周后,检测空腹血糖(FBG)水平。ELISA法检测血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)含量。检测精子质量(浓度、存活率和活力),测量睾丸重量并计算睾丸指数。HE染色法观察睾丸组织病理学改变。检测睾丸组织总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力和丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-8含量。Western blot法检测睾丸组织p38MAPK、p-p38MAPK、核因子-κB p65(NF-κB p65)、p-NF-κB p65、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达。结果:与模型组比较,TanⅡA组、SB203580组和TanⅡA+SB203580组FBG水平比较差异无统计学意义(均P>0.05);T、LH、FSH含量和精子浓度、存活率及活力升高(均P<0.05);睾丸重量和睾丸指数升高(均P<0.05);睾丸组织病理学改变明显改善;T-SOD、CAT活力升高且MDA、TNF-α、IL-1β、IL-8含量降低(均P<0.05);HMGB1水平和p-p38MAPK/p38MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低(均P<0.05)。TanⅡA+SB203580组以上指标优于TanⅡA组和SB203580组(均P<0.05)。结论:TanⅡA可能通过抑制p38MAPK/NF-κB信号通路,降低氧化应激水平和炎症反应,从而减轻糖尿病雄性大鼠生殖损伤。

叶酸通过JNK/p38 MAPK信号通路调节小鼠C2C12成肌细胞分化

目的:观察叶酸(folic acid,FA)对小鼠C2C12成肌细胞增殖和分化的影响并探讨其作用机制。方法:(1)在小鼠C2C12成肌细胞增殖阶段,采用不同浓度(0、2.5、5、10和20μmol/L)的FA处理C2C12细胞,显微镜下观察各组细胞的状态,MTT法检测细胞活力,EdU法检测细胞增殖情况。(2)在小鼠C2C12成肌细胞分化阶段,将细胞分为对照(control,Ctrl)组(0μmol/L FA)和FA组(10μmol/L FA),于分化的第2天和第4天,采用免疫荧光染色和Western blot检测成肌细胞分化相关蛋白成肌细胞决定蛋白1(myoblast determination protein 1,MyoD)、成肌蛋白(myogenin,MyoG)和肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHC)的表达水平,并统计各组细胞肌管形成情况。(3)在小鼠C2C12成肌细胞分化第4天时,加入FA处理0、1、3和6 h,采用Western blot检测各时点c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(phosphorylated JNK,p-JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK)蛋白水平。(4)将分化4 d的小鼠C2C12成肌细胞分为Ctrl组、FA组、SP600125(JNK特异性抑制剂)组、SB2035805(p38 MAPK特异性抑制剂)组、FA+SP600125组和FA+SB203580组。C2C12成肌细胞先接受10μmol/L的SP600125或SB203580处理1 h,再经10μmol/L的FA处理24 h,FA组经10μmol/L FA处理24 h,Ctrl组不作处理。采用Western blot检测p-JNK、JNK、p-p38 MAPK、p38 MAPK和MyHC蛋白水平。结果:(1)与0μmol/L FA组相比,其余各浓度组的细胞数量明显增多,细胞活力显著提高(P<0.05),EdU阳性细胞率均显著增加(P<0.05)。(2)与Ctrl组相比,FA组MyoD、MyoG和MyHC的表达水平均显著提高(P<0.05),肌管融合指数显著增加(P<0.05或P<0.01)。(3)与0 h组相比,FA处理1、3和6 h后p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值均显著升高(P<0.05或P<0.01),且随着处理时间的延长,p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值呈现逐渐升高的趋势。(4)与Ctrl组相比,FA组p-JNK、p-p38 MAPK和MyHC蛋白水平显著升高(P<0.01);与FA组相比,FA+SP600125组p-JNK和MyHC蛋白水平显著降低(P<0.05),FA+SB203580组p-p38 MAPK和MyHC蛋白水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:FA可以通过激活JNK/p38 MAPK信号通路促进小鼠C2C12成肌细胞分化。

黄芪甲苷对慢性间歇性缺氧诱导的遗尿症大鼠TLR4-p38 MAPK通路的影响

目的 探讨黄芪甲苷对慢性间歇性缺氧诱导的遗尿症大鼠Toll样受体4(Toll-like receptor-4,TLR4)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38 MAPK)信号通路的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷中剂量组、黄芪甲苷高剂量组、去氨加压素组、脂多糖组、黄芪甲苷高剂量+脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)组,每组12只。除对照组外,其他组均需采用慢性间歇性缺氧诱导的方法构建遗尿症大鼠模型,各组大鼠每天于进入动物舱前1 h进行给药处理,1次/d,持续4周。末次处理24 h后,检测各组大鼠24 h排尿量及膀胱漏尿点压(bladder leak point pressures, BLPP)值的变化;ELISA法检测大鼠血清中抗利尿激素(antidiuretic hormone, ADH)含量;HE染色检测大鼠膀胱组织病理变化;比色法检测大鼠膀胱组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性、丙二醛(malonic dialdehyde, MDA)含量;Western blot检测大鼠膀胱组织中P2X3、TLR4、p-p38蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠膀胱组织病理损伤严重,24 h排尿量增多,BLPP值变小,ADH含量、SOD活性降低,MDA含量和P2X3、TLR4、p-p38蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷中剂量组、黄芪甲苷高剂量组、去氨加压素组大鼠膀胱组织病理损伤减轻,24 h排尿量减少,BLPP值变大,ADH含量、SOD活性升高,MDA含量和P2X3、TLR4、p-p38蛋白表达降低,LPS组大鼠膀胱组织病理损伤加剧,24 h排尿量增多,BLPP值变小,ADH含量、SOD活性降低,MDA含量和P2X3、TLR4、p-p38蛋白表达升高(P<0.05);与黄芪甲苷高剂量组比较,黄芪甲苷高剂量+LPS组大鼠膀胱组织病理损伤严重,24 h排尿量增多,BLPP值变小,ADH含量、SOD活性降低,MDA含量和P2X3、TLR4、p-p38蛋白表达升高(P<0.05)。结论 黄芪甲苷可能通过抑制TLR4/p38MAPK信号通路改善慢性间歇性缺氧诱导的大鼠遗尿症。

温胆汤通过调控p38 MAPK信号通路干预内淋巴积水形成的研究

目的基于p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路探讨温胆汤对内淋巴积水形成的影响。方法将30只豚鼠随机分为对照组、模型组、低剂量温胆汤组、中剂量温胆汤组、高剂量温胆汤组,每组6只。采用腹腔注射6μg/kg醋酸去氨加压素10 d的方法,对除对照组外的其他组豚鼠建立内淋巴积水模型;第11天开始,低、中、高剂量温胆汤组分别灌胃6.1 g/kg、12.2 g/kg、24.4 g/kg温胆汤颗粒剂,对照组和模型组灌胃等量双蒸水。持续灌胃10 d后处死豚鼠,免疫组化法检测耳蜗组织中炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)]和水通道蛋白2(AQP2)阳性表达情况,qRT-PCR法检测耳蜗组织中AQP2和p38 MAPK mRNA表达情况,Western blot法检测耳蜗组织中p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组耳蜗组织中IL-1β、IL-6、AQP2阳性表达吸光度值和AQP2 mRNA相对表达量、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均明显升高(P均<0.05),p38MAPK mRNA相对表达量无明显变化(P>0.05);与模型组比较,温胆汤各组耳蜗组织中IL-1β、IL-6、AQP2阳性表达吸光度值和AQP2 mRNA相对表达量、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均明显降低(P均<0.05),p38MAPK mRNA相对表达量均无明显变化(P均>0.05)。结论温胆汤可以有效改善醋酸去氨加压素诱导的豚鼠内淋巴积水,其机制可能与调控p38 MAPK信号通路和AQP2表达有关。

艾灸督脉组穴对血管性痴呆大鼠海马p38 MAPK信号通路及细胞凋亡的影响

目的基于p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路探究艾灸督脉组穴对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠的脑保护机制。方法将60只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(12只)和实验组(48只);实验组大鼠采用双侧颈总动脉永久结扎法复制VD大鼠模型,随后将模型复制成功的大鼠分为模型组、艾灸组、阻滞剂组、艾灸+阻滞剂组,每组12只;艾灸组大鼠取“百会”“大椎”“风府”穴,采用温和灸法治疗,每次30 min,每日1次,治疗6 d,休息1 d,连续治疗4周;阻滞剂组在模型复制前30 min腹腔注射p38 MAPK阻滞剂(10μmol/L SB203580),模型复制成功后隔日注射1次,每次每只大鼠按1 mL/kg注射10μmol/L SB203580,连续注射4周;艾灸+阻滞剂组大鼠在阻滞剂组干预方法基础上进行艾灸治疗。采用Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能,TUNEL法检测大鼠海马组织CA1区神经元凋亡率,Western blot法和RT-qPCR法分别检测大鼠海马组织CA1区p38 MAPK、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9蛋白及mRNA表达水平。结果与模型组比较,艾灸组、阻滞剂组、艾灸+阻滞剂组大鼠平均逃避潜伏期均显著缩短(P<0.05),穿越平台次数显著增加(P<0.05),海马组织CA1区神经元凋亡率显著降低(P<0.05),p38 MAPK、Caspase-3、Caspase-9蛋白及mRNA表达水平均显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);艾灸+阻滞剂组大鼠平均逃避潜伏期较艾灸组、阻滞剂组显著缩短(P<0.05),穿越平台次数显著增加(P<0.05),海马组织CA1区神经元凋亡率显著降低(P<0.05),p38 MAPK、Caspase-3、Caspase-9蛋白及mRNA表达水平均显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.05)。结论艾灸督脉组穴对VD大鼠的认知功能具有一定的改善作用,其作用机制可能与调控p38 MAPK信号通路抑制海马神经元凋亡有关。

下调PDCD4抑制MAP2K3和p38 MAPK的表达减轻LPS诱导的肾小管上皮细胞炎症和凋亡

目的研究程序性细胞死亡蛋白4(programmed cell death protein 4,PDCD4)在脓毒症诱导的急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)中的作用机制,以及调控PDCD4表达通过丝裂原活化蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAP2K3)和p38蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)对脓毒症AKI起到潜在治疗作用。方法用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激人肾小管上皮细胞(HK-2)构建脓毒症AKI细胞模型。进一步用腺病毒介导siRNA和过表达载体抑制和上调AKI细胞模型中PDCD4的表达;CCK-8法检测细胞增殖;用DCFH-DA及激光共聚焦显微镜检测细胞中ROS水平,用总SOD活性检测试剂和MDA检测试剂盒检测细胞中SOD和MDA水平;免疫共沉淀验证PDCD4和MAP2K3之间的蛋白相互作用;TUNEL染色法检测细胞凋亡;RT-qPCR和Western blot检测PDCD4及相关基因的mRNA和蛋白表达水平;ELISA法检测患者血清中炎症相关因子水平。结果LPS诱导可以促进HK-2细胞中PDCD4表达,下调PDCD4可抑制LPS诱导的HK-2细胞的炎症、氧化应激及细胞凋亡。数据库预测及免疫共沉淀证实PDCD4可以与MAP2K3相互作用,且在LPS诱导的HK-2细胞中,MAP2K3表达水平显著增强。MAP2K3过表达和p38 MAPK激动剂可以减轻PDCD4下调对LPS诱导的细胞炎症和氧化应激的影响并抑制细胞凋亡。结论下调PDCD4可以通过抑制MAP2K3和p38 MAPK从而抑制LPS诱导的肾小管上皮细胞的炎症和凋亡。

基于p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨藏红花素对糖尿病心肌病大鼠的影响

目的基于p38丝裂原活化蛋白激酶/核因子-κB(p38 MAPK/NF-κB)信号通路探讨藏红花素对糖尿病心肌病(DCM)大鼠的影响。方法取45只Wistar大鼠,随机选择8只作为正常组,其余大鼠采用高糖高脂饮食12周并负荷一次性30 mg/kg链脲佐菌素的方法构建DCM模型。将32只造模成功的大鼠随机分为模型组、藏红花素组、藏红花素+p38 MAPK抑制剂组和藏红花素+p38 MAPK激动剂组,每组8只。藏红花素组给予50 mg/kg藏红花素腹腔注射,藏红花素+p38 MAPK抑制剂组给予50 mg/kg藏红花素和5 mg/kg SB203580腹腔注射,藏红花素+p38 MAPK激动剂组给予50 mg/kg藏红花素和2 mg/kg ANS腹腔注射,正常组和模型组给予等体积生理盐水腹腔注射,均1次/d。连续注射12周后,心脏超声检测大鼠心功能指标[左心室收缩末期压(LVESD)、左心室舒张末期压(LVEDD)、左心室短轴缩短率(LVFS)],ELISA法检测血清心肌酶[谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)]和炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,苏木精-伊红、马森染色观察心肌组织病变和纤维化情况,RT-PCR法、免疫组织化学法检测心肌组织中p38 MAPK、NF-κB p65、转化生长因子-β1(TGF-β1)、I型胶原蛋白(Col-I)mRNA和蛋白表达情况。结果与模型组比较,藏红花素组、藏红花素+p38 MAPK抑制剂组大鼠LVESD、LVEDD及血清AST、LDH、CK-MB、IL-1β、IL-18、TNF-α水平均明显降低(P均<0.05),LVFS明显升高(P<0.05);心肌组织病变和纤维化情况均明显改善,心肌组织损伤评分和胶原容积分数均明显降低(P均<0.05);心肌组织中p38 MAPK、NF-κB p65、TGF-β1、Col-I mRNA相对表达量和蛋白表达积分吸光度均明显降低(P均<0.05)。与藏红花素组比较,SB203580可显著增强藏红花素对DCM大鼠心功能指标、心肌酶和炎症因子水平、心肌组织病变和纤维化情况、p38 MAPK/NF-κB信号通路相关因子mRNA和蛋白表达的调控作用,ANS则明显逆转藏红花素对DCM大鼠的上述作用。结论藏红花素可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路减轻炎症反应和组织纤维化,从而对DCM大鼠起到保护作用。

木犀草素阻断p38 MAPK通路对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的抑制作用研究

目的探讨木犀草素通过调控p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法子宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞系经不同浓度木犀草素处理24 h,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力以筛选最适木犀草素作用浓度,后将SiHa细胞分为对照组、木犀草素组、阳性药物组、抑制剂组和激活剂组,干预24 h后,采用倒置显微镜、细胞增殖试剂盒、划痕、Transwell小室和蛋白免疫印迹法测定细胞形态、增殖、迁移、侵袭及EMT和p38 MAPK通路相关蛋白表达的情况。结果根据CCK-8法确定木犀草素最适作用浓度为10μmol/L。与对照组相比,木犀草素组和阳性药物组细胞的生长受到抑制,增殖率、迁移率、侵袭数,以及波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和纤维连接蛋白(FN)表达水平、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值降低(P<0.05),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平上升(P<0.05);与木犀草素组相比,SB203580增强了、茴香霉素抑制了木犀草素对SiHa细胞的上述作用(P<0.05)。结论木犀草素可通过阻断p38 MAPK通路抑制SiHa细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT进程。

瓜蒌皮注射液调控JNK/p38通路对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤和凋亡的影响

目的探究瓜蒌皮注射液通过调节c-Jun N末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(JNK/p38)通路提高缺氧/复氧损伤条件下心肌细胞活力及抑制其凋亡的作用及可能机制。方法使用H9c2心肌细胞构建缺氧/复氧(H/R)模型,随后根据处理情况将细胞分为对照组、H/R组、H/R+瓜蒌皮组和H/R+瓜蒌皮+茴香霉素组。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞活力,试剂盒检测各组细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、半胱天冬酶3(Caspase 3)活性;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP末端标记法(TUNEL)检测各组细胞凋亡并采用免疫印迹(WB)检测各组细胞中凋亡相关蛋白如B细胞淋巴瘤2(BCL-2)、BCL-2相关的X蛋白(BAX)、前半胱天冬蛋白3(Pro-caspase 3)、裂解的半胱天冬酶3(Cleaved-caspase 3)及JNK/p38通路蛋白表达。结果与对照组相比,H/R组的细胞活力显著降低,LDH和Caspase 3活性显著增加,细胞凋亡率升高,促凋亡蛋白BAX、Pro-caspase 3、Cleaved-caspase 3的表达上升,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达下降;同时,JNK/p38通路蛋白(JNK、p-JNK、p38、p-p38)的表达水平也显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与H/R组相比,不同浓度的瓜蒌皮注射液处理后细胞活力均有所提升,尤其是2%瓜蒌皮注射液组表现出最佳效果(P<0.05)。与H/R组相比,H/R+瓜蒌皮组以及H/R+瓜蒌皮+茴香霉素组的细胞活力均显著升高,且两组的LDH和Caspase 3活性降低,细胞凋亡率及促凋亡蛋白(BAX、Pro-caspase 3、Cleaved-caspase 3)的表达下降,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达上升,JNK/p38通路蛋白(JNK、p-JNK、p38、p-p38)的表达受到抑制(P<0.05)。与H/R+瓜蒌皮组相比,H/R+瓜蒌皮+茴香霉素组细胞活力受到抑制,LDH和Caspase 3活性升高;BAX、Pro-caspase 3、Cleavedcaspase 3及JNK、p-JNK、p38、p-p38的表达显著上升,而Bcl-2表达下降(P<0.05)。结论瓜蒌皮注射液能够通过抑制JNK/p38通路的激活增加细胞活力并减少细胞凋亡。

左归丸对帕金森病轻度认知障碍患者P38 MAPK信号通路及认知功能的影响

目的探究左归丸对帕金森病轻度认知障碍(PD-MCI)患者P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及认知功能的影响。方法80例肝肾阴虚型PD-MCI患者随机均分为观察和对照组,对照组采用丁苯酞软胶囊口服治疗,观察组在对照组治疗基础上加左归丸加味治疗,均治疗8周;观察两组患者的疗效、中医证侯积分、P38 MAPK蛋白表达、认知行为功能[蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、日常生活行为能力量表(ADL)、简易智力状态检查量表(MMSE)]、炎症反应[尿酸(UA)、同型半胱氨酸(Hcy)]水平及治疗期间的不良反应。结果与对照组比较,观察组总有效率更高(P<0.05);治疗8周时,两组患者头或肢体震振、肢休拘痉、颈背僵直、腰膝酸软、胁肋疼痛、头晕头痛得分均较治疗前降低,且观察组低于对照组(P<0.05);两组患者P38 MAPK及p-JNK蛋白表达均较治疗前下降,且观察组低于对照组(P<0.05);与治疗前比较,治疗8周时两组肝肾阴虚型PD-MCI患者MMSE、MoCA得分均上升,ADL得分均下降;且观察组MMSE、MoCA得分高于对照组,而ADL得分低于对照组(P<0.05);与治疗前比较,治疗8周时两组患者肝肾阴虚型PD-MCI患者UA升高、Hcy下降,观察组Hcy低于对照组(P<0.05),治疗8周时两组UA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组患者治疗期间的不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论左归丸联合丁苯酞治疗PD-MCI可改善患者的认知功能,其机制可能与调节P38 MAPK蛋白表达和炎症反应有关。

PLA2G4C通过p38/MAPK信号通路介导线粒体自噬促进DLBCL进展的实验研究

目的研究磷脂酶A2ⅣC组(phospholipase A2 groupⅣC,PLA2G4C)在弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中的作用及其可能调节机制。方法通过免疫印迹法(Western blot)检测PLA2G4C在DLBCL组织和细胞中的表达。构建PLA2G4C过表达或敲低表达的DLBCL细胞系,后用自噬抑制剂氯喹(Chloroquine,CQ)或p38抑制剂SB203580处理细胞24h。实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PLA2G4C转染效率;Western blot检测PLA2G4C蛋白、线粒体自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/Ⅰ(microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ/Ⅰ,MAP1 LC3Ⅱ/Ⅰ),Beclin1,p62,PTEN诱导激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)和Parkin],p38/丝裂原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)通路相关蛋白[磷酸化p38/MAPK(phosphorylated-p38/MAPK,p-p38/MAPK)]表达水平;CCK-8法、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡能力。进一步构建异种移植瘤裸鼠模型,观察PLA2G4C对裸鼠体内肿瘤生长及线粒体自噬的影响。结果DLBCL患者淋巴瘤组织中PLA2G4C蛋白表达显著高于反应性增生淋巴结组织(3.47±0.42 vs 1.01±0.02),差异具有统计学意义(t=-37.002,P<0.001);DLBCL细胞中PLA2G4C蛋白水平显著高于人淋巴母细胞样细胞系和B细胞淋巴瘤细胞系,差异具有统计学意义(F=73.771,P<0.001)。沉默PLA2G4C显著降低DLBCL细胞活力和侵袭能力,诱导细胞凋亡(t=6.909~11.390);过表达PLA2G4C后结果与之相反(t=2.392~19.778),差异具有统计学意义(均P<0.001)。且过表达PLA2G4C显著促进线粒体自噬的发生,而CQ或SB203580处理则可显著逆转PLA2G4C过表达对DLBCL细胞生物学行为及线粒体自噬的作用。体内裸鼠实验显示,敲低PLA2G4C显著抑制移植瘤裸鼠体内肿瘤生长及线粒体自噬相关蛋白表达,差异具有统计学意义(t=13.816~25.926,均P<0.001)。结论PLA2G4C在DLBCL中表达显著上调,可能通过促进p38/MAPK信号通路介导的线粒体自噬,促进肿瘤细胞增殖和侵袭,抑制细胞凋亡,参与DLBCL的发生发展。

弥漫大B细胞淋巴瘤中ERK和p38的表达及临床病理学意义

目的探讨ERK和p38在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的表达与各临床病理指标之间的关系,及其与预后的相关性。方法运用免疫组化检测152例弥漫大B细胞淋巴瘤中ERK和p38阳性表达情况,应用SPSS 23.0软件分析其与各临床病理指标的关系。结果在DLBCL中,ERK、p38的阳性率分别为68.4%、50%,ERK、p38在肿瘤直径>4 cm中阳性表达率高,差异均有统计学意义,且均与肿瘤直径显著正相关。p38在结内病变和结外侵犯>2个淋巴结阳性表达率更高,差异有统计学意义,且与结外侵犯正相关,与原发部位负相关。多因素分析中,表现状态评分、LDH水平和R-CHOP治疗是影响DLBCL患者总生存期的独立危险因素。结论这些发现表明ERK和p38在DLBCL中的致癌作用,提示它们是DLBCL潜在的治疗靶点。

槲皮素通过调控p38/GSK3β途径调节上皮-间质转化抑制乳腺癌侵袭和转移

目的:探讨黄酮类化合物槲皮素对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MCF-7侵袭和转移的抑制作用及其具体作用机制。方法:采用0、25、50、100μM槲皮素处理乳腺癌细胞株MCF-7,命名为对照组、25μM组、50μM组和100μM组。分别通过Transwell检测细胞的侵袭和转移,Western Blotting检测上皮间质转化(EMT)相关标记物的表达水平以及p38/GSK3β途径分子的蛋白磷酸化水平。应用小分子抑制剂干扰相关通路后检测细胞侵袭和转移的变化。结果:槲皮素可以浓度依赖的方式抑制MCF-7的迁移、侵袭,E-cadherin的表达上升,N-cadherin和Vimentin表达下降。槲皮素能够以浓度依赖的方式降低p38和GSK3β途径分子的蛋白磷酸化水平。采用p38和GSK3β的抑制剂使E-cadherin的表达上升,N-cadherin和Vimentin表达下降,并抑制MCF-7的迁移和侵袭。结论:槲皮素可抑制TNBC侵袭和转移,其机制主要是通过抑制p38/GSK3β途径实现从EMT向MET的转变。

游泳运动对慢性非细菌性前列腺炎大鼠p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨游泳运动对慢性非细菌性前列腺炎(CAP)大鼠p38MAPK/NF-κB信号通路的影响。方法:雄性SD大鼠分为运动组、CAP模型组、正常组,每组10只,注射消痔灵制备大鼠模型,运动组每天游泳运动1次,时间为50min,6d/周,共游泳运动4周,模型组和正常组不开展游泳运动;末次游泳运动结束后2h,股动脉取血处死大鼠,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测大鼠血清p38MAPK、NF-κB p65、IL-1β、IL-4、TNF-α含量,观察三个组别大鼠前列腺组织病理学改变。结果:4周游泳运动结束后,模型组和运动组大鼠血清内p38MAPK、NF-κB p65、IL-1β、IL-4、TNF-α含量显著高于正常组(P<0.05),运动组大鼠血清内上述观察指标显著低于模型组(P<0.05);相关分析显示,CAP大鼠血清内IL-1β、IL-4、TNF-α水平与p38MAPK、NF-κB p65表达呈显著正相关(P<0.01),p38MAPK与NF-κB p65呈显著正相关(P<0.01);病理观察显示,与正常组比较,模型组大鼠前列腺组织慢性炎症病变明显,与模型组比较,运动组大鼠前列腺血管扩张程度、炎细胞浸润数量及范围、管腔狭窄及间质水肿纤维化的情况均有所减轻。结论:游泳运动能够抑制CAP大鼠血清内p38MAPK、NF-κB p65表达,下调IL-1β、IL-4、TNF-α水平,对大鼠CAP炎症发挥缓解作用。

抑制P38MAPK信号通路表达减轻大鼠神经病理性疼痛的机制

目的探究抑制P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)信号通路表达减轻大鼠神经病理性疼痛的机制。方法选取60只雄性无特定病原体(SPF)级大鼠(体质量200~220 g,3月龄左右),随机抽取10只作为假手术组,其余大鼠建立大鼠慢性压迫性损伤(CCI)模型。将成模大鼠[造模成功率为80%(40/50)]随机分为模型组、P38MAPK抑制剂组,造模后第6天分别鞘内注射生理盐水、P38MAPK抑制剂,2次/d,连续5 d。术后1、7、11 d测定各组大鼠机械性痛阈、运动功能评分。术后第11天处死大鼠,采用免疫组化法测定大鼠背根神经节P38MAPK、环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达。计量资料采用重复测量方差分析。结果假手术组大鼠机械性痛阈变化不明显;模型组大鼠第7天开始痛阈水平降低,至第11天降至最低;P38MAPK抑制剂组第7天痛阈水平降低,第11天升高(P<0.05),且高于模型组(P<0.05);模型组与P38MAPK抑制剂组在第7天出现明显运动功能障碍,第11天模型组运动功能障碍程度增加,第11天P38MAPK抑制剂组运动功能障碍程度减轻(P<0.05),且运动功能评分低于模型组(P<0.05);假手术组P38MAPK免疫阳性细胞表达<P38MAPK抑制剂组<模型组[(7.35±0.63)%比(25.36±1.85)%比(60.23±2.17)%](P<0.05);假手术组COX-2蛋白阳性细胞表达<P38MAPK抑制剂组<模型组[(5.21±2.23)%比(15.14±2.01)%比(33.43±3.02)%](P<0.05)。结论P38MAPK信号通路与神经病理性疼痛发生有关,抑制P38MAPK信号通路表达可减轻大鼠神经病理性疼痛。

龙血素B通过P38MAPK信号通路调控MC3T3-E1成骨分化和骨形成的机制

目的:探究龙血素B对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1细胞)成骨分化和骨形成的影响以及其通过P38MAPK信号通路调控成骨分化和骨形成的机制。方法:培养MC3T3-E1细胞,加入不同浓度(0、15、30、60、90、120μmol/L)龙血素B,采用CCK8法和流式细胞术(FCM)检测不同时间(24h、48h、72h)MC3T3-E1细胞增殖能力和凋亡情况,确定龙血素B促MC3T3-E1细胞成骨最佳的药物浓度及作用时间。培养MC3T3-E1细胞并分为空白组(不作干预),龙血素B组(加入龙血素B共培养),龙血素B+阻断剂组(加入龙血素B和P38抑制剂SB203580共培养),进行干预实验;采用碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒测定各组细胞ALP活性,qRT-PCR法检测各组细胞骨桥蛋白(OPN)基因、骨钙素(OCN)基因、骨唾液蛋白(BSP)基因表达水平,茜素红染色法观察各组细胞骨形成能力。结果:龙血素B可促进MC3T3-E1细胞增殖并抑制其凋亡,效果与浓度和干预时间相关,在90μmol/L浓度下干预48h促MC3T3-E1细胞生长作用最强;干预结束后第1、3、5天,龙血素B组细胞ALP活性较空白组升高,龙血素B+阻断剂组细胞ALP活性较龙血素B组降低(P<0.05);龙血素B组细胞OPN、OCN、BSP基因表达水平较空白组升高,龙血素B+阻断剂组细胞OPN、OCN、BSP基因表达水平较龙血素B组降低(P<0.05);干预结束后第21天,龙血素B组细胞钙化结节区域面积较空白组增大,龙血素B+阻断剂组细胞钙化结节区域面积较龙血素B组减小(P<0.05)。结论:龙血素B可提高MC3T3-E1细胞增殖活性,并通过激活P38MAPK信号通路促进MC3T3-E1细胞成骨分化和骨形成。

基于ERK/p38 MAPK信号通路探究解毒活血汤治疗Ⅲ型前列腺炎的作用机制

目的探究解毒活血汤调控ERK/p38 MAPK信号通路治疗Ⅲ型前列腺炎的作用机制。方法采用去势手术+苯甲酸雌二醇(EB)诱导慢性前列腺炎大鼠模型。36只SD大鼠随机分为空白组(生理盐水,4 mL·kg^(-1))、模型组(生理盐水,4 mL·kg^(-1))、阳性药物对照组(前列康片混悬液,4 mL·kg^(-1))、解毒活血汤低(4 mL·kg^(-1))、中(8mL·kg^(-1))、高剂量组(12 mL·kg^(-1)),每组6只,所有实验动物连续给药30 d。苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠组织病理学变化;免疫组化法、RT-PCR、Western Blot技术检测相关炎症因子及蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,慢性前列腺炎大鼠前列腺组织增生及水肿明显、炎症浸润增加,而阳性药物对照组及解毒活血汤各剂量组大鼠前列腺组织病变减轻或消失、炎症浸润减少,且与解毒活血汤剂量成正比;免疫组化表示模型组p38、P-p38、STAT3、P-STAT3表达较高,阳性药物对照组、不同剂量解毒活血汤组的p38、P-p38、STAT3、P-STAT3表达呈下降趋势,且均低于模型组。RT-PCR结果显示阳性药物对照组及解毒活血汤低、中、高剂量组均能降低大鼠前列腺组织中TNF-α、IL-2、IL-6的表达水平;Western Blot检测提示大鼠疾病发生进展过程中p38、P-p38、P-ERK1/2、STAT3、P-STAT3呈高表达状态,解毒活血汤能够降低其表达,从而降低相关炎症因子的过度激活。结论解毒活血汤能够抑制ERK/p38 MAPK信号通路的过度激活,从而降低IL-2、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达,以改善前列腺组织炎症反应。

lncRNA MIR17HG调节miR-214-3p/RNF38信号轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)人类微小RNA17簇宿主基因(MIR17HG)调节微小RNA(miR)-214-3p/环指蛋白38(RNF38)信号轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法收集2022年5月至2023年10月于本院行手术切除的46例肝癌患者的癌组织及癌旁组织,检测lncRNA MIR17HG、miR-214-3p和RNF38的表达。体外培养HepG2、Bel-7402、SMMC-7721、HL-7702细胞,并比较lncRNA MIR17HG、miR-214-3p和RNF38的表达,选择Bel-7402细胞继续研究,随机分为sh-NC组、sh-MIR17HG组、anti-NC组、anti-miR-214-3p组和Bel-7402组。探究各组Bel-7402细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,蛋白质印迹法分析RNF38、半胱天冬酶-3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP2)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)蛋白表达,双荧光素酶验证lncRNA MIR17HG与miR-214-3p以及miR-214-3p与RNF38的关系。结果肝癌组织中lncRNA MIR17HG、RNF38的mRNA表达较高,miR-214-3p的mRNA表达较低,RNF38的蛋白阳性表达率较高(P<0.05)。细胞SMMC-7721、HepG2、Bel-7402中lncRNA MIR17HG mRNA、RNF38 mRNA和RNF38蛋白表达高于HL-7702细胞,miR-214-3p mRNA表达低于HL-7702细胞(P<0.05)。与Bel-7402组、sh-NC组比较,sh-MIR17HG组OD 450nm值、克隆细胞数、侵袭细胞数、迁移细胞数和RNF38、MMP2、Bcl-2、MMP9表达减少,凋亡率和caspase-3表达增加(P<0.05);与sh-MIR17HG组、anti-NC组比较,anti-miR-214-3p组OD 450nm值、克隆细胞数、侵袭细胞数、迁移细胞数和RNF38、MMP2、Bcl-2、MMP9表达增加,凋亡率和caspase-3表达减少(P<0.05)。lncRNA MIR17HG与miR-214-3p以及miR-214-3p与RNF38分别存在靶向关系。miR-214-3p+WT-MIR17HG组荧光素酶活性低于miR-NC+WT-MIR17HG组(P<0.05),miR-214-3p+WT-RNF38组荧光素酶活性低于miR-NC+WT-RNF38组(P<0.05)。结论lncRNA MIR17HG可能通过调控miR-214-3p/RNF38轴促进肝癌细胞的恶性生物学行为。