人参皂苷Rg1对帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡及EphB1、TH、P-c-Jun蛋白表达的影响

目的:观察人参皂苷Rg1对MPTP所致帕金森病(PD)模型小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡及酪氨酸羟化酶(TH)、Eph B1和P-c-Jun蛋白表达的影响。方法:将27只C57BL/6小鼠等分为对照组、模型组和人参皂苷Rg1组。腹腔注射人参皂苷Rg1预防给药3 d,腹腔注射MPTP构建PD模型。观察不同时间点小鼠游泳情况。MPTP给药2周后采用TUNEL染色检测小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡情况,采用免疫组化检测黑质Eph B1蛋白的表达,采用Western blot检测黑质TH、P-c-Jun蛋白的表达。结果:模型组小鼠不同时间点游泳实验分值低于对照组和人参皂苷Rg1组(P均<0.05)。模型组黑质多巴胺能神经元凋亡数、Eph B1阳性细胞数和P-c-Jun蛋白相对表达量均高于对照组和人参皂苷Rg1组,而模型组黑质TH蛋白相对表达量低于对照组和人参皂苷Rg1组(P均<0.05)。结论:人参皂苷Rg1可能通过减少黑质多巴胺能神经元凋亡以及降低Eph B1、P-c-Jun的表达而改善PD的症状。

慈姑消脂丸对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织中p-JNK/p-c-Jun信号通路表达的影响

目的:探讨慈姑消脂丸对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝脏p-JNK/p-c-Jun信号通路表达的影响。方法:60只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、JNK抑制组及慈姑消脂丸高、中、低剂量组,每组10只。使用高脂饲料饲喂大鼠建立NASH模型,于造模同时给予药物干预。实验结束处死全部实验动物,取动物肝脏。HE染色光学显微镜下观察肝脏的组织形态学特点;透射电子显微镜观察肝细胞的超微结构;免疫组织化学法检测肝组织p-JNK、p-c-Jun、Fas-L、Fas、Caspase-8蛋白的表达。结果:肝组织病理学检查显示模型组大鼠肝组织呈中重度脂肪变性并同时伴有炎症细胞浸润,p-JNK、p-c-Jun、Fas、Fas-L、Caspase-8蛋白表达较正常对照组显著升高(P<0.01)。各给药组大鼠肝小叶内空泡样变、脂肪样变显著减少,炎性细胞浸润得到改善;与模型组比较,慈姑消脂丸高、中剂量组p-JNK、p-c-Jun、Fas、Fas-L、Caspase-8蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:慈姑消脂丸可通过调节p-JNK、p-c-Jun、Fas、Fas-L、Caspase-8蛋白表达抑制肝细胞凋亡,对NASH起治疗作用。

GDNF对MPTP诱导帕金森病小鼠黑质TH mRNA、Ephrin B2、p-c-Jun的影响

目的研究胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导帕金森模型小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)、Ephrin B2、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)表达的影响,探索GDNF治疗帕金森病的价值。方法选取84只小鼠并采用MPTP复制帕金森病模型,选取72只模型复制成功的小鼠随机分为实验组和模型组,每组36只;另随机选取36只健康小鼠作为对照组。对实验组小鼠右侧侧脑室注射GDNF,模型组和对照组小鼠注射等量生理盐水。10 d后比较3组小鼠TH神经元变化、检测TH mRNA、Ephrin B2和p-c-Jun蛋白的表达。结果模型组和实验组毁损侧神经元数、神经纤维密度少于对照组(P<0.05),实验组神经元数高于模型组(P<0.05);模型组TH mRNA表达水平低于对照组和实验组(P<0.05)。模型组小鼠Ephrin B2、p-c-Jun蛋白表达水平高于对照组和实验组(P<0.05)。结论 GDNF能够提高MPTP诱导帕金森病模型小鼠黑质TH表达,降低Ephrin B2和p-c-Jun蛋白表达,进而对小鼠多巴胺能神经元产生保护作用,提示GNDF可能在治疗人帕金森病上具有一定价值。

前列腺癌细胞株PC-3经Doc处理后p-c-jun和AR的表达变化

目的探讨多西紫杉醇的细胞毒性化疗反应的分子机制.方法对体外的免疫印迹、荧光素酶和细胞生存率进行分析,研究PC-3细胞暴露在多西紫杉醇后p-c-jun的过表达与AR的相互作用.结果多西紫杉醇治疗PC-3细胞最敏感,细胞对多烯紫杉醇的敏感性与p-c-jun水平呈负相关.转染c-jun基因转染到PC-3细胞降低了多烯紫杉醇的敏感性,而转染c-jun和AR基因则可以恢复到中等程度敏感性.p-c-jun与AR蛋白水平之间没有发现直接相关性.对多烯紫杉醇的治疗反应,体内模型的结果与体外研究结果是一致的.结论 p-c-jun可能是多西紫杉醇对前列腺癌治疗的分子机制之一.

人参皂苷Rg1对MPTP所致亚急性帕金森病模型小鼠中脑黒质p-c-Jun与COX-2表达的影响

本文研究了人参皂苷Rg1(Ginsenoside Rg1,Rg1)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetra-hydropyridine,MPTP)所致亚急性Parkinson病(PD)模型小鼠中脑黒质磷酸化c-Jun(p-c-Jun)与环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的影响,以期探讨Rg1保护PD中脑黑质多巴胺(DA)能神经元可能的分子机制。实验采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型。通过行为学观察,免疫组织化学SP法和免疫蛋白印迹法,观察PD模型小鼠行为学变化,中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)、COX-2和p-c-Jun表达水平的变化,并观察给予人参皂苷Rg1对上述变化的影响。结果显示,模型小鼠出现典型PD样症状。与对照组小鼠相比,黑质区TH阳性神经元数下降约65%(P<0.001),TH表达水平显著降低约75%;黑质区COX-2阳性细胞明显增多,p-c-Jun特异性表达于黑质区细胞核内,且COX-2与p-c-Jun表达水平均明显升高。经Rg1(10mg/kg)处理后,模型小鼠PD样症状减轻,与对照组比较,在MPTP第5次注射后7d,TH阳性细胞数和TH表达水平仅下降约15%和20%;与模型组比较,黑质区COX-2阳性细胞明显减少,p-c-Jun主要表达于细胞浆,部分表达于细胞核,表达水平也明显降低。以上实验结果表明,人参皂苷Rg1对MPTP诱导的亚急性Parkinson病小鼠中脑黑质细胞的神经保护作用可能是通过阻抑p-c-Jun核内表达,从而减弱COX-2表达及其介导的黒质区炎症反应。

结直肠癌中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的表达水平及临床意义

目的检测结直肠癌患者中热休克因子1(HSF1)、氨基末端激酶(c-Jun)、p-c-Jun及二氢嘧啶脱氢酶(DPD)的表达水平,并探讨其临床意义。方法收集南方医科大学南方医院2018年1月至2019年12月收治的114例结直肠癌患者的临床资料,检测结直肠癌组织及癌旁组织的HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD表达情况,并对比HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD阳性表达率,采用Log-rank检验分析不同HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD阳性表达的结直肠癌患者预后情况,采用Spearman相关性分析法分析各指标之间的相关性。结果HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD在结直肠癌组织中的阳性表达率分别为64.04%、61.40%、52.63%、58.77%,明显高于癌旁组织的23.68%、21.93%、14.04%、25.44%,差异均有统计学意义(P<0.05);Ⅲ+Ⅳ期、低分化、淋巴结转移阳性者HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD阳性表达率,明显高于Ⅰ+Ⅱ期、中高分化、淋巴结转移阴性者,差异均有统计学意义(P<0.05);HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD阳性者1年生存率分别为83.56%、82.86%、81.67%、83.58%,明显低于阴性者的97.56%、97.73%、97.30%、95.74%,差异均有统计学意义(P<0.05);结直肠癌患者HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD之间的表达水平均呈正相关(P<0.05)。结论结直肠癌组织中HSF1、c-Jun、p-c-Jun及DPD的阳性表达率均高于癌旁组织,且与结直肠癌的临床分期、分化程度、淋巴结转移有关。

p-JNK/p-c-Jun通路参与大鼠杏仁核点燃癫痫模型

目的:研究杏仁核点燃癫痫模型中c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路的活化。方法:雄性Wistar大鼠20只,随机分为对照组10只和模型组10只。将电极植入大鼠右侧杏仁核,对照组不给予电刺激,模型组每天给予500μA的电流刺激,大鼠连续10 d在刺激后达到5级发作视为点燃成功。成功点燃的大鼠,在最后1次5级发作后2 h处死。Western blot检测2组海马JNK、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun的表达。结果:模型组刺激侧海马p-JNK、p-c-Jun表达明显高于对照组(P<0.05)。结论:p-JNK/p-c-Jun通路可能参与杏仁核癫痫模型点燃。

慈菇消脂丸含药血清对非酒精性脂肪肝细胞模型Caspase-8、FasL、p-c-Jun表达的影响

目的探讨慈菇消脂丸含药血清对游离脂肪酸(FFA)混合物诱导的HepG2细胞非酒精性脂肪肝病模型凋亡相关蛋白Caspase-8、FasL、p-c-Jun表达的影响。方法以HepG2细胞为研究对象,实验随机分为正常组(10%胎牛血清),模型组(500μmol/L FFA),中药低、中、高剂量组(500μmol/L FFA+2%、4%、6%含药血清),阳性药组(500μmol/L FFA+20μmol/L SP600125)。实验时间为24 h,实验结束后,用油红O染色镜下观察细胞浆内变化。流式细胞术检测细胞凋亡率。实时荧光定量PCR和Western Blot法检测Caspase-8、FasL、pc-Jun mRNA及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组细胞凋亡率增加(P<0.01),Caspase-8、FasL、p-c-Jun蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05);与模型组比较,各药物干预组及阳性药组细胞凋亡率均下降(P<0.05),除中药低剂量组对FasL蛋白表达及中药中剂量组对Fasl mRNA表达无影响外,其余各组Caspase-8、FasL、p-c-Jun mRNA及Caspase-8、p-c-Jun蛋白表达均下降(P<0.05)。结论慈菇消脂丸可以改善HepG2细胞脂肪变及凋亡,与下调Caspase-8、FasL、p-c-Jun表达相关。

人参皂苷Rg1对脑缺血-再灌注大鼠海马CA1区神经元的保护作用及机制

目的探讨人参皂苷Rg1对脑缺血-再灌注大鼠海马CA1区神经元的保护作用及机制。方法将健康雄性SD大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注组,人参皂苷Rg110、20、40mg/kg组,尼莫地平阳性药物对照组。采用Nissl染色检测大鼠缺血再灌注后海马神经元损伤,并采用免疫印迹方法检测p-JNK、p-c-jun、Bax的表达情况。结果假手术组海马神经元数量正常,p-JNK、p-c-jun、Bax含量最低;与假手术组比较,缺血再灌注组神经元数量显著降低,p-JNK、p-c-jun、Bax含量显著增高;各给药组与缺血再灌注组比较,海马神经元损伤减轻,p-JNK、p-c-jun、Bax含量降低,其中人参皂苷Rg140mg/kg组效果更明显。结论人参皂苷Rg1对大鼠脑缺血-再灌注损伤具有保护作用,可能与抑制脑组织p-JNK、p-c-jun、Bax的表达有关。

多西紫杉醇治疗前列腺癌的分子机制研究

目的:探讨多西紫杉醇治疗男性雄激素抵抗前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC)的分子机制。方法:前列腺癌细胞株LNCaP、PC-3和CW22-rv1体外培养后,通过蛋白质印迹、细胞转染、荧光素酶分析、细胞存活率分析等试验分析多西紫杉醇(Docetaxel,Doc)处理后细胞株的存活、AR及p-c-jun的表达情况及其与细胞生存的关系,同时实时定量PCR检测相应mRNA的表达情况。结果:多西紫杉醇对不同前列腺癌细胞株的敏感性不同,其中PC-3细胞最敏感,CW22-rv1和LNCaP细胞中度敏感,其敏感性与p-c-jun表达呈负相关。转染c-jun基因可降低细胞对多烯紫杉醇的敏感性,而PC-3细胞转染c-jun和AR基因后则可以使细胞恢复到中等程度敏感性,细胞存活率为30%。长期暴露于Bicalutmide(比卡鲁胺)后的LNCaP细胞经Doc处理后PSA蛋白表达增加,AR蛋白表达水平降低,AR的mRNA却增加。结论:p-c-jun降低前列腺癌细胞株对多西紫杉醇的敏感性,而AR可以增加前列腺癌细胞株对多西紫杉醇的反应,AR的上调降低c-jun/p-c-jun的转录活性,从而增加前列腺癌细胞株对Doc的反应,可能是Doc治疗前列腺癌的机制之一。

Bex2抑制神经胶质瘤细胞凋亡及其与JNK/MAPK通路关系的研究

目的研究Bex2对神经胶质瘤细胞凋亡的影响并探讨其作用机制,为胶质瘤的基因治疗提供理论和实验依据。方法 1利用前期构建pEGFP-N1-Bex2真核表达载体,脂质体转染法过表达Bex2后12、24、48、72 h收集U251神经胶质瘤细胞,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用免疫印迹法检测Bex2基因的表达及活化型caspase-3、p-JNK、p-c-Jun的变化。2收集临床神经胶质瘤手术标本,通过免疫组织化学检测Bex2、活化型caspase-3、p-JNK、p-c-Jun蛋白的表达,并与正常脑组织比较,分析它们之间的相关关系。结果 1流式细胞术检测结果显示,过表达Bex2后12、24、48、72 h各时间点细胞凋亡率明显低于空载体组(P<0.05),转染48 h组低于其他时间点组(P<0.05)。免疫印迹法检测表明,转染后48 h细胞的活化型caspase-3、p-JNK、p-c-Jun含量较空载体组和空白对照组降低(P<0.05)。2免疫组织化学结果表明,神经胶质瘤组织较正常脑组织中Bex2表达增高,活化型caspase-3、p-JNK、p-c-Jun蛋白低表达(P<0.05)。结论 Bex2在神经胶质瘤组织中高表达,并通过下调JNK/MAPK通路活性抑制胶质瘤细胞凋亡,进而促进肿瘤的发生和发展。

溶血磷脂酸对背根神经髓鞘相关基因Mag和髓鞘形成负性调节转录因子c-Jun表达的影响

目的探讨单次鞘内注射溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)对背根神经(dorsal root,DR)髓鞘相关基因Mag和髓鞘形成的负性调节转录因子c-Jun表达的影响以及其作用机制。方法实验1:鞘内注射LPA (1 nmol),在不同的时间点(1 h、3 h、1 d、2 d、3 d、7 d、14 d)行髓鞘相关基因Mag的实时荧光定量PCR(Real-time PCR)。实验2:鞘内注射LPA(1 nmol),在不同的时间点(1 h、3 h、6 h、24 h、3 d、5 d)行cJun、p-c-Jun的Western blot。实验3:预先30 min给予JNK抑制剂SP600125(0. 5μg)鞘内注射,再给LPA(1 nmol)鞘内注射,在不同的时间点(20、40、60、120、180 min)行c-Jun的Western blot。结果 (1)给予LPA后1 h髓鞘相关基因Mag的mRNA水平明显的降低,一直持续到注射后第7天,但第14天时不明显。(2)给予LPA(1 nmol)鞘内注射之后1 h,c-Jun明显升高,一直持续到第3天,但第5天不明显; p-c-Jun也在加LPA后1 h明显升高,但只持续到6 h,24 h不明显。(3)预先30 min给JNK抑制剂SP600125后,不能抑制DR c-Jun的升高。结论在给予LPA之后DR髓鞘相关基因Mag是下调的;在给予LPA之后髓鞘形成的负性调节转录因子c-Jun和p-c-Jun都是升高的,但c-Jun不是通过经典的JNK-c-Jun通路发挥作用。

异氟醚对大鼠脑缺血/再灌注诱导c-Jun磷酸化的影响

目的观察大鼠脑缺血/再灌注后c-Jun蛋白磷酸化情况以及异氟醚对其的影响。方法四动脉结扎法建立大鼠脑缺血模型。随机分为假手术组、直接脑缺血/再灌注组、吸入2 h 1.5 MAC异氟醚脑缺血/再灌注组和吸入纯氧2 h脑缺血/再灌注组,全脑缺血15 min后分别再灌注6 h。再灌注6 h的大鼠进行磷酸化c-Jun(p-c-Jun)的免疫印迹和免疫组化检测。结果缺血前吸入1.5 MAC异氟醚组大鼠的c-Jun磷酸化水平明显低于直接脑缺血/再灌注组和吸入纯氧2 h脑缺血/再灌注组(P<0.05)。结论异氟醚抑制c-Jun蛋白的磷酸化可能是其对大鼠缺血/再灌注性脑损伤产生保护作用的机制之一。

人参皂甙Rg1对帕金森病小鼠黑质JNK细胞凋亡通路的影响

目的 探讨人参皂甙Rg1(ginsenosideRg1)抗帕金森病 (PD)小鼠黑质神经元凋亡的可能机制。 方法采用MPTP制备帕金森病 (PD)小鼠模型 ,经人参皂甙Rg1预处理后 ,用尼氏染色、TH和活化型caspase 3组织化学染色及TUNEL染色法观察黑质神经元的损害情况 ,并计算神经元的凋亡率 ,同时应用蛋白免疫印迹法检测黑质神经元磷酸化JNK(c Jun氨基末端激酶 )及磷酸化c Jun蛋白表达水平。 结果 人参皂甙Rg1预处理可减轻PD小鼠黑质致密带Nissl阳性神经元和TH阳性神经元的丢失现象 ,同时减少磷酸化JNK及磷酸化c Jun蛋白表达水平 ,活化型caspase 3表达减少 ,降低黑质神经元的凋亡率。 结论 人参皂甙Rg1能减少MPTP诱导的小鼠黑质神经元凋亡 ,其机制与阻断JNK细胞凋亡通路激活有关。

JNK通路在亚急性帕金森病模型小鼠黑质细胞炎症与凋亡过程中的调控作用

目的研究c-Jun N-terminal protein kinase(JNK)在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahy-dropyridine,MPTP)所致亚急性帕金森病(Parkinson's disease,PD)小鼠模型中对黑质环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,Cox-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达调控作用,以探讨PD模型黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元变性失活的可能机制。方法采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型,通过行为学观察、SP法免疫组化和免疫蛋白印记法,观察模型小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、Cox-2、caspase-3,磷酸化c-Jun(Ser63,p-c-Jun)免疫阳性细胞数量和中脑黑质区TH、Cox-2、caspase-3和p-c-Jun表达水平的变化;观察给予JNK通路特异性抑制剂SP600125后对上述变化的影响。结果与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现PD典型的行为学表现,黑质区TH阳性神经元和中脑黑质TH含量分别下降约65%和75%,黑质区Cox-2与caspase-3阳性细胞数和中脑黑质Cox-2与caspase-3含量显著增加,黑质区p-c-Jun表达于细胞核内且中脑黑质p-c-Jun含量大幅升高;经JNK抑制剂SP600125处理的PD小鼠行为表现较轻,TH阳性神经元数量和TH表达水平仅较对照组分别下降约15%和25%,与模型组比较,Cox-2与caspase-3阳性细胞显著减少(P<0.001),p-c-Jun主要表达于细胞质内,中脑黑质Cox-2、caspase-3、p-c-Jun含量明显下降。结论JNK通路在MPTP诱导的黑质区细胞炎症与凋亡过程中可能起重要调控作用;JNK抑制剂对PD小鼠可能具有神经保护作用。

大鼠肝脏缺血再灌注对JNK通路表达影响的研究

目的观察肝缺血再灌注对JNK通路中JNK活化的情况和c-junmRNA表达的影响,以探讨其在肝脏缺血再灌注损伤中的作用。方法60只Wistar大鼠随机分成缺血再灌注组(IR),与假手术组(SO组),利用肝原位部分缺血再灌注模型,于复灌后0、0.5、1、2、4、8、12和24h取材,应用免疫组织化学的方法对磷酸化的JNK(p-JNK)进行免疫组化检测以及RT-PCR法检测各组c-junmRNA的表达,并作半定量分析,观察其在缺血再灌注中的变化。结果p-JNK在缺血后即有轻度地增高,但在再灌注后30min开始增高明显,持续到再灌注后4h,高峰出现在再灌注后2h。在IR组再灌注后0.5～2hc-junmRNA的表达增高,1h达高峰;4h后c-junmRNA仍有持续较高的表达。结论缺血再灌注可以增加JNK的磷酸化水平以及c-junmRNA的转录水平,JNK通路可能在缺血再灌注损伤中取至关重要的作用。

JNK信号通路介导MDR1/P-gp调控人结肠癌多药耐药

目的:探讨在人结肠癌多药耐药细胞株HCT8/V中JNK信号传导通路与多药耐药1(MDR1)基因表达的关系.方法:MTT法检测人结肠癌多药耐药细胞株HCT8/V及其敏感株HCT8细胞对多种抗肿瘤药物的敏感性;抑制JNK信号通路的激活后,采用双荧光素酶活性报告基因检测MDR1启动子转录活性的表达;实时荧光定量PCR检测MDR1mRNA的表达;Westernblot分析对P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.结果:HCT8/V细胞对长春新碱(VCR)的耐药倍数为10.49倍.加入JNK特异性抑制剂sp600125(20μmol/L)抑制后,HCT8/V细胞对VCR的半数抑制浓度(IC50)由191.08mg/L±18.18mg/L降低到50.34mg/L±15.71mg/L,逆转指数为3.80(P<0.01).HCT8/V细胞加入JNK抑制剂后,MDR1启动子活性从0.03647±0.00191降低到0.01362±0.00196,下降了2.52倍(P<0.01).实时荧光定量PCR、Westernblot检测结果提示,抑制JNK通路的激活后,HCT8/V细胞的MDR1mRNA从0.34275±0.0339下降到0.13625±0.0196(P<0.01),P-gp表达从0.88132±0.1026下降到0.56174±0.1014(P<0.01).结论:JNK信号通路通过介导MDR1/P-gp调控人肠癌多要耐药,抑制JNK信号通路可降低MDR1/P-gp的水平,逆转人结肠癌HCT8/V细胞的多药耐药性.

磷酸化c-Jun表达对亚急性帕金森病MPTP模型小鼠黑质COX-2表达的影响

目的研究磷酸化c-Jun(p-c-Jun)在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致亚急性帕金森病(PD)小鼠模型中对环氧合酶-2(COX-2)的表达调控作用,以探讨PD黑质多巴胺(DA)能神经元变性失活的可能机制。方法采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型。通过行为学观察,免疫组织化学SP法,免疫荧光双标记法和免疫蛋白印记法,观察模型小鼠行为学变化,观察PD模型小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、COX-2和p-c-Jun免疫组织化学变化以及中脑黑质TH、COX-2和p-c-Jun表达水平的变化;观察给予JNK通路特异性剂SP-600125对上述变化的影响。结果与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现典型PD症状。黑质区TH阳性神经元下降约65%(P<0.001),中脑黑质TH表达水平显著降低约75%;黑质区COX-2阳性细胞显著增加,中脑黑质COX-2表达水平明显升高;p-c-Jun特异性表达于黑质区细胞核内,p-c-Jun表达水平显著升高。免疫荧光双标记染色可见,COX-2和p-c-Jun共同表达于TH阳性细胞。抑制剂组,经SP600125处理后,模型小鼠PD症状减轻,与对照组比较,在MPTP第5次注射后七天,TH阳性细胞数和TH表达水平仅下降约15%和20%,与模型组比较,黑质区COX-2阳性细胞明显减少,中脑黑质COX-2表达水平明显降低,p-c-Jun仅表达于黑质区细胞的胞浆内,中脑黑质p-c-Jun表达水平明显下降。结论p-c-Jun表达对亚急性帕金森病MPTP模型中脑黑质COX-2表达中可能起重要调控作用;抑制p-c-Jun表达对帕金森病小鼠可能具有一定的神经保护作用。

JNK通路介导帕金森病小鼠黑质神经元丢失及人参皂甙Rg1的保护作用

[目的]研究c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal protein kinase,JNK)在1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致小鼠帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型中对PD黑质多巴胺(Dopamine,DA)能神经元丢失的可能机制以及人参皂甙Rg1的神经保护作用。[方法]采用神经毒素MPTP制备PD小鼠模型,免疫组织化学法与蛋白印迹法观察各组小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)和磷酸化c-Jun(p-c-jun)表达变化;原位末端标记法(TUNEL)观察黑质细胞凋亡数量变化。[结果]与对照组相比,模型组小鼠黑质致密带TH阳性神经元显著减少约55%(P﹤0.01),p-c-jun表达水平亦明显升高,黑质神经元TUNEL阳性细胞数量增高;人参皂甙Rg1干预组黑质TH阳性神经元细胞丢失明显减轻31%(P﹤0.01),p-c-jun表达水平明显下降,黑质神经元TUNEL阳性细胞数量显著减少。[结论]JNK通路可能通过凋亡途径参与模型小鼠黑质多巴胺能神经元丢失过程;人参皂甙Rg1可在一定程度上阻抑黑质区JNK信号通路,减轻MPTP诱导的PD小鼠黑质DA能神经元凋亡;人参皂甙Rg1对帕金森病小鼠具有一定的神经保护作用。

JNK通路对亚急性帕金森病MPTP模型小鼠黑质COX-2表达的影响

目的:研究JNK在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致小鼠帕金森病(PD)模型中对环氧合酶-2(COX-2)的表达调控作用,以探讨可能导致PD黑质多巴胺(DA)能神经元变性失活的机制.方法:采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型,观察模型小鼠行为学变化,观察PD模型小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(TH),COX-2,磷酸化c-Jun的表达变化;观察给予JNK通路特异性抑制剂SP600125对上述变化的影响.结果:与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现典型PD症状,在MPTP第3次注射后6h,黑质区COX-2阳性细胞显著增加,p-c-Jun特异性表达于黑质区细胞核内,在MPTP第5次注射后7d,黑质区TH阳性神经元显著丢失65%(P<0.01);经SP600125处理后,模型小鼠PD症状减轻,与对照组比较,在MPTP第5次注射后7d,TH阳性细胞数仅下降约15%,与模型组比较,在MPTP第3次注射后6h,黑质区COX-2阳性细胞明显减少(P<0.01),黑质区p-c-Jun表达于细胞质内.结论:JNK通路在亚急性PDMPTP模型早期对黑质COX-2表达中可能起重要调控作用;抑制JNK通路对PD小鼠具有神经保护作用.