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Down-regulation of Halr1 during induced differentiation of embryonal carcinoma P19 cells
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作者 ZAHRA HOSSEININIA SARA SOLTANIAN +1 位作者 NASER MAHDAVI-SHAHRI HESAM DEHGHANI 《BIOCELL》 SCIE 2019年第3期145-154,共10页
Maintenance of pluripotency depends to diverse regulatory factors.Studies in embryonic stem cells(ESCs)have indicated that large intergenic non-coding RNAs(lincRNAs)are involved in the regulatory network of pluripoten... Maintenance of pluripotency depends to diverse regulatory factors.Studies in embryonic stem cells(ESCs)have indicated that large intergenic non-coding RNAs(lincRNAs)are involved in the regulatory network of pluripotency.However,the presence and function of pluripotency-associated lincRNAs in cancer cells with pluripotency features are unknown.In this study,we used embryonal carcinoma(EC)P19 cell lines to investigate the expression level of Halr1 in pluripotency and retinoic acid(RA)-induced differentiated states.Down-regulation of pluripotency associated factors such as OCT4,NANOG,SSEA1 and alkaline phosphatase at transcript and protein levels were used to confirm the differentiated status of P19 cells.Quantitative measurement of Halr1 transcript levels revealed a 79% decrease during RA-induced differentiation of P19 cells.These results indicate that upon exiting the pluripotency state the expression level of Halr1 similar to core pluripotency factors is remarkably reduced. 展开更多
关键词 DIFFERENTIATION Halr1 lincRNA PLURIPOTENCY p19 cell Retinoic acid
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Changes of the expression of CCNL2 gene during the differentiation of P19 cells to cardiac myocytes
2
作者 Zhiwen Jiang Lili Zhuo Jie Gong Rong Yang Yanhui Sheng Xiangqing Kong Kejiang Cao 《Journal of Nanjing Medical University》 2009年第4期275-278,共4页
Objective: To investigate the changes of cyclin L2(CCNL2) gene mRNA and protein during the differentiation of P19 cells to cardiac myocytes, and to explore the relationship between CCNL2 gene and the differentiatio... Objective: To investigate the changes of cyclin L2(CCNL2) gene mRNA and protein during the differentiation of P19 cells to cardiac myocytes, and to explore the relationship between CCNL2 gene and the differentiation of cardiac myocytes. Methods: P19 cells were cultured with 0.9% DMSO for 18 days. Western blots of cardiac troponin I (cTnI) were used to identify cell differentiation. Total RNA was extracted from P19 cells during the process of differentiation at various time points:pre-differentiation(Day 0), and Day 1 to Day 18. The expression levels of CCNL2 gene mRNA and protein were evaluated by RT-PCR and Western blot, respectively. Results: After being induced to differentiate by DMSO for 4 days in suspension, spontaneously and rhythmically beating ceils were seen at 8 day, which were cTnI-positive. In P19 cells, both the expression level of CCNL2 gene mRNA and protein were gradually down-regulated. Conclusion: Both the expression of CCNL2 gene and protein were down-regulated during the process of the differentiation of P19 cells into cardiac myocytes, suggesting a possible role for this cyclin in their differentiation. 展开更多
关键词 cyclin L2 protein gene p19 cells cell differentiation
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miR-149-3p在先天性心脏病胎鼠心脏组织中的表达及其对P19细胞分化的影响
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作者 胡丹慧 罗慧臣 刘海英 《天津医药》 CAS 北大核心 2023年第1期45-49,共5页
目的 探讨miR-149-3p在先天性心脏病(CHD)胎鼠心脏组织中的表达及其对小鼠畸胎瘤P19细胞分化的影响。方法 建立CHD室间隔缺损胎鼠模型,于妊娠第19天,HE染色观察心脏组织病理学变化,实时荧光定量PCR(qPCR)检测心脏组织中miR-149-3p和热... 目的 探讨miR-149-3p在先天性心脏病(CHD)胎鼠心脏组织中的表达及其对小鼠畸胎瘤P19细胞分化的影响。方法 建立CHD室间隔缺损胎鼠模型,于妊娠第19天,HE染色观察心脏组织病理学变化,实时荧光定量PCR(qPCR)检测心脏组织中miR-149-3p和热休克蛋白蛋白家族B成员6(HSPB6)mRNA表达水平。二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,并收集分化第0、5、10天的细胞,qPCR检测诱导分化过程中心肌分化标志物GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心房利钠尿多肽(ANP)的mRNA表达水平以及HSPB6 mRNA和miR-149-3p表达水平。miR-149-3p过表达慢病毒和空载慢病毒感染P19细胞,DMSO诱导分化第10天,免疫荧光染色检测细胞中cTnI蛋白表达情况,qPCR检测心肌分化相关标志物mRNA表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-149-3p与HSPB6之间的靶向关系。结果 与正常组比较,CHD组胎鼠出现心脏室间隔缺损,心脏组织中miR-149-3p高表达,而HSPB6低表达(P<0.01)。P19细胞在向心肌细胞分化的过程中,GATA4、cTnT、ANP和HSPB6mRNA水平均逐渐上升,而miR-149-3p表达水平逐渐下降(P<0.05)。诱导分化第10天,miR-149-3p过表达可明显降低心肌细胞分化率,并下调GATA4、cTnT、ANP mRNA表达水平(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-149-3p可以靶向调控HSPB6表达。结论 miR-149-3p可能通过靶向下调HSPB6抑制P19细胞向心肌细胞分化。 展开更多
关键词 心脏缺损 先天性 微RNAS HSP20热休克蛋白质类 细胞分化 miR-149-3p p19细胞
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PAX3基因沉默对P19细胞向心肌样细胞分化的影响及其机制
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作者 万朝辉 曾良 +1 位作者 李晶 雷长城 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期647-655,共9页
目的:探讨配对盒转录因子3(PAX3)基因沉默对P19细胞向心肌样细胞分化的影响,并阐明其可能作用机制。方法:采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌样细胞分化,观察诱导分化过程中细胞形态表现,并收集诱导分化第0天(0d组)和第10天(10 d组... 目的:探讨配对盒转录因子3(PAX3)基因沉默对P19细胞向心肌样细胞分化的影响,并阐明其可能作用机制。方法:采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌样细胞分化,观察诱导分化过程中细胞形态表现,并收集诱导分化第0天(0d组)和第10天(10 d组)的细胞。采用shPAX3慢病毒感染P19细胞,将细胞分为对照组、sh-NC组(阴性对照)和sh-PAX3组(PAX3干扰),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测PAX3基因沉默的P19细胞构建情况。采用Notch信号激动剂Jagged1处理慢病毒感染后的P19细胞,并采用DMSO诱导分化10 d,将细胞分为DMSO组、DMSO+sh-NC组、DMSO+sh-PAX3组、DMSO+Jagged1组和DMSO+sh-PAX3+Jagged1组。RT-qPCR法检测各组细胞中GATA结合蛋白4(GATA4)、心房利钠尿多肽(ANP)、心肌肌钙蛋白(cTn)T、PAX3、Notch1、Notch胞内结构域(NICD)及Hes家族bHLH转录因子1(Hes1)mRNA表达水平。Western blotting法检测各组细胞中PAX3、Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平。免疫荧光染色法检测各组细胞中cTnI阳性表达情况和心肌样细胞分化率。结果:诱导分化第10天,可观察到自发性节律收缩的心肌样细胞簇。RT-qPCR和Western blotting法检测,慢病毒感染后,与对照组和sh-NC组比较,sh-PAX3组P19细胞中PAX3 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05),表明PAX3基因沉默的P19细胞构建成功。RT-qPCR法检测,与0d组比较,10 d组细胞中GATA4、ANP和cTnT mRNA表达水平均升高(P<0.05),PAX3、Notch1、NICD和Hes1 mRNA表达水平均升高(P<0.05);与DMSO组和DMSO+sh-NC组比较,DMSO+sh-PAX3组细胞中GATA4、ANP和cTnT mRNA表达水平均降低(P<0.05),DMSO+Jagged1组细胞中GATA4、ANP和cTnT mRNA表达水平均升高(P<0.05);与DMSO+sh-PAX3组比较,DMSO+shPAX3+Jagged1组细胞中GATA4、ANP和cTnT mRNA表达水平均升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与0d组比较,10 d组细胞中PAX3、Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平均升高(P<0.05);与DMSO组和DMSO+sh-NC组比较,DMSO+sh-PAX3组细胞中Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平均降低(P<0.05),DMSO+Jagged1组细胞中Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平均升高(P<0.05);与DMSO+sh-PAX3组比较,DMSO+sh-PAX3+Jagged1组细胞中Notch1、NICD和Hes1蛋白表达水平均升高(P<0.05)。免疫荧光法检测,慢病毒感染后,各组细胞中均有cTnI蛋白阳性表达,与DMSO组和DMSO+sh-NC组比较,DMSO+sh-PAX3组细胞中cTnI蛋白阳性表达减少,心肌样细胞分化率降低(P<0.05);与DMSO组和DMSO+sh-NC组比较,DMSO+Jagged1组细胞中cTnI蛋白阳性表达增加,心肌样细胞分化率升高(P<0.05);与DMSO+sh-PAX3组比较,DMSO+sh-PAX3+Jagged1组细胞中cTnI蛋白阳性表达增加,心肌样细胞分化率升高(P<0.05)。结论:PAX3基因沉默可抑制P19细胞向心肌样细胞分化,其机制可能是通过降低PAX3基因表达抑制Notch信号通路活化实现的。 展开更多
关键词 p19细胞 配对盒转录因子3 NOTCH信号通路 心肌样细胞
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过量表达Wnt-1基因诱导P19细胞的神经分化 被引量:9
5
作者 杨靖 孙红 +1 位作者 边玮 景乃禾 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期289-295,共7页
Wnt-1基因在小鼠神经发育过程中起着重要作用。该基因在胚胎性癌细胞P19向神经分化过程中存在瞬时性表达。利用克隆到的Wnt-1基因转染P19细胞(Wnt-1/P19),可使细胞不经视黄酸(RA)诱导,自发向神经细胞方向分化。早期神经分化关... Wnt-1基因在小鼠神经发育过程中起着重要作用。该基因在胚胎性癌细胞P19向神经分化过程中存在瞬时性表达。利用克隆到的Wnt-1基因转染P19细胞(Wnt-1/P19),可使细胞不经视黄酸(RA)诱导,自发向神经细胞方向分化。早期神经分化关键基因MASH-1在Wnt-1/P19细胞的神经分化过程中的表达,晚于RA诱导引起的P19细胞的分化过程。 展开更多
关键词 WNT-1 反转录PCR p19细胞 过量表达 神经分化
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应用二甲基亚砜体外诱导P19细胞分化为心肌细胞 被引量:5
6
作者 尹青 张雷 +2 位作者 赵昱 李莉 赵春芳 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期219-222,共4页
目的观察P19细胞经二甲基亚砜(DMSO)诱导及不同培养方法,培养形成细胞聚集体并向心肌分化的过程。方法将P19细胞接种于Petri塑料培养皿或铺有0.5%软琼脂的培养皿中,DMSO诱导悬浮培养7 d形成细胞聚集体,将聚集体用生长培养基黏附培养至1... 目的观察P19细胞经二甲基亚砜(DMSO)诱导及不同培养方法,培养形成细胞聚集体并向心肌分化的过程。方法将P19细胞接种于Petri塑料培养皿或铺有0.5%软琼脂的培养皿中,DMSO诱导悬浮培养7 d形成细胞聚集体,将聚集体用生长培养基黏附培养至19 d。观察细胞跳动情况,用-αsarcomeric actinc、ardiac Troponin T(cTnT)抗体进行免疫组织化学染色,鉴定细胞分化。结果经DMSO诱导7d,将形成的细胞聚集体用生长培养基黏附培养至15 d,在聚集体周围的生长晕中出现自发性节律跳动的细胞团片,-αsarcomeric actin及cTnT染色阳性,至19d,阳性率分别可达26%和15%。结论DMSO诱导结合聚集体形成培养方法可诱导P19细胞向心肌细胞分化,并出现自发性有节律跳动。 展开更多
关键词 二甲基亚砜 心肌细胞 细胞分化 细胞培养 p19细胞
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应用5-氮胞苷体外诱导P19细胞分化为心肌细胞 被引量:5
7
作者 尹青 赵昱 +3 位作者 陈炜 张雷 赵秀军 赵春芳 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期325-329,共5页
目的探讨P19细胞体外经5-氮胞苷(5-aza)诱导向心肌细胞分化的特征。方法将P19细胞接种于铺有琼脂的培养皿中,用含不同浓度5-aza的培养基诱导培养7d,细胞悬浮生长形成类胚体(EBs)。将EBs用生长培养基黏附培养,观察细胞收缩情况;免疫细胞... 目的探讨P19细胞体外经5-氮胞苷(5-aza)诱导向心肌细胞分化的特征。方法将P19细胞接种于铺有琼脂的培养皿中,用含不同浓度5-aza的培养基诱导培养7d,细胞悬浮生长形成类胚体(EBs)。将EBs用生长培养基黏附培养,观察细胞收缩情况;免疫细胞荧光检测α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)、心肌肌钙蛋白(cTnT)的表达;RT-PCR检测GATA-4、α-MHC基因表达,鉴定细胞分化。结果将5-aza诱导形成的EBs黏附培养后,在EBs周围的生长晕中出现自发性节律收缩的细胞团片,α-sarcomeric actin及cTnT染色阳性,表达GATA-4、α-MHC基因。10μmol/L 5-aza处理组心肌细胞分化率较高。结论5-aza暴露结合悬浮培养可诱导P19细胞向心肌细胞分化,其分化与5-aza浓度有关。 展开更多
关键词 5-氮胞苷 心肌细胞 细胞分化 细胞培养 p19细胞
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外源表达Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化 被引量:7
8
作者 张金平 张雷 +4 位作者 王惠娟 王多 赵昱 尹青 赵春芳 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期725-729,共5页
目的:构建人Nkx2-5基因融合绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,探讨外源性Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化的作用。方法:以真核表达质粒pEFSA-HA-Nkx2-5为模板,PCR扩增得到人Nkx2-5基因,将目的片段亚克隆到pEGFP-N1载体,鉴定正... 目的:构建人Nkx2-5基因融合绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,探讨外源性Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化的作用。方法:以真核表达质粒pEFSA-HA-Nkx2-5为模板,PCR扩增得到人Nkx2-5基因,将目的片段亚克隆到pEGFP-N1载体,鉴定正确。将重组质粒pEGFP-N1-Nkx2-5以脂质体法转染P19细胞,G418筛选2周,聚集4d,贴壁培养16d。以免疫细胞化学检测desmin、α-sarcomeric actin和cardiac Troponin T(cTnT)的表达。结果:将Nkx2-5基因正确插入pEGFP-N1载体,外源表达Nkx2-5基因可使P19细胞在无诱导剂、聚集条件下表达desmin、α-sarcomeric actin和cTnT蛋白。结论:成功构建真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,外源表达Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化。 展开更多
关键词 NKX2-5 质粒构建 p19细胞 基因转染 心肌分化
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Nkx2-5基因诱导P19细胞分化中心肌标志物的表达 被引量:5
9
作者 张金平 王慧娟 +5 位作者 史玉兰 王立轩 赵昱 郭艳红 赵春芳 张雷 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2658-2662,共5页
目的研究同源框基因Nkx2-5在心肌发生中的作用。方法实验分转染组和未转染组,转染组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,未转染组细胞为P19细胞。两组细胞悬浮培养4d,形成聚集体后贴壁培养,于贴壁培养的4、8、12、16d,免疫细胞化学检测α横... 目的研究同源框基因Nkx2-5在心肌发生中的作用。方法实验分转染组和未转染组,转染组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,未转染组细胞为P19细胞。两组细胞悬浮培养4d,形成聚集体后贴壁培养,于贴壁培养的4、8、12、16d,免疫细胞化学检测α横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin,α-SA)和心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)的表达;RT-PCR检测GATA-4、α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)、心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)基因的表达。结果转染组α-SA和cTnT两种蛋白在聚集体贴壁的8、12、16d出现表达,表达量有增高趋势;16d与8d比有显著差异(P<0.01);RT-PCR结果显示:转染组GATA-4在贴壁培养的4d有表达,8、12d表达逐渐增多,16d时表达有所下降。α-MHC和ANF在贴壁培养的8d有表达,12d和16d时表达逐渐增多。统计结果表明GATA-4在8、12、16d的表达量与4d比有显著差异(P<0.05或P<0.01),α-MHC在12、16d的表达量与8d比有显著差异(P<0.05,P<0.01),ANF在16d的表达量与8d比有显著差异(P<0.01),16d表达量与12d比也有显著差异(P<0.01);未转染组结果均为阴性。结论外源表达Nkx2-5基因可诱导P19细胞逐渐表达心肌标志物。 展开更多
关键词 同源框基因 NKX2-5 p19细胞 心肌标志物
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pEGFP-C2-GATA4真核表达载体的构建及在P19细胞中的表达 被引量:7
10
作者 张金平 王巍 +4 位作者 张雷 王慧娟 赵春芳 陈炜 赵秀军 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第2期134-137,共4页
目的:构建小鼠GATA4基因融合绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C2-GATA4,并检验其在P19细胞中的瞬时表达.方法:以真核表达质粒pEFSA-GATA4为模板,PCR扩增得到小鼠GATA4基因片段,将目的片段亚克隆到pEG-FP-C2载体,卡那霉素筛选阳性克隆,经... 目的:构建小鼠GATA4基因融合绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C2-GATA4,并检验其在P19细胞中的瞬时表达.方法:以真核表达质粒pEFSA-GATA4为模板,PCR扩增得到小鼠GATA4基因片段,将目的片段亚克隆到pEG-FP-C2载体,卡那霉素筛选阳性克隆,经菌落PCR、酶切鉴定和测序鉴定.将重组质粒pEGFP-C2-GATA4以脂质体法瞬时转染P19细胞,用免疫细胞化学、共聚焦扫描显微镜、PCR、免疫印记法检测GATA4在P19细胞中的表达.结果:酶切、测序结果表明将基因片段GATA4正确插入pEGFP-C2载体,并可在P19细胞中检测到GATA4基因和GATA4-EGFP融合蛋白表达.结论:成功构建真核表达质粒pEGFP-C2-GATA4,并在P19细胞瞬时表达成功,为进一步研究GATA4在心脏发育中的作用奠定了基础. 展开更多
关键词 pEGFP—C2载体 GATA4 真核表达质粒 p19细胞 转染
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催产素诱导P19细胞分化为心肌细胞的作用 被引量:3
11
作者 陈炜 尹青 +4 位作者 张雷 赵昱 张金平 赵秀军 孔祥增 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期611-613,共3页
目的研究催产素(OT)在体外诱导P19细胞分化为心肌细胞中的作用。方法将P19细胞用含OT的诱导培养基悬浮培养4d,取其形成的拟胚体(EBs)用不含OT的生长培养基贴壁培养10~12d。用免疫细胞化学、透射电镜等方法对分化的细胞进行鉴定。结... 目的研究催产素(OT)在体外诱导P19细胞分化为心肌细胞中的作用。方法将P19细胞用含OT的诱导培养基悬浮培养4d,取其形成的拟胚体(EBs)用不含OT的生长培养基贴壁培养10~12d。用免疫细胞化学、透射电镜等方法对分化的细胞进行鉴定。结果EBs周边生长晕中部分细胞变形、伸长,呈放射状排列。免疫细胞化学染色显示,变形分化的细胞表达α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)和心肌肌钙蛋白T(cTnT),并以OT终浓度1×10^-7mol/L的实验组阳性率最高(P〈0.01)。透射电镜观察分化细胞具有心肌细胞发育早期的超微结构特征。结论在体外OT能够诱导P19细胞分化为早期的心肌细胞。 展开更多
关键词 催产素 心肌细胞 诱导 分化 细胞培养 p19细胞
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苯丙氨酸及其代谢物影响P19细胞神经分化的形态学研究 被引量:5
12
作者 邱文娟 潘骏 顾学范 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期117-121,T025,共6页
本研究通过免疫组化及活细胞计数法研究了苯丙氨酸及其代谢物对 P19细胞神经分化的影响。结果显示 :在 P19细胞神经分化诱导期加入苯丙氨酸及其代谢物可降低 P19神经元存活率 ,导致 P19神经元肿胀、崩解 ,神经突起纤细且分支少 ,神经纤... 本研究通过免疫组化及活细胞计数法研究了苯丙氨酸及其代谢物对 P19细胞神经分化的影响。结果显示 :在 P19细胞神经分化诱导期加入苯丙氨酸及其代谢物可降低 P19神经元存活率 ,导致 P19神经元肿胀、崩解 ,神经突起纤细且分支少 ,神经纤维丝蛋白的染色性降低 ,同时发现 P19神经元中多极神经元 /单双极神经元的比例下降。本研究表明 ,苯丙氨酸及其代谢物可影响 P19细胞的神经诱导和分化 。 展开更多
关键词 苯丙氨酸 代谢物 p19细胞 神经分化 形态学 母源性苯丙酮尿症
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P19细胞体外DM SO诱导向心肌样细胞分化 被引量:5
13
作者 李秀华 张雷 +2 位作者 王海萍 赵春芳 尹青 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第2期129-132,共4页
目的:体外诱导P19细胞向胚胎心肌样细胞分化.方法:P19细胞经复苏、传代,在体外二甲基亚砜(DMSO)诱导下向心肌细胞分化,分化细胞经HE染色及心肌标志物转录因子(GATA-4),连接蛋白43(connecxin43),α-肌节型肌动蛋白(α-sarcomeric actin)... 目的:体外诱导P19细胞向胚胎心肌样细胞分化.方法:P19细胞经复苏、传代,在体外二甲基亚砜(DMSO)诱导下向心肌细胞分化,分化细胞经HE染色及心肌标志物转录因子(GATA-4),连接蛋白43(connecxin43),α-肌节型肌动蛋白(α-sarcomeric actin)的免疫细胞化学染色后,在光镜、倒置显微镜下观察细胞形态学变化,透射电镜下观察细胞超微结构变化.结果:经DMSO诱导分化后4 d有细胞聚集体形成,6 d有部分细胞GATA-4和connecxin43呈阳性表达,GATA-4阳性表达位于细胞核和细胞质,connecxin43阳性表达呈斑点状分布于心肌细胞胞质内和细胞膜表面.10 d时GA-TA-4和connecxin43阳性表达明显增加,并有部分细胞呈α-sarcomeric actin阳性,阳性表达位于细胞质.电镜观察,未分化细胞为圆形或椭圆形,细胞间连接松散,细胞质较少,细胞器不发达;诱导后6 d,细胞间出现紧密连接和中间连接,细胞质增多,部分细胞表面出现突起,突起内可见微丝.诱导后10d,线粒体、粗面内质网、滑面内质网、高尔基体丰富,并有中心粒形成.结论:P19细胞在DMSO诱导下已有向心肌分化趋向,有类似胚胎心肌细胞形成. 展开更多
关键词 p19细胞 细胞学 细胞分化 干细胞移植 心肌样细胞分化
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P19细胞向神经元诱导分化的实验研究 被引量:2
14
作者 吴燕 丁爱石 +4 位作者 马子敏 吴丽颖 李海生 朱玲玲 范明 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期434-436,共3页
目的 探讨P19细胞向神经元定向分化发育的可能性。 方法 经维甲酸 (RA)诱导 4d的P19细胞按神经细胞培养方法培养 12d ,分别用NSE、MAP 2和TH进行免疫组织化学染色 ,用AchE进行组织化学染色 ,鉴定分化细胞的特征。 结果 经RA诱导的... 目的 探讨P19细胞向神经元定向分化发育的可能性。 方法 经维甲酸 (RA)诱导 4d的P19细胞按神经细胞培养方法培养 12d ,分别用NSE、MAP 2和TH进行免疫组织化学染色 ,用AchE进行组织化学染色 ,鉴定分化细胞的特征。 结果 经RA诱导的P19细胞培养 12d ,大多数细胞转变为类似于神经元的形态 ,长出突起并相互联络成网。经NSE免疫组织化学显示 ,12d培养物中神经元约占 89%。P19诱导的神经元培养 12d ,神经元突起经MAP 2染色呈阳性反应。TH免疫组织化学显示 ,神经元中TH染色阳性神经元约占 0 8%。组织化学显示 ,神经元中AchE染色阳性神经元约占 71 0 9%。 展开更多
关键词 p19细胞 神经元 诱导 分化 实验研究 细胞培养
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Wnt信号通路关键基因β-catenin在RA诱导的P19胚胎性癌细胞神经分化过程中的亚细胞分布 被引量:3
15
作者 杨靖 侯海宇 +2 位作者 边玮 林其谁 景乃禾 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期671-678,共8页
Wnt信号参与了小鼠早期神经发育。我们以往的实验结果表明,Wnt信号可引起P19胚胎性癌细胞的神经分化。为了进一步了解Wnt信号在P19神经分化过程中行使功能的时间,我们以Wnt信号通路关键成员β-catenin是否定位在细胞核中作为考察Wnt... Wnt信号参与了小鼠早期神经发育。我们以往的实验结果表明,Wnt信号可引起P19胚胎性癌细胞的神经分化。为了进一步了解Wnt信号在P19神经分化过程中行使功能的时间,我们以Wnt信号通路关键成员β-catenin是否定位在细胞核中作为考察Wnt信号是否能传递到细胞核内调控下游基因活性的指标,分析了Wnt信号在P19细胞神经分化过程中的活性。我们观察到,β-catenin在RA诱导的P19细胞分化的第2到第4天存在核定位。在此期间,Wnt下游基因En-2的表达量也有明显增加。因此,在P19神经分化过程中,Wnt活性可能发生在这一阶段。同时,在神经突的形成、伸长及神经纤维集束过程中,β-catenin在神经突起及神经纤维上也存在特异性分布,提示在此过程中β-atenin可能也行使了功能。 展开更多
关键词 WNT信号通路 Β-CATENIN 胚胎性癌细胞 神经分化
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多氯联苯对P19细胞向心肌分化进程的影响 被引量:2
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作者 王瑛 朱春 +5 位作者 余章斌 王薛洁 潘亚 彭宇竹 郭锡熔 韩树萍 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期638-641,共4页
目的探讨多氯联苯对P19细胞向心肌分化进程的影响。方法在P19细胞向心肌细胞分化的培养液中加入多氯联苯(Aroclor 1254)2.5μmol/L,同时设立阴性对照组。显微镜下连续观察P19细胞形态的变化,并采用实时荧光定量RT-PCR技术对分化过程的第... 目的探讨多氯联苯对P19细胞向心肌分化进程的影响。方法在P19细胞向心肌细胞分化的培养液中加入多氯联苯(Aroclor 1254)2.5μmol/L,同时设立阴性对照组。显微镜下连续观察P19细胞形态的变化,并采用实时荧光定量RT-PCR技术对分化过程的第0、4、10天中GATA4及Nkx2.5基因mRNA的表达水平进行检测。结果在分化全程(0~10天),实验组与对照组无细胞形态上的差别;而GATA4、Nkx2.5基因的表达量除在分化开始前(第0天)差异无统计学意义外,在分化中期(第4天)及末期(第10天),实验组中GATA4、Nkx2.5基因的相对表达量均显著低于对照组。结论多氯联苯可通过对早期心脏发育相关重要基因的表达影响心肌分化进程。 展开更多
关键词 多氯联苯 p19细胞 GATA4基因 NKX2.5基因 心肌分化
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P19细胞移植改善心肌梗死大鼠心功能 被引量:2
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作者 李秀华 张雷 +3 位作者 邵素霞 尹青 赵春芳 张志敏 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2005年第12期1156-1160,共5页
目的观察P19细胞植入大鼠心肌后成活、分化及对大鼠心功能的影响。方法SD大鼠30只,随机分为移植组(n=20)和对照组(n=10)。用液氮冷冻方法建立心肌梗死模型,梗死后立即将培养的P19细胞植入心肌梗死区及周边区,8周后观察植入细胞的成活、... 目的观察P19细胞植入大鼠心肌后成活、分化及对大鼠心功能的影响。方法SD大鼠30只,随机分为移植组(n=20)和对照组(n=10)。用液氮冷冻方法建立心肌梗死模型,梗死后立即将培养的P19细胞植入心肌梗死区及周边区,8周后观察植入细胞的成活、分化,并通过血流动力学各项指标评价细胞移植对心功能的改善情况。结果移植组免疫组化染色GATA-4、α-肌节肌动蛋白(-αsarcomeric actin)及肌细胞生成蛋白(myogenin)在成活移植细胞呈阳性,左室收缩压(LVSP)、左室等容期压力最大变化速率(±dp/dtmax)明显高于对照组(P<0.01),左室舒张末期压(LVEDP)明显低于对照组(P<0.01)。移植组有1例检测心功能时发现有偶发室性早搏。结论P19细胞移植入心肌梗死区后能够成活并向心肌分化,可明显改善心肌梗死后大鼠的心功能;P19细胞可以作为研究心肌梗死细胞移植疗法的模型细胞。 展开更多
关键词 p19细胞 移植 心肌梗死 心功能 大鼠
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miR-19b沉默对P19细胞分化及线粒体功能的影响 被引量:2
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作者 刘雪华 朱莎莎 +6 位作者 余章斌 朱春 李萌萌 韩树萍 胡晓山 朱金改 彭宇竹 《东南大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2015年第5期704-709,共6页
目的:通过沉默微小RNA-19b(miR-19b)研究miR-19b对P19细胞分化及线粒体功能的影响。方法:转染miR-19b沉默质粒与空载质粒进入P19细胞建立起稳定的细胞系;线粒体功能分析用以检测细胞凋亡;诱导分化P19细胞,实时定量荧光PCR检测miR-19b沉... 目的:通过沉默微小RNA-19b(miR-19b)研究miR-19b对P19细胞分化及线粒体功能的影响。方法:转染miR-19b沉默质粒与空载质粒进入P19细胞建立起稳定的细胞系;线粒体功能分析用以检测细胞凋亡;诱导分化P19细胞,实时定量荧光PCR检测miR-19b沉默后细胞分化关键基因表达水平。结果:Target Scan 5.1软件及双荧光素酶报告基因系统共同证实,Wnt1为miR-19b在P19细胞中发挥作用的靶点(P<0.05);测定第0、4、6、8、10、12天c Tn T、NKX2.5、GATA4等基因的核酸表达量显示,心肌分化相关标志基因逐渐增高,miR-19b沉默组明显低于对照组(P<0.05);于分化第10天检测线粒体功能,发现miR-19b沉默组线粒体DNA拷贝数的相对含量高于对照组,其活性氧水平显著低于对照组,ATP水平也高于对照组(均P<0.05)。结论:miR-19b沉默可抑制细胞凋亡,抑制心肌细胞分化。 展开更多
关键词 微小RNA-19b沉默 p19细胞 线粒体 分化
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P19细胞向心肌细胞分化过程中ZNF207基因的表达变化 被引量:2
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作者 卓莉莉 龚杰 +4 位作者 周蕾 盛燕辉 杨荣 孔祥清 曹克将 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期781-784,F0002,共5页
目的:观察锌指蛋白207基因(ZNF207)在P19细胞向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化,探讨ZNF207基因与心肌细胞分化之间可能的关系。方法:体外培养P19细胞,应用0.9%二甲基亚砜(DMSO)诱导其向心肌细胞分化,采用RT-PCR技术在细胞分化成... 目的:观察锌指蛋白207基因(ZNF207)在P19细胞向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化,探讨ZNF207基因与心肌细胞分化之间可能的关系。方法:体外培养P19细胞,应用0.9%二甲基亚砜(DMSO)诱导其向心肌细胞分化,采用RT-PCR技术在细胞分化成熟的不同时段检测P19细胞中ZNF207基因mRNA表达水平。结果:ZNF207基因在P19细胞向心肌细胞分化的过程中均有表达,随细胞分化成熟,该基因表达水平逐渐升高。经统计学分析发现,在分化第0~2天该基因表达无差异;第2~10天表达持续性增高,各时间点之间均有差异,差异均有统计学意义(P<0.05);第10~17天该基因稳定高表达,各时间点之间无差异。结论:ZNF207基因在P19细胞向心肌细胞分化过程中表达逐渐上调,可能有利于心肌细胞的分化和发育。 展开更多
关键词 ZNF207基因 p19细胞 细胞分化
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二甲基亚砜对P19细胞体外分化为心肌细胞的影响 被引量:4
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作者 尹青 陈炜 +3 位作者 赵昱 李莉 张雷 龚淼 《细胞生物学杂志》 CSCD 2007年第4期579-584,共6页
体外应用不同浓度二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,通过免疫细胞化学、流式细胞、RT-PCR方法检测α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin,α-SA)、心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)及GATA-4、α-... 体外应用不同浓度二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,通过免疫细胞化学、流式细胞、RT-PCR方法检测α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin,α-SA)、心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)及GATA-4、α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)mRNA表达。结果显示,DMSO处理结合悬浮培养可诱导部分P19细胞分化为节律跳动的心肌细胞,分化的细胞α-SA、cTnT表达阳性,同时表达心肌特异GATA-4、α-MHCmRNA。1.0%DMSO组α-SA、cTnT阳性细胞免疫荧光强度及GATA-4、α-MHCmRNA表达水平明显高于0.5%及0.8%DMSO组。表明DMSO的诱导作用与其浓度有关。 展开更多
关键词 p19细胞 心肌细胞 二甲基亚砜
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