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Asia 1型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因真核表达质粒的构建及鉴定 被引量:1
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作者 霍晓伟 金宁一 +2 位作者 鲁会军 马鸣潇 牟伟峰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第5期371-373,377,共4页
目的构建Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)P1-2A-3C基因真核表达质粒。方法采集疫区牛的水疱液及水疱皮,经RT-PCR法扩增出Asia 1型FMDV的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切、连接,获得质粒pMD18-T-P1-... 目的构建Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)P1-2A-3C基因真核表达质粒。方法采集疫区牛的水疱液及水疱皮,经RT-PCR法扩增出Asia 1型FMDV的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切、连接,获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C。经酶切获得P1-2A-3C片段,插入真核表达载体pVAXⅠpCMV启动子下游,构建pVAXⅠ-P1-2A-3C真核表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,进行IFA检测。结果Asia 1型FMDV真核表达载体pVAX1PⅠ-2A-3C,经酶切鉴定证明构建正确,转染HeLa细胞后,可见明显的黄绿色荧光,表明P1-2A-3C基因得到了表达。结论pVAXⅠ-P1-2A-3C可作为Asia1型FMD核酸疫苗的候选疫苗。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 p1-2a-3c基因 真核表达 核酸疫苗
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表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株的构建及筛选 被引量:1
2
作者 王建科 张云德 +7 位作者 张强 吴国华 颜新敏 朱海霞 李健 邵长春 朱彩珠 吴磊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期434-440,共7页
为构建和筛选表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株,用已构建的口蹄疫病毒O/Chi-na99毒株的EGFP-P7.5-P1-2A-3C基因整体通过平末端连接到KpnⅠ酶切后的线性载体pUC119-TK中,得到重组载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C。重... 为构建和筛选表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的山羊痘病毒弱毒株,用已构建的口蹄疫病毒O/Chi-na99毒株的EGFP-P7.5-P1-2A-3C基因整体通过平末端连接到KpnⅠ酶切后的线性载体pUC119-TK中,得到重组载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C。重组载体通过缺失的TK基因与羊痘病毒弱毒株在BHK-21细胞中同源重组,用EGFP作为标记筛选出重组毒株,并进行PCR鉴定、抗原捕获ELISA试验检测及Western blot分析。结果显示该重组弱毒株能在1~10代BHK-21细胞中稳定传代,扩增出约3000bp片段,并经测序确证为基因P1-2A-3C;抗原捕获ELISA试验检测均为阳性;Western blot分析表明转移载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C在感染的GTPV AV41BHK-21细胞中表达的蛋白可被O型FMDV高免血清特异性识别,并具有反应原性。这些结果表明获得了表达O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的重组山羊痘弱毒株。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 启动子p7.5 p1-2a-3c基因 羊痘病毒
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共表达口蹄疫病毒O型P1-2A-IL-18基因和Asia I型P1-2A-3C基因重组鸡痘病毒的构建 被引量:1
3
作者 谷长维 金宁一 +8 位作者 霍晓伟 李太元 鲁会军 郑敏 常巧呈 于长勇 牟伟峰 胡博 马鸣潇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第8期658-661,共4页
目的构建共表达口蹄疫病毒(FWDV)O型P1-2A-IL-18基因和AsiaI型P1-2A-3C基因的重组鸡痘病毒。方法将酶切得到的FWDVO型P1-2A-IL-18基因和AsiaI型P1-2A-3C基因克隆至鸡痘病毒表达载体pUTAL上,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-P1-2... 目的构建共表达口蹄疫病毒(FWDV)O型P1-2A-IL-18基因和AsiaI型P1-2A-3C基因的重组鸡痘病毒。方法将酶切得到的FWDVO型P1-2A-IL-18基因和AsiaI型P1-2A-3C基因克隆至鸡痘病毒表达载体pUTAL上,构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-P1-2A-IL-18,与鸡痘病毒(FPV)282E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过BrdU3次加压筛选,挑选出单克隆重组病毒株,进行RT-PCR及间接免疫荧光(IFA)鉴定。结果重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-P1-2A-IL-18经双酶切鉴定证明构建正确。经RT-PCR和IFA鉴定,证明所筛选的重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-3C-P1-2A-IL-18基因盒。结论已成功构建了共表达FMDVO型P1-2A-IL-18基因和AsiaI型P1-2A-3C基因的重组鸡痘病毒。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 鸡痘病毒 p1-2a-IL-18基因 p1-2a-3c基因
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共表达Asia1口蹄疫病毒P1-2A-3C基因和猪IL-18基因重组鸡痘病毒构建及表达 被引量:2
4
作者 鲁会军 霍晓伟 +3 位作者 任静强 常巧呈 金扩世 金宁一 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第6期30-35,共6页
为构建Asia1型口蹄疫重组鸡痘病毒疫苗,采集口蹄疫发病牛的水泡液及水泡皮,用RT-PCR法扩增出Asia 1型口蹄疫病毒的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切连接获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C。再将P1-2A... 为构建Asia1型口蹄疫重组鸡痘病毒疫苗,采集口蹄疫发病牛的水泡液及水泡皮,用RT-PCR法扩增出Asia 1型口蹄疫病毒的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切连接获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C。再将P1-2A-3C片段与pUTAL-IL18片段连接起来,构建鸡痘病毒中间转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-IL18。通过脂质体转染法,将pUTAL-P1-2A-3C-IL18与鸡痘病毒282E4株共感染染鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblasts,CEF),通过BrdU三次加压筛选,筛选出重组鸡病毒株vUTAL-P1-2A-3C-IL18。经RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定,证明所筛选的1株重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-3C基因。本研究为研制安全、高效的亚洲Ⅰ型FMD重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 Asia1口蹄疫病毒 鸡痘病毒载体 p1-2A基因 3c基因 IL-18基因 表达
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miR-7a-5p负调控Rac1表达参与HepG2细胞胰岛素抵抗
5
作者 汪丽娟 黄琛 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1037-1042,共6页
目的:探讨软脂酸诱导胰岛素抵抗的HepG2细胞中微小RNA-7a-5p(microRNA-7a-5p,miR-7a-5p)是否通过调控Ras相关C3肉毒毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)表达参与细胞胰岛素抵抗。方法:应用生物信息学分析预测... 目的:探讨软脂酸诱导胰岛素抵抗的HepG2细胞中微小RNA-7a-5p(microRNA-7a-5p,miR-7a-5p)是否通过调控Ras相关C3肉毒毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)表达参与细胞胰岛素抵抗。方法:应用生物信息学分析预测其下游靶分子,构建含Rac13'端非翻译区的野生型及突变型hsa-Rac1萤光素酶报告质粒,与miR-7a-5p表达慢病毒或对照空载慢病毒共转染293T细胞,检测萤光素酶活性。HepG2细胞分为软脂酸诱导的胰岛素抵抗组和正常对照组,RT-qPCR分析两组细胞miR-RNA-7a-5p的表达,Western blot分析下游靶分子蛋白的表达。HepG2细胞分为干扰慢病毒转染组和对照慢病毒转染组,转染之后,软脂酸诱导两组细胞胰岛素抵抗,分析两组HepG2细胞中脂质堆积及葡萄糖消耗情况。结果:生物信息学预测Rac1为miR-7a-5p下游分子。野生型hsa-Rac1萤光素酶报告质粒与miR-7a-5p表达慢病毒共转染后,萤光素酶较对照组显著降低(P<0.05)。胰岛素抵抗的HepG2与对照细胞组相比,miR-7a-5p表达显著下调(P<0.05),Rac1蛋白表达显著上调(P<0.05)。较对照相比,Rac1 mRNA的表达抑制增加了胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗(P<0.05),降低了胞质内脂质堆积(P<0.05)。结论:miR-7a-5p的一个潜在靶点是Rac1。miR-7a-5p通过负调节Rac1表达参与软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗。 展开更多
关键词 胰岛素抵抗 微小RNa-7a-5p Ras相关c3肉毒毒素底物1 HEpG2细胞
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Expression of Recombinant Gene P1-2A3C of FMDV Asia I in Different Bombyx mori Varieties 被引量:1
6
作者 张韵 张金卫 +5 位作者 易咏竹 李志勇 李江涛 鱼南洋 丁农 柳纪省 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第10期1528-1530,共3页
[Objective] The aim was to investigate the expression level of recombinant gene P1-2A3C of FMDV Asia I in different Bombyx mori varieties,so as to screen out the B.mori varieties suitable for the foreign gene expressi... [Objective] The aim was to investigate the expression level of recombinant gene P1-2A3C of FMDV Asia I in different Bombyx mori varieties,so as to screen out the B.mori varieties suitable for the foreign gene expression.[Method] The recombinant B.mori baculovirus rBmNPV(P1-2A3C) are injected into pupae of original species and hybrids of B.mori respectively.Then,the expression of antigen is detected by ELISA method and compared.[Result] The expression level of P1-2A3C significantly differed in different B.mori varieties,in which,the hybrids of Qiufeng×TQ78 and Qiufeng×Sijiaojian could be considered as the effective bioreactors for high-level expression of foreign genes.[Conclusion] This study provided the basis for breeding special B.mori varieties which can highly express target protein of Asia I FMDV. 展开更多
关键词 Asia I FMDV p1-2A3c Bombyx mori varieties
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含O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的羊痘病毒弱毒株转移载体的构建 被引量:1
7
作者 王建科 张强 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第1期31-33,共3页
利用已构建的口蹄疫病毒O/China99毒株的pMD18-T-P1-2A-3C载体和p-EGFP-N1-P7.5载体,分别通过HindⅢ、NheⅠ酶切,将基因P1-2A-3C连接到线性载体p-EGFP-N1-P7.5,构建了载体p-EGFP-N1-P7.5-P1-2A-3C。将EGFP-P7.5-P1-2A-3C基因整体通过平... 利用已构建的口蹄疫病毒O/China99毒株的pMD18-T-P1-2A-3C载体和p-EGFP-N1-P7.5载体,分别通过HindⅢ、NheⅠ酶切,将基因P1-2A-3C连接到线性载体p-EGFP-N1-P7.5,构建了载体p-EGFP-N1-P7.5-P1-2A-3C。将EGFP-P7.5-P1-2A-3C基因整体通过平末端连接到KpnⅠ酶切后的载体pUC119-TK中,得到重组载体pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C。通过PCR扩增、酶切鉴定及序列测定。结果表明,成功构建了一侧启动表达P1-2A-3C基因,一侧启动表达标记基因EGFP的pUC119-TK-EGFP-P7.5-P1-2A-3C转移载体。 展开更多
关键词 FMDV cpV EGFp p1-2a-3c基因
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O型口蹄疫病毒P1-2A3C基因在家蚕杆状病毒表达系统中的表达 被引量:4
8
作者 张韵 易咏竹 +2 位作者 李志勇 张志芳 柳纪省 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期148-153,共6页
口蹄疫是一种严重危害畜牧业生产的烈性传染病。为了促进O型口蹄疫病毒(FMDV)基因工程活载体疫苗的研制,选取O型FMDV编码序列中的衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因,插入家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组载体pVL-P1-2A3C,并... 口蹄疫是一种严重危害畜牧业生产的烈性传染病。为了促进O型口蹄疫病毒(FMDV)基因工程活载体疫苗的研制,选取O型FMDV编码序列中的衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因,插入家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组载体pVL-P1-2A3C,并与线性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕BmN细胞,获得重组病毒Bm-P1-2A3C。将重组病毒感染家蚕5龄幼虫,以双抗体夹心ELISA法和间接血凝方法检测血淋巴中的表达产物:目的蛋白在感染病毒后120 h的蚕血淋巴中表达量最高,抗原表达呈阳性的最大稀释倍数为1∶128。结果显示O型FMDV的P1-2A3C基因已在家蚕体内获得表达。 展开更多
关键词 O型口蹄疫病毒 基因工程疫苗 p1-2A3c基因 家蚕杆状病毒表达系统
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Asia I口蹄疫病毒组合基因P1-2A3C在不同家蚕品种中的表达 被引量:3
9
作者 张韵 张金卫 +5 位作者 易咏竹 李志勇 李江涛 鱼南洋 丁农 柳纪省 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第33期20490-20491,20510,共3页
[目的]研究Asia I口蹄疫病毒组合基因P1-2A3C在不同家蚕品种中的表达,以期筛选出较适合表达该组合基因的家蚕品种。[方法]将已经获得高效表达的重组家蚕杆状病毒rBmNPV(P1-2A3C)基因,分别注射原种及杂交家蚕蚕蛹。利用ELISA方法对其进... [目的]研究Asia I口蹄疫病毒组合基因P1-2A3C在不同家蚕品种中的表达,以期筛选出较适合表达该组合基因的家蚕品种。[方法]将已经获得高效表达的重组家蚕杆状病毒rBmNPV(P1-2A3C)基因,分别注射原种及杂交家蚕蚕蛹。利用ELISA方法对其进行抗原表达量检测,并对表达结果进行差异比较。[结果]不同家蚕品种对rBmNPV(P1-2A3C)的表达存在着明显差异;秋丰×TQ78和秋丰×丝胶茧杂交组合可考虑作为高效表达的家蚕生物反应器专用品种。[结论]为AsiaΙFMDV目的蛋白的高效表达专用品种的选育提供了依据。 展开更多
关键词 AsiaI口蹄疫病毒 p1-2A3c 家蚕品种
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MiR-106a-5p靶向E2F3和SP-1抑制C2C12细胞成肌分化的研究
10
作者 朱由波 孙世铎 《家畜生态学报》 北大核心 2019年第10期14-19,共6页
为探究miR-106a-5p对成肌分化的作用及潜在调控靶点,在线预测miR-106a-5p潜在靶基因,通过RT-qPCR及Westernblot检测miR-106a-5p对靶基因的调控作用,利用双荧光素酶报告系统验证miR-106a-5p与靶基因之间的互作,并以C2C12细胞系为实验模型... 为探究miR-106a-5p对成肌分化的作用及潜在调控靶点,在线预测miR-106a-5p潜在靶基因,通过RT-qPCR及Westernblot检测miR-106a-5p对靶基因的调控作用,利用双荧光素酶报告系统验证miR-106a-5p与靶基因之间的互作,并以C2C12细胞系为实验模型,采用过表达技术,在细胞形态学水平初步探索其对成肌分化的作用。在线预测发现E2F3和SP-1可能是miR-106a-5p的潜在靶基因;RT-qPCR分析表明,miR-106a-5p与E2F3和SP-1的表达模式相反;Westernblots结果发现,miR-106a-5p抑制E2F3和SP-1蛋白翻译;双荧光素酶报告载体系统表明,E2F3和SP-1是miR-106a-5p调控成肌分化的靶基因;此外,超表达miR-106a-5p抑制C2C12细胞分化,肌管数目显著减少。结果表明,E2F3和SP-1是miR-106a-5p抑制C2C12细胞成肌分化的靶基因。 展开更多
关键词 miR-106a-5p c2c12细胞 成肌分化 E2F3 Sp-1
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配合物[NH_3(CH_2)_4NH_3]Co(hedpH_2)(H_2O)_2的水热合成与表征(hedpH_4=1-羟亚乙基二膦酸)
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作者 宋会花 王哲明 +2 位作者 严纯华 郑丽敏 忻新泉 《Chinese Journal of Structural Chemistry》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第2期202-206,共5页
采用水热合成法以丁二胺作为模板剂合成了钴的有机二膦酸超分子化合物[NH3(CH2)4NH3]Co(hedpH2)2(H2O)2 [hedpH4 = 1-羟亚乙基二膦酸, CH3C(OH)(PO3H2)2]。用元素分析、红外光谱、紫外-可见光谱、热重分析以及单晶结构解析对其进行了表... 采用水热合成法以丁二胺作为模板剂合成了钴的有机二膦酸超分子化合物[NH3(CH2)4NH3]Co(hedpH2)2(H2O)2 [hedpH4 = 1-羟亚乙基二膦酸, CH3C(OH)(PO3H2)2]。用元素分析、红外光谱、紫外-可见光谱、热重分析以及单晶结构解析对其进行了表征。该化合物的化学式为:C8H30N2CoO16P4,Mr = 593.15,晶体属单斜晶系,空间群C2/c,晶胞参数a = 16.128(2), b = 12.427(1), c = 12.610(2) ? b = 121.389(9), V = 2157.3(4) 3, Z = 4, Dc = 1.826 g/cm3, m(MoKa) = 1.172 mm-1, F(000) = 1228。结构用直接法解出,最终偏离因子R = 0.0285, wR = 0.0747。该化合物的结构包含单核的Co(hedpH2)2- 阴离子,阴离子之间通过氢键连结形成具有空隙的三维超分子骨架结构,双质子化的丁二胺分子位于空隙中。 展开更多
关键词 钴配合物 有机二膦酸超分子化合物 水热合成法 晶体结构 [NH3(cH2)4NH3]co(hedpH2)(H2O)2 c8H30N2coO16p4 1-羟亚乙基二膦酸
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lncRNA-HOTAIR通过靶向负调控miR-1-3p抑制脂多糖诱导的H9c2大鼠心肌细胞增殖并促进炎症反应
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作者 刘星 董家辉 +1 位作者 鲜悦 任宗芳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期904-910,共7页
目的探讨长链非编码RNA-HOX转录本反义基因间RNA(lncRNA-HOTAIR)是否通过靶向微小RNA miR-1-3p调控脓毒症的炎症反应。方法利用0.5μg/mL脂多糖(LPS)诱导H9c2大鼠心肌细胞,建立脓毒症心肌细胞损伤模型,将H9c2细胞分为对照组、LPS组、LP... 目的探讨长链非编码RNA-HOX转录本反义基因间RNA(lncRNA-HOTAIR)是否通过靶向微小RNA miR-1-3p调控脓毒症的炎症反应。方法利用0.5μg/mL脂多糖(LPS)诱导H9c2大鼠心肌细胞,建立脓毒症心肌细胞损伤模型,将H9c2细胞分为对照组、LPS组、LPS联合HOTAIR小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、LPS联合HOTAIR小干扰RNA(si-HOTAIR)组、LPS联合miR-1-3p阴性对照(miR-NC)组、LPS联合miR-1-3p组、LPS联合si-HOTAIR和miR-1-3p拮抗剂阴性(anti-miR-NC)组、LPS联合siHOTAIR和anti-miR-1-3p组。实时定量PCR检测HOTAIR和miR-1-3p表达,CCK-8法检测细胞增殖,Western blot法分析KI-67抗原(ki67)、P21、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)的蛋白表达,流式细胞术评估细胞凋亡,ELISA测定炎性因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。双荧光素酶报告实验分析HOTAIR和miR-1-3p的靶向关系。结果LPS组H9c2细胞中HOTAIR表达量高于对照组,miR-1-3p表达量低于对照组。与LPS联合si-NC组比较,LPS联合si-HOTAIR组LPS处理H9c2细胞增殖活性、ki67、Bcl2表达量增多,P21表达量、凋亡率、BAX表达量、IL-6和TNF-α水平降低。HOTAIR靶向调控miR-1-3p的表达。LPS联合miR-1-3p组较LPS联合miR-NC组的H9c2细胞增殖活性、ki67、Bcl2表达量升高,P21表达量、凋亡率、BAX表达量、IL-6、TNF-α水平降低。与LPS联合si-HOTAIR和anti-miR-NC组比较,LPS联合si-HOTAIR和anti-miR-1-3p组H9c2细胞增殖活性降低、ki67、Bcl2表达减少,P21、BAX表达,细胞凋亡、IL-6、TNF-α水平增加。结论HOTAIR通过靶向负调控miR-1-3p的表达,抑制LPS诱导的H9c2心肌细胞增殖,并诱导细胞凋亡和炎症反应。 展开更多
关键词 脓毒症 HOX转录本反义基因间RNA(HOTAIR) miR-1-3p H9c2细胞 细胞凋亡 炎症反应
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桥本甲状腺炎患者外周血miR-142-3p、miR-125a-5p水平与甲状腺功能和Th1/Th2及Th17/Treg细胞平衡的关系
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作者 林俊平 李少珊 +2 位作者 张立 曹金涛 马涛 《现代生物医学进展》 CAS 2024年第17期3269-3273,3336,共6页
目的:探讨桥本甲状腺炎(HT)患者外周血微小核糖核酸(miRNA)-142-3p、miR-125a-5p水平与甲状腺功能和辅助性T细胞(Th)1/Th2及Th17/调节性T细胞(Treg)细胞平衡的关系。方法:选取2020年1月~2023年8月我院收治的HT患者90例作为HT组和同时间... 目的:探讨桥本甲状腺炎(HT)患者外周血微小核糖核酸(miRNA)-142-3p、miR-125a-5p水平与甲状腺功能和辅助性T细胞(Th)1/Th2及Th17/调节性T细胞(Treg)细胞平衡的关系。方法:选取2020年1月~2023年8月我院收治的HT患者90例作为HT组和同时间段90名体检健康者作为对照组,根据甲状腺功能减低程度将HT患者分为甲状腺功能正常组(26例)、亚临床甲状腺功能减退组(31例)和临床甲状腺功能减退组(33例)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测外周血miR-142-3p、miR-125a-5p水平,酶联免疫吸附法检测甲状腺功能指标[甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT_(3))、游离甲状腺素(FT_(4))],流式细胞术检测外周血Th1、Th2、Th17、Treg细胞比例,并计算Th1/Th2及Th17/Treg比值。通过Pearson/Spearman相关性分析HT患者外周血miR-142-3p、miR-125a-5p与甲状腺功能、Th1、Th2、Th17、Treg的相关性。结果:HT组外周血miR-142-3p、miR-125a-5p、TgAb、TPOAb、TSH、Th1、Th17、Th1/Th2、Th17/Treg比值高于对照组,FT3、FT4、Th2、Treg比例低于对照组(P<0.05)。甲状腺功能正常组、亚临床甲状腺功能减退组、临床甲状腺功能减退组外周血miR-142-3p、miR-125a-5p、TgAb、TPOAb、TSH、Th1、Th17、Th1/Th2、Th17/Treg比值依次升高,FT3、FT4、Th2、Treg比例依次降低(P<0.05)。Pearson/Spearman相关性分析显示,HT患者外周血miR-142-3p、miR-125a-5p与TgAb、TPOAb、TSH、Th1、Th17、Th1/Th2、Th17/Treg呈正相关,与FT3、FT4、Th2、Treg呈负相关(P<0.05)。结论:HT患者外周血miR-142-3p、miR-125a-5p水平升高,与甲状腺功能减退和Th1/Th2、Th17/Treg细胞失衡有关。 展开更多
关键词 桥本甲状腺炎 miR-142-3p miR-125a-5p 辅助性T细胞1/辅助性T细胞2 辅助性T细胞17/调节性T细胞 甲状腺功能
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共表达O型口蹄疫病毒P1-2A基因和猪白细胞介素18的重组鸡痘病毒的构建 被引量:3
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作者 刘慧娟 金宁一 +6 位作者 马鸣潇 金明兰 张林 李旭 计越 鲁会军 金扩世 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期20-23,共4页
目的:为获得能有效预防O型口蹄疫病毒的重组鸡痘病毒活载体疫苗奠定基础。方法:在O型口蹄疫病毒P1-2A基因上游引入Kozak序列,下游通过Linker与细胞因子IL-18联接,获得P1-2A基因与猪IL-18基因融合表达基因盒P1-2A-IL-18,将该表达基因盒... 目的:为获得能有效预防O型口蹄疫病毒的重组鸡痘病毒活载体疫苗奠定基础。方法:在O型口蹄疫病毒P1-2A基因上游引入Kozak序列,下游通过Linker与细胞因子IL-18联接,获得P1-2A基因与猪IL-18基因融合表达基因盒P1-2A-IL-18,将该表达基因盒克隆至鸡痘病毒中间转移载体pUTAL-3C中,构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-3C-P1-2A-IL-18。通过脂质体转染法,将pUTAL-3C-P1-2A-IL-18与鸡痘病毒282E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过BrdU三次加压筛选,挑选出单克隆重组病毒株。结果:经RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定,证明所筛选的1株重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-IL-18基因盒。结论:成功获得了一株共表达O型口蹄疫病毒P1-2A基因和猪白细胞介素18基因的重组鸡痘毒疫苗候选株rFPV-3C-P1-2A-IL-18。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 鸡痘病毒活载体 p1-2A基因 IL-18基因 3c基因
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SNHG6靶向miR-101/TGFBR1促进AMI小鼠左心室心肌纤维化
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作者 张梦伟 赵忠帅 +3 位作者 杨林 王明 杨雪飞 王倩 《中南医学科学杂志》 CAS 2023年第5期640-644,共5页
目的探讨SNHG6对急性心肌梗死(AMI)小鼠左心室心肌的影响。方法将30只雄性C57/BL6小鼠构建成AMI小鼠后随机均分为AMI组、AMI+SNHG6组、AMI+miR-101-3p组、AMI+SNHG6+miR-101-3p组、AMI+miR-101-3p+TGFBR1组,另设正常小鼠6只为假手术组。... 目的探讨SNHG6对急性心肌梗死(AMI)小鼠左心室心肌的影响。方法将30只雄性C57/BL6小鼠构建成AMI小鼠后随机均分为AMI组、AMI+SNHG6组、AMI+miR-101-3p组、AMI+SNHG6+miR-101-3p组、AMI+miR-101-3p+TGFBR1组,另设正常小鼠6只为假手术组。qRT-PCR检测AMI小鼠SNHG6、miR-101-3p表达水平。心脏彩超检测各组小鼠左室射血分数(LVEF);马松和天狼星红染色法以及免疫组化分析各组小鼠左心室心肌纤维化变化。将H9C2细胞株分为阴性对照组(转染空质粒)、SNHG6组(转染质粒SNHG6)、miR-101-3p组(转染质粒miR-101-3p)。Western blotting检测各组TGFBR1蛋白表达;采用双荧光素酶报告基因法预测并验证SNHG6/miR-101-3p/TGFBR1荧光素酶活性及调控机制。结果AMI小鼠较假手术组SNHG6表达显著增加,miR-101-3p降低(P<0.05)。与AMI组比较,AMI+SNHG6组小鼠LVEF降低,心肌纤维化程度加重(P<0.05);AMI+miR-101-3p组LVEF升高,心肌纤维化程度减轻(P<0.05)。AMI+SNHG6+miR-101-3p组较AMI+SNHG6组LVEF升高、心肌纤维化程度减轻(P<0.05),而AMI+miR-101-3p+TGFBR1组较AMI+miR-101-3p组LVEF降低、心肌纤维化程度加重(P<0.05)。双荧光素酶报告基因法验证显示,miR-101-3p组SNHG6、TGFBR1野生型质粒的荧光素酶活性较阴性对照组明显降低(P<0.05)。结论SNHG6抑制miR-101-3p上调TGFBR1加重AMI小鼠左心室心肌纤维化。 展开更多
关键词 AMI lncRNA SNHG6 miR-101-3p TGFBR1 H9c2 心肌纤维化
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miR-93-5p靶向调控Smad5表达抑制小鼠C3H10T1/2细胞成骨分化的研究 被引量:2
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作者 徐练 李晓龙 +3 位作者 刘印 孔清泉 龙丹 李胜富 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1288-1294,共7页
目的探讨mi R-93-5p是否通过靶向调控其预测靶基因Smad5的表达,从而抑制小鼠MSCs C3H10T1/2细胞的成骨分化。方法构建Smad5 3’-UTR-荧光素酶报告载体(pmi R-RB-REPORTTM),通过双荧光素酶报告基因检测,观察mi R-93-5p对Smad5 3’-UTR荧... 目的探讨mi R-93-5p是否通过靶向调控其预测靶基因Smad5的表达,从而抑制小鼠MSCs C3H10T1/2细胞的成骨分化。方法构建Smad5 3’-UTR-荧光素酶报告载体(pmi R-RB-REPORTTM),通过双荧光素酶报告基因检测,观察mi R-93-5p对Smad5 3’-UTR荧光素酶活性的影响,鉴定Smad5是否为mi R-93-5p的靶基因。将mi R-93-5p mimics(M组)与mi R-93-5p inhibitor(In组)及其对应的阴性对照组mi R-93-5p mimics阴性对照(MC组)与mi R-93-5p inhibitor阴性对照(In C组)分别转染至C3H10T1/2细胞中,并进行成骨诱导培养,48 h后分别采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,q RT-PCR)及Western blot检测各组细胞Smad5在m RNA及蛋白水平的相对表达量;14 d后通过茜素红染色检测各组细胞外钙盐的沉积情况,了解mi R-93-5p对C3H10T1/2细胞成骨分化的调控效应。结果双荧光素酶报告基因检测结果显示,mi R-93-5p能与Smad5 m RNA3’-UTR特异性结合,抑制其荧光素酶活性(P<0.05)。q RT-PCR检测示,M组及In组Smad5的m RNA相对表达量与对应阴性对照组MC组及In C组比较差异均无统计学意义(P>0.05);Western blot检测示,M组及In组Smad5蛋白相对表达量与对应阴性对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),其中M组较MC组表达量下调,而In组则较In C组表达量上调。茜素红染色示,M组钙盐沉积较MC组明显减少,而In组则较In C组钙盐沉积明显增多。结论Smad5是mi R-93-5p的靶基因,mi R-93-5p可通过靶向调控Smad5的表达,抑制小鼠C3H10T1/2细胞成骨分化。 展开更多
关键词 c3H10T1/2细胞 miR-93-5p SMAD5 MScs 成骨分化 小鼠
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miR-486-5p对C2C12细胞IGF-1-PI3K/AKT-mTOR信号通路的影响 被引量:2
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作者 郭晓萍 陈时锦 +2 位作者 张名媛 蒋钦杨 兰干球 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期481-488,共8页
本文旨在研究miR-486-5p对C2C12细胞IGF-1-PI3K/AKT-mTOR信号通路的影响,探讨miR-486-5p在C2C12细胞中对胰岛素信号通过基因的调控机制。利用构建好的miR-486-5p过表达和抑制慢病毒载体,通过脂质体转染法分别在C2C12细胞上过表达和抑制m... 本文旨在研究miR-486-5p对C2C12细胞IGF-1-PI3K/AKT-mTOR信号通路的影响,探讨miR-486-5p在C2C12细胞中对胰岛素信号通过基因的调控机制。利用构建好的miR-486-5p过表达和抑制慢病毒载体,通过脂质体转染法分别在C2C12细胞上过表达和抑制miR-486-5p的表达,利用荧光定量PCR法检测miR-486-5p过表达和抑制效率,同时检测过表达和抑制miR-486-5p后IGF-1、INSR、IRS1、PI3K、PI3KR1、PDK1、AKT1、PTEN、Fox O1、m TOR、4EBP1基因的mRNA变化。荧光定量PCR结果显示24 h过表达倍数和抑制效率分别为2.8倍和35%,48 h过表达倍数和抑制效率分别为1.4倍和15%。过表达miR-486后,24 h和48 h时INSR、PDK1、PTEN、AKT1、FoxO1、4EBP1基因均显著下调;抑制miR-486后,24 h时4EBP1显著上调,48 h时IGF-1显著上调,4EBP1显著下调。本研究表明过表达miR-486-5p后胰岛素信号通路基因的表达受到抑制,抑制miR-486-5p后胰岛素信号通路基因的表达上升,这可能是肥胖患者血清miR-486-5p升高损害胰岛素信号引起葡萄糖摄取能力降低,从而导致胰岛素抵抗发生的原因。 展开更多
关键词 miR-486-5p IGF-1-pI3K/AKT-mTOR信号通路 c2c12细胞
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微小RNA-19a-3p对人白血病叉头蛋白O1-Kruppel样因子2-鞘氨醇-1-磷酸受体1通路的影响探析
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作者 拓进宝 宋超 王丽萍 《世界临床药物》 2022年第2期140-143,共4页
目的探究微小 RNA(miR)-19a-3p 对人白血病叉头蛋白 O1(FoxO1)-Kruppel 样因子(Kruppel like factor,KLF)2-鞘氨醇-1-磷酸受体1(sphingosine-1-phosphate receptor 1,S1P1)通路的影响。方法选取人白血病T淋巴细胞,对细胞进行常规传代培... 目的探究微小 RNA(miR)-19a-3p 对人白血病叉头蛋白 O1(FoxO1)-Kruppel 样因子(Kruppel like factor,KLF)2-鞘氨醇-1-磷酸受体1(sphingosine-1-phosphate receptor 1,S1P1)通路的影响。方法选取人白血病T淋巴细胞,对细胞进行常规传代培养并分为实验组及对照组。实验组通过转染小干扰RNA敲低mi R-19a-3p的表达,对照组不进行任何刺激。检测mi R-19a-3p表达水平,细胞中Fox O1、KLF2、S1P1的表达情况及细胞增殖水平,对比两组相关指标表达情况。结果传代培养后,实验组及对照组细胞mi R-19a-3p表达分别为(2.44±0.21)、(1.53±0.15),差异有统计学意义(P <0.05)。敲低后,实验组Fox O1(35.33±0.89)、KLF2(1.92±0.48)、S1P1(1.45±0.15)表达水平显著高于对照组Fox O1(1.33±0.29)、KLF2(0.66±0.19)、S1P1(0.41±0.09),差异有统计学意义(P <0.05)。两组细胞增殖情况未见明显差异,但实验组较对照组细胞凋亡抑制解除。结论 mi R-19a-3p在淋巴瘤组织中呈现高表达且对人白血病Fox O1-KLF2-S1P1通路有抑制作用,且抑制mi R-19a-3p的高表达可帮助激活Fox O1-KLF2-S1P1通道的正向调控。 展开更多
关键词 微小RNa-19a-3p 人白血病叉头蛋白O1 Kruppel样因子2 鞘氨醇-1-磷酸受体1 细胞通路
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表达O型FMDV衣壳蛋白重组腺病毒的构建及其对小鼠免疫效力的研究 被引量:2
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作者 刘彦玲 裴艳艳 +5 位作者 李敏杰 杨德成 王海伟 于力 田志军 周国辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期636-641,共6页
已有研究发现口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A含有FMDV主要抗原决定簇,并在3C蛋白酶的裂解下表达FMDV衣壳蛋白,诱导机体产生高水平的体液免疫应答。为了研究FMDV衣壳蛋白对鼠体内体液免疫应答的影响,本研究构建了含有O型FMDV P1-2A-3... 已有研究发现口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A含有FMDV主要抗原决定簇,并在3C蛋白酶的裂解下表达FMDV衣壳蛋白,诱导机体产生高水平的体液免疫应答。为了研究FMDV衣壳蛋白对鼠体内体液免疫应答的影响,本研究构建了含有O型FMDV P1-2A-3C基因的重组腺病毒表达载体,经双酶切鉴定正确后采用同源重组方法构建重组腺病毒rAdV-P12A3C,传代后经PCR鉴定,结果显示各代次均检测到预期的3.5 kb的目的条带,获得了r AdV-P12A3C。将r AdV-P12A3C连续传代后,分别利用IFA和western blot检测rAdV-P12A3C第2、4、6、8代时外源基因在293细胞中的表达情况。结果显示,获得了表达FMDV P1-2A-3C基因的rAdV-P12A3C,且外源基因在病毒传代过程中均能够稳定表达。将其感染293细胞后测定rAdV-P12A3C各时间点的病毒效价并绘制一步生长曲线,结果显示,该r AdV-P12A3C传至第8代时病毒效价可达7.2×10^(8)TCID/mL,各时间点病毒效价与亲本病毒差异均不显著,表明外源基因插入后对重组腺病毒的病毒滴度未造成明显影响。将rAdV-P12A3C免疫BALB/c小鼠,对BALB/c小鼠采血并分离血清,通过间接ELISA方法检测鼠体内的抗体,结果显示,rAdVP12A3C免疫组、O型FMDV灭活疫苗组及rAdV-P12A3C与206佐剂乳化组BALB/c小鼠均在首免后7周(二免后3周)VP1抗体达到峰值,之后抗体水平逐渐下降,到第24周抗体水平接近阴性,且rAdV-P12A3C与206佐剂乳化组产生的VP1抗体水平极显著高于另外两个免疫组(P<0.001)。表明rAdV-P12A3C能够刺激BALB/c鼠体内产生IgG抗体。本研究结果首次表明:rAdV-P12A3C能够表达FMDV衣壳蛋白,并能在小鼠体内产生高水平的体液免疫应答,为新型口蹄疫候选疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 p1-2a-3c基因 重组腺病毒 免疫原性
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