费氏丙酸杆菌谢氏亚种和植物乳杆菌亚油酸异构酶结构及酶学性质

【目的】对来源于植物乳杆菌(Lactobacillu plantarum)和费氏丙酸杆菌谢氏亚种(Propionibacteriu freudenreichii ssp.shermanii)亚油酸异构酶酶学特性开展研究,探讨不同来源的亚油酸异构酶酶学性质存在的差异。【方法】通过酶反应动力学方法及电泳技术测定了酶的最适反应条件、米氏常数、酶的分子量,并在此基础上,采用高效液相色谱(HPLC)与电喷雾离子化/质谱(ESI-MS)相结合的方法测定了L.plantarum和P.freudenreichii ssp.shermanii亚油酸异构酶的氨基酸序列。【结果】P.freudenreichii ssp.shermanii亚油酸异构酶的最适pH为8.0,最适反应温度是30℃,Km=20.53μmol·L-1,Vmax=0.44μg·ml-1·min-1;L.plantarum亚油酸异构酶的最适pH为7.5,最适反应温度是为50℃,Km=17.85μmol·L-1,Vmax=0.73μg.ml-1·min-1。【结论】来源于L.plantarum和P.freudenreichii ssp.shermanii亚油酸异构酶的全氨基酸序列不同,但两者具有一定的同源性,且两者酶学特性也有差异。

费氏丙酸杆菌谢氏亚种和植物乳杆菌中亚油酸异构酶的分离纯化

采用盐析、Sephacryl S-200HR凝胶过滤层析、DEAE Sepharose F.F.离子交换层析相结合的方法,分别建立了来源于费氏丙酸杆菌谢氏亚种(P.feudenreichii ssp.shermanii)和植物乳杆菌(L.plantarum)的亚油酸异构酶的分离提取步骤。结果表明不同来源的亚油酸异构酶在纯化的过程中表现出不同的洗脱特性,P.freudenreichii ssp.shermanii亚油酸异构酶的分子质量约为56kDa,L.plantarum亚油酸异构酶的分子质量为50.65kDa。不同来源亚油酸异构酶的分离纯化方法存在差异。