喉癌组织中p14ARF蛋白表达及临床意义

目的研究细胞周期抑制蛋白p14ARF在喉癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学S-P方法检测68例喉癌组织标本中p14ARF蛋白的表达,同时以20例喉部正常粘膜组织作对照。结果正常喉部粘膜组织中p14ARF的表达率为90%,喉癌组织中p14ARF的表达率为40.18%(P<0.01);在喉癌组织中其表达与喉癌的病理分级密切相关,中、低分化的喉癌组织其p14ARF表达明显低于高分化喉癌组织,其表达随T分期的增加而降低。结论喉癌组织中p14ARF蛋白表达具有明显的组织病理学特征,抑癌基因p14ARF在喉癌的进展中可能具有重要作用。

p14ARF蛋白在人脑胶质瘤中的缺失及其临床意义

目的 研究人脑胶质瘤中p14ARF蛋白的缺失情况及其与临床病理的关系。方法 采用链霉菌素 生物素 (SP)免疫组织化学法对 5 5例脑胶质瘤标本进行分析。结果 在 5 5例人脑胶质瘤标本中p14ARF缺失率为 5 0 .9%。I级 II级病例p14ARF缺失率为 32 % ,III级 IV级病例p14ARF缺失率为 6 6 .7% (P <0 .0 5 )。结论 p14ARF蛋白缺失与脑胶质瘤的发生发展有一定的相关性 ,提示p14ARF基因的失活可能是脑胶质瘤恶性演变的重要因素。

p14ARF蛋白与脑胶质瘤发生发展的相关性研究

目的探讨p14ARF蛋白与脑胶质瘤发生、发展及细胞生物学特性的关系,试图为脑胶质瘤发病机制的阐明及基因治疗提供新的理论依据和思路。方法选取68例不同级别的脑胶质瘤标本,用免疫组织化学法检测p14ARF蛋白表达的改变。结果p14ARF蛋白缺失率在Ⅰ～Ⅱ级为10.0%,Ⅲ级为25.0%,Ⅳ级为43.3%,p14ARF蛋白缺失率随脑胶质瘤恶性程度增高呈上升趋势(P<0.05)。结论p14ARF蛋白异常可导致细胞周期调控失常及细胞增殖活性升高,促进脑胶质瘤的恶性演进。

抑癌基因p14ARF与p32在喉鳞状细胞癌中的表达及其意义

目的观察p14ARF与p32在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)组织中的表达情况及其与临床病理特征的关系,探讨其对LSCC发生发展过程中的影响。方法分别用荧光定量PCR和免疫组化法检测了50例LSCC组织及对应的癌旁组织中p14ARF与p32的mRNA和蛋白质的表达。采用SPSS 17.0软件进行统计分析。结果 p14ARF mRNA在LSCC组织中的表达水平与肿瘤临床分期相关(χ2=20.704,P<0.05),并呈现早期相对上升,晚期相对下降的趋势。p32 mRNA在LSCC组织与癌旁组织中的表达无明显的相关性(t=-0.684,P>0.05)。p14ARF蛋白定位肿瘤细胞的细胞质和细胞核,p32蛋白主要定位于细胞浆,两者在蛋白水平上的表达结果与PCR基本一致。p14ARF与p32在LSCC组织中的表达无关联性(r=0.157,P>0.05)。结论 p14ARF在LSCC中的异常表达提示其可能参与了肿瘤的早期发生发展过程,并有可能成为LSCC早期诊断的一个分子标志物,而p32可能在LSCC的发生发展过程中并未起到关键的作用。

p14ARF、MDM2和p53蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达及其相互关系

目的探讨p14ARF、MDM2和p53蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达及其相互关系,为阐明子宫内膜样腺癌的发病机制、临床病理诊断和基因治疗提供理论依据和实验基础。方法采用免疫组化S-P法检测15例正常子宫内膜组织、18例子宫内膜增生组织及43例子宫内膜样腺癌组织标本中p14ARF、MDM2和p53蛋白的表达情况。结果 p14ARF蛋白在子宫内膜样腺癌组织中的表达显著低于子宫内膜增生和正常子宫内膜(P<0.05),MDM2蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达有高于子宫内膜增生和正常子宫内膜(P<0.05),p53蛋白在子宫内膜样腺癌组织中的表达显著高于子宫内膜增生和正常子宫内膜(P<0.05)。在子宫内膜样腺癌中,p14ARF与MDM2蛋白的表达无相关性(P>0.05),而p14ARF与p53蛋白的表达呈负相关(r=-0.414,P=0.018),MDM2与p53蛋白的表达呈正相关(r=0.426,P=0.016)。结论 p14ARF蛋白失表达及MDM2和p53蛋白过表达在子宫内膜样腺癌的发生、发展中发挥着一定的作用。p14ARF和p53蛋白表达负相关,MDM2与p53蛋白表达正相关,提示三者可能在同一"p14ARF-MDM2-p53"通路中发挥作用,三者的联合检测可能有助于子宫内膜样腺癌的临床病理诊断,并为基因治疗提供可能的参考指标。

P14^(ARF)、P16^(INK4a)基因表达与高危型HPV感染的关系

目的探讨P14ARF、P16INK4a的基因表达与高危型人乳头瘤病毒DNA(HPV DNA)感染的关系。方法采用免疫组化EnVision法,对130例宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变60例、20例正常宫颈组织进行P16INK4a、P14ARF蛋白基因检测,并采用原位杂交法检测130例宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变60例、20例正常宫颈组织中的HPV DNA。结果宫颈鳞癌组中P16INK4a、P14ARF蛋白表达率分别为100.0%(130/130)和96.9%(126/130);在60例宫颈上皮内瘤变组中其表达率分别为85.0%(51/60)、81.7%(49/60);在20例正常宫颈组中其表达率分别为10.0%(2/20)、15.0%(3/20),宫颈鳞癌组显著高于正常对照组(P<0.01);正常宫颈组与宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌组P16INK4a和P14ARF的表达呈显著差异(P<0.05)。HPV16/18在130例宫颈鳞癌中86例(66.2%)表达阳性;在宫颈上皮内瘤变中39例(65.0%)表达阳性;P16INK4a、P14ARF阳性率HPV DNA阳性宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变组与HPV DNA阴性宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变组比较无显著差异(P>0.05)。结论P16INK4a、P14ARF蛋白在宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌组织中呈高表达,有较高的特异性和敏感性,可作为宫颈癌前病变及宫颈癌的诊断指标。

胃癌组织Pokemon和p14^(ARF)表达率及其在临床生物学行为中的意义

目的探讨胃癌组织中Pokemon、p14^(ARF)蛋白表达率及其与临床生物学行为的关系。方法取手术切除胃癌组织标本50例,正常胃黏膜组织标本20例,用免疫组织化学方法检测胃癌组织、正常胃黏膜组织Pokemon和p14^(ARF)蛋白的表达,并且分析二者表达情况与胃癌患者性别、年龄、肿瘤部位、瘤体大小、大体分型、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期等临床生物学特征的关系。结果①在胃癌组织和正常胃黏膜组织中Pokemon和p14^(ARF)均表达于细胞核,在阳性染色的细胞核中呈现棕黄色颗粒。Pokemon蛋白表达率在胃癌组织中为78%,在正常胃黏膜组织中为45%,二者差异有统计学意义(P<0.05)。p14^(ARF)蛋白表达率在胃癌组织中为42%,在正常胃黏膜组织为90%,二者差异有统计学意义(P<0.05)。②胃癌组织中Pokemon蛋白表达率在有淋巴结转移组为87.5%,在无淋巴结转移组为40%,二者差异有统计学意义(P<0.05)。随着肿瘤增大、浸润程度加深及临床分期升高,胃癌组织中Pokemon蛋白表达有升高趋势。③胃癌组织中p14^(ARF)蛋白表达率在有淋巴结转移组为37.5%,在无淋巴结转移组为80%,二者差异有统计学意义(P<0.05)。随着肿瘤分化程度的降低、浸润程度的加深及临床分期的升高,胃癌组织中p14^(ARF)蛋白表达有降低的趋势。④胃癌组织中,Pokemon与p14^(ARF)蛋白表达呈现负相关(r=-0.280,P=0.049)。结论胃癌组织Pokemon高表达和p14^(ARF)低表达可反映胃癌的发生发展、侵袭及转移等临床生物学行为的程度。

Pokemon和P14^(ARF)蛋白在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Pokemon和P14ARF蛋白在人肝细胞癌组织中的表达及相关性,分析其与肝细胞癌转移复发的关系。方法应用免疫组织化学法检测60例肝细胞癌组织和癌旁组织中Pokemon和P14ARF蛋白的表达情况。结果Pokemon及P14ARF在60例肝细胞癌及癌旁组织中的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。Pokemon的表达与临床分期、肿瘤直径、肿瘤分化程度密切相关(P<0.05);P14ARF的表达与肿瘤分化程度密切相关(P<0.05)。Pokemon的表达和P14ARF的表达呈显著负相关(γ=-0.268,P=0.038)。结论 Pokemon和P14ARF蛋白在肝细胞癌的发生及发展中起着重要作用。

中国北方人群p14^(ARF)启动子甲基化与原发性肝癌的临床相关性

目的通过对中国北方人群原发性肝癌p14ARF启动子甲基化的分析,探讨p14ARF基因启动子甲基化与原发性肝癌的临床相关性。方法通过甲基化特异性PCR(MSP)方法检测111例原发性肝癌组织和22例癌旁组织中p14ARF基因启动子甲基化状况,然后与肿瘤种类、病因、病理以及肿瘤分期等临床数据进行关联。结果肝细胞癌组织及癌旁组织中p14ARF基因启动子甲基化频率分别为33.7%(29/86)和5.0%(1/20),二者差异有统计学意义(P=0.010)。肝细胞癌p14ARF基因的启动子甲基化频率在不同肿瘤分期显著相关(P=0.027),而与肿瘤细胞分化程度以及是否感染HBV无关,肝内胆管细胞癌p14ARF基因启动子甲基化频率在不同肿瘤分期、有无HBV感染以及不同肿瘤细胞分化程度之间的差异均无统计学意义。结论肝细胞癌中p14ARF基因启动子甲基化可能是p14ARF基因失活并影响TP53功能的方式之一,p14ARF基因启动子甲基化可能与肝细胞癌发生发展相关。

胰腺癌PC-3细胞株外源性p14ARF抑癌基因表达与内源性p53表达水平的关系

目的 探讨外源性 p1 4ARF基因表达于胰腺癌PC 3细胞后与另一重要细胞周期调控蛋白 p53表达水平的相互关系。 方法 将含人 p1 4ARFcDNA的重组质粒通过脂质体介导转染入胰腺癌PC 3细胞中 ,并筛选出阳性克隆 ,逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、Westernblot法检测PC 3细胞转染前后p1 4ARF的mRNA及蛋白的表达 ,同时用Westernblot分析其内源性 p53蛋白表达水平的变化。噻唑蓝 (MTT)比色法测定PC 3细胞在转染前、后的生长曲线变化。结果 胰腺癌PC 3细胞中p1 4ARF基因缺失。外源性 p1 4ARF基因成功转染入PC 3细胞并获得 1 4× 1 0 3大小的p1 4蛋白表达 ,且内源性 p53蛋白表达水平在转染后明显增高。PC 3细胞在导入 p1 4ARF基因后第 1天及第 5天的生长抑制率分别为 2 2 %及 2 6 % ,两者差异有显著性 (P <0 .0 5)。结论 p1 4ARF基因可上调胰腺癌PC 3细胞的内源性p53蛋白表达水平 ,从而发挥其细胞周期阻滞功能。

燃煤污染型地方性砷中毒患者皮肤组织P14ARF和MDM2及突变型P53蛋白表达

目的 观察燃煤污染型地方性砷中毒患者皮肤组织突变型P53（ P53mt）蛋白及其下游基因P14ARG、MDM2蛋白的表达水平,为揭示砷致皮肤损害的分子机制提供依据.方法 以自愿手术治疗的60例燃煤污染型地方性砷中毒患者作为观察对象,依据皮肤病理学诊断分为一般皮肤病变组（35例）、癌前病变组（19例）、癌变组（6例）；以某医院经病理学诊断无异常的非肿瘤手术患者的9例皮肤组织为对照,采用免疫组织化学EnVision二步法检测皮肤组织中P14ARF、MDM2和P53mt蛋白的表达情况.结果 4组皮肤组织P14ARF蛋白表达阳性率比较,差异有统计学意义（x2=9.39,P＜0.05）；其中癌前病变组、癌变组[46.1％（6/19）、33.3％（2/6）]明显低于对照组[88.9％（8/9）,P均＜0.05]；且随着皮肤病变程度的加重,P14ARF蛋白表达呈降低趋势（P＜0.05）.4组皮肤组织MDM2、P53mt蛋白表达阳性率比较,差异有统计学意义（x2值分别为6.21、20.64,P均＜ 0.05）；其中一般病变组、癌前病变组和癌变组[54.2％（ 19/35）、63.2％（10/19）、66.7％（4/6）和25.7％（9/35）、73.7％（14/19）、83.3％（5/6）]明显高于对照组（0、0,P均＜0.05）；随着皮肤病变程度的加重,MDM2和P53mt蛋白表达呈增强趋势（P均＜0.05）.结论 燃煤污染型地方性砷中毒患者皮肤组织P53mt蛋白表达阳性率升高,且P14ARF和MDM2蛋白表达异常,后者所致的细胞周期和凋亡调控失常可能是砷致皮肤病损发生发展的原因之一.

p14ARF经p53凋亡通路增强骨肉瘤U2OS细胞对顺铂的敏感性

目的 探讨抑癌基因p14ARF增强骨肉瘤U2OS细胞对顺铂的敏感性及其作用机制.方法 使用顺铂处理不表达p14ARF的U2OS细胞和稳定表达p14ARF的U2OS-ARF细胞,采用噻唑蓝（MTT）比色法测定细胞毒作用和半数抑制浓度值;流式细胞术和Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡;免疫印迹法检测p53以及其下游基因Bax、p21、Mdm2、Fas的表达;比色法检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶（caspase）-3、caspase-8、caspase-9蛋白酶的活性.结果 顺铂处理72 h后,U2OS、U2OS-vec和U2OS-ARF组的细胞活力分别为（84.8％±4.4％）、（86.9％±5.0％）和（66.7％±4.6％）,相比U2OS-ARF的细胞活力明显降低,U2OS、U2OS-vec和U2OS-ARF组的IC50分别为（15.8±0.9）、（16.3±0.6）μmol/L和（8.9±0.8）μmol/L,相比U2OS-ARF的IC50明显降低（P＜0.05）.流式细胞术和形态学鉴定表明相对于U2OS和U2OS-vec细胞,U2OS-ARF细胞表现更为明显的凋亡比例和凋亡特异性形态学变化.在U2OS-ARF细胞中,p53、Mdm2和p21的基础表达水平稍稍高于U2OS-vec对照细胞,顺铂处理在U2OS-vec和U2OS-ARF细胞均明显激活p53、Mdm2和p21的表达,但在U2OS-ARF细胞中更加明显;另外,顺铂处理对U2OS-vec细胞中Bax和Fas的表达没有影响,却在U2OS-ARF细胞中明显增强了Bax的表达,但对Fas无影响.p14ARF还增强顺铂对caspase-9和caspase-3的活化.结论 p14ARF通过p53凋亡通路增强骨肉瘤U2OS细胞对顺铂的敏感性,并与内源性线粒体通路有关.

p14ARF与皮肤恶性肿瘤的关系

p14ARF是近年来发现的抑癌基因之一，其通过p53、Rb及促分裂原活化蛋白激酶这3条相互独立的通道在细胞周期的调控中发挥作用。研究表明，p14ARF在包括皮肤恶性肿瘤在内的多种恶性肿瘤中的表达均有显著下调。p14ARF的功能失活的机制主要包括基因的甲基化、基因缺失和突变，其中以甲基化最为常见。目前科学家将p14ARF作为治疗恶性肿瘤的靶向之一进行了有益的探索，并取得了初步成果。

HPV阴性的宫颈癌和癌前病变中p14ARF蛋白表达及其临床意义

目的:通过检测人乳头状瘤病毒(HPV)感染阴性的宫颈癌和宫颈上皮内瘤变中p14ARF和基质金属蛋白酶MMPs及其抑制物TIMPs的表达,探讨其与宫颈癌早期诊断、侵袭转移的关系。方法:以PCR方法筛查HPV阴性的慢性宫颈炎30例、宫颈上皮内瘤变(CIN)35例及宫颈浸润癌35例作为研究对象,采用SP染色法检测p14ARF蛋白在其中的表达,分析p14ARF蛋白在宫颈癌组织中的表达、临床病理特征及其与浸润深度、淋巴结转移的相关性。结果:p14ARF蛋白特异性表达在HPV阴性的CIN病变、宫颈癌细胞核及胞质中,在正常鳞状上皮和腺上皮中无任何阳性表达信号,且与临床分期无关,与细胞分化程度、淋巴结转移有关。结论:p14ARF蛋白检测可作为HPV阴性宫颈癌的早期诊断指标,并可作为预测宫颈癌侵袭转移潜能和临床预后的指标。

新疆地区维汉妇女宫颈病变组织中Pokemon与P14ARF表达情况的研究

目的探讨新疆地区维汉妇女宫颈疾病及其癌变组织中Pokmon蛋白与P14ARF蛋白的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测240例新疆地区维汉族妇女宫颈病变中Pokmon蛋白和P14ARF蛋白的表达。维汉妇女各120例,依据病理诊断结果分为4组,非瘤变组(正常及慢性炎症组)30例、CINⅠ组30例、CINⅡ—Ⅲ组30例、宫颈鳞癌组30例。结果宫颈病变组织中Pokemon与P14ARF蛋白在维汉族之间的表达差异无显著性(P>0.05);随着宫颈病变程度的加重,不同组别之间Pokemon与P14ARF蛋白的表达有显著差异(P<0.05)。结论 Pokemon蛋白与P14ARF蛋白表达与宫颈疾病及其癌变的发生密切相关,呈正相关,Pokemon蛋白与P14ARF蛋白在新疆地区维汉妇女宫颈病变及其癌变中表达不存在民族差异。

胰腺癌p53上下游基因mdm2、p21^(WAF/CIP1)以及p14^(ARF)蛋白的表达及相互关系

目的 探讨p14ARF、p53、mdm2及p21WAF/CIP1蛋白在胰腺癌组织中的表达、相互关系及意义。方法 选取167例胰腺癌、101例癌旁与13例良性病变组织构建组织芯片(又称组织微阵列),应用免疫组织化学EnVision二步法检测这4种蛋白在胰腺良恶性病变中的表达。结果 p14ARF、p53、mdm12及p21WAF/CIP1在胰腺癌中表达的阳性率分别为35.3％(59/167)、57.5％(96/167)、64.1％(107/167)和39.5％(66/167)。同癌旁组织相比,p53和mdm2表达明显升高(P<0.01),而p14ARF和p21WAF/CIP1的表达明显降低(P<0.05)。p21WAF/CIP1的阳性表达与年龄、神经受累显著相关(P<0.05);p53的阳性表达与肿瘤的分化、淋巴结转移和神经受累均显著相关(P<0.05);mdm2的阳性表达与肿瘤的分化显著相关(P<0.05);p14ARF与年龄和浸润转移显著相关(P<0.05)。四者阳性表达两两之间统计学上具有关联性(P<0.05)。结论 p53和mdm2的过表达以及p14ARF和p21WAF/CIP1的缺失表达可能会导致胰腺癌的形成和进展;4种蛋白主要以p14ARF-p53-mdm2-p21WAF/CIP1通路的方式作用于细胞的转化和肿瘤的形成;联合检测p53和mdm2的表达可用于评定胰腺癌的恶性程度。

非小细胞肺癌Bmi-1、p16^(INK4a)、p14^(ARF)蛋白表达关系研究

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)Bmi-1、p16INK4a、p14ARF蛋白表达之间的关系。方法首先采用免疫组织化学S-P方法对123例NSCLC癌组织中p16INK4a和p14ARF蛋白的表达进行检测。然后,以p16INK4a和p14ARF蛋白表达共阴性和共阳性的NSCLC患者癌组织样本为研究对象,分别称为(p16+p14)阴性组和(p16+p14)阳性组,再采用免疫组织化学S-P方法对这些病例癌组织中Bmi-1蛋白的表达进行检测。结果123例NSCLC标本中p16INK4a、p14ARF表达阴性率分别为40.65%(50/123)和72.36%(89/123),两种蛋白表达阴性率差异有非常显著的意义(P<0.01);其中有39例p16INK4a、p14ARF蛋白表达共阴性,表达共阴性率高达31.71%(39/123);还有24例p16INK4a、p14ARF蛋白表达共阳性,表达共阳性率为19.51%(24/123)。(p16+p14)阴性组中有28例显示强阳性或阳性表达Bmi-1蛋白,阳性率达71.79%(28/39),其余11例显示弱阳性或阴性表达Bmi-1蛋白,仅占28.21%(11/39),两者差异有显著意义(P<0.05);(p16+p14)阳性组中有5例显示强阳性或阳性表达Bmi-1蛋白,阳性率仅为20.83%,其余19例显示弱阳性或阴性表达Bmi-1蛋白,占79.17%,两者差异有显著意义(P<0.05)。相关分析结果显示,本组NSCLC癌组织Bmi-1与p16INK4a、p14ARF蛋白表达相互之间有显著相关性(P<0.05)。结论NSCLC癌组织中p16INK4a、p14ARF蛋白表达有较高的阴性率,其原因与Bmi-1蛋白的过表达密切相关。

维吾尔族妇女宫颈病变组织p14^(ARF)表达与HPV基因分型的相关性研究

目的:探讨新疆地区维吾尔族妇女不同程度宫颈病变组织p14ARF蛋白的表达及HPV感染情况。方法:运用免疫组织化学染色SP法检测120例维吾尔族妇女宫颈病变标本中p14ARF的表达情况,运用反向点杂交技术检测HPV分型情况。结果:随着宫颈病变程度的增加,p14ARF的表达出现升高趋势;慢性宫颈炎组与CINⅠ组、CINⅡ-Ⅲ组与SCC组比较,差异无统计学意义(P>0.05),其余各组两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同级别宫颈病变组织HPV感染率差异明显(P<0.05),p14ARF蛋白在HPV感染组织中的表达明显高于未检测出HPV感染的组织,二者呈正相关(r=0.453,P<0.01)。结论:维吾尔族妇女宫颈病变及癌变组织p14ARF阳性表达随着病变级别的增加而增加,异常表达可能与感染HPV有关。