短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因的克隆和序列分析

采用RT PCR原理和长片段扩增技术克隆短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因。设计合成特异引物、提取血细胞总RNA ,反转录后扩增获得的特异片段回收并克隆到pGEM TEasyVector系统的T载体上 ,重组子进行碱基序列测定。结果表明 ,所克隆的短沟对虾酚氧化酶原基因含起始密码子ATG到终止密码子TGA的 2 0 5 5bp ,编码 6 84个氨基酸。斑节对虾酚氧化酶原基因含ATG到TGA的 2 0 6 1bp ,编码 6 86个氨基酸。短沟对虾酚氧化酶原推算分子量为 781 5 3Da ,等电点pI为 6 2 5 ;斑节对虾则为 785 81Da ,pI为 5 83。用DNA分析软件分析显示两种对虾酚氧化酶原基因具有高度的同源性 ,二者的碱基和推测的氨基酸序列同源性分别为 93 %和 92 %;对虾与其他节肢动物酚氧化酶原基因的同源性的高低与种类间亲缘关系相关 ;不同种类间酚氧化酶活性中心重要组成部分的 2个铜结合位点、位于铜结合位点内的6个组氨酸以及与铜结合位点相邻的氨基酸序列高度保守。

不同盐度条件下亚硝酸氮对斑节对虾的毒性影响

研究不同盐度条件下亚硝酸氮(NO2--N)对斑节对虾的急性毒性,为不同盐度条件下亚硝酸氮的调控提供依据。采用常规生物毒性实验方法进行试验,结果表明:盐度为25的条件下,24h LC50、48h LC50、72h LC50和96h LC50分别为91.4,69.1,56.5,43.5mg·L-1;盐度为20的条件下,分别为59.1,53.1,41.0,36.8 mg·L-1;盐度为15的条件下,分别为35.5,31.1,21.5,14.3mg·L-1;盐度为10的条件下,分别为22.1,18.4,16.0,14.2mg·L-1;盐度为5条件下,分别为12.4,7.1,3.6,0.2mg·L-1;而在盐度为25,20,15,10,5的条件下,亚硝酸氮的安全浓度分别为4.4,3.7,1.4,1.4,0.02mg·L-1。不同盐度条件下,亚硝酸氮安全浓度的排序:盐度25>盐度20>盐度15>盐度10>盐度5;所以亚硝酸氮浓度越高,斑节对虾的抗病能力越弱,盐度越低,亚硝酸氮的毒性越强。

饲料中不饱和脂肪酸对斑节对虾幼虾存活、蜕皮和生长的影响

在基础饲料中添加四种含不同脂肪酸的脂肪源组成四种试验饲料，对斑节对虾幼虾进行４５天的喂养试验。结果表明，饲料中含有高度不饱和脂肪酸（ＨＵＦＡ），能促进幼虾的生长和提高幼虾的成活率。幼虾摄食含有不同脂肪酸的饲料，虽然虾体内脂肪含量接近，但虾体脂肪酸含量差异显著。斑节对虾幼虾对１８碳以下的脂肪酸转化能力有限。在斑节对虾幼虾的养殖饲料中直接添加含有ＨＵＦＡ的脂肪源是必要的。

促性腺激素释放激素及多巴胺拮抗物地欧酮对斑节对虾卵巢组织发育的影响

研究了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)促性腺激素释放激素(Es GnRH-I)、克氏原螯虾(Procambarus clarkii)促性腺激素释放激素(Pc GnRH)、多巴胺拮抗物地欧酮(DOM)及神经组织对斑节对虾(Penaeus monodon)卵巢发育的调控作用效果。试验前使用石蜡切片、HE染色及荧光观察确定斑节对虾卵巢发育分期及各期卵母细胞形态特征。结果显示,斑节对虾卵巢具有自发荧光现象,主要集中于滤泡细胞以及富含卵黄颗粒的次级卵母细胞、成熟卵母细胞的细胞质区域,荧光强度与卵巢发育阶段具有显著正相关性(P<0.01)。随后采用离体卵巢组织培养的方法研究3种激素对卵巢发育的影响。结果表明,50 ng·m L-1Es GnRH-I、500 ng·m L-1Pc GnRH和0.3μg·m L-1DOM对离体卵巢的发育有明显的刺激作用,显著增大卵母细胞直径(P<0.01),与脑组织、胸神经处理组效果相似;同时组合使用Pc GnRH和DOM能极显著促进卵母细胞发育(P<0.01)。荧光定量PCR结果显示Pc GnRH和DOM处理后能显著增加卵黄蛋白原的积累量。说明甲壳类动物GnRH和DOM均能促进斑节对虾卵母细胞成熟,并具有协同作用。