p27^Kip1在RA诱导人神经前体细胞分化中的作用

目的观察全反式视黄酸(RA)对体外培养的人神经前体细胞的诱导作用,研究在这个过程中细胞周期调节蛋白p27Kip1、p21Cip1及相关分子cdk2、cyclinE的变化,探讨p27Kip1在RA诱导的人神经前体细胞分化过程中的作用。方法取12wk的人胚胎前脑纹状体,原代培养人神经前体细胞。在细胞进入对数生长期时给予1μmol·L-1RA诱导。在诱导的d1、3、7,用相差显微镜观察细胞形态的变化;用免疫细胞化学染色、RT-PCR等方法检测p27Kip1、p21Cip1及其相关的cdk2、cyclinE的变化。结果在RA诱导d3,人神经前体细胞形态发生变化,至d7时已接近成熟神经元形态。免疫细胞化学染色结果显示p27Kip1的表达在RA诱导d3增加,在RA诱导d7时明显增加,与未经RA诱导的细胞相比差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示,p27Kip1 mRNA的表达在RA诱导d3增加,并在RA诱导d5达到高峰,而p21Cip1 mRNA的表达在RA诱导后略呈下降趋势。cdk2、cy-clinE的mRNA水平在RA诱导前后没有明显变化。结论p27Kip1在RA诱导的人神经前体细胞分化过程中具有重要作用,并且其表达增加是通过转录水平调节的。

宫颈腺癌中HPV感染与Skp2、p27^kip1蛋白表达的研究

目的 探讨S期激酶相关蛋白2（Skp2）和细胞周期调控因子p27^kip1在宫颈腺癌发生发展中的作用，分析高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染与Skp2、p27^kip1蛋白表达关系。方法 采用组织微阵列技术结合原位杂交和免疫组化（二步法）检测HPV16／18DNA和Skp2、p27^kip1蛋白在86例宫颈腺癌和24例慢性宫颈炎组织中的表达。结果 宫颈腺癌组HPV16／18DNA与Skp2蛋白阳性表达率分别为65．1％和68．6％，均显著高于慢性宫颈炎组（P〈0．01）。p27^kip1蛋白在宫颈腺癌组中的阳性表达率为55．8％，明显低于慢性宫颈炎组（P〈0.05）。HPV16／18感染与宫颈腺癌病理分级和组织学类型无明显相关性，但与Skp2表达里正相关（P〈0．05），与p27^kip1表达呈负相关（P〈0．05）。Skp2表达与宫颈腺癌的病理分级有关，G2、G3组阳性表达率均明显高于G1组（P〈0．05）。Skp2和p27^kip1表达与宫颈腺癌组织学类型有明显相关性。结论 宫颈康癌的发生与HPV16／18感染及Skp2、p27^kip1蛋白的表达异常相关，三者协同作用导致宫颈腺癌恶性发展。

人乳头瘤病毒感染对宫颈腺癌中p27^kip1蛋白表达的影响

目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）感染对宫颈腺癌中细胞周期调控因子p27^kip1蛋白表达的影响以及二者在宫颈腺癌发生过程的作用。方法采用原位杂交和免疫组化（二步法）检测24例慢性宫颈炎和86例宫颈腺癌组织的HPV16／18DNA和p27^kip1蛋白表达情况。结果HPV16/18DNA在宫颈腺癌组织中的阳性率为65．1％，显著高于慢性宫颈炎组织8．3％（P〈0．01）。p27^kip1蛋白表达在宫颈腺癌组织中的阳性率为55．8％，明显低于慢性宫颈炎组织79.2％（P〈0．05）．HPV16／18感染与宫颈腺癌的组织学类型无关，但与p27^kip1表达呈负相关（P〈0．05）。p27^kip1表达与官颈腺癌组织学类型有明显相关性，透明细胞腺癌p27^kip1阳性表达率明显低于其它类型宫颈腺癌（P〈0．05）。结论HPV16／18感染可能引起p27^kip1蛋白表达异常，从而导致宫颈腺癌发生。

小鼠p27^kip1真核表达载体的构建及其对单个核细胞周期的影响

目的构建小鼠p27kip1真核表达载体,探讨其对单个核细胞生长情况和细胞周期的影响,为进一步研究p27kip1在疾病防治中的作用奠定基础。方法将小鼠p27kip1基因克隆至pcDNA3.0真核表达载体上,并经脂质体介导转染至小鼠单个核细胞中,应用MTT法和流式细胞仪分析转染细胞生长情况和细胞周期。结果经酶切分析和测序鉴定,成功构建了小鼠pcDNA3.0/p27kip1重组质粒;经pcDNA3.0/p27kip1转染的单个核细胞中p27蛋白表达增多,其生长增殖不仅受到明显抑制,而且处于G1/G0期的细胞明显增加,处于S期的细胞明显减少。结论构建的pcDNA3.0/p27kip1真核表达载体能够在单个核细胞中表达,且高表达的pcD-NA3.0/p27kip1可以通过抑制细胞周期的方式抑制单个核细胞的生长。

miR-211-5p和p27^Kip1在原发性胃癌组织中的表达水平与临床病理学特征的相关性研究

目的探究miR-211-5p和p27^Kip1在胃癌组织中的表达水平,以及其与患者临床病理学特征和预后的关系。方法收集2015年8月至2016年8月在开滦总医院林西医院接受手术治疗的60例胃癌患者的临床资料,采用实时定量聚合酶链反应和免疫组织化学法检测胃癌组织、癌旁组织(距离肿瘤边缘>2 cm)中miR-211-5p和p27^Kip1的表达水平。探讨miR-211-5p和p27^Kip1阳性率与患者的临床病理学特征和预后的相关性。采用Kendall′s tau-b等级相关系数分析miR-211-5p与p27^Kip1表达的相关性。结果与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-211-5p的阳性率显著升高,而p27^Kip1的阳性率则显著降低。miR-211-5p和p27^Kip1的阳性率与患者的TNM分期、淋巴结转移和浸润深度有关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤位置和大小不相关(P>0.05)。miR-211-5p与p27^Kip1在胃癌组织中的表达水平呈负相关(r=-0.455,P<0.031),miR-211-5p阳性表达者的3年生存率显著低于阴性表达者(log-rankχ^2=19.85,P<0.0001);而p27^Kip1阳性表达者的3年生存率则高于阴性表达者(log-rankχ^2=17.53,P<0.0001)。结论在胃癌组织中miR-211-5p呈高表达,p27^Kip1呈低表达,两者呈负相关,且其表达水平的异常提示胃癌患者的预后不良。

OCT4和P27^kip1蛋白在肺癌含量及其相关性研究

目的研究OCT4和P27^kip1蛋白在肺癌中的表达及其相关性,并探讨与肺癌临床病理参数的关系。方法采用免疫组织化学SP法对30例肺癌标本OCT4和P27^kip1的表达进行检测。结果肺癌标本OCT4和P27^kip1蛋白阳性表达分别为66.7%和73.7%,且OCT4和P27^kip1的表达水平与患者年龄、性别无明显关联,而与肿瘤转移有关。OCT4和P27^kip1在肺癌中的表达存在负相关(rs=-0.426,P<0.05)。结论OCT4和P27^kip1呈负相关性,可能在肺癌的发生发展过程中起关键作用,为肺癌诊治的研究提供了新的思路。

反义miRNA-221／222上调p27^kip1抑制胶质瘤细胞生长的体外研究

目的探讨敲低miRNA-221／222表达上调p27^kip1抑制U251人脑胶质瘤细胞株生长的效果及机制。方法脂质体共转染反义miRNA-221／222下调U251人脑胶质瘤细胞株miRNA-221、miRNA-222的表达。使用Northern blot方法鉴定转染后U251细胞miRNA-221、miRNA-222表达水平下调；MTT法评价反义miRNA-221／222抑制U251细胞生长效果；流式细胞术检测转染后U251细胞周期分布；Westernblot分析p27^kip1蛋白的表达变化。结果Northernblot显示反义miRNA-221／222共转染组使miRNA-221、miRNA-222的表达水平明显下降。反义miRNA-221转染组仅使miRNA-221的表达水平明显下降，反义miRNA：222转染组仅使miRNA-222的表达水平明显下降。转染无意序列组及对照组的miRNA-221、miRNA-222表达水平没有改变。MTT结果显示反义miRNA-221／222共转染组肿瘤细胞生长速度小于对照组、转染无意序列组、转染反义miRNA-221组、转染反义miRNA-222组。流式细胞术检测可见反义miRNA-221／222共转染组细胞周期存在G0／G1期阻滞且明显高于其他各组。Western blot显示反义miRNA-221／222共转染组的p27^kip1蛋白表达明显上调。结论反义miRNA-221／222通过上调p27^kip1蛋白表达来抑制胶质瘤细胞U251的生长。

反义-miR221／222上调p27^kip1抑制胶质瘤生长的研究

微小RNA（mieroRNA或miRNA）是长度约21～25核苷酸的非编码RNA，在转录后水平对其靶基因的表达进行负调控。国外已在体外实验中证实miR-221／222可以通过抑制p27^kip1表达促进肿瘤细胞生长。我们通过敲低胶质瘤裸鼠模型中肿瘤细胞的miR-221／222表达，观察miR-221／222可以通过调控p27^kip1的表达抑制胶质瘤生长。

92例非霍奇金淋巴瘤组织中Skp2和p27^kip1蛋白的表达及相互关系

目的探讨92例非霍奇金淋巴瘤（NHL）组织中Skp2和p27^kip1蛋白的表达及相互关系。方法采用免疫组织化学方法检测92例NHL和14例反应性增生淋巴结组织中Skp2、p27^kip1蛋白及细胞增殖指标Ki-67的表达情况,结合病理资料进行统计分析;采用Western blot技术检测4种淋巴瘤细胞株内Skp2和p27^kip1蛋白的表达情况。结果Skp2蛋白在NHL组织中的表达高于反应性增生的淋巴结（不含生发中心）,且与增殖活性（Ki-67 LI）呈正相关,并随着肿瘤侵袭性增加而表达增高;p27^kip1蛋白在NHL组织中的表达低于反应性增生淋巴结（不含生发中心）,且与增殖活性呈负相关,并随着肿瘤侵袭性增加而表达减低;Skp2和p27^kip1蛋白在NHL组织中的表达无明显相关性。结论在NHL组织中,Skp2的高表达和p27^kip1的低表达均可能与NHL的发生发展有关。

幽门螺杆菌对SGC-7901细胞增殖凋亡及p27^kip1表达的影响

目的探讨幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）对感染细胞增殖凋亡及细胞周期蛋白抑制因子p27^kip1表达的影响。方法不同浓度脚国际标准株NCTC11637分别感染胃上皮细胞株SGC-7901，测定p27^kip1蛋白及mRNA的表达、细胞增殖指数和凋亡率。结果（1）Hp在3．4×10^4～1．9×10^5CFU／ml浓度时，SGC-7901的增殖指数随却浓度增高而显著增高，而在Hp≥4．8×10^6CFU／ml时明显降低；（2）Hp≥9．6×10^5CFU／ml时，细胞凋亡率呈浓度依赖性显著增高（P〈0.01）；（3）细胞p27^kip1 mRNA表达阳性率无显著变化，而p27^kip1蛋白表达阳性率呈脚浓度依赖性显著降低（P〈0．05），与细胞凋亡率呈负相关。结论却感染可直接导致胃上皮细胞增殖与凋亡的紊乱，影响细胞周期调控蛋白p27^kip1的表达。

Survivin和p27^kip1在胆囊癌中的表达及相关性研究

目的检测胆囊癌中Survivin和p27^kip1的表达，研究它们与胆囊癌临床病理特征的关系，并探讨两者的相关性。方法采用免疫组织化学技术检测50例胆囊癌组织、20例胆囊息肉、20例胆囊炎组织中Survivin和p27^kip1表达。结果50例胆囊癌组织中39例Survivin蛋白表达阳性，22例p27^kip1蛋白表达阳性，二者表达呈负相关系；Survivin在胆囊息肉和胆囊炎标本中不表达，p27^kip1在胆囊息肉和胆囊炎标本中呈高表达；Survivin在胆囊癌中的表达与病人性别、年龄、病理分级、Nevin分期、淋巴结转移无关（P〉0．05），p27^kip1在胆囊癌中的表达与病理分级、Nevin分期、淋巴结转移有关（P〈0．05），而与年龄、性别无明显相关性。结论Survivin和p27^kip1表达异常可能在胆囊癌的发生、发展中起重要的作用，二者在胆囊癌的发生、发展中可能有相互作用；Survivin在胆囊癌中的高表达提示其可能与肿瘤的发生有关；p27^kip1有可能成为判断胆囊癌预后的有效指标之一。

p21^waf1-p27^kip1基因联合转染对乳腺癌细胞增殖和中心体复制的影响

目的探讨外源性p21^waf1-p27^kip1基因联合转染对人乳腺癌细胞细胞增殖及中心体复制的影响和意义。方法应用脂质体介导法分别将构建的pIRES-p21^waf1、pIRES-p27^kip1、pIRES-p21^waf1-p27^kip1真核表达载体，转染入常规培养的人乳腺癌细胞系MCF-7，未转染组、转染空质粒组细胞做对照，Western免疫印迹法验证转染前后p21^waf1、p27^kip1基因蛋白表达情况；噻唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线；流式细胞仪检测细胞周期DNA分布变化；免疫荧光技术检测转染前后中心体复制的变化情况。结果Western免疫印迹法证实p21^waf1、p27^kip1、p21^waf1-p27^kip1基因转染24h后，其蛋白表达量明显增多（P〈0.01），与对照组比较，各转染实验组细胞生长明显受抑制（P〈0.01），细胞周期大部分停滞于G1期，各实验组G1期和S期细胞比例依次为：（69.52±3.21）％、（18.38±2.51）％，（60.83±3.02）％、（24.52±1.89）％，（78.37±2.83）％、（15.27±1.74）％，对照组则为（47.28±2.25）％、（33.52±1.97）％，中心体复制异常的乳腺癌细胞数较转染前（13.47±0.33）％明显减少：（5.07±0.38）％，（6.28±0.35）％，（3.47±0.23）％，两两比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论外源性p21^waf1和p27^kip1基因转染可抑制人乳腺癌细胞的增殖及中心体的异常复制，二者联合转染时效果显著。提示，乳腺癌的发生、发展是多基因、多因素共同参与的过程，p21^waf1和p27^kip1在调控细胞增殖及中心体复制方面具有协同作用，对于p21^waf1、p27^kip1基因失活、低表达或不表达的乳腺癌，联合转染外源性p21^waf1、p27^kip1基因不失为一种有效的治疗手段。

乳腺癌组织中Ser10磷酸化p27^kip1的表达及意义

目的观察第10位丝氨酸磷酸化p27^kip1（P-p27Ser10）在乳腺癌组织中的表达情况，探讨其表达的临床病理意义。方法回顾性收集嘉兴市第一医院2004年1月至2005年12月行手术切除的111例乳腺癌组织标本，采用免疫组织化学EnVision二步法检测乳腺癌及相应癌旁正常组织中P-p27Ser10的表达情况并分析其与临床病理特征的相关性；提取6例新鲜乳腺癌手术标本的总蛋白并进行定量，蛋白质印迹检测乳腺癌组织与癌旁正常组织中P-p27Ser10和p27的表达；采用免疫共沉淀方法检测乳腺癌组织中P-p27Ser10与相关蛋白Jab1的结合情况。结果免疫组织化学及蛋白质印迹结果均显示，P-p27Ser10在乳腺癌组织中的表达显著高于在癌旁正常组织中的表达，本组乳腺癌组织中P-p27Ser10阳性表达率为88．3％（98／111），癌旁组织中为7．2％（8／111），两组之间差异有统计学意义（P〈0．05）；P—p27Serl0蛋白表达与肿瘤大小、腋淋巴结转移和TNM分期有关（均P〈0．05）；P—p27Ser1O与增殖指标硒-67表达呈显著正相关（r=0．582，P〈0．05），与p27表达呈负相关（r=-0．426，P〈0．05）；免疫共沉淀结果显示，在乳腺癌组织中，P—p27Ser10与Jabl蛋白结合明显增加。结论p27Ser10磷酸化参与了乳腺癌的发生发展，与乳腺癌患者的腋淋巴结转移和TNM分期有关。联合检测P—p27Ser10和p27可为乳腺癌的临床诊断及预后判断提供重要参考价值。

多发性内分泌腺瘤病1型相关的甲状旁腺肿瘤p27^KiP1及β-连环蛋白的表达

目的 分析p27^Kip1及β-连环蛋白（β-catenin）在多发性内分泌腺瘤病1型（MEN1）相关的甲状旁腺肿瘤（MHPT）组织中的表达,以探索其在MHPT发病机制中的作用.方法 收集2002年至2013年北京协和医院收治的31例MHPT患者的MHPT组织31份以及5份正常甲状旁腺（NP）组织的石蜡标本,应用免疫组织化学染色法检测p27^Kip1及β-catenin的表达情况.结果 MHPT组织中,p27^Kip1在细胞核表达为缺失、弱阳性或中等阳性（分别为12.9％、32.3％、54.8％）;细胞膜β-catenin表达为强阳性或中等阳性,细胞质β-catenin表达为中等阳性或弱阳性,未见有β-catenin表达于细胞核.MHPT组织p27 Kip1表达水平显著低于NP组织（P=0.001）,但细胞膜及细胞质β-catenin表达在MHPT组织与NP组织差异无统计学意义（P值分别为0.087,0.357）.结论 MHPT组织p27^Kip1蛋白表达显著减少,未发现β-catenin异位聚集于细胞核现象.

Skp2、P27^kip1和PTEN在人脑胶质瘤中的表达及其相互关系的研究

目的探讨S期激酶相关蛋白2（skp2）、细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白P27^kip1和抑癌基因蛋白PTEN表达与人脑胶质瘤发生、发展的关系。方法用免疫组化SP法检测52例人脑胶质瘤和8例正常脑组织标本中Skp2、P27^kip1和PTEN蛋白的表达。结果Skp2在8例正常脑组织中全部表达阴性。在52例胶质瘤标本中随着肿瘤恶性程度增高而表达增强。在低、高级别胶质瘤中的阳性率分别56％和81．5％，三者之间的表达水平差异有显著性意义（P〈0．001）。P27^kip1和PTEN在正常脑组织中表达均为强阳性，随着肿瘤恶性程度增高而表达减弱，P27^kip1和PTEN各自在低、高级别人脑胶质瘤中阳性率分别96％、77．8％和80％、55．6％。三者之间的表达水平差异有显著性意义（P〈0．01）。在52例胶质瘤标本中，Skp2表达与P27^kip1（r=-0．490，P〈0．01）和肿瘤抑制蛋白PTEN（r=-0．489，P〈0．01）表达呈负相关，PTEN表达与P27^kip1表达呈正相关（r=-0．802，P〈0．01）。结论人脑胶质瘤中Skp2蛋白过表达与P27^kip1降解及PTEN蛋白低表达有关，提示Skp2蛋白过表达可能是人脑胶质瘤发生和发展的一个重要原因。

氟伐他汀对糖尿病大鼠肾皮质p27^kip1及ERK1／2表达的影响

糖尿病肾病（DN）是糖尿病（DM）的主要微血管并发症，是当前导致终末期肾病（ESRD）的主要原因之一，因此积极研究DN的发病机制，寻找有效的药物预防DN的发生、发展，是目前亟待解决的问题。DM引起的肾脏病变早期主要表现为肾小球和肾小管肥大，而肾小球肥大与后期肾小球硬化的发生密切相关。

Jurkat细胞增殖过程中S期激酶相关蛋白2与p27^kip1的表达变化及意义

目的探讨S期激酶相关蛋白2（skp2）与p27^kip1在淋巴瘤细胞株Jurkat细胞增殖过程中的表达变化及意义。方法采用免疫沉淀法检测Jurkat细胞中p27^kip1与Skp2的结合情况；采用血清饥饿合并释放法同步化处理Jurkat细胞，再分别用Western blot技术、免疫荧光双标技术及核浆分离法检测p27^kip1和Skp2在Jurkat细胞中的表达变化及亚细胞定位。结果p27^kip1与Skp2能够相互结合。在Jurkat细胞增殖过程中，p27““蛋白表达减少，其中在细胞核内的减少更明显；Skp2蛋白表达增加，其中在细胞浆中的增加更明显。结论在Jurkat细胞增殖过程中，Skp2在细胞浆中的合成增加，并可能通过加快p27^kip1的泛素化降解使细胞核内p27^kip1显著减少，从而推动细胞周期的进程。

P27^KIP1和P57^KIP2在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨P27KIP1及P57^KIP2的表达与胃癌生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测72例胃癌组织及41例正常胃黏膜中P27^KIP1及P57^KIP2的表达。结果胃癌组织中P27^KIP1、P57^KIP2的表达率分别为31．9％和38．9％．低于正常胃黏膜的63．4％和73．2％（P〈0．01）；P27^KIP1和P57^KIP2在胃癌中的低表达均与淋巴结转移有关（P〈0．05）；胃癌中P27^KIP1与P57^KIP2的表达呈正相关（r=0．338，P〈0．05）。结论P27^KIP1、P57^KIP2的表达缺失可作为判断胃癌病情的指标。

鼻咽癌中p27^kip1表达及其与临床病理特征相关研究

目的检测p27^kip1蛋白在鼻咽癌中的表达，分析其与临床病理特征的关系。方法收集60例手术活检切取的鼻咽癌组织蜡块，与30例非肿瘤鼻咽组织石蜡标本作比较。应用免疫组织化学技术检测鼻咽癌组织中p27^kip1蛋白的表达，回顾性研究鼻咽癌患者的临床病理特征。结果p27^kip1蛋白在鼻咽癌细胞核和细胞质中均有表达。鼻咽癌组织中细胞核表达阳性率为46．7％（28／60），低于非肿瘤鼻咽组织细胞核表达的90％（27／30），P〈0．01；而在细胞质中阳性率为68．3％（41／60），显著高于非肿瘤鼻咽组织的细胞质表达的20％（6／30），P〈0．01。未发现p27^kip1蛋白在细胞核和细胞质表达与鼻咽癌原发灶的范围和局部侵犯程度有关，但p27^kip1蛋白胞核表达与淋巴结转移、远处转移和TNM临床分期有关；细胞质表达仅与淋巴结转移和TNM临床分期有关，可见p27^kip1蛋白胞核表达与临床病理的关系更为密切。结论与非肿瘤鼻咽组织相比，p27^kip1蛋白为细胞核低表达、细胞质高表达。鼻咽癌中p27^kip1蛋白存在不同于非肿瘤鼻咽组织的错误的核质定位，其在细胞核中表达的减少或丢失可能与鼻咽癌的恶性发展有关，提示p27^kip1蛋白的异常表达和定位可能涉及鼻咽癌的分期和转移。