远隔缺血预适应对脑缺血再灌注损伤大鼠缺血半暗带区PERK/p-eIF2α通路及自噬的影响

目的研究远隔缺血预适应(remote ischemic preconditioning, RIPC)对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带区自噬相关蛋白Beclin1、LC3B以及内质网分子伴侣GRP78、内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)相关通路PERK/p-eIF2α的影响,探讨RIPC保护脑缺血损伤作用的相关机制。方法将24只健康雄性Sprague-Dawley大鼠采用抽签法随机分为3组:假手术(Sham)组、大脑中动脉梗塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)组和RIPC+MCAO组。每组8只大鼠。采用改良线栓法制备大鼠MCAO再灌注模型,于缺血90 min后拔出线栓再灌注24 h。其中RIPC+MCAO组在MCAO之前,给予大鼠连续3 d的RIPC(采用夹闭双侧股动脉10 min开放10 min,每天3个循环的方法)。免疫荧光双标染色法检测再灌注大鼠缺血半暗带区自噬相关蛋白Beclin1、LC3B以及GRP78、p-eIF2α的表达。结果 1)Sham组大鼠脑内偶见Beclin1阳性细胞。MCAO组大鼠再灌注24 h缺血半暗带区Beclin1表达水平比Sham组显著升高(P<0.05)。给予RIPC的脑缺血再灌注大鼠半暗带区Beclin1的表达水平比MCAO组显著减少(P<0.05)。Beclin1与神经元标志物NeuN共定位。2)MCAO组大鼠再灌注24 h,脑缺血半暗带区GRP78分别与Beclin1和LC3B免疫荧光染色共定位。3)MCAO组大鼠再灌注24 h,脑缺血半暗带区Beclin1与p-eIF2α免疫荧光染色共定位。Sham组大鼠未见Beclin1和p-eIF2α双标阳性细胞,MCAO组大鼠再灌注24 h半暗带区可见大量Beclin1和p-eIF2α双标阳性细胞。给予RIPC后,缺血大鼠半暗带区Beclin1和p-eIF2α双标阳性细胞数目比MCAO组明显减少(P<0.05)。结论 RIPC可能通过抑制ERS相关通路PERK/p-eIF2α,减少神经元中自噬相关蛋白产生,避免神经元过度激活自噬,发挥对脑缺血再灌注损伤的保护作用。

HPV(16/18)E6、PKR、p-PKR、p-EIF2α在宫颈病变组织表达的意义

目的:探讨HPV(16/18)E6、蛋白激酶R(PKR)、磷酸化型PKR(p-PKR)、磷酸化型真核细胞翻译起始因子2α(p-EIF2α)在各级别宫颈病变组织的表达差异与宫颈病变级别的相关性及对宫颈癌患者预后的影响。方法:采用免疫组化法检测HPV(16/18)E6、PKR、p-PKR、p-EIF2α在63例宫颈癌、114例宫颈上皮内瘤样病变(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ)、15例正常宫颈组织中的表达。结果:HPV(16/18)E6在各组的阳性表达率为6.7%、15.4%、22.9%、27.5%、39.7%,宫颈癌组明显高于正常组及CINⅠ组(P<0.01,P<0.05);PKR在各组的阳性表达率为6.7%、17.9%、25.7%、30.0%、46.0%,宫颈癌组明显高于正常及CINⅠ-Ⅱ组(P<0.01,P<0.01,P<0.05);p-PKR在各组的阳性表达率(6.7%、15.4%、20.0%、15.0%、15.9%)无统计学差异(P>0.05);p-EIF2α在各组的阳性表达率为6.7%、23.1%、31.4%、40.0%、30.2%,CINⅢ组高于正常宫颈组(P<0.05);HPV(16/18)E6、PKR在各组的阳性表达率与宫颈病变级别成正相关(P<0.05,P<0.05);在宫颈癌组,PKR的阳性表达率明显高于p-PKR(P<0.01);宫颈癌患者临床分期晚者病情进展快(P<0.01),p-PKR、p-EIF2α阴性表达者病情进展快(P<0.05,P<0.05)。结论:HPV(16/18)E6使p-PKR、p-EIF2α失活,促进宫颈病变进展,导致宫颈癌患者预后不良;p-PKR、p-EIF2α能抑制病情进展,改善其预后。

抵当汤对脑出血大鼠eIF2α、p-eIF2α及CHOP蛋白表达的影响

目的讨论抵当汤对脑出血大鼠的内质网应激损伤而导致的神经细胞凋亡相关的信号蛋白真核细胞起始因子(eIF2α)、磷酸化真核细胞起始因子(p-eIF2α)及特异性蛋白C增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的影响。方法以健康的Wistar大鼠60只作为研究对象,采用自体血注射尾状核的方法制作大鼠脑出血模型,将大鼠随机分为5组:假手术组、模型组,以及抵当汤低、中、高剂量组,每组 12只。采用免疫蛋白印记(western blot)方法,比较各组eIF2α、p-eIF2α及CHOP蛋白在脑出血半暗带区的动态表达;采用Longa五级评分法对几组大鼠进行神经功能评分;采用Billot公式计算法测定出脑出血半暗带的脑含水量。结果与模型组比较,抵当汤组p-eIF2α及CHOP蛋白表达降低;与模型组比较,抵当汤组大鼠神经功能评分较模型组低;与模型组比较,抵当汤组大鼠脑含水量较模型组低。结论抵当汤可以通过下调p-eIF2α及CHOP蛋白的表达,抑制与细胞凋亡相关的信号通路的活化,从而抑制过度的内质网应激损伤,对脑出血半暗带区的神经细胞有保护作用,从而减轻凋亡。

葡萄糖调节蛋白-78和磷酸化真核翻译启动因子2α在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义

目的分析葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)及磷酸化真核翻译启动因子2α(P-e IF2α)在正常膀胱黏膜组织和膀胱泌尿上皮癌组织中的表达。方法采用Western blot法检测16对膀胱癌和正常膀胱活检新鲜组织的GRP78和P-e IF2α蛋白的表达水平。采用免疫组织化学方法检测67例膀胱泌尿上皮癌组织中GRP78蛋白的表达,并分析其蛋白表达水平与临床病理特征之间的相关性。结果 GRP78蛋白在膀胱泌尿上皮癌中表达较正常膀胱黏膜组织中上升。免疫组织化学染色结果显示膀胱泌尿上皮癌组织中的GRP78的表达水平与临床分期、浸润深度及淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。结论在膀胱泌尿上皮癌中,GRP78较正常组织中表达上调,并且与膀胱泌尿上皮癌的浸润深度及淋巴结转移相关,P-e IF2α在癌组织与正常组织中表达无显著差异。

REM睡眠剥夺对大鼠额叶皮质磷酸化eIF2α表达的影响

目的观察不同时间的快速眼动(REM)睡眠剥夺对大鼠额叶皮质磷酸化真核翻译起始因子(elF2α)蛋白表达的影响。方法采用改良多平台睡眠剥夺法,将Sprague-Dawle大鼠分为6h、12h、24h和72h时间段进行REM期睡眠剥夺。采用免疫组织化学方法和蛋白质免疫印迹(Western blot)技术观察REM睡眠剥夺后大鼠额叶磷酸化eIF2α蛋白表达的分布特点和变化规律。结果免疫组化观察到eIF2α(P)免疫反应阳性表达在睡眠剥夺6h开始增多,12h、24h显著增多,72h降低,阳性指数分别为80.733±4.094、121.288±3.453、106.197±6.611、67.890±4.173;Western blot实验发现,与对照组相比,REM睡眠剥夺早期大鼠额叶皮质激活了磷酸化的eIF2α,在12h(1.103±0.200)达到高峰,并持续到24h(1.095±0.157),睡眠剥夺72h(0.566±0.074)后逐渐下降。结论短期REM睡眠剥夺能诱导大鼠额叶皮质磷酸化eIF2α蛋白表达,使蛋白合成抑制。

氧乐果导致染毒大鼠内质网应激的研究

目的研究有机磷暴露接触对内质网的影响。方法大鼠持续60天氧乐果经口染毒,检测骨骼肌中的PERK,BiP,p-eIF2α,eIF2α,IRE1α的表达水平。结果染毒组的BiP,PERK和IRE1α的表达水平均高于Control组(P<0.05)。染毒组中BiP,PERK和IRE1α的表达水平中剂量组(MD)和高剂量组(HD)均高于低剂量组(LD)(P<0.05);与MD组相比,HD组中BiP,PERK和IRE1α的表达水平较高(P<0.05)。染毒组p-eIF2α/eIF2α水平均高于Control组(P<0.05)。与LD组和MD组相比,HD组中p-eIF2α/eIF2α的水平较高(P<0.05);LD组与MD组的peIF2α/eIF2α水平的差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论氧乐果暴露接触能够引起大鼠体内产生内质网应激。

PERK／p-eIF2a通路在氟致机体损伤中的作用

氟中毒可造成机体的骨相和非骨相组织损害，其发生机制不清。大量研究证明，氟能引起机体各系统或脏器的蛋白合成下降、细胞凋亡增加，从而造成机体组织的广泛损伤，并且损伤机制可能与内质网应激有关。蛋白激酶受体样内质网激酶／磷酸化真核翻译起始因子2α（PERK／p-eIF2a）通路为内质网应激最先活化的通路，可能在氟中毒的发生机制中有重要作用。因此，作者将对PERK／p-eIF2a路在氟致机体损伤中的作用进行综述，以期为氟中毒发病机制的阐明和防治提供新思路。

女性压力性尿失禁与内质网应激的相关性研究

目的研究女性压力性尿失禁(SUI)患者病理改变及内质网应激(ERS)的相关蛋白表达变化,为SUI的发病机制研究提供参考依据。方法选取2009年10月-2012年2月在吉林大学中日联谊医院泌尿外科确诊为SUI的18例患者作为SUI组;另选取同期因外阴癌、直肠癌行手术治疗的女性患者13例作为对照组。获取患者阴道前壁及肛提肌组织样本,进行HE及免疫组织化学染色。结果病理组织学显示,平滑肌细胞有不同程度的肌纤维稀疏,细胞间质水肿出现;免疫组织化染色结果显示,与对照组比较,内质网激酶(PERK)蛋白表达上升,差异有统计学意义(P<0.05),磷酸化真核翻译起始因子2α(p-e IF2α)、免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)、活化转录因子4(ATF4)下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SUI组织中发生了持续且严重的ERS。