针刺对脑缺血再灌注大鼠P-选择素和E-选择素蛋白表达影响的实验研究

目的:探讨针刺抗脑缺血再灌注炎性损伤的机制。方法:采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),采用免疫组织化学技术研究P-选择素和E-选择表达的动态变化。结果:再灌注3h各实验组P-选择素和E-选择素均开始表达,于再灌注24h均达到高峰(组内比较P<0.01),持续至再灌注48h,针刺可显著降低P-选择素和E-选择素的表达(与模型组和非穴组比较,P<0.01)。结论:P-选择素和E-选择素的表达上调与再灌注后的炎症反应有关,早期针刺治疗可能通过下调脑缺血区粘附分子P-选择素和E-选择素的表达而防治脑缺血再灌注炎性损伤。

P-选择素在基因敲除小鼠肺转移中的作用研究

目的探讨P-选择素对小鼠黑色素瘤肺转移的影响。方法将体外培养的B16黑色素细胞株通过小鼠的尾静脉注射到小鼠背景为C57/BL(C57)的P-选择素敲除的小鼠和C57小鼠的体内,建立转移瘤瘤模型,第21天断颈处死小鼠,计数转移到肺表面的结节的数目,HE染色进一步确定转移结节。结果 P-选择素敲除小鼠肺表面转移的肿瘤结节的数目明显比C57小鼠少,两者比较差异有统计学意义(P﹤0.01)。HE染色证实小鼠肺组织中有B16细胞的肺转移灶。结论 P-选择素缺失可能参与抑制了黑色素瘤的肺转移。

血清P-选择素水平与冠脉病变严重度关系的研究

目的:探讨检测血清P-选择素水平与冠脉病变严重度的关系。方法:70例冠心病患者,按临床诊断分为2组:急性冠脉综合症组32例和稳定型冠心病组38例,对照组患者30例。ELISA检测各组患者血清中P-选择素水平,并比较各组间的差异;冠脉造影术对冠脉病变进行Gensini评分,并了解其与血清中P-选择素的相关性。结果:冠心病患者血清中的P-选择素水平显著高于正常对照组;在冠心病组内,急性冠脉综合症组的P-选择素水平显著高于稳定型冠心病患者,但两组冠脉病变Gensini评分无显著差别;而且冠脉病变Gensini评分与血清中P-选择素水平呈明显的相关性。结论:P-选择素可能参与了冠状动脉粥样硬化的发生和发展过程,血清P-选择素水平可能是冠脉病变严重度的一个预测指标。

吡格列酮对脑缺血再灌注损害的保护作用及对血小板活化因子和P-选择素表达的影响

目的研究吡格列酮对脑缺血再灌注损害的保护作用及对血小板活化因子(PAF)和P-选择素(Ps)表达的影响。方法用线栓法建立脑缺血再灌注大鼠模型。制模前7 d起,分别予以大剂量吡格列酮组大鼠20 mg/(kg.d)、小剂量吡格列酮组大鼠10 mg/(kg.d)吡格列酮灌胃,对照组大鼠给等量生理盐水灌胃,连续7 d。在缺血再灌注24 h后,给大鼠进行神经功能缺损评分,脑组织2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色、苏木精-伊红染色,观察脑梗死体积、脑水肿程度及病理学变化。采用免疫组化法检测大鼠脑组织PAF和Ps的表达。结果与对照组比较,大剂量吡格列酮组和小剂量吡格列酮组的神经功能缺损评分显著降低、脑梗死体积显著缩小(P<0.05～0.01);病理改变明显较轻。大剂量吡格列酮组的脑水肿程度显著低于对照组(P<0.05),小剂量吡格列酮组与对照组脑水肿程度的差异无统计学意义。大剂量和小剂量吡格列酮组脑组织PAF阳性细胞数、Ps阳性血管数明显少于对照组,大剂量吡格列酮组的PAF阳性细胞数明显少于小剂量吡格列酮组(P<0.05～0.01)。结论吡格列酮预处理能减轻缺血再灌注脑损害,降低脑组织PAF和Ps的表达,其可能是通过减轻缺血再灌注后的炎症反应而起到脑保护作用。

糖尿病大鼠脑小血管内皮P-选择素表达研究

目的 探讨糖尿病鼠脑小血管病变机制，方法 利用1％链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病动物模型，将SD大鼠随机分为正常组、糖尿病病程8周组（DM8组）、糖尿病病程24周组（DM24组）观察糖尿病对鼠脑血管内皮P-选择素（PS）表达的影响和炎性标志物血浆C-反应蛋白（CRP）的动态变化。结果 正常大鼠脑内无PS表达；糖尿病大鼠脑内PS主要表达在直径为7．5～30μm的微血管上糖尿病人鼠PS表达较正常大鼠显著增高（P〈0，01）；随病程延长DM24组的PS表达较DM8组也有显著增加（P〈0．05）造模前各组大鼠的血浆CRP含量无差异，造模后DM8组、DM24组CRP分别为64．7±8．12mg／L和1263±123mg／L，较正常大鼠均有显著增高（P〈0.01），DM24组的较DM8组的也有显著性增高（P〈0．05）。结论 糖尿病鼠脑微血管内皮P-选择素表达上凋与慢性低度炎症反应有关，可能是糖尿病大鼠脑微血管内皮功能紊乱的机制之一。

C-反应蛋白对脐静脉内皮细胞凋亡和P选择素表达的影响

目的:观察C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)对人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)凋亡和P选择素(P-selectin)表达的影响。方法:将HUVECs与不同浓度CRP(0ug/ml、5ug/ml、25ug/ml、50ug/ml、100ug/ml)在培养基中孵育24h后为CRP剂量效应组;0ug/ml、50ug/mlCRP作用3h、6h、12h、24h为时间效应组;分别收集细胞和上清液。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用酶联免疫吸附试验检测上清液中的P选择素含量。结果:(1)与对照组(0ug/mlCRP)相比,5ug/ml的CRP培养内皮细胞24h细胞凋亡率显著增加(12.16±3.69%,P<0.01),50ug/ml时细胞凋亡率到达顶峰(27.91±3.11%,P<0.01);50ug/mlCRP孵育不同时间,细胞凋亡率从3h明显增加(2.71±0.93%,P<0.01),24h时细胞凋亡率达顶峰(27.91±3.11%,P<0.01)。(2)与对照组(0ug/mlCRP)相比,5ug/ml的CRP即可显著增加内皮细胞P选择素表达(15.93±3.77ng/ml,P<0.01),100ug/ml时P选择素表达到达顶峰(86.35±7.35ng/ml,P<0.01);50ug/mlCRP孵育不同时间,P选择素表达从3h明显增加(34.33±5.01ng/ml,P<0.01),6h时P选择素表达达顶峰(79.28±7.63ng/ml,P<0.01)。结论:CRP以剂量及时间依赖的方式促进内皮细胞凋亡及P选择素的表达。

槲皮素-3半乳糖苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注炎症损伤机制的影响

目的研究槲皮素-3-半乳糖苷(金丝桃苷)对缺血性脑血管病的神经保护作用。方法78只Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血对照组、金丝桃苷缺血组(Hyp组),后2组又根据观察时间点不同分为脑缺血2h后再灌注,3h、6h、12h、48h六个亚组,每组各6只,线栓法建立大鼠缺血再灌注模型。SABC免疫组化染色法分别记录各组不同时间点的P-选择素和E-选择素阳性反应血管数。结果自3h起同时间点金丝桃苷苷组P-选择素、E-选择素水平均显著低于对照组(P<0.05)。结论金丝桃苷能有效抑制大鼠缺血/再灌注早期P、E-选择素的表达,有显著脑保护作用。

冠状动脉介入治疗干预前后急性心肌梗死患者MMP-9、IL-6、P选择素动态变化的临床意义

目的分析经皮冠状动脉(冠脉)介入(percutaneous coronary intervention,PCI)治疗干预前、后急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9、白细胞介素(interleukin,IL)-6、P选择素浓度动态变化的临床价值。方法选取2011年3月至2014年8月期间在黄梅县人民医院行PCI治疗的86例AMI患者为观察组,选取同时期体检的86名健康人为对照组,采集上述人员空腹外周静脉血并采用酶联免疫吸附法测定样本中MMP-9、IL-6、P选择素浓度。结果观察组PCI治疗前MMP-9、IL-6、P选择素浓度依次为(698.47±108.78)ng/L、(109.87±10.98)pg/L、(94.78±99.54)μg/L,均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组PCI治疗7d后,MMP-9、IL-6、P选择素浓度均依次为(324.78±78.78)ng/L、(73.04±11.78)pg/L、(78.76±69.48)μg/L,均明显低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);观察组PCI治疗7d后MMP-9、IL-6、P选择素浓度与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MMP-9、IL-6、P选择素浓度动态变化反映AMI患者病情变化,监测其浓度波动有助于临床评估PCI治疗的效果。

P选择素在大鼠胰腺移植缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨P选择素(selectin)在大鼠胰腺移植缺血再灌注损伤中的作用。方法将45只SD大鼠随机分为假手术组(15只)和全胰十二指肠移植组(15对),于再灌注后1、3、6h取血测定血清淀粉酶水平,并切取胰腺标本进行组织病理学观察及P选择素免疫组化染色。结果移植组胰腺组织损伤随再灌注时间的延长而加重,血淀粉酶升高,与中性粒细胞浸润直接相关;而假手术组胰腺组织损伤不明显,血淀粉酶不升高。移植组各时段P选择素均表达,且再灌注后1h即达高峰,假手术组P选择素不表达。结论中性粒细胞的活化以及释放出各种蛋白酶和活性因子,是导致胰腺移植缺血再灌注损伤的直接原因。P选择素在大鼠胰腺移植缺血再灌注损伤的病理过程中起重要作用。

创伤性休克患者血浆P-选择素、血管内皮生长因子和一氧化氮的含量变化及其意义

目的 探讨创伤性休克患者血浆P 选择素 (P Sel)、血管内皮生长因子 (VEGF)和一氧化氮 (NO)的含量变化及其意义。方法 采用酶联免疫吸附 (ELISA)测定 43例创伤性休克患者 (创伤性休克组 )及 3 0例健康体检者 (对照组 )外周血中P Sel及VEGF含量。用比色法测定NO的含量。结果 (1)创伤性休克组血浆P Sel、VEGF及NO水平均明显高于正常对照组 (P均 <0 .0 1)。(2 )不同程度休克组P Sel、VEGF及NO含量均随休克加重逐渐升高 ,差异均有显著意义 (P均 <0 .0 1) ,且创伤性休克患者中死亡者血浆P Sel、VEGF及NO浓度明显高于存活者 (P 均 <0 .0 1)。结论 P Sel、VEGF及NO均参与了创伤性休克的发生、发展病理过程 ,并与休克程度相关 ,检测P Sel、VEGF及NO水平对判断创伤性休克的严重程度 ,估计其预后均有一定的参考价值。

GST-talin1融合蛋白的原核表达及纯化

应用PCR方法扩增talin1的cDNA,并将其重组入谷胱甘肽转硫酶融合基因表达载体pGEX-4T-1中,获取人源的GST-talin1融合蛋白,为下阶段深入的研究talin1的结构、功能、及其与之相互作用的蛋白打下基础。经酶切、序列鉴定,选择正确重组子,将其质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用G lutath ione Sepharose 4B柱纯化,western b lot鉴定。克隆得到了一个2400bp的talin1的cDNA片断,重组质粒目的DNA测序正确,纯化出分子量约为121.6kD的融合蛋白。用基因工程方法使GST-talin1重组质粒在原核细胞表达并成功纯化出GST-talin1融合蛋白。

冠心病患者血浆P-选择素、血管性假性血友病因子水平变化及临床意义

目的观察冠心病患者血浆P-选择素、血管性假性血友病因子(vWF)浓度的改变并探讨其临床意义。方法分别测定28例稳定型心绞痛(SA)患者、39例不稳定型心绞痛(UA)患者、21例正常对照组体内的P-选择素、vWF含量,并分析有无冠状动脉事件发生者与P-选择素、vWF之间的关系,同时探讨P-选择素与vWF的相关关系。结果UA组P-选择素、vWF含量明显高于SA组,(13.11±4.13)μg/L vs(10.92±3.16)μg/L,(159.1±45.4)%vs(136.3±43.8)%(均P<0.05)和对照组(10.21±3.38)μg/L,(124.5±36.9)%(均P<0.05),而SA组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);有冠状动脉事件发生者与无冠状动脉事件发生者比较,P-选择素(13.59±4.24)μg/L vs(11.23±3.67)μg/L和vWF(167.9±38.7)%vs(140.0±49.4)%差异均有统计学意义(P<0.05);UA患者P-选择素水平与vWF水平成正相关(r=0.331,P<0.05),有冠状动脉事件发生者二者亦呈正相关(r=0.397,P<0.05)。结论血浆P-选择素、vWF水平可作为冠状动脉血栓形成的指标之一,并在一定程度上反映了冠状动脉事件发生的危险性。

低分子肝素对急性坏死性胰腺炎并肝损伤P-选择素和E-选择素表达的影响

目的研究低分子肝素(LWMH)对大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)并肝损伤中P-选择素和E-选择素表达的影响及其对急性坏死性胰腺炎的保护作用。方法将96只雄性SD大鼠随机分为三个组:对照组(C组,n=32)、急性坏死性胰腺炎组(A组,n=32)、低分子肝素干预组(G组,n=32)。A组以1.5%脱氧胆酸钠溶液逆行注入胰胆管建立急性坏死性胰腺炎模型(1 ml/kg),G组于造模后给予皮下注射低分子肝素(10 U/100 g),C组仅翻动胰腺后关腹。各组分别于造模后6、12、24、48 h四个时点分批处死大鼠,测定血清淀粉酶水平;E LISA检测血清TNF-α、IL-6水平,取胰腺及肝脏组织光镜下进行病理学评分;RT-PCR检测肝脏P-选择素和E-选择素mRNA表达。结果三组间和不同时点之间各项观察指标比较均有统计学意义(P<0.01),A组6、12、24、48 h各时点胰腺及肝脏病理评分、血清淀粉酶及TNF-oα、IL-6水平,P-选择素和E-选择素mRNA表达均较C组相应时点显著升高(P<0.05);G组各时点胰腺及肝脏病理评分、血清淀粉酶及TNF-oα、IL-6水平,P-选择素和E-选择素mRNA表达均较A组对应时点显著降低(P<0.05)。结论 P-选择素和E-选择素在急性坏死性胰腺炎并肝损伤时的表达可能与病变严重程度有关;LWMH可能是通过下调P-选择素和E-选择素表达减轻急性坏死性胰腺炎的胰腺和肝脏病变。

血清P-选择素联合尿微量蛋白检测对过敏性紫癜患儿肾损害的早期诊断价值

目的探讨血清P-选择素联合尿微量蛋白检测对过敏性紫癜(HSN)患儿肾损害的早期诊断意义。方法选择76例HSP患儿作为HSP组,并选取同期65例健康儿童作为对照组。采用常规放免法检测β2微球蛋白(β2-MG)、白蛋白(ALB)及转铁蛋白(TRF)含量,采用双抗夹心酶联免疫法测N乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)含量,血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)测定运用终点法,血清P-选择素定量测定采用酶联免疫吸附法(ELISA)。比较2组尿ALB、TRF、NAG、β2-MG及血清P-选择素的水平,并分析血清P-选择素水平与尿微量蛋白间的相关性。结果 HSP组患儿BUN及Scr水平均在正常范围内,且尿ALB、TRF、NAG、β2-MG及血清P-选择素水平均显著高于对照组患儿,差异有统计学意义;血清P-选择素水平与尿微量蛋白系列呈正相关;HSP组血清P-选择素及尿微量蛋白4项指标中的1项或>1项的异常率显著高于传统以尿常规阳性来判定早期肾损害的尿常规异常率,差异有统计学意义。结论联合检测血清P-选择素及尿微量蛋白对HSP患儿的肾损害具有早期诊断价值。

通脉灵对糖尿病患者P-选择素、抗心磷脂抗体及C-反应蛋白的影响

目的观察糖尿病(DM)患者经通脉灵治疗后血浆CD62-p、ACA、CRP的变化,以评估其能否逆转DM患者血小板活化及微血栓前状态,阻断其病理过程的进展。方法CD62-p、ACA采用ELISA法;CRP采用免疫散射浊度法。所有患者停服抗凝剂一周后,空腹采静脉血分离血浆检测上述指标,随机分为A1组38例;A2组30例。分别采用通脉灵煎剂口服和川芎嗪静脉滴注治疗30d,疗程结束后重复检测以上指标并与安慰剂(B)组30例作对照。结果治疗后A1与A2组临床症状较B组明显改善,CD62-p、ACA、CRP均较治疗前下降(P<0.01、<0.05),尤其是CRP在第2疗程时A1组首先下降,但A2组下降不明显;疗程结束后血浆CD62-p、ACA水平A1较A2组降低显著,临床症状改善有不同程度的差别。结论通脉灵可显著改善DM患者血小板活化及微血栓前病理过程,可降低其心脑血管事件发生。

多发伤重症患者血浆选择素P、L、E浓度测定的临床意义

目的观察多发伤重症患者血浆中P、L、E-选择素浓度与并发全身炎症反应综合征（SIRS）和脓毒症的关联。方法选择2008年6月～2011年11月问来笔者医院急诊外科就诊的重症监护室多发伤SIRS但未并发脓毒症的患者52例（SIRS组），多发伤并发脓毒症患者49例（Sepsis组），多发伤无并发症患者51例（无并发症组）。另筛选44例健康成人志愿者为对照组。监测患者入院时血浆中P、L、E-选择素水平，并绘制ROC曲线图。结果与正常对照组P、L、E-选择素水平相比，Sepsis组、SIRS组和无并发症组的P、L、E-选择素浓度均有统计学差异（P〈0．05）。Sepsis组中死亡患者血浆中选择素水平高于存活患者，差异有统计学意义（P〈0．05）。P-选择素在诊断曲线下面积方面优于L、E-选择素。结论血浆P、L、E-选择素对多发伤患者是否伴有并发症具有重要检测意义，有助于判断患者预后，降低病死率。

不同剂量ASA对PCI术后患者血浆TXB2和P选择素水平的影响

目的:经皮冠脉介入治疗(PCI)术后阿司匹林的剂量一直是人们争论的问题。虽然国外多个大型临床研究发现PCI术后服用低剂量阿司匹林(≤100 mg/d)较高剂量阿司匹林(300 mg/d)可同样预防缺血事件,而且还可以减少出血事件的发生,但这些研究均未对不同剂量阿司匹林抑制血小板聚集及活化情况进行检测,我们通过对PCI术后服用不同剂量阿司匹林患者血浆中血栓烷素B2(TXB2)和P选择素的水平的检测,为PCI术后阿司匹林合理剂量提供更有力的依据。方法:我们于2011年5月至2012年12月间,连续入选在我院行冠状动脉造影并置入了支架且符合入选标准的患者150例,随机分为低剂量阿司匹林组(PCI术后阿司匹林100 mg/d)和高剂量阿司匹林组(PCI术后阿司匹林300 mg/d服用3个月后改100 mg/d),采用酶联免疫吸附双抗体夹心法分别于服用阿司匹林前以及PCI术后5-7天检测血浆中TXB2、P选择素水平。结果:与服用阿司匹林前相比,服用阿司匹林后,各组血浆中TXB2和P选择素均有明显下降,PCI术后两组间血浆中TXB2和P选择素的水平均无显著差异。结论:PCI术后低剂量阿司匹林(≤100 mg/d)抑制血小板聚集及活化的效果与高剂量阿司匹林(300 mg/d)相同。

P-选择素、C-反应蛋白和心肌肌钙蛋白I对急性冠状动脉综合征的预后价值

目的探讨P-选择素、C-反应蛋白(CRP)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)对急性冠状动脉综合征(ACS)患者短期预后评估的作用。方法分别测定70例ACS患者入院时外周血的P-选择素、CRP和cTnI水平。随诊1个月,终点为心脏事件。同时测定18例健康成人的P-选择素作对照。结果ACS组的P-选择素水平较对照组明显增高(P<0.01),在70例ACS患者中P-选择素升高27例,CPR升高23例,cTnI升高38例。随诊期共发生心脏事件14例,各因子增高组的心脏事件率均较正常组高(均为P<0.05)。其与ACS预后关系的相对危险度分别是5.74、6.83和3.94(均为P<0.05)。阳性预测值分别是37%、34%和28%。这三种因子的联合试验对心脏事件的阳性预测值是42.9%。结论P-选择素与ACS发生有关;P-选择素、CRP和cTnI分别与ACS短期预后有关,可作为危险分层的指标之一;联合检测意义更大。

非瓣膜性心房颤动患者内皮和血小板功能及β受体阻滞剂干预的临床意义

目的探讨非瓣膜性心房颤动（房颤）与内皮细胞功能及血小板功能的关系，观察B受体阻滞剂治疗对房颤患者内皮功能及血小板功能的影响。方法非瓣膜性持续性房颤患者（房颤组）25例，窦性心律组（窦律组）35例，通过竞争性酶联免疫（ELASA）分析定量测定两组血清血管性血友病因子（von Willebrand Factor，vWF）和可溶性P选择素水平，及房颤组8受体阻滞剂治疗后上述指标的变化。结果房颤组血清vwF水平（1945．2±111．3）g／L高于窦律组（1862．3±101．6）g／L，差异有统计学意义（P〈O．05）。房颤组患者服用口受体阻滞剂（阿替洛尔）后，血清vWF水平下降至（1758．3±152．4）g／I。，与服药前比较差异有统计学意义（P〈0．01）。血清可溶性P选择素水平房颤组与窦律组[分别为（24．32±9．21）g／I。与（24．68±11．70）g／L]比较，差异无统计学意义（P〉0．05），服用G受体阻滞剂后血清可溶性P选择素水平下降至（21．05±8．94）g／L，但与服药前相比差异无统计学意义（P〉0．05）。vWF与可溶性P选择素无相关性（Pearson相关系数为-0．008，P〉0．05）。结论房颤患者血清vWF水平较窦性心律者升高，提示存在心血管内皮损伤。服用阿替洛尔后，房颤患者血清vWF水平下降，提示阿替洛尔用于房颤患者除能有效控制心室率外，还可能具有内皮保护功能。

P-选择素水平及血小板计数在重症感染患者的临床价值

目的探讨P-选择素水平、血小板计数在评价、预测重症感染患者病情变化及预后的，临床意义。方法选择2011年9月至2012年9月郑州大学第一附属医院呼吸ICU病房重症感染患者80例，按ACCM／SC—CMl991年芝加哥会议上提出的全身炎症反应综合征（SIRS）诊断标准，分为SIRS组40例（A组）和非SIRS组40例（B组）；选择同期健康体检者40例作为对照组（C组），比较各组间的P-选择素、血小板计数的差异；A组按预后分为生存组和死亡组，比较两组的P-选择素、血小板计数的差异。结果A组与B组、c组比较，P-选择素升高，血小板计数降低，差异有统计学意义；B组P选择素较c组升高，差异有统计学意义；死亡组与生存组比较，P一选择素升高，血小板计数降低，差异有统计学意义。结论P．选择素水平、血小板计数可以作为反映重症感染患者病情严重程度及预后的可靠指标。