Sirt1、P53及P-gp在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨沉默信息调节因子1(Sirt1)、P53及P-糖蛋白(P-gp)在胃癌组织中的表达、临床病理意义及对生存预后的影响。方法采用免疫组化方法检测胃癌组织及正常组织石蜡切片中的Sirt1、P53及P-gp的表达,KaplanMeier生存曲线分析68例患者生存时间与上述指标的表达水平的关系。结果肿瘤组织中Sirt1、P53及P-gp的表达较正常组织表达增高(P<0.001)。Sirt1的高表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关,且浸润深度越深、有淋巴结转移及临床分期升高时表达随之升高(P<0.05)。Sirt1阳性表达和P53、P-gp之间存在一定的相关性(P<0.001)。Sirt1阳性表达的患者生存时间较Sirt1阴性表达者低(P<0.001)。结论 Sirt1、P53及P-gp在胃癌组织中呈现高表达,且与胃癌的病理学特征有相关性;联合检测Sirt1、P53及P-gp表达可作为一组判断患者生存时间及预后的指标。

PKC抑制剂对MGC803细胞中P-gp表达及耐药性的影响

背景与目的:既往研究发现,肿瘤细胞的多药耐药(multidrugresistance,MDR)与蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)信号转导系统关系密切,但其作用机制有待于进一步研究。本实验拟通过研究长春新碱(vincristine,VCR)及选择性PKCα、β抑制剂myr-ψPKC对人胃癌细胞MGC803的作用,探讨PKC信号转导系统与mdr1基因的关系。方法:用Westernblot检测MGC803细胞中mdr1基因编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达以及VCR作用对其表达的影响,用流式细胞术对VCR及作用后的细胞进行周期分析,同时用MTT法验证VCR诱导后及其作用下MGC803细胞的药物敏感性。结果:MGC803细胞在VCR短期作用下,P-gp表达增加,在myr-ψPKC的作用下其表达受到抑制。通过细胞周期分析发现VCR和myr-ψPKC共同作用的细胞其凋亡比例为31.23%,显著高于VCR单独作用时的细胞凋亡率(18.41%)(P<0.05)。VCR刺激后MGC803细胞对VCR的IC50为(284.0±13.2)ng/ml,是阴性对照组IC50犤(127.0±17.6)ng/ml犦的2.24倍,是myr-ψPKC组IC50犤(212.0±30.4)ng/ml犦的1.33倍。结论:MGC803细胞在VCR的短期作用下可诱导产生P-gp,而myr-ψPKC可通过选择性抑制PKCα、β而抑制P-gp的表达和逆转其耐药性,从而促进MGC803细胞的凋亡。PKC可能对胃癌mdr1表达有调节作用。

P-gp、GST-л、TopoⅡ在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨P gp、GST л、TopoⅡ在胃癌组织中的表达及临床意义。 方法 采用免疫组化方法研究了P gp、GST л、TopoⅡ在胃癌组织中的表达情况。 结果 P gp、GST л、TopoⅡ在胃癌组织中的表达率分别为 5 9.74 %、6 7.5 3%、83.12 %。除TopoⅡ的表达与组织学类型有关外 (P <0 .0 0 1) ,其余与各项临床病理参数均无关 (P >0 .0 5 )。结论 胃癌组织中存在着P gp、GST л、TopoⅡ表达水平的变化 ,临床检测P gp、GST л、TopoⅡ对胃癌化疗方案的制定具有重要的指导意义。

左金丸对小鼠S180肿瘤细胞获得性多药耐药P-gp的表达及血清肿瘤标志物的影响

目的:研究左金丸、黄连和吴茱萸对小鼠获得性多药耐药S180腹水肿瘤细胞生长的抑制作用,以及对肿瘤细胞P-gp的表达和血清4种肿瘤标志物:(TM)酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、醛缩酶(ALD)和乳酸脱氢酶(LDH)活力的影响。方法:PFC方案建立S180多药耐药细胞模型,将耐药后S180细胞悬液以每只小鼠0.2ml接种于腹腔,黄连、吴茱萸及左金丸灌胃给药7d,观察小鼠体重、脾指数、肝指数、生命延长率(ILS),流式细胞仪测定P-糖蛋白(P-gp)的表达率,试剂盒检测血清中肿瘤标志物的活力。结果:左金丸给药组对小鼠S180多药耐药细胞增长有明显的抑制作用,能有效降低肝指数,提高脾指数,提高生命延长率(ILS)(60.26%)的作用明高于黄连(21.85%)和吴茱萸单独给药(20.53%)(P<0.01)。同时,左金丸给药组能有效逆转S180肿瘤细胞中P-gp的表达(2.69%)至接近S180细胞对照组水平(1.65%),显著低于模型组(16.07%),也强于黄连(5.69%)及吴茱萸(9.15%)单独给药时的逆转效果。并且左金丸可有效降低血清中ALD(75.94±12.47U.L-1)和LDH(1632.92±494.48U.L-1)的活力,提高血清中ACP(103.28±10.36U.100ml-1)和AKP(34.56±4.91U.100ml-1)的活力,与黄连、吴茱萸给药组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:黄连和吴茱萸合用能产生明显的配伍协同抗肿瘤作用,对P-gp的表达和血清中肿瘤标志物的影响可能是其抗肿瘤和逆转多药耐药的潜在机制。

大肠癌组织中HSP27、bcl-2、p53和P-gp的表达及其意义

目的探讨热休克蛋白27(Heatshockprotein,HSP27)和bcl-2、p53、P-gp蛋白在大肠癌组织中的表达及其意义。方法运用免疫组织化学SP法检测HSP27和bcl-2、p53、P-gp在72例大肠癌组织中的表达,并运用多因素COX比例风险模型分析患者的预后。结果HSP27、bcl-2、p53和P-gp在大肠癌组织中的阳性表达率分别为69.44%(50/72)、54.17%(39/72)、59.72%(43/72)和40.28%(29/72)。HSP27在高分化腺癌组的表达率为84.85%,显著高于低分化组的28.57%(χ2=29.614,P=0.000),bcl-2、p53和P-gp在高分化腺癌组的表达率也高于低分化腺癌组,具有统计学意义(P<0.05)。HSP27与bcl-2及P-gp在大肠癌中的表达具有相关性(r=0.380,P=0.001;r=0.284,P=0.016)。COX回归分析提示HSP27表达与生存期呈负相关。结论HSP27、bcl-2、p53和P-gp在大肠癌组织中呈高表达,提示与大肠癌耐药有关;联合检测对临床制定合理的化疗方案具有指导意义;HSP27可作为判断大肠癌预后的一个独立预测指标。

基于AQP-4、P-gp黄芩苷、栀子苷配伍对缺血/再灌注损伤大鼠血脑屏障保护机制研究

课题组前期发现,黄芩苷、栀子苷（7：3）配伍具有抗脑缺血作用。本实验进一步考察黄芩苷、栀子苷（7：3）配伍对脑缺血/再灌注损伤大鼠AQP-4、P-gp影响,探讨黄芩苷、栀子苷配伍对脑缺血/再灌注损伤的血脑屏障通透性和脑水肿的影响及作用机制。1材料与方法1.1药品与试剂黄芩苷（陕西中鑫生物技术有限公司,批号140821）;栀子苷（陕西维奥生物技术有限公司,批号140912）.

黄连素对HepG2细胞CYP3A4和P-gp的影响和作用机制研究

目的：阐明黄连素即盐酸小檗碱（berberine hydrochloride,BBR）对人肝癌细胞HepG2中细胞色素P450 3A4（CYP3A4）、多药耐药基因（MDR1）在mRNA和蛋白水平表达的影响,初步探讨黄连素对CYP3A4和P-糖蛋白（P-gp）的影响及其作用机制。方法：采用MTT法检测不同浓度的BBR（1～100μg/mL）对HepG2细胞活力的影响;并在BBR对HepG2细胞毒性较小的浓度范围进行实验,实验分为空白对照组、不同浓度BBR组、诱导剂利福平（Rif）组以及不同浓度BBR和Rif共同给药组,与对数期HepG2细胞孵育48h后,提取细胞RNA和总蛋白,分别采用荧光定量PCR法（QRT-PCR）、Western blot法检测HepG2细胞中CYP3A4、MDR1、孕烷X受体（pregnane X receptor,PXR）、视黄醛X受体（retinoid X receptor,RXR）在mRNA水平的表达和CYP3A4、P-gp在蛋白水平的表达。结果：BBR在1～40μg/mL浓度范围内对HepG2细胞毒性小,细胞活力大于80%,超过40μg/mL时对细胞毒性大,细胞存活率低。Western blot结果表明,与空白对照组比较,0.1、0.5和2μg/mL BBR对HepG2细胞CYP3A4和P-gp蛋白的表达有诱导作用（P〈0.05）,但10、40μg/mL BBR对HepG2细胞CYP3A4和P-gp蛋白的表达有显著性抑制作用（P〈0.01）。QRT-PCR结果表明,与空白对照组比较,10、20和40μg/mL BBR均对HepG2细胞PXR、CYP3A4、MDR1mRNA的表达有显著抑制作用（P〈0.05）;但10μg/mL BBR对RXR mRNA无显著性影响（P〉0.05）,20、40μg/mL BBR对RXR mRNA有显著的抑制作用（P〈0.05）。结论：黄连素对CYP3A4和P-gp有双向作用,低剂量时诱导,高剂量时抑制,并且其作用很有可能通过PXR信号通路实现。

NF-κB、P-gp、c-erbB-2蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨核因子κB(NF-κB)、P-gp、c-erbB-2蛋白在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化Power visionTM两步法检测97例乳腺癌组织中NF-κB、P-gp、c-erbB-2的表达情况。结果乳腺癌组织中NF-κB、P-gp、c-erbB-2的阳性表达率分别为65.97%、43.29%、50.51%;NF-κB、c-erbB-2与乳腺癌淋巴转移及病理分期相关(P<0.05);在乳腺癌标本中NF-κB、P-gp、c-erbB-2蛋白表达两两间均有相关性(P<0.05)。结论乳腺癌中NF-κB、P-gp、c-erbB-2三者间蛋白表达均有相关性,其在乳腺癌多药耐药发生中具有一定作用。

六味地黄丸对大鼠肝CYP1A2及肠道P-gp活性的影响

目的:考察六味地黄丸对大鼠肝CYP1A2及肠道P-gp活性的影响。方法:两组(各5只)大鼠分别灌胃给予六味地黄丸生理盐水7 d后,静脉给予咖啡因,用HPLC法测定咖啡因的血药浓度,获得药-时曲线,计算药动学参数,以咖啡因t1/2的变化来评价六味地黄丸对大鼠肝CYP1A2活性的影响;采用在体肠循环法,通过分析P-gp底物地高辛肠吸收参数的变化来考察六味地黄丸对P-gp活性的影响。结果:生理盐水组、六味地黄丸组大鼠体内探针药物咖啡因的t1/2分别为(2.61±0.98)h、(5.14±0.21)h;地高辛在给药组和对照组肠吸收百分率分别为(6.54±0.71)%、(5.42±0.23)%,吸收速率常数分别为(0.030±0.005 7)h-1、(0.024±0.003 9)h-1。结论:六味地黄丸对大鼠肝CYP1A2活性具有一定抑制作用,对肠道P-gp活性具有较弱的诱导作用。

P-gp、GSTπ及TopoⅡ在胃癌中的表达及临床意义

目的 :探讨耐药基因蛋白P gp、GSTπ和TopoⅡ在胃癌中的表达及其临床意义。方法 :应用S P免疫组化法对 85例胃癌进行检测。结果 :胃癌组织P gp、GSTπ表达率分别为 37 6 5 %及 6 3 5 3% ,表达强度与临床分期有关 ,其中高分期者P gp表达较低分期者为高。TopoⅡ表达率为 5 5 2 9% ,阳性率与组织学分类相关 ,分化较低者 (5 9 5 7% )较分化较高者 (38 30 % )阳性率高。结论 :P gp、GSTπ、TopoⅡ的耐药机制各不相同 ,根据P gp、GSTπ和TopoⅡ表达情况进行药物选择对胃癌化疗具有重要的指导意义。

GST-π和P-gp在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨耐药蛋白GST-π和P-gp在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系。方法用免疫组化法检测209例胃癌组织GST-π和P-gp的表达情况,并收集临床病理相关资料作回顾性分析。结果 GST-π表达阳性率为81.82%(171/209),与淋巴结转移数目有关(P<0.05);P-gp表达阳性率为79.90%(167/209),在印戒细胞癌中表达率较高(P<0.05);GST-π和P-gp表达具有相关性(r=0.241,P<0.05)。结论 GST-π和P-gp的表达与胃癌的生物学行为有一定的相关性。

阿帕替尼逆转P-gp转运体介导的乳腺癌化疗多药耐药性的作用及其机制

目的探讨阿帕替尼对人乳腺癌化疗多药耐药性的逆转作用及其机制。方法不同浓度的阿帕替尼作用于体外培养的人乳腺癌MCF-7及MCF-7/ADR细胞48 h,MTT法检测阿帕替尼对两种细胞的细胞毒性;低毒浓度的阿帕替尼与化疗药物紫杉醇及阿霉素联用,探讨阿帕替尼对两种细胞化疗耐药性的影响;采用流式细胞术检测阿帕替尼对罗丹明123在MCF-7及MCF-7/ADR细胞内蓄积的影响;采用Pgp-Glo^(TM) Assay Systems试剂盒观察阿帕替尼对多药耐药相关蛋白P-gp的ATPase活性的影响;采用Western blot法检测阿帕替尼对P-gp表达及AKT磷酸化的影响。结果阿帕替尼可浓度依赖性地逆转乳腺癌MCF-7/ADR细胞对紫杉醇及阿霉素的多药耐药性(P<0.05)、增加罗丹明123在MCF-7/ADR细胞内的蓄积(P<0.05)及激活P-gp转运体的ATPase活性(P<0.05),而对P-gp的表达没有影响;此外,阿帕替尼不改变AKT的磷酸化水平。结论阿帕替尼可能通过抑制P-gp转运体的外排功能逆转P-gp转运体介导的乳腺癌化疗多药耐药性。

TopoⅡα、GST-π、P-gp在卵巢癌化疗耐药中的作用

目的探讨TopoⅡα、GSTπ、Pgp在卵巢癌化疗耐药中的作用。方法采用免疫组化SP法、计算机图像分析技术对80例卵巢癌、20例良性上皮性卵巢肿瘤、20例正常卵巢组织中TopoⅡα、GSTπ、Pgp的表达进行检测。结果卵巢癌中TopoⅡα、GSTπ、Pgp的表达显著高于正常组及良性肿瘤组,P<0.05。TopoⅡα、GSTπ的表达与肿瘤分化程度有关,分化越差表达越高,P<0.05;Pgp的表达与多种病理因素无关,P>0.05。术前化疗组GSTπ、Pgp的阳性表达率显著高于术前未化疗组,P<0.05。结论TopoⅡα、GSTπ、Pgp在卵巢癌耐药中发挥重要作用,这三项指标的联合检测对制定合理的化疗方案具有积极的指导意义。

川芎嗪对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响

目的观察川芎嗪(TMP)对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响,研究TMP对人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM的逆转机制。方法将人肝癌细胞耐药株BEL-7402/ADM及其亲本细胞BEL-7402分为:亲本组、耐药组、逆转组(耐药+TMP)、阳性对照组(耐药+维拉帕米)、二抗阴性对照组,用免疫组化SABC法和流式细胞术对照观察TMP对BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响。结果流式细胞术结果显示耐药组显著高于亲本组(P<0.01);耐药+TMP组和耐药+维拉帕米组均显著低于耐药组和亲本组(P<0.01)。免疫组化SABC法显示耐药组P-gp阳性表达率显著高于亲本组(P<0.01);TMP组、维拉帕米组的P-gp阳性表达率显著低于耐药组(P<0.01)。结论 TMP能显著降低人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM细胞表面P-gp的表达,增加阿霉素等化疗药物对BEL-7402/ADM的细胞毒性作用,从而增加对肿瘤细胞的抑制率,提高化疗疗效。

常态虚寒状态小鼠CYP3A活性P-gp水平比较研究

目的:比较虚寒状态与常态小鼠肝和小肠细胞色素P4503A(CYP3A)活性和P-糖蛋白(P-gp)水平情况。方法:肌注氢化可的松复制小鼠虚寒状态模型,采用聚乙二醇法制备肝和小肠微粒体,测定肝和小肠细胞色素CYP 3A活性;以免疫组化法检测肝和小肠组织P-gp水平。结果:虚寒状态组和正常状态组肝和小肠微粒体内CYP3A活性和P-gp水平存在差异,即正常状态CYP3A活性、P-gp水平高于虚寒状态,且差异显著(P<0.05)。结论:初步发现,CYP3A活性和P-gp水平存在机体状态差异。

P-gp,MRP,LRP和GST-π等多药耐药蛋白在肝癌中的协同表达研究

目的:探讨多药耐药相关标志物P-gp,MRP,LRP和GST-π在肝癌细胞中的共表达情况.方法:以69例肝癌患者为本次研究对象,应用免疫组化SP法检测多药耐药相关标志物P-gp,MRP,LRP和GST-π在肝癌组织的共表达情况.结果:不同分型、不同分期肝癌组织P-gp,MRP,LRP和GST-π阳性表达率及共表达差异无显著性(P>0.05);分化程度不同的肝癌组织多药耐药相关标志物P-gp,MRP,LRP和GST-π阳性表达率及共表达有明显差异(P<0.05).结论:多药耐药相关标志物P-gp,MRP,LRP和GST-π在不同分型、不同分期和不同分化程度的肝癌组织中均有明显共表达,在不同分化程度的肝癌组织中阳性表达率及共表达更为明显.

耐药相关基因MDR1、MRP、LRP及其表达产物P-gp、MRP、LRP在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的:研究探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织和癌旁组织中多药耐药基因1(multidrug resistance gene1,MDR1)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-related proteins,MRP)、肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)mRNA及其相应蛋白P-gp、MRP、LRP的表达情况及临床意义。方法:运用聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学法(IHC)检测43例NSCLC组织及癌旁组织标本中耐药基因MDR1、MRP、LRPmRNA及其蛋白P-gp、MRP、LRP的表达水平。结果:MDR1、MRP和LRP mRNA3种基因在43例肿瘤组织中的表达率分别为79.06%(34/43)、65.17%(28/43)和86.05%(37/43),癌旁组织中的表达率分别为20.00%(3/15)、13.33%(2/15)和13.33%(2/15);P-gp、MRP和LRP3种耐药蛋白在肺癌组织中的表达率分别为74.42%(32/43)、67.44%(29/43)和88.37%(38/43),癌旁组织中的表达率分别为13.33%(2/15)、20.00%(3/15)和6.67%(1/15),上述3种基因及其蛋白在肺癌组织与癌旁组织的表达差异有显著性(P<0.05)。肺癌组织中既存在耐药基因MDR1、MRP和LRP的共表达,也存在耐药蛋白P-gp、MRP和LRP的共表达,3种基因与其相应蛋白表达密切相关。肺腺癌组织中MDR1及其蛋白P-gp、LRPmRNA表达率较高,与其它病理类型相比差异有显著性(P<0.05),MRPmRNA及其蛋白MRP表达与肺癌病理类型、临床分期和组织学分级无关(P>0.05)。结论:NSCLC存在着广泛的原发性多药耐药现象,耐药基因MDR1、MRP和LRPmRNA及其相应蛋白参与了肺癌多药耐药的形成,检测多药耐药基因可为指导临床用药提供一定的理论依据及策略。

多药耐药性基因1/P糖蛋白(mdr1/P-gp)高表达与类风湿性关节炎患者甲氨蝶呤耐药有关

目的研究类风湿性关节炎(RA)患者甲氨蝶呤(MTX)耐药性与外周血单个核细胞(PBMC)多药耐药性基因1/P糖蛋白(mdr1/P-gp)的表达的相关性。方法根据符合纳入标准的RA患者依据服用MTX后28个关节疾病活动度评分(DAS28)的情况,将RA患者分为MTX敏感组及耐药组,健康人群为正常对照组。采用实时定量PCR检测mdr1 mRNA的表达,流式细胞术检测PBMC的P-gp的水平及功能,比较mdr1/P-gp在各组中的表达情况。结果与正常对照组相比,MTX敏感组及MTX耐药组P-gp表达及功能增强;与MTX敏感组相比,MTX耐药组mdr1 mRNA水平增加,且P-gp表达及功能增强。结论 RA患者mdr1/P-gp高表达与MTX耐药相关。

Snail增强乳腺癌细胞MCF-7中P-gp介导的多药耐药

目的探讨乳腺癌细胞中Snail过表达与P-gp之间的关系,揭示EMT对乳腺癌细胞多药耐药的影响。方法构建Snail真核表达载体pCDNA3.1-Snail,将载体转染人乳腺癌细胞MCF-7后用阿霉素对细胞进行诱导。利用细胞毒性实验(MTT)、阿霉素外排实验对耐药细胞系的耐药状况进行评价;通过流式细胞术和Real-time PCR分别测量耐药细胞系中P-gp和MDR1 mRNA,Snail mRNA的表达。结果由细胞毒性实验和阿霉素外排实验的结果显示,MCF-7/Snail细胞经阿霉素诱导后相对耐药指数升高至109.2,细胞内荧光强度降至7.1(P<0.05);Real-time PCR显示相对于MCF-7,MCF-7/Snail细胞中的MDR1 mRNA,Snail mRNA的表达明显升高与流式细胞术显示的P-gp升高相一致。结论转染Snail真核表达载体后,MCF-7/Snail细胞的耐药性较MCF-7细胞明显升高。

乳腺癌中耐药蛋白P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ的表达

目的明确乳腺癌中是否存在P-gp、GST-π、TopoⅡ三种原发耐药蛋白;三种耐药蛋白的表达与乳腺癌的组织类型、细胞分化程度、TNM分期是否相关;是否影响乳腺癌患者的预后。方法采用S-P免疫组化方法,检测260例乳腺癌患者中P-gp、TopoⅡ、GST-π的表达情况,同时取10例乳腺病及10例癌旁乳腺组织作对照。结果乳腺癌中三种耐药蛋白呈异质性表达。P-gp、GST-π和TopoⅡ在良性病变中弱表达,在伴有早期浸润的乳腺导管内癌和乳腺浸润性导管癌中的表达同样明显高于乳腺导管内癌;其中P-gp和GST-π表达和预后相关,差异显著(P<0.01,P<0.05)。结论乳腺癌在发生早期浸润的同时就伴随着耐药的发生;P-gp和GST-π是乳腺癌患者预后的影响因素,综合检测优于单一检测。