人P115基因重组真核表达质粒的构建及其对肝癌细胞增殖的影响

目的构建人P115基因重组真核表达质粒,并探讨其过表达对人肝癌细胞HepG2增殖活性的影响。方法采用RT-PCR从HepG2细胞中扩增人P115基因,插入pEGFP-N1 Vector(+)载体,构建重组真核表达质粒pEGFP-N1 Vector(+)-USO1,将重组质粒转染至HepG2细胞,免疫荧光及流式细胞术检测转染效率;RT-PCR及Western blot检测转染细胞中P115基因及蛋白的表达;MTT法检测转染细胞的增殖活性、流式细胞术检测细胞周期变化。结果重组真核表达质粒pEGFP-N1 Vec-tor(+)-USO1经酶切鉴定及测序证明构建正确;重组质粒转染HepG2细胞的转染效率达84.83%;重组质粒转染的HepG2细胞中P115基因和蛋白的表达水平及细胞增殖活性均明显高于空载体转染和未转染的细胞;重组质粒转染的细胞G1/G2期比例明显减少,S期比例明显增加。结论已成功构建了人P115基因重组真核表达质粒,其在肝癌细胞中过表达P115可促进肝癌细胞增殖。