基于PI3K/AKT信号通路探讨PRDX4对食管鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:分析过氧化物还原酶4(peroxiredoxin4,PRDX4)对食管鳞状细胞癌(esophagealcarcinoma,ESCC)细胞增殖和凋亡能力的调控作用及相关蛋白表达。方法:结合UALCAN、GEPIA和TCGA数据库预测PRDX4在ESCC中的表达及与病理特征及预后的关系。选取2010年8月至2023年8月潍坊医学院附属医院行食管癌(esophagealcarcinoma,EC)根治术治疗的60例ESCC患者的癌组织及癌旁组织为研究样本,分析组织样本中的PRDX4的表达水平。通过实时荧光定量PCR和免疫印迹法分析ESCC细胞中PRDX4的mRNA和相关信号分子蛋白的表达水平;此外,结合CCK-8实验、流式细胞术实验分析PRDX4对细胞的增殖和凋亡活动的影响。最终将体外实验结果通过裸鼠皮下瘤模型进行验证。结果:GEPIA和UALCAN数据库的数据表明,PRDX4在ESCC中表达异常增高,且与病理分期、分级和患者的生存率等有关。对ESCC细胞系PRDX4进行敲低和过表达后,PRDX4、p-PI3K、p-AKT、Cyclin D1、Survivin蛋白表达分别表达降低和增高,细胞增殖和凋亡能力均受正相关调控;相较于sh-NC组、sh-PRDX4组裸鼠肿瘤的体积和质量降低。结论:PRDX4可基于P13K/AKT信号通路的激活对ESCC细胞的增殖和凋亡能力进行调控。

盐酸小檗碱通过P13K/AKT信号通路抑制MMP2和MMP9的表达影响膀胱癌T24细胞侵袭性

目的:探讨盐酸小檗碱(Berberine hydrochloride)对膀胱癌T24细胞侵袭能力的影响及机制.方法:采用利用CCK8法检测膀胱癌T24细胞的生存率;transwell侵袭试验检测盐酸小檗碱对T24细胞侵袭能力的影响;Western-blotting分析盐酸小檗碱对P13K/AKT通路相关因子(PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT),细胞基质金属蛋白酶(MMP2、MMP9)蛋白表达的改变.结果:CCK8显示盐酸小檗碱对T24细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性(P<0.05);与对照组比较,经盐酸小檗碱处理后膀胱癌T24细胞侵袭能力明显降低.P13K抑制剂LY294002可通过抑制P13K/AKT通路活化,抑制MMP2和MMP9的表达,相对应的盐酸小檗碱处理后膀胱癌T24细胞p-PI3K、pAKT、MMP2、MMP9蛋白表达下降(P<0.05).结论:盐酸小檗碱可有效抑制膀胱癌T24细胞侵袭能力,其机制可能是通过调控P13K/AKT通路抑制MMP2和MMP9的表达.

miR-535靶向GAB2基因通过激活PI3K/AKT信号通路促进山羊颗粒细胞增殖

【背景】MicroRNA(miRNA)是长度为18—25 nt的短RNA分子,在哺乳动物卵巢颗粒细胞调控卵泡发育过程中起着重要作用。团队前期对云上黑山羊高、低产羔数个体卵巢转录组测序结果显示,miR-535能够影响山羊产羔数,但具体调控机制尚不清楚。【目的】通过研究miR-535靶向GAB2(GRB2 associated binding protein 2)及其相关信号通路PI3K/AKT对山羊颗粒细胞增殖的影响,进一步探讨其分子生物学调控机制。【方法】在本研究中,选择具有两胎以上产羔记录的高、低产云上黑山羊各3只,同期发情处理后采集卵泡期卵巢组织,收集原代颗粒细胞。使用荧光定量PCR(reverse transcription-quantitativePCR,RT-qPCR)检测miR-535和GAB2在云上黑山羊高、低产卵巢组织中的表达量。构建GAB2的过表达/干扰载体,使用RT-qPCR、Western blot、免疫荧光、CCK8、EdU和细胞凋亡检测候选基因GAB2对山羊卵巢颗粒细胞增殖的影响。使用miRDB和miRanda软件预测miR-535和GAB2的靶向关系,构建GAB2的野生型和突变型载体,利用双荧光素酶活性检验检测miR-535和GAB2的靶向关系。构建过表达/干扰miR-535载体,探究其颗粒细胞增殖及下游基因功能的影响。【结果】RT-qPCR结果显示,GAB2在高产云上黑山羊卵巢组织中的表达量显著低于低产个体,miR-535的表达则相反(P<0.05);随后,RT-qPCR和Westernblot结果表明,在颗粒细胞中过表达GAB2后,CCND2、CDK4和BCL2的表达量显著升高(P<0.05),BAX的表达量显著降低(P<0.05),抑制其表达则与之相反;EdU和CCK8检测显示,GAB2过表达后显著促进颗粒细胞增殖(P<0.05),抑制其表达后则相反;双荧光素酶报告试验表明,miR-535抑制了GAB2基因3’UTR区域的双荧光素酶活性。RT-qPCR和Western blot结果显示,在颗粒细胞中过表达miR-535后,GAB2、CCND2、CDK4和BCL2的表达量显著降低(P<0.05),BAX的表达量显著升高(P<0.05),抑制其表达后则与之相反;EdU和CCK8检测显示,miR-535过表达后抑制颗粒细胞增殖,抑制其表达后则相反;细胞凋亡试验表明,miR-535过表达后促进颗粒细胞增殖,抑制其表达后则相反。在颗粒细胞中抑制miR-535后,发现PI3K/AKT信号通路标志因子AKT1的表达水平显著升高(P<0.05)。【结论】miR-535通过抑制GAB2的表达,抑制了山羊颗粒细胞的增殖,为进一步探究miR-535调控山羊颗粒细胞的生物学功能提供了理论依据。

P13K／Akt／mTOR信号通路参与缺氧诱导因子-1α在急性胰腺炎大鼠的表达调节

目的探讨急性胰腺炎（AP）大鼠P13K／Akt/mTOR信号通路与HIF-1α表达的关系。方法56只雄性SD大鼠随机分为7组：空白对照组（n=8）、假手术组（n=8）、AP模型组（n=8）、wortmannin预处理组（n=8）、rapamycin预处理组（n=8）、wortmannin＋rapamycin预处理组（n=8）和溶剂对照组（n=8）。用逆行胰胆管注射5％牛磺胆酸钠制备大鼠AP模型，wortmannin预处理组、rapamycin预处理组、wortmannin＋rapamycin预处理组分别于AP模型复制前30min腹腔注射wortmannin、rapamycin、wortmannin＋rapamycin DMSO／PBS溶液，溶剂对照组仅注射DMSO／PBS溶液。模型复制成功后6h处死大鼠取胰头部胰腺组织，应用Westernblot检测HIF-1α、Akt、P—Akt、p70^s6k、P—p70^s6k蛋白的表达。结果Akt、p70^s6k蛋白在胰腺组织中表达稳定，各组间差异无统计学意义（P〉0．05），HIF—1α、P—Akt、P—p70^s6k蛋白在空白对照组和假手术组中均有极少量阳性表达，两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。AP模型组HIF-1α、P—Akt、P—p70^s6k蛋白含量与空白对照组相比明显升高（P〈0．01）；wortmannin预处理组、rapamycin预处理组、wortmannin＋rapamycin预处理组中HIF-1α、P—p70^s6k蛋白表达明显高于空白对照组（P〈0．01），但较AP模型组明显降低（P〈0．01），其中HIF-1α蛋白表达在wortmannin＋rapamycin预处理组比wortmannin预处理组、rapamycin预处理组降低更明显（P〈0．05）。HIF-1α、P—Akt、P—p70“蛋白含量在溶剂对照组和AP模型组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论P13K／Akt／mTOR信号通路阻断剂wortmannin、rapamycin能够显著降低急性胰腺炎大鼠HIF-1α的表达，P13K／Akt／mTOR信号通路参与了HIF-1α的表达调控，P13K／Akt／mTOR信号通路可作为AP防治中的新靶点。

s腺苷蛋氨基酸通过抑制P13K/AKT/mTOR通路调控HepG2肝癌细胞自噬作用研究

目的探讨s腺苷蛋氨基酸通过抑制P13K/AKT/mTOR通路调控HepG2肝癌细胞自噬作用。方法选取上海生命科学研究院细胞资源中心的HepG2肝癌细胞作为研究标本,随机分为阴性对照组、阳性对照组和观察组,并比较三组间HepG2肝癌细胞的增殖、凋亡情况以及HepG2肝癌细胞自噬相关标记物记LC3B和Bclin1表达水平。结果 s腺苷蛋氨基酸作用24 h、48 h和72 h时抑制HepG2细胞增殖的IC_(50)分别为24.34μmol/L、10.26μmol/L、6.24μmol/L,与阴性对照组和阳性对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);10μmol/L、30μmol/L和100μmol/L不同浓度s腺苷蛋氨基酸作用于HepG2细胞48 h后出现的凋亡率分别为(26.28±1.34)%、(22.34±1.82)%和(11.18±0.60)%,而阴性对照组其HepG2细胞48 h后的凋亡率为(6.28±0.02)%,即观察组凋亡率随着药物浓度的增高而降低,且与阴性对照组比较,观察组各浓度s腺苷蛋氨基酸作用于HepG2细胞48h后出现的凋亡率均明显较高,即s腺苷蛋氨基酸具有诱导HepG2细胞凋亡的作用(P<0.05);经流式细胞仪结果显示,不同浓度s腺苷蛋氨基酸作用于HepG2细胞48 h后其LC3B和Bclin1水平均呈逐渐降低(P<0.05)。结论 s腺苷蛋氨基酸可通过抑制P13K/AKT/mTOR通路调控进一步增强HepG2肝癌细胞自噬作用。

P13K抑制剂对肺癌Akt2、p-Akt表达影响的试验研究

目的探讨P13K抑制剂LY294002对肺癌Akt2、p-Akt表达的影响。方法体外实验是取对数生长期的A549细胞制备细胞爬片,体内实验先用裸鼠建立移植瘤模型,通过P13K抑制剂LY294002干预后,分别用免疫组织化学法和W estern b lot法检测Akt2、p-Akt蛋白的表达。结果肺腺癌细胞株A549细胞中存在Akt2和p-Akt蛋白的高表达,应用P13K抑制剂LY294002可抑制该细胞株细胞中Akt2和p-Akt蛋白的表达,而且其表达呈浓度依赖型降低。LY294002组移植瘤组织Akt2和p-Akt蛋白的表达用免疫组织化学法检测较对照组染色变淡,用W estern b lot法检测显示其蛋白表达量低于对照组。结论LY294002可通过抑制P13K活性,抑制Akt的表达及活化,使Akt2和p-Akt蛋白的表达降低,提示抑制P13K/Akt途径可能是LY294002发挥抗癌作用的重要机制,P13K/Akt可能成为肺癌治疗的靶点。

基于网络药理学、分子对接和实验验证研究续断散加当归、骨碎补调控PI3K/AKT信号通路治疗激素性股骨头坏死的潜在机制

目的基于网络药理学、分子对接技术,结合动物实验验证探究续断散加当归、骨碎补(Teasel Root Sanjia Angelica Sinensis and Drynaria Rhizome,TASDR)对激素性股骨头坏死的治疗作用,并初步探讨其潜在作用机制。方法采用TCMSP数据库检索TASDR中各味中药的化学成分和中药靶点,利用GeneCards数据库筛选激素性股骨头坏死的作用靶点,通过String平台构建核心靶点基因的蛋白质PPI(蛋白质互相作用)网络,通过Omic-Share Tools进行GO、KEGG分析。使用AutoDock 1.5.6软件对所得靶点以及姜黄素进行分子对接验证。动物实验选取24只新西兰大白兔,分为空白组,模型组及高、低剂量药物干预组,从中选取18只建立醋酸泼尼松龙诱导的激素性股骨头坏死模型,各组采取相应的药物干预,采用HE染色、免疫组化、Western blot检测,比较TASDR在治疗激素性股骨头坏死过程中对PI3K/AKT信号通路中某些关键蛋白表达水平的影响。结果经过筛选后TASDR治疗激素性股骨头坏死潜在核心靶点38个,靶点包括TNF、IL-6、VEGFA等,此外TASDR作用靶点中包括AKT蛋白家族-AKT1。TASDR通过肿瘤信号通路、VEGF信号通路等通路,并涉及酶结合、受体结合等分子功能,参与程序性细胞凋亡、程序性细胞凋亡负调控等生物过程来调控成骨分化。分子对接显示TASDR与TNF、VEGF、AKT1等靶点基因的结合活性良好。动物实验结果表明:在模型组中,PI3K、AKT等蛋白呈现高表达,而下游蛋白FOXO1及VEGF表达量减少,经TASDR干预后PI3K及AKT等蛋白表达量下降,FOXO1及VEGF等蛋白表达升高。结论TASDR有着靶点、通路多元化的优势,可在一定程度上调控TNF、IL-6、VEGF、AKT1等靶点基因的表达,动物实验表明PI3K/AKT信号通路过度激活时,TASDR可一定程度上下调上游蛋白AKT及PI3K的表达量,且使得下游基因FOXO1及VEGF的表达量增加进而在激素性股骨头坏死的治疗中发挥作用。

P13K／Akt信号通路与肝纤维化

肝纤维化（hepatic fibrosis，HF）是肝脏对各种慢性刺激进行损伤修复反应时，以胶原为主的细胞外基质（extracellular matrix，ECM）在肝内大量沉积的病理过程。肝星状细胞（hepaticstellate cell，HSC）在肝纤维化形成过程中居核心地位。在各种因素作用下，肝细胞、Kupffer细胞、内皮细胞和星状细胞自身可产生多种细胞因子与活化产物等，这些因子可以通过各种信号通路调节HSC的功能，P13K／Akt是其中重要的一条通路。

P13K／AKT／mTOR信号通路在乳腺癌Her-2治疗耐药中的作用研究进展

Her-2靶向治疗是Her-2过表达乳腺癌治疗的重要组成部分，但Her-2靶向治疗的耐药严重影响了乳腺癌的治疗。研究证实乳腺癌Her-2靶向治疗出现耐药的过程中有P13K／AKT／mTOR信号通路的激活，因此对P13K／AKT／mTOR信号通路及以P13K／AKT／mTOR信号通路为靶点的药物研究对乳腺癌治疗具有重要意义。

调节P13K／Akt信号转导通路对脑缺血-再灌注后微血管生成机制的研究进展

磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）／丝氨酸一苏氨酸蛋白激酶（Akt）信号转导通路参与调节脑缺血-再灌注后半暗带区微血管的生成，为缺血性脑血管疾病的临床治疗提供了新的途径。本文从调控缺氧诱导因子（HIF）、细胞内皮生长因子（VEGF）等相关因子的表达，促血管内皮祖细胞（EPCs）归巢和血管内皮细胞（VEC）迁移等方面，就近年来有关P13K／Akt信号转导通路在脑缺血-再灌注微血管生成机制方面的研究进展做一综述。

乌灵胶囊对卒中后抑郁大鼠海马P13K/Akt/mTOR通路和神经递质的影响

目的探讨乌灵胶囊对卒中后抑郁大鼠海马P13K/Akt/mTOR通路和神经递质影响。方法选取健康SD大鼠48只,随机分为对照组、模型组、低剂量组和高剂量组,每组12只。采用改良Zea-Longa法复制大脑中动脉缺血大鼠模型(MCAO模型),MCAO模型复制成功后皮下注射利血平复制卒中后抑郁模型。对照组和模型组给予等剂量双蒸水灌胃;低剂量组于模型复制成功后第2天给予40 mg乌灵胶囊;高剂量组于模型复制成功后第2天给予80 mg乌灵胶囊,1次/d。各组大鼠灌胃21 d。采用Western blotting检测大鼠海马组织海马组织PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量;高效液相色谱法测定海马组织NE、DA和5-HT含量。结果模型组、低剂量组和高剂量组大鼠Zea Longa评分高于对照组(P<0.05),海马组织PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量低于对照组(P<0.05),海马组织NE、DA和5-HT含量低于对照组(P<0.05);而低剂量组和高剂量组大鼠Zea Longa评分低于模型组(P<0.05),海马组织PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量高于模型组(P<0.05),海马组织NE、DA和5-HT含量高于模型组(P<0.05)。结论乌灵胶囊可改善卒中后抑郁大鼠行为,且可调节海马P13K/Akt/mTOR通路,调节神经递质水平。

基于P13K/AKt及NF-kB信号通路探讨大鼠应激性溃疡的关键保护因子

应激性溃疡(SU)是胃肠病最具挑战性的研究热点,也是胃黏膜防御因素与侵袭因素失衡的结果,胃黏膜的信号通路存在激活后加重胃黏膜损伤及保护胃黏膜的双重通路,如何激活保护通路、抑制损伤通路进而修复胃黏膜将是SU研究的重点。笔者以胃黏膜的关键信号通路(P13K/AKt及NF-kB)作为研究靶点,对P13K/AKt及NF-kB信号通路相关的关键信息分子作一综述,旨在为SU研究提供新的研究思路。

胃肠道间质瘤P13K／Akt信号转导通路的检测及其意义

目的探讨胃肠道间质瘤P13K／Akt信号转导通路的检测及意义。方法：采用Western印迹法检测P13K、Akt和PTEN在胃肠道间质瘤患者中的表达，同时采用免疫组织化学法检测HIF-1、NOS2和VEGF在胃肠道间质瘤患者中的表达。结果：在胃肠道间质瘤患者中，P13K、Akt表达水平随着NIH分级增高而上调（P〈0．05）；PTEN表达水平随着NIH分级增高而下调（P〈0．05）。而HIF-1、NOS2和VEGF表达水平与NIH分级、黏膜受侵及侵袭转移均有密切关系（P〈0．05）：（1）I、Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级患者的HIF-1阳性率分别为43．6％和69．7％，NOS2阳性率分别为44．3％和72．5％．VEGF阳性率分别为47．5％和62．8％；（2）黏膜受侵与无受侵组患者的HIF-1阳性率分别为89．4％和52．1％，NOS2阳性率分别为87．3％和56．2％，VEGF阳性率分别为78．7％和51．8％；（3）有侵袭转移组患者相比于无侵袭转移组阳性率明显升高。此外，HIF-1与NOS2二者阳性表达之间呈正相关；HIF-1与VEGF二者阳性表达之间呈正相关：NOS2与VEGF二者阳性表达之间亦呈正相关。结论：在胃肠道间质瘤患者中。P13K／Akt信号可能通过调控PTEN从而调节HIF-1表达．HIF-1、NOS2和VEGF表达水平与NIH分级、黏膜受侵及侵袭转移均有密切关系。

miR-200b-5p靶向ATAD2调控P13K/AKT信号通路参与宫颈癌血管生成的作用机制

目的探究miR-200b-5p靶向调控ATAD2基因介导P13K/AKT信号通路对宫颈癌血管生成的作用机制。方法采集2016年3月至2018年3月间日照市妇幼保健院诊治的90例宫颈癌手术切除患者的术中标本作为研究对象。将采集到的标本行免疫组化检测,qRT-PCR检测组织miR-200b-5p、ATAD2表达,Western blot检测组织中ATAD2蛋白表达。细胞转染并分组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-200b-5p、ATAD2、PI3K、AKT mRNA表达水平;Western blot检测ATAD2、PI3K、AKT、VEGF蛋白表达水平。体外管腔形成实验比较各组管腔数目。结果宫颈癌组织中miR-200b-5pmRNA低表达,ATAD2 mRNA表达水平及蛋白表达均呈高表达,差异均具有统计学意义(均P<0.05);并伴随高VEGF阳性表达率和MVD。细胞转染实验提示与Blank组和NC组相比,miR-200b-5p mimic组miR-200b-5p表达量显著升高,ATAD2、PI3K、AKT表达显著下降,差异均具有统计学意义(均P<0.05);miR-200b-5p mimic组和ATAD2siRNA组VEGF、ATAD2、PI3K、AKT蛋白表达水平均显著下降,差异均具有统计学意义(均P<0.05);且miR-200b-5p mimic+ATAD2siRNA组表达趋势相比miR-200b-5p mimic组更显著,差异均具有统计学意义(均P<0.05);而miR-200b-5p inhibitor组差异与之相反,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。体外管腔形成实验提示管腔数目变化miR-200b-5p inhibitor组显著上升,miR-200b-5p mimic+ATAD2siRNA组显著下降,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论促进miR-200b-5p表达,抑制ATAD2基因,抑制PI3K、AKT表达,从而抑制P13K/AKT信号通路,最终实现对人宫颈癌细胞血管生成的抑制。

原花青素B2通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路减轻氯氰菊酯所致神经元损伤

目的探讨原花青素B2(PCB2)是否通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路保护氯氰菊酯(CYP)导致的神经元氧化损伤。方法原代培养C57BL/6小鼠大脑皮层神经元,将细胞随机分成5组:正常对照组;PCB2处理组(将5μg/mL的PCB2与细胞共培养24 h);CYP暴露组(将50μmol/L的CYP与细胞共培养24 h);PCB2预处理组(将5μg/mL的PCB2与细胞预处理30 min后加入CYP 50μmol/L共培养24 h);LY294002处理组(先将20μmol/L的LY294002与细胞预处理30 min,然后加入PCB2预处理30 min,后与CYP共培养24 h)。采用CCK-8分析各组细胞活性,采用荧光探针DCFH-DA及流式细胞术检测细胞内ROS水平,通过Hoechst 33342观察细胞核形态变化,采用JC-1检测线粒体膜电位异常,利用Western blot检测Nrf2、HO-1、p-Akt、Akt蛋白表达。结果CYP暴露降低细胞活性(P<0.001),引起线粒体膜电位下降、促使细胞核出现固缩、浓染等凋亡特征,导致ROS产生异常。PCB2预处理提高细胞存活率(P=0.006),改善细胞核形态异常,逆转CYP导致的线粒体膜电位下降,减弱细胞内ROS产生。CYP暴露引起Nrf2核易位,Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白表达上调(P<0.001)。PCB2预处理调节Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白过度表达。抑制P13K/Akt信号通路消除了PCB2对CYP诱导损伤的保护作用(P<0.05)。结论PCB2通过激活P13K/Akt信号通路,调控Nrf2/ARE通路,减轻CYP所致小鼠大脑皮层神经元氧化损伤。

盐酸坦索罗辛对前列腺增生大鼠P13K/Akt信号通路的影响

目的:探讨盐酸坦索罗辛对前列腺增生(BPH)大鼠P13K/Akt信号通路的影响。方法:将健康的雄性SD大鼠60只随机分为健康对照组、空白模型组和盐酸坦索罗辛高、中、低剂量组,每组12只。除健康对照组外,其余各组大鼠均采用去势术联合丙酸睾酮注射建立良性BPH模型。建模成功后,盐酸坦索罗辛高、中、低剂量组分别灌胃1 mL剂量为0.1 mg/mL、0.2 mg/mL和0.4 mg/mL的盐酸坦索罗辛配制溶液,健康对照组和空白模型组灌胃等体积的蒸馏水。治疗28 d后计算大鼠前列腺指数,苏木精-伊红(HE)染色观察前列腺组织病理改变,免疫组化超敏感SP法检测Ki-67蛋白的表达情况,利用Ki-67蛋白表达计算出细胞增殖指数。Western blotting检测前列腺PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测PI3K、Akt和mTOR蛋白mRNA相对表达量。结果:HE染色结果显示,健康对照组的大鼠前列腺结构完整,腺体和腺腔大小正常,腺上皮细胞排列整齐;建模各组大鼠前列腺腺体增生明显,腺腔缩小,腺上皮细胞皱褶增多,盐酸坦索罗辛高、中、低剂量组大鼠的前列腺腺体增生较空白模型组大鼠明显减少,盐酸坦索罗辛中剂量组改善程度明显优于盐酸坦索罗辛低剂量组、高剂量组。各组大鼠前列腺指数、P13K/Akt信号通路相关蛋白表达和细胞增殖指数比较,均具有显著差异(均P<0.01),盐酸坦索罗辛高、中、低剂量组比健康对照组高(P<0.05),且比空白模型组低(P<0.05),盐酸坦索罗辛中剂量组表现更明显。p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量与前列腺指数呈正相关关系(P<0.05)。结论:盐酸坦索罗辛能抑制前列腺细胞增殖,有效改善BPH模型大鼠前列腺组织增生,其可能作用机制与抑制PI3K/Akt信号通路表达相关。

PTEN和mTOR蛋白在IDH1基因分型胶质母细胞瘤及P13K/Akt/mTOR信号通路中的表达及其相关性

目的研究P13K/Akt/mTOR信号通路中PTEN和mTOR蛋白在IDH1基因分型-突变型与野生型胶质母细胞瘤中的表达及意义。方法采用免疫组化方法检测胶质母细胞瘤手术后组织标本共52例(其中IDH1突变型胶质母细胞瘤10例,IDH1野生型胶质母细胞瘤42例),检测PTEN和mTOR蛋白在这两种不同基因分型胶质母细胞瘤中的表达情况及相关性。结果PTEN蛋白在IDH1突变型与野生型胶质母细胞瘤的表达率分别为20.00%(2/10)和73.81%(31/42),mTOR蛋白的表达率分别为70.00%(7/10)及35.71%(15/42),PTEN和mTOR蛋白在IDH1两种基因分型的胶质母细胞瘤的表达差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。PTEN和mTOR的表达呈负相关关系(r=-0.724,P<0.01)。结论 PI3K/AKT/mTOR信号转导通路中两个位点调节因子PTEN及mTOR在IDH1突变型与野生型GBM中分别表达降低及增高,且两种蛋白表达呈负相关的关系,提示PTEN和mTOR在IDH1突变型与野生型胶质母细胞瘤的分子通路中扮演着重要的调控作用。

PI3K/Akt信号途径抑制烧伤后大鼠缺血缺氧心肌细胞凋亡

目的探讨PI3K/Akt信号途径在烧伤后大鼠缺血缺氧心肌细胞凋亡中的作用及机制。方法首先建立模拟烧伤的动物模型,通过Western blot观察PI3K/Akt信号途径的活化规律,TUNEL实验观察烧伤大鼠心肌凋亡。然后建立离体培养的缺血缺氧心肌细胞模型,并分为对照组、单纯缺血缺氧组、LY294002处理组或IGF-1处理组,应用ELISA观察缺血缺氧心肌细胞凋亡。并通过DEVD荧光检测caspase-3酶活性,RT-PCR检测p53、Bax的转录活性。结果烧伤后大鼠心肌组织内PI3K和pAkt表达逐渐增加,伤后3h达高峰;烧伤3h后,大鼠心肌细胞凋亡率显著增加;应用LY294002特异性抑制PI3K/Akt通路后,大鼠心肌细胞凋亡率较对照组增加更为显著(P<0.05)。缺血缺氧导致体外培养心肌细胞凋亡增加,caspase-3活性逐渐增强,p53、Bax mRNA表达量逐渐升高;与单纯缺血缺氧组相比,应用LY294002阻断PI3K/Akt途径活化后,心肌细胞凋亡数量增加更显著(P<0.05),caspase-3活性增高更为明显(P<0.05),p53、Bax mRNA表达量均显著升高(P<0.05);用IGF-1预先激活PI3K/Akt途径后,与单纯缺血缺氧组比较,心肌细胞caspase-3活性明显降低(P<0.05)。结论PI3K/Akt信号途径在缺血缺氧心肌细胞中具有抗凋亡作用,该作用与PI3K/Akt调控促凋亡基因p53、Bax的表达,抑制caspase-3凋亡反应有关,并为心肌缺血缺氧损害的临床防治提供新思路及实验依据。

PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌的关系

背景与目的PI3K/Akt/mTOR通路失调对肺癌形成可能具有重要作用,本研究通过分析非小细胞肺癌组织中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平,探讨PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌之间的关系。方法外科手术中获取40例非小细胞肺癌组织及30例癌旁组织,应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测癌及癌旁组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平。结果非小细胞肺癌组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平分别为(40±59)%、(61±23)%、(77±32)%、(43±21)%,癌旁组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平分别为(16±40)%、(23±16)%、(10±12)%、(20±17)%,非小细胞肺癌组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平均高于癌旁组织(P<0.01)。联合应用4个基因表达作为NSCLC诊断标志,诊断的敏感性达到87.5%,特异性为90%。结论非小细胞肺癌中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径相关基因表达水平明显上调,说明该通路在非小细胞肺癌中被激活。联合检测VEGF、PI3K、Akt、mTOR的表达水平改变可能作为NSCLC的诊断标志。

脑络欣通及其拆方对脑缺血再灌注大鼠NGF、PI3K、Akt以及Bad蛋白表达的影响

目的观察局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠缺血半暗带NGF、PI3K、Akt以及Bad蛋白的动态表达及脑络欣通(黄芪、川芎、三七、蜈蚣等)对其影响。方法以线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉,复制局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h再灌注3、7、14 d,用免疫组化染色SABC法分别检测缺血半暗带NGF、PI3K、Akt、Bad的表达。结果与模型组相比,脑络欣通组在脑缺血再灌注3、7、14 d后,能够明显增加PI3K、Akt的表达(P<0.01或P<0.001);在再灌注7、14 d,脑络欣通组NGF蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01);再灌注14 d,脑络欣通组Bad蛋白表达显著减少(P<0.05)。结论脑络欣通能够保护脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织,其作用机制可能与促进NGF表达,激活PI3K/Akt通路并降低Bad蛋白表达有关。