盐酸小檗碱通过P13K/AKT信号通路抑制MMP2和MMP9的表达影响膀胱癌T24细胞侵袭性

目的:探讨盐酸小檗碱(Berberine hydrochloride)对膀胱癌T24细胞侵袭能力的影响及机制.方法:采用利用CCK8法检测膀胱癌T24细胞的生存率;transwell侵袭试验检测盐酸小檗碱对T24细胞侵袭能力的影响;Western-blotting分析盐酸小檗碱对P13K/AKT通路相关因子(PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT),细胞基质金属蛋白酶(MMP2、MMP9)蛋白表达的改变.结果:CCK8显示盐酸小檗碱对T24细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性(P<0.05);与对照组比较,经盐酸小檗碱处理后膀胱癌T24细胞侵袭能力明显降低.P13K抑制剂LY294002可通过抑制P13K/AKT通路活化,抑制MMP2和MMP9的表达,相对应的盐酸小檗碱处理后膀胱癌T24细胞p-PI3K、pAKT、MMP2、MMP9蛋白表达下降(P<0.05).结论:盐酸小檗碱可有效抑制膀胱癌T24细胞侵袭能力,其机制可能是通过调控P13K/AKT通路抑制MMP2和MMP9的表达.

P13K／Akt／mTOR信号通路参与缺氧诱导因子-1α在急性胰腺炎大鼠的表达调节

目的探讨急性胰腺炎（AP）大鼠P13K／Akt/mTOR信号通路与HIF-1α表达的关系。方法56只雄性SD大鼠随机分为7组：空白对照组（n=8）、假手术组（n=8）、AP模型组（n=8）、wortmannin预处理组（n=8）、rapamycin预处理组（n=8）、wortmannin＋rapamycin预处理组（n=8）和溶剂对照组（n=8）。用逆行胰胆管注射5％牛磺胆酸钠制备大鼠AP模型，wortmannin预处理组、rapamycin预处理组、wortmannin＋rapamycin预处理组分别于AP模型复制前30min腹腔注射wortmannin、rapamycin、wortmannin＋rapamycin DMSO／PBS溶液，溶剂对照组仅注射DMSO／PBS溶液。模型复制成功后6h处死大鼠取胰头部胰腺组织，应用Westernblot检测HIF-1α、Akt、P—Akt、p70^s6k、P—p70^s6k蛋白的表达。结果Akt、p70^s6k蛋白在胰腺组织中表达稳定，各组间差异无统计学意义（P〉0．05），HIF—1α、P—Akt、P—p70^s6k蛋白在空白对照组和假手术组中均有极少量阳性表达，两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。AP模型组HIF-1α、P—Akt、P—p70^s6k蛋白含量与空白对照组相比明显升高（P〈0．01）；wortmannin预处理组、rapamycin预处理组、wortmannin＋rapamycin预处理组中HIF-1α、P—p70^s6k蛋白表达明显高于空白对照组（P〈0．01），但较AP模型组明显降低（P〈0．01），其中HIF-1α蛋白表达在wortmannin＋rapamycin预处理组比wortmannin预处理组、rapamycin预处理组降低更明显（P〈0．05）。HIF-1α、P—Akt、P—p70“蛋白含量在溶剂对照组和AP模型组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论P13K／Akt／mTOR信号通路阻断剂wortmannin、rapamycin能够显著降低急性胰腺炎大鼠HIF-1α的表达，P13K／Akt／mTOR信号通路参与了HIF-1α的表达调控，P13K／Akt／mTOR信号通路可作为AP防治中的新靶点。

TRPM7-P13K在治疗性浅低温（34℃）处理的大鼠离体心肌缺血-再灌注模型中的作用

目的在离体大鼠心肌缺血一再灌注模型中，检测常温下心肌缺血-再灌注损伤后TRPM7的表达水平变化以及治疗性浅低温（34qc）在心肌缺血-再灌注中对TRPM7的影响及其与P13K通路的关系。方法SPF清洁级健康成年雄性SD大鼠108只，随机分为六组，每组18只，SHAM组：正常大鼠组；UR组：37℃灌流液灌流大鼠心脏30min，缺血30min，37℃灌注液再灌注120min；VR＋2-APB组：37℃灌流液灌流30rain，缺血30min，灌注液中加2-APB后行37℃灌注液再灌注120min；34H＋I／R组：37℃灌流液灌流30min，缺血30min，34℃灌注液再灌注120min；34H＋L／R＋WORT组：37℃灌流液灌流30rain，缺血30min，在灌注液加womannin后行34℃灌注液再灌注120min；34H＋L／R＋2-APB组：37℃灌流液灌流30min，缺血30min，在灌注液中加2-APB后行34℃灌注液再灌注120min。以压力换能器连接Medlab生物信号采集系统记录平衡灌流30rain末（哟，基础值），再灌注30min（T1），60min（T2），90min（T3），120min（T4）各时间点的心率（HR）、左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末压（LVEDP）、左心室内压上升／下降最大速率（±do／dtmax）。在再灌注120min末，取心脏进行HE染色观察心肌损伤，WesternMot测定TRPM7蛋白含量，并测定TTC染色后的心肌梗死面积。结果UR组TRPM7的表达量升高（P〈0．05），心肌梗死面积明显增多（P〈0．05）；L／R＋2-APB组与SHAM组和I／R组比较，TRPM7表达量明显减少（P〈0．05），心肌梗死面积与I／R组比较明显减少（P〈0．05）；34H＋VR组TRPM7的表达量与SHAM组和UR组相比明显减少（P〈0．05），心肌梗死面积与L／R组相比明显减少（P〈0．05）；34H＋I／R＋WORT组TRPM7表达量与34H＋L／R组相比增多（P〈0．05），心肌梗死面积与34H＋L／R组相比有所增加（P〈0．05）；34H＋L／R＋2-APB组TRPM7表达量与34H＋∥R组相比差异无统计学意义（P〉0．05），与34H＋L／R＋WORT组相比其TRPM7表达量减少（P〈0．05）；34H＋VR＋2-APB组心肌梗死面积与34H＋L／R组相比差异无统计学意义（P〈0．05），与34＋I／R＋WORT组相比，其心肌梗死面积减小（P〈0．05）。各组之间血流动力学变化差异无统计学意义（P〈0．05）。结论在离体心肌缺血-再灌注模型中，心肌缺血-再灌注损伤时TRPM7蛋白呈现高表达；治疗性浅低温（34℃）可以抑制心肌缺血一再灌注中TRPM7的高表达，并且这种保护作用是通过P13K通路介导产生的。

西妥昔单抗联合FOLFOX4对老年结肠癌患者组织PTEN及P13K表达的影响

目的探讨西妥昔单抗联合FOLFOX4化疗方案对老年结肠癌患者组织抑癌基因PTEN及P13K表达的影响。方法选取2013年10月~2015年7月浙江省台州医院收治的结肠癌老年患者62例,按治疗方法不同分组,对照组（n=27）采用单纯FOLFOX4方案化疗,研究组（n=35）在FOLFOX4化疗方案基础上给予西妥昔单抗治疗,疗程均为4个周期,对比2组间临床疗效,治疗前后采用免疫组化测定病理组织PTEN及P13K表达状况。结果研究组有效率（51.4%）与对照组有效率（44.4%）,研究组疾病控制率（80.0%）与对照组疾病控制率（62.9%）比较差异均无统计学意义（χ2=0.298,P=0.585;χ2=2.223,P=0.136）。在组织PTEN及P13K表达上,研究组治疗后PTEN阳性率显著高于对照组（82.86%vs.59.26%,P〈0.05）,治疗后P13K阳性率显著低于对照组（37.14%vs.62.96%,P〈0.05）。结论采用西妥昔单抗联合FOLFOX4化疗方案治疗老年结肠癌能提高组织PTEN表达,降低P13K表达,效果显著。

s腺苷蛋氨基酸通过抑制P13K/AKT/mTOR通路调控HepG2肝癌细胞自噬作用研究

目的探讨s腺苷蛋氨基酸通过抑制P13K/AKT/mTOR通路调控HepG2肝癌细胞自噬作用。方法选取上海生命科学研究院细胞资源中心的HepG2肝癌细胞作为研究标本,随机分为阴性对照组、阳性对照组和观察组,并比较三组间HepG2肝癌细胞的增殖、凋亡情况以及HepG2肝癌细胞自噬相关标记物记LC3B和Bclin1表达水平。结果 s腺苷蛋氨基酸作用24 h、48 h和72 h时抑制HepG2细胞增殖的IC_(50)分别为24.34μmol/L、10.26μmol/L、6.24μmol/L,与阴性对照组和阳性对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);10μmol/L、30μmol/L和100μmol/L不同浓度s腺苷蛋氨基酸作用于HepG2细胞48 h后出现的凋亡率分别为(26.28±1.34)%、(22.34±1.82)%和(11.18±0.60)%,而阴性对照组其HepG2细胞48 h后的凋亡率为(6.28±0.02)%,即观察组凋亡率随着药物浓度的增高而降低,且与阴性对照组比较,观察组各浓度s腺苷蛋氨基酸作用于HepG2细胞48h后出现的凋亡率均明显较高,即s腺苷蛋氨基酸具有诱导HepG2细胞凋亡的作用(P<0.05);经流式细胞仪结果显示,不同浓度s腺苷蛋氨基酸作用于HepG2细胞48 h后其LC3B和Bclin1水平均呈逐渐降低(P<0.05)。结论 s腺苷蛋氨基酸可通过抑制P13K/AKT/mTOR通路调控进一步增强HepG2肝癌细胞自噬作用。

P13K抑制剂对肺癌Akt2、p-Akt表达影响的试验研究

目的探讨P13K抑制剂LY294002对肺癌Akt2、p-Akt表达的影响。方法体外实验是取对数生长期的A549细胞制备细胞爬片,体内实验先用裸鼠建立移植瘤模型,通过P13K抑制剂LY294002干预后,分别用免疫组织化学法和W estern b lot法检测Akt2、p-Akt蛋白的表达。结果肺腺癌细胞株A549细胞中存在Akt2和p-Akt蛋白的高表达,应用P13K抑制剂LY294002可抑制该细胞株细胞中Akt2和p-Akt蛋白的表达,而且其表达呈浓度依赖型降低。LY294002组移植瘤组织Akt2和p-Akt蛋白的表达用免疫组织化学法检测较对照组染色变淡,用W estern b lot法检测显示其蛋白表达量低于对照组。结论LY294002可通过抑制P13K活性,抑制Akt的表达及活化,使Akt2和p-Akt蛋白的表达降低,提示抑制P13K/Akt途径可能是LY294002发挥抗癌作用的重要机制,P13K/Akt可能成为肺癌治疗的靶点。

P13K／Akt信号通路与肝纤维化

肝纤维化（hepatic fibrosis，HF）是肝脏对各种慢性刺激进行损伤修复反应时，以胶原为主的细胞外基质（extracellular matrix，ECM）在肝内大量沉积的病理过程。肝星状细胞（hepaticstellate cell，HSC）在肝纤维化形成过程中居核心地位。在各种因素作用下，肝细胞、Kupffer细胞、内皮细胞和星状细胞自身可产生多种细胞因子与活化产物等，这些因子可以通过各种信号通路调节HSC的功能，P13K／Akt是其中重要的一条通路。

调节P13K／Akt信号转导通路对脑缺血-再灌注后微血管生成机制的研究进展

磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）／丝氨酸一苏氨酸蛋白激酶（Akt）信号转导通路参与调节脑缺血-再灌注后半暗带区微血管的生成，为缺血性脑血管疾病的临床治疗提供了新的途径。本文从调控缺氧诱导因子（HIF）、细胞内皮生长因子（VEGF）等相关因子的表达，促血管内皮祖细胞（EPCs）归巢和血管内皮细胞（VEC）迁移等方面，就近年来有关P13K／Akt信号转导通路在脑缺血-再灌注微血管生成机制方面的研究进展做一综述。

P13K／AKT／mTOR信号通路在乳腺癌Her-2治疗耐药中的作用研究进展

Her-2靶向治疗是Her-2过表达乳腺癌治疗的重要组成部分，但Her-2靶向治疗的耐药严重影响了乳腺癌的治疗。研究证实乳腺癌Her-2靶向治疗出现耐药的过程中有P13K／AKT／mTOR信号通路的激活，因此对P13K／AKT／mTOR信号通路及以P13K／AKT／mTOR信号通路为靶点的药物研究对乳腺癌治疗具有重要意义。

乌灵胶囊对卒中后抑郁大鼠海马P13K/Akt/mTOR通路和神经递质的影响

目的探讨乌灵胶囊对卒中后抑郁大鼠海马P13K/Akt/mTOR通路和神经递质影响。方法选取健康SD大鼠48只,随机分为对照组、模型组、低剂量组和高剂量组,每组12只。采用改良Zea-Longa法复制大脑中动脉缺血大鼠模型(MCAO模型),MCAO模型复制成功后皮下注射利血平复制卒中后抑郁模型。对照组和模型组给予等剂量双蒸水灌胃;低剂量组于模型复制成功后第2天给予40 mg乌灵胶囊;高剂量组于模型复制成功后第2天给予80 mg乌灵胶囊,1次/d。各组大鼠灌胃21 d。采用Western blotting检测大鼠海马组织海马组织PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量;高效液相色谱法测定海马组织NE、DA和5-HT含量。结果模型组、低剂量组和高剂量组大鼠Zea Longa评分高于对照组(P<0.05),海马组织PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量低于对照组(P<0.05),海马组织NE、DA和5-HT含量低于对照组(P<0.05);而低剂量组和高剂量组大鼠Zea Longa评分低于模型组(P<0.05),海马组织PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量高于模型组(P<0.05),海马组织NE、DA和5-HT含量高于模型组(P<0.05)。结论乌灵胶囊可改善卒中后抑郁大鼠行为,且可调节海马P13K/Akt/mTOR通路,调节神经递质水平。

基于P13K/AKt及NF-kB信号通路探讨大鼠应激性溃疡的关键保护因子

应激性溃疡(SU)是胃肠病最具挑战性的研究热点,也是胃黏膜防御因素与侵袭因素失衡的结果,胃黏膜的信号通路存在激活后加重胃黏膜损伤及保护胃黏膜的双重通路,如何激活保护通路、抑制损伤通路进而修复胃黏膜将是SU研究的重点。笔者以胃黏膜的关键信号通路(P13K/AKt及NF-kB)作为研究靶点,对P13K/AKt及NF-kB信号通路相关的关键信息分子作一综述,旨在为SU研究提供新的研究思路。

胃肠道间质瘤P13K／Akt信号转导通路的检测及其意义

目的探讨胃肠道间质瘤P13K／Akt信号转导通路的检测及意义。方法：采用Western印迹法检测P13K、Akt和PTEN在胃肠道间质瘤患者中的表达，同时采用免疫组织化学法检测HIF-1、NOS2和VEGF在胃肠道间质瘤患者中的表达。结果：在胃肠道间质瘤患者中，P13K、Akt表达水平随着NIH分级增高而上调（P〈0．05）；PTEN表达水平随着NIH分级增高而下调（P〈0．05）。而HIF-1、NOS2和VEGF表达水平与NIH分级、黏膜受侵及侵袭转移均有密切关系（P〈0．05）：（1）I、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级患者的HIF-1阳性率分别为43．6％和69．7％，NOS2阳性率分别为44．3％和72．5％．VEGF阳性率分别为47．5％和62．8％；（2）黏膜受侵与无受侵组患者的HIF-1阳性率分别为89．4％和52．1％，NOS2阳性率分别为87．3％和56．2％，VEGF阳性率分别为78．7％和51．8％；（3）有侵袭转移组患者相比于无侵袭转移组阳性率明显升高。此外，HIF-1与NOS2二者阳性表达之间呈正相关；HIF-1与VEGF二者阳性表达之间呈正相关：NOS2与VEGF二者阳性表达之间亦呈正相关。结论：在胃肠道间质瘤患者中。P13K／Akt信号可能通过调控PTEN从而调节HIF-1表达．HIF-1、NOS2和VEGF表达水平与NIH分级、黏膜受侵及侵袭转移均有密切关系。

原花青素B2通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路减轻氯氰菊酯所致神经元损伤

目的探讨原花青素B2(PCB2)是否通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路保护氯氰菊酯(CYP)导致的神经元氧化损伤。方法原代培养C57BL/6小鼠大脑皮层神经元,将细胞随机分成5组:正常对照组;PCB2处理组(将5μg/mL的PCB2与细胞共培养24 h);CYP暴露组(将50μmol/L的CYP与细胞共培养24 h);PCB2预处理组(将5μg/mL的PCB2与细胞预处理30 min后加入CYP 50μmol/L共培养24 h);LY294002处理组(先将20μmol/L的LY294002与细胞预处理30 min,然后加入PCB2预处理30 min,后与CYP共培养24 h)。采用CCK-8分析各组细胞活性,采用荧光探针DCFH-DA及流式细胞术检测细胞内ROS水平,通过Hoechst 33342观察细胞核形态变化,采用JC-1检测线粒体膜电位异常,利用Western blot检测Nrf2、HO-1、p-Akt、Akt蛋白表达。结果CYP暴露降低细胞活性(P<0.001),引起线粒体膜电位下降、促使细胞核出现固缩、浓染等凋亡特征,导致ROS产生异常。PCB2预处理提高细胞存活率(P=0.006),改善细胞核形态异常,逆转CYP导致的线粒体膜电位下降,减弱细胞内ROS产生。CYP暴露引起Nrf2核易位,Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白表达上调(P<0.001)。PCB2预处理调节Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白过度表达。抑制P13K/Akt信号通路消除了PCB2对CYP诱导损伤的保护作用(P<0.05)。结论PCB2通过激活P13K/Akt信号通路,调控Nrf2/ARE通路,减轻CYP所致小鼠大脑皮层神经元氧化损伤。

miR-200b-5p靶向ATAD2调控P13K/AKT信号通路参与宫颈癌血管生成的作用机制

目的探究miR-200b-5p靶向调控ATAD2基因介导P13K/AKT信号通路对宫颈癌血管生成的作用机制。方法采集2016年3月至2018年3月间日照市妇幼保健院诊治的90例宫颈癌手术切除患者的术中标本作为研究对象。将采集到的标本行免疫组化检测,qRT-PCR检测组织miR-200b-5p、ATAD2表达,Western blot检测组织中ATAD2蛋白表达。细胞转染并分组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-200b-5p、ATAD2、PI3K、AKT mRNA表达水平;Western blot检测ATAD2、PI3K、AKT、VEGF蛋白表达水平。体外管腔形成实验比较各组管腔数目。结果宫颈癌组织中miR-200b-5pmRNA低表达,ATAD2 mRNA表达水平及蛋白表达均呈高表达,差异均具有统计学意义(均P<0.05);并伴随高VEGF阳性表达率和MVD。细胞转染实验提示与Blank组和NC组相比,miR-200b-5p mimic组miR-200b-5p表达量显著升高,ATAD2、PI3K、AKT表达显著下降,差异均具有统计学意义(均P<0.05);miR-200b-5p mimic组和ATAD2siRNA组VEGF、ATAD2、PI3K、AKT蛋白表达水平均显著下降,差异均具有统计学意义(均P<0.05);且miR-200b-5p mimic+ATAD2siRNA组表达趋势相比miR-200b-5p mimic组更显著,差异均具有统计学意义(均P<0.05);而miR-200b-5p inhibitor组差异与之相反,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。体外管腔形成实验提示管腔数目变化miR-200b-5p inhibitor组显著上升,miR-200b-5p mimic+ATAD2siRNA组显著下降,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论促进miR-200b-5p表达,抑制ATAD2基因,抑制PI3K、AKT表达,从而抑制P13K/AKT信号通路,最终实现对人宫颈癌细胞血管生成的抑制。

盐酸坦索罗辛对前列腺增生大鼠P13K/Akt信号通路的影响

目的:探讨盐酸坦索罗辛对前列腺增生(BPH)大鼠P13K/Akt信号通路的影响。方法:将健康的雄性SD大鼠60只随机分为健康对照组、空白模型组和盐酸坦索罗辛高、中、低剂量组,每组12只。除健康对照组外,其余各组大鼠均采用去势术联合丙酸睾酮注射建立良性BPH模型。建模成功后,盐酸坦索罗辛高、中、低剂量组分别灌胃1 mL剂量为0.1 mg/mL、0.2 mg/mL和0.4 mg/mL的盐酸坦索罗辛配制溶液,健康对照组和空白模型组灌胃等体积的蒸馏水。治疗28 d后计算大鼠前列腺指数,苏木精-伊红(HE)染色观察前列腺组织病理改变,免疫组化超敏感SP法检测Ki-67蛋白的表达情况,利用Ki-67蛋白表达计算出细胞增殖指数。Western blotting检测前列腺PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测PI3K、Akt和mTOR蛋白mRNA相对表达量。结果:HE染色结果显示,健康对照组的大鼠前列腺结构完整,腺体和腺腔大小正常,腺上皮细胞排列整齐;建模各组大鼠前列腺腺体增生明显,腺腔缩小,腺上皮细胞皱褶增多,盐酸坦索罗辛高、中、低剂量组大鼠的前列腺腺体增生较空白模型组大鼠明显减少,盐酸坦索罗辛中剂量组改善程度明显优于盐酸坦索罗辛低剂量组、高剂量组。各组大鼠前列腺指数、P13K/Akt信号通路相关蛋白表达和细胞增殖指数比较,均具有显著差异(均P<0.01),盐酸坦索罗辛高、中、低剂量组比健康对照组高(P<0.05),且比空白模型组低(P<0.05),盐酸坦索罗辛中剂量组表现更明显。p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量与前列腺指数呈正相关关系(P<0.05)。结论:盐酸坦索罗辛能抑制前列腺细胞增殖,有效改善BPH模型大鼠前列腺组织增生,其可能作用机制与抑制PI3K/Akt信号通路表达相关。

PTEN和mTOR蛋白在IDH1基因分型胶质母细胞瘤及P13K/Akt/mTOR信号通路中的表达及其相关性

目的研究P13K/Akt/mTOR信号通路中PTEN和mTOR蛋白在IDH1基因分型-突变型与野生型胶质母细胞瘤中的表达及意义。方法采用免疫组化方法检测胶质母细胞瘤手术后组织标本共52例(其中IDH1突变型胶质母细胞瘤10例,IDH1野生型胶质母细胞瘤42例),检测PTEN和mTOR蛋白在这两种不同基因分型胶质母细胞瘤中的表达情况及相关性。结果PTEN蛋白在IDH1突变型与野生型胶质母细胞瘤的表达率分别为20.00%(2/10)和73.81%(31/42),mTOR蛋白的表达率分别为70.00%(7/10)及35.71%(15/42),PTEN和mTOR蛋白在IDH1两种基因分型的胶质母细胞瘤的表达差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。PTEN和mTOR的表达呈负相关关系(r=-0.724,P<0.01)。结论 PI3K/AKT/mTOR信号转导通路中两个位点调节因子PTEN及mTOR在IDH1突变型与野生型GBM中分别表达降低及增高,且两种蛋白表达呈负相关的关系,提示PTEN和mTOR在IDH1突变型与野生型胶质母细胞瘤的分子通路中扮演着重要的调控作用。

P13K细胞信号转导通路和肝癌发病的关系研究

肝癌是我国常见的消化道肿瘤,在临床肿瘤的相关死亡原因中居第2位。肝癌恶性程度高,临床特异性低,致使多数患者确诊时大多已属晚期,失去了手术机会[1]。传统的化疗、放疗对肝癌疗效欠佳,有必要寻找新的治疗方法或药物,而靶向治疗药物正是其中的热点之一。原发性肝癌的发生发展过程是肝细胞过度增殖和细胞凋亡受抑制的过程[2],如能诱发肝癌细胞凋亡而不损伤正常细胞、组织、

PTEN缺失的前列腺癌细胞中P13K的激活机理

研究目的：根据底物及产物的不同，PI3K可分为3类。I类PI3K的产物是3，4，5-三磷酸肌醇（PIP3），该产物可与蛋白中的PH domain结合，从而将蛋白招募到细胞膜附近。I类PI3K可进一步被分为IA和IB两个亚类，IA类PI3K由调节亚单位p85和催化亚单位p110（包括p110α，β和δ）组成，其中p85亚单位的SH2domain可与Tyr磷酸化的受体或adaptor蛋白结合，该类P13K由受体Tyr蛋白激酶（RTK）所激活。IB类P13K则由调节亚单位p101和催化亚单位p110γ组成，由G蛋白偶联受体（GPCR）所激活。近期有研究表明p110β也可通过GPCR激活Pi3K信号通路。正常细胞中，Pi3K信号通路被PIP3的磷酸酶PTEN所拮抗。许多研究表明，由PTEN缺失所导致的P13K信号通路的激活在成胶质神经细胞瘤和前列腺癌（prostatecancer；VCa）中起着主要作用，并在其他一些肿瘤中起着一定作用。对于PTEN突变的鉴定以及PTEN蛋白的研究表明，在大部分转移性PCa及许多侵袭性的原发性PCa中，PTEN的活性发生丢失。

罗氏获得全球独家P13K的生物标志许可

罗氏与荷兰Qiagen公司已达成协议共同开发和测试主要癌症生物标志。罗氏从Qiagen公司获得全球独家P13K的生物标志许可（磷酸肌醇3激酶）以开发诊断检测技术。但具体的交易细节并未公开。

LY294002抑制P13K／Akt通路对人骨肉瘤类肿瘤干细胞增殖的影响

目的分离鉴定人骨肉瘤类肿瘤干细胞并探讨LY294002对其增殖的作用。方法采用无血清培养法从人骨肉瘤MG-63细胞中分离培养人骨肉瘤类肿瘤干细胞，免疫组织化学检测干细胞表面标志CD44及CD133的表达，CCK-8法观察加入不同浓度磷脂酰肌醇-3-激酶（P13K）抑制剂LY294002（5、10和20umol／L）后对其增殖的影响，并用Westernblot检测总蛋白激酶B（Akt）和磷酸化Akt（p-Akt）的变化。结果无血清培养法可用于分离人骨肉瘤类肿瘤干细胞，人骨肉瘤类肿瘤干细胞CD44及CD133呈阳性表达。LY294002可显著抑制其增殖，细胞生长抑制率平均分别为12．54％、14．92％和19．91％（P〈0．05），作用可能与通过抑制P13K进而抑制Akt的磷酸化有关。结论LY294002对人骨肉瘤类肿瘤干细胞的增殖具有抑制作用。