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Identification of Shell Color-Associated Genes Using Mantle Branch-Specific RNA Sequencing of Yellow-Colored Line of Pearl Oyster Pinctada fucata martensii
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作者 PENG Haiming LIAO Yongshan +3 位作者 YANG Chuangye MKUYE Robert DENG Yuewen YUE Chenyang 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS CSCD 2024年第4期1076-1086,共11页
The yellow-colored line of pearl oyster Pinctada fucata martensii displays a yellow prismatic layer and a white nacreous layer that can be used as an ideal model for research on shell color formation.Micro-Raman spect... The yellow-colored line of pearl oyster Pinctada fucata martensii displays a yellow prismatic layer and a white nacreous layer that can be used as an ideal model for research on shell color formation.Micro-Raman spectroscopy and transcriptome analyses were performed to explore the potential molecular mechanism underlying the phenotype differentiation.The micro-Raman spectroscopy results indicate that the prismatic layer exhibits distinct characteristic peaks of carotenoids,while these peaks are not prominent in the nacreous layer.In the transcriptome comparison of the central zone of mantle and mantle edge tissue,which function in nacreous and prismatic layer formation,respectively,935 significantly differentially expressed genes(DEGs)were identified,with 385 genes upregulated and 227 genes downregulated(|log_(2)(Fold change)|>1 and false discovery rate<0.05)in the mantle edge tissue.Among these genes,some were associated with melanoma/melanogenesis,such as tyrosinase,zinc metalloprotease,glutathione S-transferase,and ATP-binding cassette sub-family;some were associated with the carotenoid-related pathway,including scavenger receptors,cytochrome P450 and lipoprotein receptor.Genes associated with porphyrin metabolism,including porphobilinogen deaminase,and copper/zinc superoxide dismutase,and genes associated with shell matrix protein,including amorphous calcium carbonate binding protein,shematrin,PIF,and collagen,also exhibited significantly different expressions.It is speculated that the different colours between prismatic layer and nacreous layer in the yellow-colored line of P.f.martensii might be resulted from melanin,carotenoids and porphyrin metabolism,while genes related to shell structure and biomineralization might also affect coloration.Our results provide new insights to understand the mechanism of shell color formation in mollusca. 展开更多
关键词 pinctada fucata martensii shell coloration TRANSCRIpTOME
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马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)FBP基因的克隆及其对温度胁迫的响应 被引量:4
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作者 赖卓欣 刘雅 +2 位作者 王庆恒 郑哲 邓岳文 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2019年第2期106-114,共9页
果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)是催化糖异生过程中的限速酶,当动植物处于温度胁迫等不良环境条件时,FBP通过参与糖异生途径以维持机体的糖平衡,在动植物抗逆过程中起着重要作用。本研究通过RACE技术获得了马氏珠母贝(Pinctada fucata martensi... 果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)是催化糖异生过程中的限速酶,当动植物处于温度胁迫等不良环境条件时,FBP通过参与糖异生途径以维持机体的糖平衡,在动植物抗逆过程中起着重要作用。本研究通过RACE技术获得了马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii) FBP(Pm-FBP)基因c DNA全长,并使用实时荧光定量PCR技术检测了该基因在马氏珠母贝不同组织中的表达量,以及在17℃(低温组)、22℃(对照组)、32℃(高温组)条件下鳃中的时序表达模式。序列分析显示,Pm-FBP全长为1381 bp,具有54 bp的5¢UTR和62 bp的3¢UTR,开放阅读框(ORF)为1020 bp,编码339个氨基酸,预测分子量为37.13 kDa,等电点为6.02。Pm-FBP具有一个Pfam FBPase保守结构域,6个潜在的O-连接糖基化位点(Ser36、Ser56、Ser57、Ser76、Ser80和Thr115),1个潜在的N-糖基化位点,1个金属结合位点(Asp-Pro-Ile/Leu-Asp-Gly/Ser-Thr/Ser)和46个磷酸化位点。多序列比对结果显示,Pm-FBP与长牡蛎(Crassostrea gigas)FBP的相似性最高,为83%;系统进化树显示,Pm-FBP与长牡蛎等贝类聚为一支,然后再与其他软体动物聚为一大支,节肢动物和脊椎动物分别聚类,进化树总体聚为三大支。实时荧光定量结果显示,Pm-FBP在所检测的闭壳肌、鳃、性腺、肝胰腺、足和外套膜等组织中均有表达,在性腺表达量最高,肝胰腺和鳃中有较高表达;对Pm-FBP时序表达的分析发现,Pm-FBP在低温组和高温组实验时间范围内均出现先上升后下降的趋势,且在72 h时达到最大值,表明Pm-FBP参与了马氏珠母贝对温度胁迫的响应;在120h时,高温组和低温组的Pm-FBP表达量均显著下降,表明Pm-FBP可能主要在短期的温度胁迫中发挥作用。本研究结果为进一步探索马氏珠母贝对温度胁迫的适应性提供了参考资料。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 果糖-1 6-二磷酸酶基因 温度胁迫 表达分析 基因克隆
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The role of Smad6 in immunity of the pearl oyster Pinctada fucata martensii
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作者 Yu SHI Xiaolan PAN +3 位作者 Meng XU Huiru LIU Hanzhi XU Maoxian HE 《Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2022年第3期1135-1147,共13页
Inhibitory Smads(I-Smads),which belong to the Smad family and inhibit bone morphogenic protein 2(BMP2)signaling by a variety of mechanisms,can suppress innate immunity responses in vertebrates.However,there are no rep... Inhibitory Smads(I-Smads),which belong to the Smad family and inhibit bone morphogenic protein 2(BMP2)signaling by a variety of mechanisms,can suppress innate immunity responses in vertebrates.However,there are no reports for the role of Smad6 in immunity in mollusks.In this study,we showed that Smad6 of the pearl oyster Pinctada fucata martensii was located in the Smad6 cluster of the phylogenetic tree;mRNA expression of Smad6 and Smad3 was up-regulated after lipopolysaccharide and polyinosinic:polycytidylic challenge;and transcript levels of Smad6 and Smad3 showed opposite patterns during wound healing.Under salinity stress,water inflow and outflow in the gills appear to be regulated by BMP2-Smads signals,and BMP2-Smads signaling may be closely related to the immune response.Our results indicate that Smad6 is involved in immunity,that it plays a positive role in the response to immune challenge and an inhibitory role during wound healing,and that Smad6 and Smad3 may work against each other. 展开更多
关键词 SMAD6 BMp2-Smads signal pathway expression IMMUNITY pinctada fucata martensii
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Transcriptomic Analysis and Comparison of the Gene Expression Profiles in Fast- and Slow-Growing Pearl Oysters Pinctada fucata martensii
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作者 XU Hanzhi LIU Huiru +1 位作者 ZHANG Hua HE Maoxian 《Journal of Ocean University of China》 SCIE CAS CSCD 2022年第1期186-194,共9页
The pearl oyster Pinctada fucata martensii is an economically valuable shellfish that is cultured for seawater pearl pro-duction,which mainly depends on oyster growth.However,the growth mechanisms of the pearl oyster ... The pearl oyster Pinctada fucata martensii is an economically valuable shellfish that is cultured for seawater pearl pro-duction,which mainly depends on oyster growth.However,the growth mechanisms of the pearl oyster are still poorly understood.In this study,oysters were grouped with relative growth rate,including fast-growing(FG)group and slow-growing(SG)group.Oxford Nanopore Technologies(ONT)long-read sequencing was applied to investigate the molecular mechanisms involved in the growth of this species.Five alternative splicing(AS)types were analyzed in both FG and SG groups,which include alternative 3’splice site,alternative 5’splice site,exon skipping,intron retention,and mutually exclusive exon.Transcriptome analysis showed that four of five different AS events(excluding mutually exclusive exons)occurred more frequently in FG than in SG oysters,and the five main AS types exhibited different characteristics.The AS events that were detected may be involved in growth,and the difference in ex-pression of AS events between FG and SG oysters may be involved in the mechanism underlying the difference in growth.Fifty dif-ferentially expressed genes(DEGs)were identified between the FG and SG oysters.The results showed that 40 genes were signifi-cantly up-regulated in FG oysters,while 10 genes were significantly down-regulated in SG oyster.Several genes related to nutrient metabolism,shell formation,and immunity were more highly expressed in FG oysters than in SG oysters.In summary,FG oysters exhibited higher metabolic and biomineralization activities and had a more powerful immune system than SG oysters.These results provide insight into the growth of P.f.martensii that can be used to improve breeding programs. 展开更多
关键词 pinctada fucata martensii differential growth Oxford Nanopore Technologies sequencing differentially expressed genes
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Transcriptome analysis differentially expressed genes with total carotenoid contents in pearl oyster(Pinctada fucata martensii)
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作者 LIU Yong YANG Xiuyan +3 位作者 LEI Chao LI Junhui YANG Chuangye DENG Yuewen 《Marine Science Bulletin》 2022年第1期56-71,共16页
Differentially expressed genes(DEGs)between individuals with high(HC)and low(LC)total carotenoid content(TCC)were sampled from a selected line of Pinctada fucata martensii with black shell in the prismatic layer.The e... Differentially expressed genes(DEGs)between individuals with high(HC)and low(LC)total carotenoid content(TCC)were sampled from a selected line of Pinctada fucata martensii with black shell in the prismatic layer.The expression levels of candidate genes were verified by qRT-PCR.Targeted resequencing was used to detect SNPs in a candidate gene,PmSR-BI.The association of TCC with SNPs in PmSR-BI was determined.Results showed that a total of 1025 DEGs were identified between HC and LC.The expression levels of the candidate gene PmSR-BI in HC were higher than those in LC.Seven SNPs in the exon and eight SNPs in the 5′regulatory regions of PmSR-BI were found.Association analysis showed that one SNP in the exon and two SNPs in the 5′regulatory regions of PmSR-BI were significantly associated with the TCC(P<0.05).All SNPs of PmSR-BI were divided into four blocks.CC haplotype in Block 1 and AG haplotype in Block 3 were significantly higher than other haplotypes.These results help elucidate the mechanism underlying carotenoid metabolism and develop marker-assisted breeding design in the species. 展开更多
关键词 pinctada fucata martensii Total carotenoid content Scavenger Receptors Class B Type SNp markers
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马氏珠母贝Perlucin基因序列特征及其SNP与耐低温性状的关系
6
作者 王成 赖卓欣 +3 位作者 宋欣霖 钟如卓 郑哲 王庆恒 《广东海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期55-63,共9页
【目的】克隆马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)新的凝集素分子基因,命名为Perlucin,研究在低温胁迫下马氏珠母贝Perlucin的表达以及与抗低温性状相关的单核苷酸多态性(SNP)位点。【方法】根据马氏珠母贝基因组中Perlucin基因序列... 【目的】克隆马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)新的凝集素分子基因,命名为Perlucin,研究在低温胁迫下马氏珠母贝Perlucin的表达以及与抗低温性状相关的单核苷酸多态性(SNP)位点。【方法】根据马氏珠母贝基因组中Perlucin基因序列设计引物,克隆Perlucin基因全长;用生物信息学方法分析Perlucin的结构和理化特征;设计17和22℃(对照)2个温度组,对马氏珠母贝进行低温胁迫实验,用实时荧光定量PCR检测低温胁迫下Perlucin表达量的变化;筛选和比较分析马氏珠母贝耐低温选育系(R)F3和北部湾野生群体(W)的Perlucin外显子区的SNP位点和单倍型。【结果】马氏珠母贝Perlucin全长631 bp,编码152个氨基酸;包含1个信号肽和1个C型凝集素结构域。同源分析表明,马氏珠母贝Perlucin与紫贻贝(Mytilus galloprovincialis)Perlucin的亲缘性最近。Perlucin在鳃中表达量最高,其次为足和肝胰腺。低温胁迫时,鳃组织中Perlucin基因在17℃低温组的表达量呈先升高后降低的趋势,在12 h时达到最高并显著高于22℃对照组(P<0.05),表明Perlucin可能参与马氏珠母贝的低温响应过程。对Perlucin外显子区的SNP进行分析,共得到30个SNP,其中13个SNP位点的基因型频率在R和W群体间差异显著(P<0.05)。【结论】Perlucin是参与调节马氏珠母贝低温适应过程中的候选基因,筛选出两个SNP位点g.40078856、g.40078945。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 perlucin 基因克隆 低温胁迫 SNp
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马氏珠母贝V-ATPase-d基因序列特征及其与耐低温性状的关系
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作者 赖卓欣 宋欣霖 +2 位作者 潘若哲 谭又瑄 王庆恒 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期85-98,共14页
液泡ATP酶(V-ATPase)在生物应对各种环境压力时发挥重要功能,为探究VATPase在马氏珠母贝低温适应过程中的作用,实验克隆了马氏珠母贝的V-ATPase-d基因,采用qRT-PCR技术研究了低温胁迫下Pm-V-ATPase-d表达量的变化,并筛选和比较了该基因... 液泡ATP酶(V-ATPase)在生物应对各种环境压力时发挥重要功能,为探究VATPase在马氏珠母贝低温适应过程中的作用,实验克隆了马氏珠母贝的V-ATPase-d基因,采用qRT-PCR技术研究了低温胁迫下Pm-V-ATPase-d表达量的变化,并筛选和比较了该基因在耐低温选育系(low temperature resistant line,R)F_(3)和北部湾野生群体(Beibu Gulf wild population,W)外显子区的SNP位点。结果显示,Pm-V-ATPase-d总长为1473 bp,开放阅读框(ORF)为1140bp,编码379个氨基酸,具有ATP典型的结构域PfamvATPsynt_AC39。Motif分析及三级结构预测结果表明,Pm-V-ATPase-d具有较高的保守性,其在系统进化树中与长牡蛎聚为一支。组织荧光定量结果显示,Pm-V-ATPase-d在所检测的组织中均有表达,在肝胰腺、性腺和鳃组织中表达量较高。在低温胁迫条件下,Pm-VATPase-d基因的表达量随着时间的延长呈现先上升后下降的趋势,且低温组的表达量在5 d内均显著高于对照组,这表明Pm-V-ATPase-d可能参与了马氏珠母贝对温度胁迫的响应;对Pm-V-ATPase-d外显子区的SNP分析共得到35个SNP,其中34个为同义突变,只有一个位点为非同义突变,26个SNP在W和R群体的不同基因型和等位基因之间具有显著差异,单倍型连锁不平衡分析结果显示,Pm-V-ATPase-d基因SNPs可形成6个单倍体块,14种单倍型,其中单倍型GAAT、CGC、TC、TG、AG与马氏珠母贝耐低温性状显著相关。研究表明,Pm-V-ATPase-d可能是参与调节马氏珠母贝低温适应过程中的候选基因,本研究可为马氏珠母贝对低温的适应机制提供研究基础,筛选出的与抗低温性状相关的SNPs及单倍型可应用于分子辅助育种。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 V-ATpase-d基因 单核苷酸多态性 低温
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马氏珠母贝B型清道夫受体PmSR-B基因克隆与表达性分析 被引量:8
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作者 雷超 贝伟烈 +3 位作者 郑哲 罗少杰 王庆恒 邓岳文 《广东海洋大学学报》 CAS 2017年第1期7-14,共8页
采用c DNA末端快速扩增技术克隆获得马氏珠母贝清道夫受体基因c DNA全长序列(Pm SR-B);利用荧光定量技术检测Pm SR-B基因在各个组织中的表达量。结果表明,Pm SR-B基因c DNA序列全长1 857 bp,开放阅读框(ORF)长1 443 bp,编码480个氨基酸,... 采用c DNA末端快速扩增技术克隆获得马氏珠母贝清道夫受体基因c DNA全长序列(Pm SR-B);利用荧光定量技术检测Pm SR-B基因在各个组织中的表达量。结果表明,Pm SR-B基因c DNA序列全长1 857 bp,开放阅读框(ORF)长1 443 bp,编码480个氨基酸,5′非翻译区(5′UTR)长89 bp,3′UTR长325 bp。预测其分子质量为54.77 ku,等电点为7.94,脂溶性系数92.94,总平均亲水性-0.120,属于疏水性蛋白;不稳定指数26.37,属于稳定蛋白。氨基酸序列同源比对结果,Pm SR-B氨基酸序列与其他物种具有一定的保守性,与华贵类栉孔扇贝(Mimachlamys nobilis)SR-B的序列的相似度高达47%。荧光定量PCR检测结果,Pm SR-B在肝胰腺中表达量最高,其后依次是鳃、闭壳肌、中央膜,各组织的表达量差异具统计学意义(P<0.05)。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 清道夫受体B 基因克隆 基因表达
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马氏珠母贝Kelch-like基因的序列及其SNP位点分析 被引量:3
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作者 杨创业 张丞澍 +7 位作者 黄静 郝瑞娟 师尚丽 黄荣莲 周芮 邱金玉 颜翼龙 邓岳文 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期386-393,共8页
为了探究马氏珠母贝Pinctada fucata martensii Kelch样基因(Kelch-like)的功能,对Kelch-like基因序列及其SNP位点进行了分析。结果表明:马氏珠母贝Kelch-like序列全长为2127 bp,其中,5′UTR为58 bp,3′UTR为44 bp,其开放式阅读框长度为... 为了探究马氏珠母贝Pinctada fucata martensii Kelch样基因(Kelch-like)的功能,对Kelch-like基因序列及其SNP位点进行了分析。结果表明:马氏珠母贝Kelch-like序列全长为2127 bp,其中,5′UTR为58 bp,3′UTR为44 bp,其开放式阅读框长度为2025 bp,可编码674个氨基酸;预测其Kelch-like氨基酸序列含有1个BTB结构域、1个BACK结构域和2个Kelch结构域;马氏珠母贝Kelch-like与美洲牡蛎Kelch-like氨基酸序列的一致性最高(35%),其次为虾夷扇贝(32.05%);马氏珠母贝Kelch-like氨基酸序列的BTB、BACK保守性较高,且Kelch具有保守的GG位点;Kelch-like基因在马氏珠母贝边缘膜组织的相对表达量显著高于其他组织(P<0.05),且贝壳损伤后6、12、120 h时该组织中的基因表达量显著上调(P<0.05);马氏珠母贝Kelch-like基因共有56个SNP位点,其中,31个SNP位点为中度多态,其余位点为低度多态;10个SNP位点形成了1个单倍块,为4种单倍型,其中单倍型AATCTGTCGG为优异单倍型,其壳质量性状显著大于单倍型AGCCTACCGA和单倍型AGCCTACTTA(P<0.05)。研究表明,马氏珠母贝Kelch-like可能参与贝壳棱柱层的形成,其单倍型AATCTGTCGG具有作为以壳质量为目标的育种标记的潜力,该结果对于选育具有优良经济性状的马氏珠母贝具有重要意义。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 Kelch-like基因 序列分析 表达模式
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马氏珠母贝PmLec-8基因的克隆与表达分析 被引量:7
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作者 吴羽媛 郭志颖 +3 位作者 梁海鹰 王庆恒 邓岳文 杜晓东 《广东海洋大学学报》 CAS 2017年第4期1-7,共7页
Lec-8(C-type lectin 8)属于C-型凝集素超家族,在机体抵抗微生物的感染过程起重要的作用。本研究采用RACE技术克隆出了PmLec-8基因cDNA全长序列,并且运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了PmLec-8基因在马氏珠母贝(Pinctada fucata ma... Lec-8(C-type lectin 8)属于C-型凝集素超家族,在机体抵抗微生物的感染过程起重要的作用。本研究采用RACE技术克隆出了PmLec-8基因cDNA全长序列,并且运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了PmLec-8基因在马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)不同组织中的表达模式。结果显示:PmLec-8基因序列全长737 bp,其中5′UTR长为36 bp,3′UTR长为113 bp,开放阅读框(ORF)为588 bp,编码195个氨基酸,预测其分子质量约为22.90 ku,等电点为5.17;PmLec-8具在一个糖类识别结构域(Carbonhydrate-recognition domain,CRD),符合典型的C型凝集素(C-type lectin)家族特征;多序列比对结果表明物种间Lec-8的同源性较低,4个半胱氨基酸残基高度保守;qRT-PCR数据分析表明,PmLec-8在马氏珠母贝肝胰腺、性腺、闭壳肌、鳃、血细胞和外套膜中均有表达,其中肝胰腺中表达量最高,其次是鳃,差异具统计学意义(P<0.05)。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 C-型凝集素 基因克隆 实时荧光定量pCR
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马氏珠母贝TTLL基因的序列特征、SNP筛选及其与生长性状的关联分析 被引量:1
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作者 尹诗欣 李志屿 +4 位作者 杨晶淼 廖永山 杨创业 邓岳文 王庆恒 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期949-959,共11页
为了探究微管蛋白酪氨酸连接酶样(tubulin tyrosine ligase-like, TTLL)在马氏珠母贝Pinctada fucata martensii中的作用,对TTLL基因的序列特征、表达模式及其SNP位点进行了相关分析。结果表明:采用RACE技术克隆获得马氏珠母贝TTLL基因c... 为了探究微管蛋白酪氨酸连接酶样(tubulin tyrosine ligase-like, TTLL)在马氏珠母贝Pinctada fucata martensii中的作用,对TTLL基因的序列特征、表达模式及其SNP位点进行了相关分析。结果表明:采用RACE技术克隆获得马氏珠母贝TTLL基因cDNA全长为1 962 bp,其中,开放阅读框(ORF)为1 611 bp,编码536个氨基酸,5′UTR长134 bp, 3′UTR长191 bp;TTLL蛋白靠近N端处具有一个TTL结构域;多序列比对及系统进化树分析显示,马氏珠母贝与其他物种的TTLL氨基酸序列具有较高的同源性,并与长牡蛎Crassostrea gigas等双壳贝类聚为一支;qRT-PCR分析显示,TTLL基因在马氏珠母贝外套膜、闭壳肌、性腺、肝胰腺、鳃和足中均有表达,在性腺中表达量最高(P<0.05),在生长性状较好的大规格群体和杂交家系中高表达(P<0.05),在卵和受精卵中的表达量也显著高于其他发育时期(P<0.05);马氏珠母贝TTLL基因共有277个SNP位点,其中,109个SNP位点符合哈迪-温伯格平衡,6个位点为中度多态,103个位点为低度多态;对基因外显子SNPs单倍型分析发现,4个SNP位点形成了2个单倍块、5种单倍型,单倍型GG为优异单倍型,其生长性状显著高于单倍型AA;对基因突变位点分析发现,7个SNP位点发生了突变,包括4个错义突变和3个同义突变,其中,位点g.7572350 T>G和g.7572368 A>G与壳宽显著性关联(P<0.05),位点g.7572405 C>T与壳长、壳高显著性关联(P<0.05),而其他突变位点对生长性状无显著性关联(P>0.05)。研究表明,TTLL基因参与马氏珠母贝的生长发育过程,且其优异单倍型GG及突变位点g.7572350 T>G、g.7572368 A>G和g.7572405 C>T均有利于马氏珠母贝的生长。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 微管蛋白酪氨酸连接酶样(TTLL) 序列特征 表达模式 SNpS 生长性状
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形态学和SNP标记分析马氏珠母贝杂交子代及其亲本群体的遗传结构 被引量:1
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作者 黄景 潘肖兰 +3 位作者 许濛 刘文广 张华 何毛贤 《热带海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期80-89,共10页
马氏珠母贝是重要的海水养殖贝类,为了探究繁育亲本及其子代的遗传结构和关系,本研究运用多元性形态学和SNP标记对马氏珠母贝母本深圳群体、父本海南群体和其杂交子代F1的外部形态和分子遗传结构进行分析。结果发现,3个群体的综合判别率... 马氏珠母贝是重要的海水养殖贝类,为了探究繁育亲本及其子代的遗传结构和关系,本研究运用多元性形态学和SNP标记对马氏珠母贝母本深圳群体、父本海南群体和其杂交子代F1的外部形态和分子遗传结构进行分析。结果发现,3个群体的综合判别率为72%,F1和母本群体的形态差异最小,父本群体与母本、F1的形态差异较大。采用HRM法(high resolution melting)应用4个SNP位点对这3个群体进行分型,3个群体的平均观测杂合度Ho和期望杂合度He分别为0.2110~0.2879和0.3317~0.4685,F1的杂合度高于两个亲本;平均多态信息含量PIC值为0.2643~0.3556,呈现中等程度遗传多样性。F1与母本之间的基因流Nm最大(7.7701),遗传距离最小(0.0546),亲缘关系最近;两个亲本之间的Nm最小(1.9662),遗传距离最大(0.1759)。rs8位点可以判别两个亲本群体,可作为特异性的标记。该结果可以为马氏珠母贝群体遗传结构鉴别、育种群体管理提供指导。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 遗传学 遗传结构 形态学 SNp
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马氏珠母贝CD-MPR基因序列特征及其在耐低温品系的选择分析 被引量:1
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作者 韩书雅 钟如卓 +4 位作者 伍灵君 宋欣霖 赖卓欣 郑哲 王庆恒 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1224-1234,共11页
【目的】明确马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)阳离子依赖性甘露糖-6-磷酸受体(CD-MPR)基因(PmCD-MPR)多态性与其低温耐受能力的相关性,为马氏珠母贝耐低温品系的选育提供理论依据。【方法】采用RACE克隆PmCD-MPR基因序列全长,并... 【目的】明确马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)阳离子依赖性甘露糖-6-磷酸受体(CD-MPR)基因(PmCD-MPR)多态性与其低温耐受能力的相关性,为马氏珠母贝耐低温品系的选育提供理论依据。【方法】采用RACE克隆PmCD-MPR基因序列全长,并运用实时荧光定量PCR检测PmCD-MPR基因在马氏珠母贝各组织及低温胁迫下的表达模式;基于马氏珠母贝耐低温选育系(R群体)和北部湾野生群体(W群体)的全基因组重测序数据筛选出PmCD-MPR基因外显子区的SNP位点,并通过遗传多态性分析、单倍型分析及频率计算获取与马氏珠母贝低温胁迫过程相关的SNP位点。【结果】PmCD-MPR基因序列全长902 bp,其开放阅读框(ORF)为792 bp,共编码263个氨基酸残基;PmCD-MPR基因编码蛋白分子量为30.22 kD,理论等电点(pI)为5.79,属于亲水性蛋白,在第18~263位氨基酸处含有1个典型的甘露糖-6-磷酸受体(Man-6-P_recep)结构域。CD-MPR氨基酸序列在N端的相似性较低,在C端的相似性较高;基于CD-MPR氨基酸相似性构建的系统发育进化树显示,马氏珠母贝与长牡蛎、加利福尼亚海兔等软体动物聚为一支,与经典的动物学分类相吻合。PmCD-MPR基因在马氏珠母贝肝胰腺的相对表达量最高,显著高于在性腺、闭壳肌和外套膜中的相对表达量(P<0.05,下同);低温胁迫组马氏珠母贝鳃组织中的PmCD-MPR基因相对表达量随着胁迫时间的延长整体上呈先上升后下降的变化趋势。从PmCD-MPR基因外显子区筛选获得34个SNPs位点,且这34个SNPs位点构成5个单倍块和15种单倍型,其中GCC、TG、CCCTCT等3种单倍型在R群体中的分布频率显著高于W群体,即与马氏珠母贝耐低温性状显著相关。【结论】PmCD-MPR基因参与马氏珠母贝的低温响应过程,与耐低温性状显著相关的基因型及单倍型可作为马氏珠母贝耐低温品系辅助育种的候选分子标记。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 pmCD-MpR基因 低温耐受 SNp位点 选择分析
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马氏珠母贝α-Tubulin基因结构、SNP筛选及耐低温相关性分析
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作者 刘雅 李松谕 +3 位作者 赖卓欣 钟如卓 王庆恒 邓岳文 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期406-413,共8页
为了探究马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)α-Tubulin基因在低温适应性中的作用,通过RACE克隆技术获得马氏珠母贝α-Tubulin基因,分析了α-Tubulin基因在低温胁迫下的表达趋势,并筛选和比较了马氏珠母贝耐低温选育系(R)F3和北部... 为了探究马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)α-Tubulin基因在低温适应性中的作用,通过RACE克隆技术获得马氏珠母贝α-Tubulin基因,分析了α-Tubulin基因在低温胁迫下的表达趋势,并筛选和比较了马氏珠母贝耐低温选育系(R)F3和北部湾野生群体(W)的α-Tubulin编码区SNP位点。结果表明:马氏珠母贝α-Tubulin基因总长为2107 bp,可编码454个氨基酸,具有典型的Tubulin和Tubulin-C结构域;全组织定量显示,α-Tubulin基因在所有组织中均有表达,在足部中表达量最高(P<0.05);低温胁迫时,鳃组织中α-Tubulin基因在低温组(12、17℃)的表达量均在72 h时达到最高,且显著高于对照组(22℃)(P<0.05);α-Tubulin外显子区域共有34个SNP,其中3个SNP位点的基因型频率在R和W群体间有显著性差异(P<0.05);连锁不平衡分析显示,R群体单倍型CCTCAGCGCC的频率明显高于W群体。研究表明,α-Tubulin为参与调节马氏珠母贝低温适应过程中的候选基因,筛选出的与抗低温性状相关的SNP位点g.111071125及优异单倍型CCTCAGCGCC,可作为选择育种的候选标记。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 α-Tubulin基因 SNp 低温耐受
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马氏珠母贝TLRP基因克隆及其功能研究
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作者 张美珍 王志新 +1 位作者 吴羽媛 梁海鹰 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2331-2340,共10页
【目的】明确马氏珠母贝TLRP基因(PmTLRP)的组织表达特征及哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)刺激、植核及脂多糖(LPS)刺激后的时序表达特点,为进一步研究TLRs在马氏珠母贝中的免疫机制打下基础。【方法】采用RACE克隆PmTLRP基因c DNA序列,通... 【目的】明确马氏珠母贝TLRP基因(PmTLRP)的组织表达特征及哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)刺激、植核及脂多糖(LPS)刺激后的时序表达特点,为进一步研究TLRs在马氏珠母贝中的免疫机制打下基础。【方法】采用RACE克隆PmTLRP基因c DNA序列,通过ProtParam、ProtScale、SignalP 4.0、TMHMM v.2.0、SMART、SoftBerry Psite和SOPMA等在线软件进行生物信息学分析,并以实时荧光定量PCR检测PmTLRP基因在马氏珠母贝各组织中及经哈维氏弧菌、植核及LPS刺激后的表达情况。【结果】PmTLRP基因cDNA序列全长2214 bp,包含33 bp的5’非编码区(5’-UTR)、135 bp的3’非编码区(3’-UTR)及2043 bp的开放阅读框(ORF),共编码681个氨基酸残基;其编码蛋白含有信号肽、富含亮氨酸重复序列(LRRs)、跨膜结构域和TIR结构域,符合TLRs家族所具有的特征;PmTLRP氨基酸序列与其他物种的TLRs氨基酸序列存在一定相似性,其中与美洲牡蛎TLP氨基酸序列的相似度较高。PmTLRP基因在马氏珠母贝外套膜、血淋巴、肝胰腺、鳃、性腺和闭壳肌中均有表达,以在肝胰腺中的相对表达量最高,显著高于在其他组织中的相对表达量(P<0.05)。在哈维氏弧菌刺激下,PmTLRP基因在血淋巴中的相对表达量于注射刺激后12 h开始上调,至注射刺激后16 h达最大值,约是注射刺激前(0 h)的19.0倍。经植核刺激后,PmTLRP基因相对表达量在植核后5~20 d呈逐渐上升趋势,于植核后30 d达最大值,约是植核前(0 h)的6.4倍。在LPS刺激下,PmTLRP基因在血淋巴中的相对表达量先上升后下降,至注射刺激后3 h达最大值,约是对照组的5.0倍;PmTLRP基因在肝胰腺中的相对表达量呈升高→降低→升高→降低→升高的波动变化趋势,至注射刺激后24 h相对表达量上调到最大值,约是对照组的6.0倍。【结论】PmTLRP基因在马氏珠母贝外套膜、血淋巴、肝胰腺、鳃、性腺和闭壳肌中均有表达,但表达水平存在差异,经哈维氏弧菌、植核及LPS刺激后呈明显上调表达趋势,说明TLRP在马氏珠母贝的免疫防御反应中扮演重要角色。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 Toll样受体(TLRs) TLRp基因 植核 哈维氏弧菌 脂多糖
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马氏珠母贝PfAQP4免疫功能初探
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作者 潘肖兰 刘惠茹 +3 位作者 许濛 许瀚之 张华 何毛贤 《热带海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期83-89,共7页
文章对马氏珠母贝水通道蛋白基因PfAQP4进行免疫功能分析。利用实时荧光定量分析免疫刺激和RNA干扰后PfAQP4及免疫相关基因的表达模式,旨在为马氏珠母贝自然免疫研究提供新的资料。结果表明,注射脂多糖LPS后,在外套膜组织中PfAQP4 mRNA... 文章对马氏珠母贝水通道蛋白基因PfAQP4进行免疫功能分析。利用实时荧光定量分析免疫刺激和RNA干扰后PfAQP4及免疫相关基因的表达模式,旨在为马氏珠母贝自然免疫研究提供新的资料。结果表明,注射脂多糖LPS后,在外套膜组织中PfAQP4 mRNA表达量在24h时显著上调(p<0.05),在消化腺中PfAQP4 mRNA表达量先在12h时显著下调(p<0.05),后在24h、36h和48h时显著上调(p<0.05)。注射聚肌胞poly(I:C)后,在外套膜组织中PfAQP4 mRNA表达量在36h时和48h时显著上调(p<0.05),在消化腺中PfAQP4 mRNA表达量在48h时显著上调(p<0.05)。RNA干扰PfAQP4表达后,免疫相关基因CuZn-SOD在外套膜中的表达量显著下降(p<0.05),Pearson相关性分析显示PfAQP4与CuZn-SOD的表达存在显著正相关(r=0.818,p<0.001)。综上所述,PfAQP4参与马氏珠母贝的免疫应答。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 水通道蛋白4基因 免疫刺激 RNA干扰 基因表达
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马氏珠母贝Pm-miR-183序列分析及功能研究 被引量:1
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作者 熊新威 郑哲 +2 位作者 焦钰 邓岳文 杜晓东 《广东海洋大学学报》 CAS 2017年第6期11-18,共8页
用马氏珠母贝基因组序列,通过生物信息学方法获得Pm-miR-183的前体,长度76 bp,具有典型的茎环结构。成熟序列及前体序列的同源性分析均显示较高的种间保守性。Pm-miR-183前体序列(Pm-pre-miR-183)的系统进化树分析,Pm-pre-miR-183与帽... 用马氏珠母贝基因组序列,通过生物信息学方法获得Pm-miR-183的前体,长度76 bp,具有典型的茎环结构。成熟序列及前体序列的同源性分析均显示较高的种间保守性。Pm-miR-183前体序列(Pm-pre-miR-183)的系统进化树分析,Pm-pre-miR-183与帽贝同源性较高。靶向关系分析,Pm-miR-183与矿化基因及免疫相关基因均存在靶向作用位点。实时荧光定量分析,Pm-miR-183在马氏珠母贝的各组织中均有表达。注射Pm-miR-183mimics进行过表达,Pm-miR-183的表达量在套膜区(MP)中显著上调(P<0.05)。扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)检测,Pm-miR-183过表达会导致贝壳珍珠层生长出现紊乱。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 pm-miR-183 生物矿化 miRNA调控
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马氏珠母贝丝裂原活化蛋白激酶p38的克隆与表达
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作者 涂淏天 房晓宸 +2 位作者 梁海鹰 雷倩楠 刘德凡 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期27-37,共11页
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,该蛋白激酶通过磷酸化级联介导的信号通路在细胞对细胞外刺激的反应中起着重要作用。本研究利用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA... 丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,该蛋白激酶通过磷酸化级联介导的信号通路在细胞对细胞外刺激的反应中起着重要作用。本研究利用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆获得马氏珠母贝MAPK p38(PmMAPK p38)cDNA全长序列并对其序列进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析了PmMAPK p38在马氏珠母贝不同组织以及不同免疫刺激后的表达水平。结果显示,PmMAPK p38 cDNA全长为1516 bp,开放阅读框长度为1071 bp,共编码356个氨基酸,理论分子量为40.88 ku;结构域预测结果表明PmMAPK p38含有MAPK家族典型的S_TKc结构域;多序列比对、进化树构建以及MatGAT计算结果显示PmMAPK p38与其他物种的相似度、保守程度较高;荧光定量分析结果表明,该基因在马氏珠母贝中存在广泛表达,在肝胰腺中表达量最高,其次为外套膜,最低是闭壳肌。马氏珠母贝在受到LPS刺激后,PmMAPK p38的相对表达量在刺激后2 h达到最高,12 h降到最低,最高约为最低的5倍;而在哈维氏弧菌刺激后,PmMAPK p38的相对表达量在2 h达到最高,8 h降到最低,最高约为最低的4倍。研究表明,PmMAPK p38可能在马氏珠母贝的免疫反应,尤其是在抵御外部细菌侵入中起着重要的作用。本研究为贝类免疫防御系统的研究提供了基础资料。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 MApK p38 免疫 基因克隆
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琥珀酰化修饰对马氏珠母贝植核免疫的影响
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作者 梁海鹰 陈洁 张美珍 《广东海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期39-45,共7页
【目的】研究蛋白质琥珀酰化修饰在马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)植核后免疫应答中的作用,为阐明珍珠贝植核反应的分子调控机制提供理论依据。【方法】通过对马氏珠母贝注射琥珀酸钠模拟提高琥珀酰化修饰水平,检测马氏珠母贝... 【目的】研究蛋白质琥珀酰化修饰在马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)植核后免疫应答中的作用,为阐明珍珠贝植核反应的分子调控机制提供理论依据。【方法】通过对马氏珠母贝注射琥珀酸钠模拟提高琥珀酰化修饰水平,检测马氏珠母贝植核后鳃组织总蛋白琥珀酰化程度、免疫相关基因表达、抗氧化相关酶酶活以及珍珠贝的存活率和留核率。【结果与结论】注射琥珀酸钠后,鳃组织琥珀酰化修饰水平在12 h和72 h显著上升;使用实时荧光定量PCR检测胁迫应激相关基因的时序表达,胁迫应激相关因子SOD和Caspase2在6 h表达量显著上调,NF-κB和IRAK1在48 h表达量显著上调,TRAF3和IκK的表达量在96 h显著上调(P <0.05),表明琥珀酰化修饰水平提高后受体贝机体细胞免疫增强;抗氧化相关酶、过氧化物酶和谷胱甘肽活性都在96 h出现显著上调(P <0.05),表明受体贝体液免疫增强。与对照组[磷酸盐缓冲溶液(PBS)+植核]和植核组相比,实验组(琥珀酸钠+植核)中珍珠贝的存活率在7 d和45 d存在显著差异,在60 d留核率显著上升(P <0.05)。结果说明,琥珀酰化修饰参与了马氏珠母贝的植核免疫反应,注射琥珀酸钠可以提高受体贝的免疫活力,并提高其在植核后的存活率和留核率。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 植核免疫 琥珀酰化修饰 琥珀酸钠
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马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)Pm-HSP70基因的克隆及其对温度胁迫的响应
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作者 刘雅 王庆恒 +3 位作者 郑哲 焦钰 李利二 杜晓东 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期990-998,共9页
本实验利用RACE技术克隆获得了马氏珠母贝HSP70 (Pm-HSP70)基因,并对其基因和氨基酸序列结构特征进行了生物信息学分析,同时采用荧光定量PCR技术分析了该基因在不同组织的表达模式及不同温度下的时序表达模式。序列分析表明,Pm-HSP70 c... 本实验利用RACE技术克隆获得了马氏珠母贝HSP70 (Pm-HSP70)基因,并对其基因和氨基酸序列结构特征进行了生物信息学分析,同时采用荧光定量PCR技术分析了该基因在不同组织的表达模式及不同温度下的时序表达模式。序列分析表明,Pm-HSP70 cDNA序列全长为2 215 bp,其中开放式阅读框1 899 bp,5'UTR 107 bp,3'UTR 209 bp,编码632个氨基酸,理论蛋白分子量为69.44 kD,理论等电点为5.61。该蛋白具有HSP70家族典型的结构域HSP70,以及ATP结合位点、细胞质特征性保守序列和3个HSP70家族标签。多序列比对结果表明Pm-HSP70与菲律宾蛤仔HSP70同源性最高,为80%;系统进化分析发现,Pm-HSP70与菲律宾蛤仔等贝类HSP70聚为一支。组织表达定量分析结果显示,Pm-HSP70在马氏珠母贝多个组织中均有表达,在肝胰腺中表达量最高,其次是性腺;对不同温度下鳃组织中Pm-HSP70的时序表达分析发现,在处理后各时间点高温组(32℃)基因表达水平最高,且均显著高于对照组(22℃)和低温组(17℃)。以上结果表明Pm-HSP70可能参与马氏珠母贝的高温胁迫响应。该研究为进一步探索Pm-HSP70在马氏珠母贝温度适应性中的作用提供了基础资料。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 温度适应 pm-HSp70 基因克隆 表达分析
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