益气活血汤对急性心肌梗死模型大鼠Ras、ERKl、p-ERKl和C-Raf-1表达的影响

目的探讨益气活血汤对急性心肌梗死(AMI)模型大鼠缺血心肌Ras、ERKl(extracellularsignal regulated kinasel)、p-ERKl(phosphor-ERKl)和C-Raf-1蛋白表达的影响。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、倍他乐克组和益气活血汤大、小剂量组(下称大、小剂量组)。采用大鼠冠状动脉左前降支结扎构造急性心肌梗死(AMI)的心肌缺血模型。通过免疫组化法检测缺血心肌的Ras、ERKl、p-ERKl及C-Raf-1的蛋白表达。结果模型组Ras、ERKl、p-ERKl及CRaf-1的蛋白表达均高于空白组、假手术组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。Ras、C-Raf-1蛋白表达:小剂量组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);大剂量组及倍他乐克组与模型组比较均有增高(P<0.05或P<0.01)。ERK1、p-ERK1蛋白表达:大、小剂量及倍他乐克组与模型组比较均有增高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。四个因子在大剂量组的表达均较小剂量组增多更明显(P<0.05)。结论益气活血汤可能是通过提高Ras通路相关蛋白表达来促进缺血后心肌的血管生成,抑制心肌缺血的损伤。

胃肠间质瘤中p-ERK1/2、CyclinD1、PCNA表达及其与临床病理因素的关系

目的探讨胃肠道间质瘤(gastrointestinal stormal tumors,GISTs)中磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal regulated kinase,p-ERK1/2)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白的表达及其与临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学方法检测50例GISTs患者及肿瘤旁正常组织(平滑肌)中p-ERK1/2、CyclinD1和PCNA的表达水平,并进行比较分析。结果 GISTs组织中p-ERK1/2、CyclinD1和PCNA蛋白阳性表达率(82.0%、62.0%、66.0%)明显高于肿瘤旁正常组织(24.0%、30.0%、38.0%),差异有统计学意义(P<0.05)。随着肿瘤直径增大,p-ERK1/2、CyclinD1和PCNA蛋白阳性表达率逐渐增高,差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别的GISTs患者CyclinD1蛋白的表达差异有统计学意义(P<0.05)。不同年龄、民族及发生部位的GISTs患者p-ERK1/2、CyclinD1和PCNA蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。相关性分析显示,p-ERK1/2(r=0.291,P<0.05)和PCNA(r=0.378,P<0.05)蛋白表达与肿瘤分级呈正相关。结论 ERK1/2激活、CyclinD1和PCNA高表达对肿瘤细胞的增殖、浸润和转移有一定的促进作用。

天麻素对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及其机制研究

目的探讨天麻素对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及其机制,为临床开发新的镇痛药物奠定基础。方法 SD大鼠随机分为坐骨神经慢性压迫性损伤组(n=32)和假手术组(n=8),自术后第8天分别腹腔注射天麻素治疗,用电子Von-Frey测痛仪测定大鼠机械缩足反射阈值,热痛刺激仪测定大鼠热痛缩足反应潜伏期。取脊髓腰膨大及L4/L6背根神经节,采用Western blotting法测定脊髓背角和背根神经节p-ERK1/2的表达。结果与假手术组相比,对照组和天麻素治疗组各时点机械缩足反射阈值降低、热痛缩足反应潜伏期缩短,脊髓背角及背根神经节p-ERK1/2均出现表达上调(P<0.05);与对照组相比,天麻素治疗组在给药后7 d机械缩足反射阈值回升、热痛缩足反应潜伏期延长;在给药14 d后脊髓背角及背根神经节p-ERK1/2表达下调(P<0.05)。结论天麻素可减轻大鼠神经病理性痛,其机制可能与抑制脊髓背角和背根神经节p-ERK1/2通路激活有关。

天麻素通过下调ERK1/2-p38信号通路保护谷氨酸损伤的PC12细胞

目的研究天麻素(gastrodin,Gas)通过调控ERK1/2-p38信号通路保护谷氨酸损伤的PC12细胞。方法建立谷氨酸损伤的PC12细胞模型;甲基噻唑基四唑比色法测定细胞活力;Hochest 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态;罗丹明123染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位;Western blot法检测细胞内p38、ERK1/2、p-p38、p-ERK1/2蛋白表达。结果天麻素明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,在0.1～10μmol/L剂量范围内呈一定的量效关系;天麻素升高谷氨酸损伤引起的细胞线粒体膜电位的降低,下调p-p38、p-ERK1/2蛋白的表达。结论天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与升高线粒体膜电位水平,下调p-p38、p-ERK1/2蛋白表达,抑制细胞凋亡有关。

养精胶囊对老年大鼠阴茎海绵体P-Erk1和P-Akt1表达的影响

目的:通过观察养精胶囊对老年大鼠阴茎海绵体中P-Erk1和P-Akt1表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法:将40只24月龄老年雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组20只。用药前实验组和对照组各取10只用于eNOS表达测定。实验组(n=10)给予养精胶囊[0.5 g/(kg.d)]灌胃,对照组(n=10)给予等剂量的生理盐水灌胃。4周后,处死所有大鼠,留取大鼠阴茎海绵体组织,HE染色,采用RT-PCR和免疫组化方法检测eNOS、P-Erk1及P-Akt1在阴茎海绵体组织中的表达。结果:HE染色结果显示实验组老年大鼠阴茎海绵体组织血管较对照组明显充盈,管径明显增大。免疫组化结果显示,对照组大鼠阴茎海绵体组织中eNOS的表达干预前(19.35±1.50)和干预后(18.15±1.98)无显著性差异(P>0.05);实验组老年大鼠阴茎海绵体组织中eNOS的表达干预后(24.10±2.40)较干预前(18.80±2.04)显著增强(P<0.05);而干预后老年大鼠阴茎海绵体组织中eNOS的表达,实验组较对照组明显增强(P<0.05);大鼠阴茎海绵体组织中P-Erk1的表达,实验组明显低于对照组(实验组P-Erk1表达量为0.71±0.13,对照组P-Erk1的表达量为0.83±0.17,P<0.01)。而在同等内参GAPDH条件下,两组大鼠间P-Akt1的表达强度未见明显差异(实验组P-Akt1的表达量为0.58±0.17,对照组P-Akt1的表达量为0.48±0.13,P>0.05)。结论:P-Erk1和P-Akt1在老年大鼠阴茎海绵体组织中均有表达,养精胶囊能改善老年大鼠勃起功能,作用机制可能与阴茎海绵体中P-Erk1的低表达相关。

氟西汀对条件恐惧消退大鼠边缘下皮质Erk1/2磷酸化的影响

目的研究氟西汀对条件恐惧消退大鼠内侧前额叶皮质边缘下区p-Erk1/2表达的影响。方法 16只成年雄性大鼠随机分成单纯条件恐惧消退组和氟西汀干预条件恐惧消退组,实验动物采用单调声配对电击大鼠足底造成条件恐惧刺激模型,氟西汀干预组灌胃给予氟西汀14 d,对照组灌胃给予生理盐水。后行消退训练并检测动物的静止不动时间(freezing time);处死动物,冷冻切片行内侧前额叶皮质边缘下区p-Erk1/2的免疫组织化学染色。结果行为学结果显示氟西汀干预组大鼠条件恐惧消退训练后静止不动时间百分比显著低于单纯条件恐惧消退组;p-Erk1/2的免疫组织化学染色显示氟西汀干预组大鼠条件恐惧消退训练后内侧前额叶皮质边缘下区p-Erk1/2表达明显增加,p-Erk1/2阳性细胞显著增多。结论氟西汀促进大鼠恐惧记忆的消退,其作用机制可能为通过促进大鼠内侧前额叶皮质边缘下区Erk1/2活化而发挥作用。

锁阳乙酸乙酯提取物改善慢性应激认知功能障碍MAPK/ERK1/2通路机制

目的探究锁阳乙酸乙酯提取物(ECS)对去势后慢性应激小鼠认知功能障碍MAPK/ERK1/2信号通路中磷酸化的胞外信号调控激酶1/2(P-Erk1/2)和磷酸化的c AMP反应元件蛋白(P-CREB)表达量的影响。方法将实验动物采用随机数字法分为对照组、模型组、ECS组,除对照组外,模型组和ECS组,采用去势后慢性应激造模,ECS组同步灌胃ECS。在造模8周后采用Morris水迷宫检测小鼠空间学习记忆能力,造模成功时取材海马组织检测Western Blot。结果:Morris水迷宫结果显示,模型组较对照组穿越平台次数减少(P<0.01),ECS组较模型组穿越平台次数增加(P<0.01)。Western Blot结果显示,P-Erk1/2蛋白表达量模型组较对照组显著减少(P<0.01),ECS组较模型组显著增加(P<0.01);P-CREB蛋白表达量模型组较对照组显著减少(P<0.05),ECS组较模型组显著增加(P<0.05)。结论 ECS改善去势后慢性应激小鼠认知功能障碍机制之一可能是通过上调MAPK/ERK1/2信号通路中P-Erk1/2与P-CREB的蛋白表达量。