糖尿病肾病肾间质炎症损伤程度与P2X4、NALP3表达的相关性研究

目的观察糖尿病肾病患者肾间质损伤程度与P2X4、NALP3表达水平变化的相关性。方法将45例糖尿病肾病患者设为观察组，40例肾错构瘤行切除术患者设为对照组。比较两组生化指标水平及肾小管上皮细胞P2X4、NALP3、白细胞介素-1β、白细胞介素18的表达水平。结果观察组尿素氮、血清肌苷、尿蛋白水平显著高于对照组（P〈0．01），血浆总蛋白、血浆清蛋白、肾小球滤过率水平显著低于对照组（P〈0．01）。免疫组化荧光结果显示观察组P2X4、NALP3、白细胞介素-1G、白细胞介素-1β均为高表达；激光共聚焦结果显示观察组P2X4、NALP3、白细胞介素-18、白细胞介素-18表达均显著增强。观察组P2X4和NALP3分别与尿素氮、血清肌苷、尿蛋白、肾间质炎症、。肾间质纤维化、肾小管萎缩、白细胞介素-1β和白细胞介素-18呈显著正相关（P〈0．05），与肾小球滤过率呈显著负相关（P〈0．05）。结论P2X4和NALP3的表达水平与肾间质炎症损伤程度存在显著正相关，可以作为-种新的监测指标，为临床诊断、治疗与预后评价提供参考依据。

嘌呤受体P2X4介导慢性疼痛的研究进展

慢性疼痛是一种临床常见病症,其发病机制复杂,目前临床上尚缺乏效佳、毒副作用少、针对性强的治疗方法,因此慢性疼痛的病理机制研究仍然是目前疼痛研究领域的热点。嘌呤受体激活与疼痛调制机制密切相关,嘌呤受体P2X配体门控离子通道4(purinergicreceptor P2X ligand-gated ion channel 4,P2X4R)作为嘌呤受体家族的重要成员之一,在慢性疼痛的发生发展中发挥着重要作用。研究发现,P2X4R在神经病理痛、炎性痛、癌性痛及内脏痛等慢性疼痛的形成、传导和调节中均发挥关键作用。本文就有关P2X4R在不同类型慢性疼痛中的作用及相关研究进展做一综述。

神经病理性疼痛大鼠脊髓背角小胶质细胞P2X4受体的表达及意义

目的探讨神经病理性疼痛大鼠脊髓背角小胶质细胞离子型嘌呤受体(ionotropic purinoceptor,P2X)P2X4的表达及其意义。方法雌性SD大鼠20只,随机分为坐骨神经保留性损伤(SNI)组和对照组。SNI组大鼠于左后肢制备SNI模型,对照组大鼠仅暴露坐骨神经后立即缝合手术切口。术后观测机械疼痛阈值的变化,于术后第7天断头处死大鼠,截取L4～6段脊髓,分离左右侧脊髓。采用免疫组化法检测脊髓背角P2X4受体及蛋白激酶p38MAPK的表达。结果与对照组相比,SNI模型组大鼠机械刺激50%缩爪阈值显著降低(P<0.01)。SNI模型组大鼠手术侧脊髓背角活化的小胶质细胞表面P2X4受体的表达水平(456.86±32.21)较非手术侧(106.27±12.16)明显增高(P<0.01),同时SNI模型组大鼠手术侧脊髓背角p38MAPK表达水平(399.95±32.42)较非手术侧(123.63±15.47)明显增高(P<0.01)。结论神经病理性疼痛大鼠模型脊髓背角活化小胶质细胞P2X4受体表达增加,可能通过激活p38MAPK促进了疼痛的发生。

结肠扩张刺激对P2X4受体在IBS大鼠神经中枢中表达的影响

目的观察P2X4受体在结肠扩张刺激引起的IBS大鼠骶髓后连合核(DCN)和骶髓后角中表达的变化,为探讨IBS的神经作用机制提供理论依据。方法采用免疫组织荧光化学的方法,通过对P2X4受体和小胶质细胞的标志物OX42的荧光双标记,观察其在小胶质细胞和神经元上的反应;通过免疫电镜同步观察P2X4受体与小胶质细胞和神经元的相互关系。结果对照组大鼠的DCN和骶髓后角中几乎没有发现P2X4的表达。而在IBS大鼠组,P2X4在DCN和骶髓后角神经元和小胶质细胞中表达明显增高。电镜下,在对照组的DCN和骶髓后角,少数P2X4-LI产物表达在胶质细胞突起上,此突起可与神经元胞体、轴突、树突或另外的胶质细胞突起接触。而在IBS大鼠的DCN和骶髓后角中,P2X4在抑制性突触上的表达明显增加。有的表达在突触复合体上,并且在神经元上也有发现。然而P2X4阳性产物更多的表达在胶质细胞的突起上。结论P2X4是小胶质细胞活化的启动因素,可能是IBS内脏敏感性增高的重要因素。

电针对神经病理性痛大鼠脊髓背角P2X4受体表达的影响

目的:通过观察电针干预慢性坐骨神经压迫性损伤(chronic constrictive injury,CCI)大鼠痛阈变化及脊髓背角P2X4受体的表达情况,探讨P2X4受体在电针镇痛效应中的作用。方法:18只SD大鼠随机分为3组:假模组(Sham Group)、模型对照组(CCI Group)和电针干预组(EA Group),CCI组及EA组结扎坐骨神经造成CCI疼痛模型,各组于术前(0 d)及术后20 d分别测量患侧足机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL),EA组于术后第5天电针"足三里"-"阳陵泉"连续14 d,1次/d。术后20 d取各组大鼠L4~6脊髓段用免疫荧光检测P2X4受体表达情况。结果:与术前比较,CCI大鼠痛阈明显降低,出现痛觉过敏(P<0.01),而电针干预后EA组较CCI模型组痛阈明显增加(P<0.05)但仍低于假模组。术后20 d EA组较CCI组脊髓背角中P2X4受体表达显著减少(P<0.05)。结论:脊髓背角P2X4受体参与了大鼠神经病理性疼痛的发生发展,电针可能通过抑制大鼠脊髓中P2X4受体的表达而产生镇痛作用。

P2X4受体在大鼠胫骨癌痛中的变化及可能机制

目的:观察骨癌痛大鼠脊髓P2X4受体表达的变化,并探讨其可能机制。方法:72只SD大鼠随机分为两部分(6组),第一部分:空白对照组(K组,n=14)、假手术组(J组,n=14)、模型组(M组,n=20)。K组不给予任何处理,J组和M组分别在左胫骨上端注射PBS液和Walker256乳腺癌细胞5μl(2×107/ml)。各组分别于术前1天,术后3、6、9、12、15、18天时随机各取8只大鼠测定左后肢机械缩足反射阈值(MWT)。K组和J组于术后12天,M组于术后6、12、18天时各处死6只大鼠,取L4～6脊髓组织,用免疫组化法检测P2X4受体表达;第二部分:溶媒对照组、TNP-ATP组、PPADS组,每组8只。各组从骨癌痛造模术后第7天起,连续5天分别鞘内给予双蒸水(ddH2O)、PPADS(100nmol)、TNP-ATP(30nmol)各10μl,并于建模后第12天取L4～6脊髓,用免疫组织化学方法检测脊髓P2X4受体及p-ERK的表达。结果:与K组和J组比较,M组大鼠术后第6～18天,左后肢MWT进行性下降,P2X4受体(P2X4R)阳性细胞数明显增加(P<0.01)。连续5天鞘内注射TNP-ATP可抑制由胫骨癌痛引起的脊髓P2X4受体及p-ERK表达增加(P<0.05),而PPADS组和ddH2O溶剂组却没有此种效应(P>0.05)。结论:脊髓P2X4受体表达上调可能参与了大鼠胫骨癌痛的产生和维持,其机制可能与激活下游ERK通路有关。

乙酸致内脏痛大鼠孤束核及胸髓中P2X4受体表达的变化

本文探讨了乙酸致内脏痛模型大鼠孤束核及胸髓背角内P2X4受体表达的时程变化。将SD大鼠随机分为6组:空白对照组、内脏痛10、30、60、90和180min组,分别检测各组大鼠行为学以及孤束核、胸髓背角浅层内P2X4受体的表达变化。结果表明,乙酸致内脏痛后各组大鼠均出现典型的扭体行为,内脏痛指数在60、90和180min组最高,30min组其次,10min组最低,各组之间的差别有统计学意义(P<0.01);各内脏痛组P2X4阳性产物在孤束核及胸髓背角浅层表达明显增高,产物呈绿色点状,见于细胞胞膜、突起、胞浆,其时程变化是10min出现表达,30min进一步增高,60min达到顶峰,90min开始下降,至180min进一步降低。此结果表明延髓孤束核及胸髓背角浅层内的P2X4受体在内脏伤害性刺激后表达增加,60min达到高峰。

电针合谷对牙髓痛大鼠模型三叉神经节和牙髓中P2X4受体的影响

目的观察电针合谷对实验性牙髓痛大鼠三叉神经节和牙髓中P2X4受体表达的影响.方法成年雄性SD大鼠42只,随机分为正常组(N组)、对照组(C组)、牙髓痛组(M组)、拮抗剂组(A组)、电针组(E组)、拮抗剂+电针组(AE组),每组7只.N组不做任何处理;C组在钻好的牙髓腔内注入与M组等量的生理盐水,浸润后将牙洞封闭;M组在钻好的牙髓腔内注入大肠杆菌内毒素(LPS),浸润后牙洞封闭;A组造模方法同M组,在注入LPS时,将A-317491同时注射进牙髓;E组同M组造模后,电针双侧合谷,留针30 min,每日1次,共治疗3次;AE组按A组造模后按E组方法治疗.每日治疗后观察大鼠的行为学变化及体质量变化,第4天处死所有大鼠,运用RT-PCR方法分别检测大鼠三叉神经节和牙髓中P2X4受体(mRNA)表达,比较各组P2X4受体mRNA相对表达量.结果 A组、E组、AE组行为学变化均显著低于M组(P<0.01);E组、AE组体质量差值均显著高于M组(P<0.01);AE组体质量差值显著高于A组和E组(P<0.01);E组体质量差值高于A组(P<0.05);E组、AE组三叉神经节和牙髓中P2X4受体mRNA表达量低于M组(P<0.01).结论 LPS诱导大鼠牙髓痛时三叉神经节和牙髓P2X4受体mRNA表达量增加,电针合谷可降低LPS诱导牙髓痛大鼠P2X4受体mRNA表达,这可能是电针合谷镇痛的机制.

大鼠脑外伤时嘌呤受体P2X4受体的表达

目的:观察大鼠脑外伤后嘌呤受体亚型P2X4的表达水平。方法:免疫组织化学和半定量RT-PCR。结果:脑外伤后P2X4受体表达水平迅速升高,并在损伤后较长的时间内维持高的表达水平;脑外伤早期,损伤区P2X4免疫反应阳性细胞主要是圆形细胞,中后期主要以具有突起的细胞为主。结论:脑外伤早期,损伤区P2X4受体免疫反应阳性细胞主要为小胶质细胞,中后期可能星形胶质细胞为多;由此推测P2X4参与脑外伤时大脑生理或病理生理功能的调节。

结肠扩张刺激对肠易激综合征大鼠DCN核团及骶髓后角中P2X4及P2X7受体表达的影响

目的观察肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)致内脏高敏感化大鼠在结肠扩张刺激时大鼠腹直肌肌电变化,并观察骶髓后联合核(dorsal commissural nucleus,DCN)和脊髓后角中P2X4和P2X7受体表达的变化情况,为探讨IBS内脏敏化的神经机制提供理论依据。方法以旋毛虫感染大鼠建立IBS大鼠模型,并以正常大鼠作为对照,实验共分4组:正常大鼠无刺激组,正常大鼠结肠扩张刺激组,IBS大鼠无刺激组,IBS大鼠结肠扩张刺激组。采用免疫组织荧光化学方法,将P2X4和P2X7受体分别标记,观察其在骶髓后角及DCN核团上的表达变化,并同步测定大鼠腹直肌肌电变化。结果 IBS结肠刺激组大鼠腹直肌肌电变化、大鼠骶髓后角及DCN核团中的P2X4和P2X7受体表达较正常大鼠对照组及IBS未刺激组均显著增强。结论 P2X4和P2X7受体可能是IBS致内脏敏感性增高的重要因素。

小胶质细胞-P2X4受体在神经病理性疼痛中的研究进展

神经病理性疼痛是一种具有代表性的慢性疼痛,对患者的心理及生理均具有极大的影响。周围神经损伤后脊髓小胶质细胞活化及其表面P2X4受体表达上调。P2X4受体是ATP受体的离子型亚型,在神经损伤的病理条件下受多种因素调节,而抑制小胶质细胞活化及其P2X4受体的高表达可减轻神经病理性疼痛,文章主要就小胶质细胞-P2X4受体在神经病理性疼痛发病过程中作用的研究进展进行综述。

小胶质细胞P2X4受体:探索视网膜光损伤的新靶点

视网膜小胶质细胞是一种视网膜固有的巨噬细胞,具有维持视网膜自身稳定的功能,在视网膜光损伤等视网膜病变中发挥重要作用,是我们探索视网膜疾病研究的新方向。P2X4受体是一种表达于小胶质细胞的ATP门控离子通道受体,对于小胶质细胞的激活和存活具有重要的调控作用,且已有大量文献证实其在视网膜中的表达。故本文将从视网膜小胶质细胞在光损伤中的作用及P2X4受体对光损伤中小胶质细胞的调控作用进行综述。

小剂量氯胺酮抑制慢性神经痛大鼠大脑皮质P2X4受体表达

目的观察小剂量氯胺酮腹腔注射对慢性坐骨神经收缩损伤(CCI)大鼠的镇痛效应及其对大鼠大脑皮质P2X4受体表达的影响,探讨其可能的镇痛机制。方法24只SD大鼠随机分为假手术组、CCI组及氯胺酮治疗组(n=8)。CCI组及氯胺酮治疗组大鼠均制备慢性坐骨神经痛CCI模型;术后3 d测定热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)确定痛觉过敏形成后,氯胺酮治疗组大鼠腹腔注射小剂量氯胺酮(10 mg/kg),CCI组腹腔注射等量的生理盐水,给药至术后7 d。假手术组大鼠单纯坐骨神经暴露,不用肠线结扎,也不给药治疗。分别于术前1 d、术后1、3、7 d用热辐射法测定TWL;术后7 d用免疫组织化学法检测大鼠大脑皮质P2X4受体的表达。结果术前1 d三组大鼠TWL无统计学差异;假手术组术后术侧TWL轻度下降,但与术前相比无统计学差异。与术前及CCI组及假手术组相比,氯胺酮治疗组术后3 d始TWL呈进行性下降,以术后7 d为甚(P<0.05);术后7 d氯胺酮治疗组TWL较CCI组显著升高(P<0.05),但仍低于假手术组(P<0.05)。与假手术组相比,CCI组及氯胺酮治疗组大鼠术侧大脑皮质P2X4受体表达显著增加(P<0.01);氯胺酮治疗组P2X4受体表达明显少于CCI组(P<0.05)。结论小剂量氯胺酮腹腔注射可部分缓解慢性神经痛大鼠的痛觉过敏症状,可能部分与其直接或者间接抑制大脑皮质P2X4受体表达有关。

小檗碱抗小鼠视网膜光损伤及P2X4受体调节作用研究

目的从小胶质细胞P2X4受体角度揭示小檗碱抗视网膜光损伤的部分作用机制。方法将健康清洁级小鼠完全随机分为空白组、LD组和BBR组,后两组持续给予照度为10000±1500 Lux的光照4 h建立视网膜光损伤模型,48 h后取材,比较各组小鼠视网膜形态学变化,并观察小胶质细胞及P2X4在视网膜中的阳性表达。结果与空白组比较,LD组小鼠视网膜明显变薄,细胞凋亡明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05),而BBR可缓解其凋亡情况;与空白组比较,LD组小鼠视网膜外核层(Outer Nuclear Layer,ONL)的小胶质细胞数量和P2X4表达均明显增加(P<0.05),而BBR组的小胶质细胞数量和P2X4表达均降低,以P2X4的表达降低最为明显(P<0.05)。结论小檗碱具有较好的抗视网膜光损伤的作用,这可能与BBR通过P2X4受体调控小胶质细胞的活动有关。

鞘内和腹腔注射米诺环素对糖尿病性神经痛大鼠脊髓P2X4受体表达的影响

目的:评价鞘内和腹腔注射米诺环素对糖尿病性神经痛大鼠机械痛阈和脊髓P2X4受体表达的影响。方法:78只健康雄性Wistar大鼠随机分为5组:Ⅰ组(正常对照),实验组(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组)用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)制备糖尿病模型;Ⅱ组鞘内注入10μL生理盐水;Ⅲ组,腹腔内注入与V组等量的生理盐水;Ⅳ组鞘内注入米诺环素;Ⅴ组腹腔注入米诺环素。各实验组从建糖尿病模型前1d起每日注入米诺环素或生理盐水,共28d。测定各组50%PWT。注入STZ后3、7、14、21、28d从各组随机取出3只大鼠,取腰段脊髓,测定P2X4受体表达。结果:与I组相比,实验组均在注药后14d后50%PWT降低;与Ⅱ组相比,Ⅳ组在注药14d后50%PWT回升;与Ⅲ组相比,Ⅴ组在注药后各时点50%PWT无明显差异。与Ⅰ组相比,各实验组大鼠脊髓P2X4受体mRNA在注药后各时点表达量增加;与Ⅱ组相比,Ⅳ组在注药后各时点脊髓P2X4受体mRNA表达下降;与Ⅲ组相比,Ⅴ组在注药后各时点脊髓P2X4受体mRNA表达无明显差异。结论:脊髓小胶质细胞通过P2X4受体表达参与了糖尿病神经痛发生和维持,米诺环素鞘内应用可抑制P2X4受体表达,并改善了神经痛。

离子通道受体P2X4的结构及生物学功能

P2X4受体是P2X受体家族的成员。目前 ,已从人、大鼠、小鼠、鸡胚和非洲爪蟾的组织中获得了全长cDNA。P2X4受体分布广泛 ,在被ATP及其同系物激活后 ,引起细胞内钙离子浓度显著升高 ,将信号传递给下游的信号分子。

P2X4受体在大鼠脊髓小胶质细胞中的表达

目的 研究神经病理性疼痛大鼠脊髓小胶质细胞P2X4受体的表达及意义.方法 40只健康SD大鼠随机分为脊神经结扎组（SNL组n=20）及对照组（Con组n=20）.SNL组结扎腰5脊神经,对照组仅暴露脊神经后不结扎立即缝合.术后观测2组机械痛阀值的变化,SNL组于术后第1、7、14、21 d处死4只大鼠,取L4～6段脊髓,用免疫组化及Western印迹法测定分析P2X4受体及OX-42的表达.结果 SNL组P2X4表达对照组显著增加.结论 神经病理性疼痛大鼠脊髓小胶质细胞P2X4受体表达明显增加.

电针足三里穴对内脏痛大鼠腰髓神经元胶质细胞内P2X4受体表达和超微结构的影响

目的:观察电针足三里穴对直结肠扩张性内脏痛模型大鼠腰髓背角内P2X4受体表达及神经元和胶质细胞形态学超微结构关系。方法:18只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、结直肠扩张内脏痛模型组(内脏痛组)、电针足三里穴后结直肠扩张内脏痛模型组(电针组)。采用直结肠扩张(CRD)作为内脏的伤害性刺激。取脊髓腰膨大部位切片进行抗P2X4受体免疫染色,电镜观察脊髓腰膨大背角浅层内神经元和胶质细胞超微结构的变化。结果:行为学观察到电针组基础痛阈平均值较内脏痛组明显升高(63.3±6.45→31.2±2.77)mm Hg,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。电镜观察到大鼠脊髓背角有P2X4受体阳性免疫反应产物分布在神经元和胶质细胞的细胞膜上;内脏痛组和电针组中神经元与胶质细胞内部存在突触样结构、缝隙连接等多种超微结构联系。结论:脊髓背角内P2X4受体免疫阳性神经元和胶质细胞存在超微结构改变可能是电针镇痛作用的形态学基础。

P2X4Rs在脑缺血性损伤后小胶质细胞活化及炎症反应中的作用

P2X4受体（P2X4 receptor，P2X4R，P2X4Rs）是ATP受体（P2-purinoceptors，P2）的一个亚型，广泛分布在中枢神经系统，其中脑内主要分布于海马、嗅球及大脑皮层等。研究发现脑缺血缺氧情况下，损伤后的神经元释放ATP至胞外，激活其配体门控性通道P2X受体，进一步激活小胶质细胞，而过度活化的小胶质细胞可释放一氧化氮合酶、促炎因子等物质介导炎症反应进一步损伤神经元，而阻断小胶质细胞的过度活化可减少炎症因子的释放，降低缺血导致的神经损伤。因此抑制小胶质细胞的过度活化、调控小胶质细胞表面或细胞内表达的受体或蛋白分子、拮抗小胶质细胞产生的神经毒性因子、促进小胶质细胞分泌神经保护性物质、阻断小胶质细胞介导的炎症反应等成为脑缺血治疗的新思路。本文对P2X4受体在脑缺血性损伤后小胶质细胞活化及其介导炎症反应中的作用作一综述。

P2X4受体在糖尿病神经病理性疼痛模型中的作用

目的通过建立糖尿病神经病理性疼痛大鼠(DM)模型,观察P2X4受体在糖尿病神经病理性疼痛大鼠模型中的作用和意义。方法 40只SD大鼠随机分为制模组(DM组,n=30)和正常对照组(C组,n=10)。按60mg/kg一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型。于STZ注射前、注射后第7、14、28d分别测定大鼠血糖、体重以及机械性痛阈变化。DM组又均分为制模1周组(DM1组)、制模2周组(DM2组)、制模4周组(DM4组)三个亚组。在制模前及制模后1、2、4周利用von Frey hairs法测定大鼠机械痛阈,并通过real-time法测定每个时间点大鼠脊髓背根神经节(DRG)P2X4R的表达水平。结果 DM组机械痛阈在制模1周后即明显下降,并持续至4周;在制模1周以后脊髓背根神经节内P2X4R表达水平出现显著上调。大鼠P2X4R表达水平变化与机械痛阈的下降存在相关性。结论糖尿病早期大鼠脊髓背根神经节P2X4R表达即出现上调,并与疼痛相关。这些结果说明P2X4R可能在DM大鼠周围神经疼痛的发生及痛敏的维持阶段起重要作用。