GARP、Foxp3及TGF-β在桥本甲状腺炎病人PBMC中的表达及意义

目的:探讨桥本甲状腺炎(HT)病人外周血单个核细胞(PBMC)中糖蛋白A重复序列为主的蛋白(GARP)、叉头框蛋白p3(Foxp3)、转化生长因子β(TGF-β)mRNA表达水平和意义。方法:选取HT病人32例作为观察组,选取同期健康体检者32名作为对照组。采用化学发光免疫法测定2组血清促甲状腺激素(TSH)、总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、总甲状腺素(TT4)水平,放射免疫法检测甲状腺抗体TmAb、TgAb水平。采用实时荧光定量PCR检查HT病人PBMC中GARP、Foxp3、TGF-βmRNA,分析HT病人PBMC中GARP、Foxp3、TGF-βmRNA表达量与甲状腺功能指标水平的相关性。结果:2组TT3、TT4、TSH水平差异均无统计学意义(P>0.05),观察组TgAb和TmAb水平均明显高于对照组(P<0.01)。观察组GARP、Foxp3、TGF-βmRNA表达水平均明显低于对照组(P<0.01)。Pearson相关分析显示,HT病人PBMC中GARP mRNA表达水平与TgAb水平呈负相关关系(P<0.05),与TT3水平呈明显正相关关系(P<0.01)。结论:HT病人PBMC中GARP、Foxp3、TGF-βmRNA表达降低。GARP mRNA与TgAb水平呈负相关关系,与TT3水平呈明显正相关关系,可能与HT的发生、发展相关。

乳腺癌组织中FOXP3、CMTM6、Shoc2表达及其临床意义

目的探讨叉头框蛋白P3(FOXP3)、趋化素样因子超家族6(CMTM6)、Shoc2在乳腺癌组织中的表达及与患者临床病理特征、预后的关系。方法选取51例女性乳腺癌患者为研究对象,采集癌组织与癌旁正常组织,以免疫组织化学法测定FOXP3、CMTM6、Shoc2的阳性表达。收集患者的年龄等一般资料,分析FOXP3、CMTM6、Shoc2表达与乳腺癌临床病理特征之间的关系;随访3年,分析三项指标表达与患者预后的关系。结果癌组织FOXP3、CMTM6、Shoc2阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。FOXP3、CMTM6、Shoc2表达与乳腺癌患者的年龄、体重指数(BMI)、肿瘤大小无关(P>0.05);FOXP3、CMTM6、Shoc2表达与患者的分化程度、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。FOXP3、CMTM6、Shoc2阳性表达患者的3年生存率低于阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论FOXP3、CMTM6、Shoc2在乳腺癌组织内呈高表达,与患者的分化程度、临床分期、淋巴结转移联系紧密,参与疾病的发生与发展,且三项指标表达水平越高,则患者预后越差。

抗磷脂综合征患者血清sVCAM-1、HMGB1与NLRP3炎症小体信号通路与血栓事件的关系

目的探讨抗磷脂综合征(APS)患者血清可溶性血管细胞黏附分子-1(sVCAM-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与NOD样受体P3(NLRP3)炎症小体信号通路和血栓事件的关系。方法选择2021年6月至2023年6月上海市浦东新区人民医院收治的124例APS患者作为APS组和67例健康志愿者作为对照组。检测所有受检者的血清sVCAM-1、HMGB1水平、外周血单个核细胞的NLRP3信使核糖核酸(mRNA)和下游炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平。采用Pearson相关性分析血清sVCAM-1、HMGB1水平与外周血单个核细胞的NLRP3 mRNA表达、IL-1β和IL-18水平的相关性。根据是否发生血栓事件将APS患者分为血栓组(n=32)和非血栓组(n=90)。采用多因素Logistic回归分析APS患者发生血栓事件的影响因素。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析sVCAM-1、HMGB1预测APS患者发生血栓事件的价值。结果APS组患者的血清sVCAM-1、HMGB1、IL-1β和IL-18水平以及外周血单个核细胞的NLRP3 mRNA分别为(806.35±204.75)μg/L、(125.42±24.57)μg/L、(13.62±3.09)pg/mL、(16.24±3.72)pg/mL、1.62±0.42,明显高于对照组的(395.12±77.24)μg/L、(35.01±10.30)μg/L、(3.15±0.67)pg/mL、(4.02±1.13)pg/mL、0.85±0.23,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析结果显示,APS组患者的血清sVCAM-1、HMGB1水平与外周血单个核细胞的NLRP3 mRNA以及血清IL-1β和IL-18水平均呈正相关(P<0.05);血栓组患者的血清sVCAM-1、HMGB1水平分别为(915.35±70.28)μg/L、(136.42±10.17)μg/L,明显高于非血栓组的(767.59±61.43)μg/L、(121.51±15.03)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);经多因素Logistic回归分析结果显示,3个抗体阳性、高水平sVCAM-1、HMGB1是APS患者发生血栓事件的危险因素(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清sVCAM-1联合HMGB预测APS患者血栓事件的曲线下面积(AUC)为0.885,高于单独预测(P<0.05)。结论APS患者血清sVCAM-1、HMGB1水平均增高,且与NLRP3及其下游炎症因子水平增加、血栓事件发生有关,NLRP3炎症小体信号通路的激活可能进一步促进血栓形成。

甘蔗条纹花叶病毒 P3 蛋白与甘蔗 Rubisco 大亚基互作的研究

该研究以甘蔗条纹花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)的P3蛋白(SCSMV-P3)为诱饵,采用酵母双杂交技术(yeast two-hybrid system,Y2HS)从甘蔗酵母文库中筛选到1个编码核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase,Rubisco)大亚基的基因,命名为ScRbcL。序列分析表明,该基因开放读码框(open reading frame,ORF)长度为1 337bp,编码478个氨基酸残基。Y2HS和双分子荧光互补(bimolecular flourescence complementation,BiFC)实验表明,ScRbcL与SCSMV-P3存在互作关系。研究认为SCSMV-P3与ScRbcL的互作可能是SCSMV侵染甘蔗导致花叶症状发生的分子基础。

针刺对胚胎着床障碍大鼠CD4^+ CD25^+ Foxp3^+调节性T细胞的影响

目的:观察针刺对胚胎着床障碍大鼠CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的影响。方法:144只孕鼠随机分为对照组(N)、米非司酮组(M)、米非司酮+针刺组(A)和米非司酮+黄体酮组(W),每组随机再分为6 d组、8 d组和10 d组。其中M组、A组和W组妊娠1 d给予米非司酮-麻油溶液造模,N组则给予等量麻油溶液。同时,每天下午A组固定并行针刺三阴交和后三里,N组和M组仅固定,W组肌肉注射黄体酮,直到处死当天结束。统计孕鼠胚胎着床数,用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和子宫内膜的CD4+Foxp3+Treg细胞的比例,Western blotting和real-time PCR测定着床点的子宫内膜Foxp3的表达。结果:与N组相比,M组的着床胚胎数、外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和子宫内膜CD4+Foxp3+Treg细胞的比例、着床点子宫内膜Foxp3蛋白和mRNA的表达均明显下降(P<0.05);与M组相比,A组和W组的着床胚胎数、外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和子宫内膜CD4+Foxp3+Treg细胞的比例以及着床点子宫内膜Foxp3蛋白和mRNA的表达均有不同程度地升高。结论:针刺改善胚胎着床障碍大鼠的胚胎着床可能与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的调节密切相关。

脊髓背角p38MAPK活化在瑞芬太尼诱发术后痛觉过敏中的作用

目的：探讨脊髓背角磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）在瑞芬太尼诱发术后痛觉过敏中的作用。方法：取鞘内置管成功的雄性SD大鼠40只,体重230~270 g,采用数字表法将其随机分为5组：对照组（C组）、术后切口痛组（I组）、瑞芬太尼组（R组）、p38MAPK特异性抑制剂SB203580组（S组）和SB203580的溶媒二甲基亚砜DMSO组（D组）。C组、I组、R组大鼠鞘内分别给予NS 10μl,S组和D组大鼠鞘内分别给予2.65 mmol SB203580 10μl和溶剂2%DMSO 10μl;I组大鼠在1.5%异氟烷吸入麻醉下行右侧跖底切口手术,C组大鼠不行右侧跖底手术,其余三组均在瑞芬太尼持续泵注下行右侧跖底切开手术。采用热辐射刺激仪和von Frey纤维丝分别测定双侧后爪热刺激缩爪潜伏期及机械性痛阈。应用免疫组织化学法检测脊髓背角p-p38MAPK表达的变化。结果：与I组比较,R组、D组在术后4 h、1 d、2 d、3 d双侧跖底热刺激缩爪潜伏期、机械性痛阈值均降低,双侧脊髓背角p-p38MAPK表达增多;与R组比较,S组双侧跖底的机械性痛阈值、手术侧跖底热刺激缩爪潜伏期值增高,双侧脊髓背角p-p38MAPK表达减少。结论：脊髓背角p38MAPK活化可能参与了瑞芬太尼诱发的术后痛觉过敏。

口蹄疫病毒非结构蛋白P3区的基因序列及分析

以口蹄疫Akesu/ 5 8分离株的 5 3代牛舌皮病料为材料 ,采用RT PCR法 ,扩增和克隆了两个约 1.5kb的DNA片段。核酸序列测得结果对接后 ,涵盖了全部P3区的基因序列。口蹄疫Akesu/ 5 8分离株基因组P3区的核酸序列共计 2 ,72 4nt,包括一个终止密码子TAA ,共编码 90 7个氨基酸 ;其中非结构蛋白 3A的基因是 45 9nt,编码 15 3个氨基酸 ;3个 3B(VPg)基因分别是 6 9、72和 72nt,氨基酸分别为 2 3、2 4和 2 4;3C是 6 39nt,2 13个氨基酸 ;3D是1,413nt ,471个氨基酸。各蛋白间由Glu/Gly(Ser)连接。序列比较显示 :3A的C端易变 。

缬沙坦对血管平滑肌细胞增殖、迁移及p-ERK1/2、p-P38表达的影响

目的观察缬沙坦（Val）对血管紧张素1I（AngⅡ）刺激下大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）的增殖与迁移及对p-ERK1／2、P—P38表达的影响。方法组织贴块法培养VSMCs，取3～5代细胞进行实验。采用MTT法检测Val对AngⅡ诱导下细胞增殖的影响，采用划痕试验法进行细胞迁移实验，采用蛋白质印迹法检测VSMCs中ERK1／2、PERK1／2、P38、p-P38的表达。结果（1）Angll能明显促进VSMCs的增殖，AngⅡ促进VSMCs增殖的作用能被Val和PD98059所抑制，并且Val呈浓度依赖性抑制VSMCs增殖。SB23015能明显促进VSMCs增殖。（2）细胞经AngⅡ作用后，迁移活性明显增加，Val及PD98059抑制AngⅡ诱导的大鼠VSMCs迁移，但SB23015作用与之相反。（3）Va1和PD98059能抑制AngⅡ的促VSMCs胞内PERKl／2表达的作用，而SB23015则能增强这种作用。Val和SB23015能抑制AngⅡ的促VSMCs胞内PP38表达的作用，而PD98059则对此无显著影响。（4）Val单独作用于VSMCs时，对细胞的增殖、迁移及P～ERK1／2、P—P38的表达均无明显影响。结论（1）Val呈浓度依赖性抑制AngII诱导VSMCs的增殖和迁移。（2）Val抑制AngⅡ诱导VSMCs的增殖和迁移与其抑制AngⅡ诱导的PERK1/2的表达相关。（3）P—P38对AngⅡ诱导的p—ERK1／2的激活起负调节作用。

P38MAPK信号通路与uPA在卵巢癌细胞及组织中表达的相关性

背景与目的:P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)信号通路参与多种肿瘤的发生、发展和转移过程,尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)在肿瘤浸润和转移中发挥着重要作用。本实验研究卵巢癌组织中P38MAPK、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(serine threonine kinase,AKT)及uPA的表达与临床病理特征的关系,并分析上述蛋白与u PA表达的相关性,探讨P38MAPK信号通路与uPA在卵巢癌细胞及组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学法检测49例卵巢癌组织中u PA、P38MAPK、ERK和AKT蛋白的表达,采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测不同卵巢癌细胞系HO8910、HO-8910PM、SKOV3和CAOV3中uPA和P38MAPK蛋白的表达,使用特异性抑制剂SB203580阻断P38MAPK信号通路后检测u PA蛋白表达水平的变化。结果:uPA、P38MAPK、ERK和AKT蛋白在卵巢癌组织中的表达阳性率分别为61.22%、57.14%、53.06%和55.10%。uPA蛋白的表达与P38MAPK呈正相关(r=0.865,P=0.001),且与卵巢癌组织的临床病理分期(P=0.029)、分化(P=0.03)和转移程度(P淋巴=0.022,P大网膜=0.012)有关,而与患者的年龄(P=0.754)及组织学类型(P=0.652)无关。ERK、AKT蛋白的表达与卵巢癌淋巴结转移(PERK=0.011,PAKT=0.022)和大网膜转移(PERK=0.006,PAKT=0.000)有关,而与患者的年龄(PERK=0.000,PAKT=0.022)、组织类型(PERK=0.771,PAKT=0.245)及病理分期(PERK=1.000,PAKT=0.254)无关。卵巢癌细胞系HO-8910PM中uPA蛋白的表达水平明显高于HO8910、SKOV3和CAOV3细胞系,使用SB203580阻断P38MAPK信号通路后可降低uPA蛋白的表达,且随着SB203580浓度升高u PA蛋白表达水平逐渐降低。卵巢癌中P38MAPK及u PA蛋白的表达与卵巢癌的预后显著相关(Log-rank=3.897和11.044,P=0.048和0.001)。结论:卵巢癌组织中P38MAPK信号通路处于激活状态;P38MAPK信号通路的激活可上调u PA的表达,促进卵巢癌的恶性进展;P38MAPK信号通路和u PA可能在卵巢癌侵袭和转移的过程中发挥重要作用。P38MAPK和uPA蛋白有望成为卵巢癌预后评估的重要指标。

带PTD的小鼠Foxp3 PRD缺失突变体对小鼠脾混合淋巴细胞反应的影响

目的:构建和表达带蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)的Foxp3(forkhead boxP3)PRD缺失突变体(PTD-ΔPRD)融合蛋白,并探讨其对脾混合淋巴细胞反应的影响。方法:应用PCR技术扩增获得小鼠ΔPRD片段核酸序列,将其分列插入到带PTD的pET28a-PTD和pET28a-PTD-eGFP原核表达载体中,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中表达融合蛋白,利用镍柱获得并复性融合蛋白;Western印迹鉴定目的蛋白表达的正确性、流式细胞术和Western印迹检测融合蛋白穿膜进入小鼠T淋巴细胞瘤株EL-4细胞中的能力、双向混合淋巴细胞反应分析融合蛋白对T淋巴细胞增殖的影响。结果:融合蛋白可在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中表达,并获得了大量纯化的融合蛋白。流式细胞术和Western印迹显示融合蛋白穿越细胞膜进入EL-4细胞核中,混合淋巴反应初步证明融合蛋白具有抑制T淋巴细胞增殖的功能。结论:成功表达小鼠PTD-ΔPRD Foxp3融合蛋白,该融合蛋白能有效进入细胞核内,抑制T淋巴细胞增殖。

三株牛瑟氏泰勒虫P32表面蛋白基因的克隆与序列分析

为分析我国分离的3株牛瑟氏泰勒虫P32基因序列,根据GenBank上登录的牛瑟氏泰勒虫P32表面蛋白基因序列设计合成1对引物,用PCR方法分别扩增出牛瑟氏泰勒虫辽阳株、宁县株和汶川株的P32基因片段,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-T Easy载体上,将经PCR鉴定和EcoRⅠ酶切鉴定为阳性的重组质粒进行测序。结果表明,克隆的这3株牛瑟氏泰勒虫P32基因片段长度均为875 bp,编码283个氨基酸。核苷酸同源性分析表明,该基因辽阳株与宁县株的同源性最高,为99.4%,汶川株与这2株的同源性分别是92.1%和91.9%,而我国辽阳株与日本株(AB016280)、俄罗斯株(AB016279)的同源性较高,分别为99.8%和99.6%。

亚洲1型口蹄疫病毒RS株非结构蛋白P3区基因特征分析

经RT-PCR扩增得到一株口蹄疫亚洲1型流行毒株的非结构蛋白P3基因核苷酸序列,与其他代表性参考毒株的P3基因进行比较,分析该毒株P3区基因特征。结果表明,该毒株P3基因含有2721个核苷酸,编码907个氨基酸;其中非结构蛋白3A的基因长度为459bp,编码153个氨基酸;3个3B(VPg)基因长度分别是69、72、72bp,分别编码23、24、24个氨基酸;3C基因长度为639bp,编码213个氨基酸;3D基因长度为1410bp,编码470个氨基酸。氨基酸序列比较分析显示,3A基因C末端比其他基因更容易变异,根据3A基因构建的系统进化分析提示该流行毒株与YNBS/58和IND 321/01亲缘关系较近,属同一亚系谱。

食管癌患者根治手术前后外周血中GATA3、Foxp3 mRNA的表达及其意义

目的研究食管癌患者根治手术前后外周血中GATA结合蛋白3(GATA3)、叉头蛋白P3(Foxp3)mRNA的表达及其意义。方法选取196例食管癌患者为病例组,另选同期的60例体检健康者作为正常组,采用定量PCR检测手术前后患者外周血单核细胞中GATA3、Foxp3 mRNA表达,用流式细胞仪检测外周血样本中CD_(3)^(+)、CD _(4)^(+)T细胞的表达水平,分析GATA3、Foxp3 mRNA表达与食管癌临床病理特征及患者预后的关系。结果病例组手术前的GATA3、Foxp3 mRNA表达水平高于手术后1周和正常组,CD_(3)^(+)、CD _(4)^(+)T细胞水平低于手术后1周和正常组(P<0.05);病例组手术后1周与正常组的GATA3、Foxp3 mRNA、CD_(3)^(+)、CD _(4)^(+)T细胞水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不同TNM分期、病理分级、肿瘤大小和淋巴结转移的食管癌患者术前GATA3 mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同TNM分期、淋巴结转移的食管癌患者术前Foxp3 mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同TNM分期、病理分级、肿瘤大小、淋巴结转移、GATA3、Foxp3 mRNA表达的食管癌患者1年生存率比较,差异有统计学意义(P<0.05);TNM分期晚(RR=1.610)、Foxp3高表达(RR=1.473)是影响食管癌患者预后的危险因素,差异有统计学意义(P<0.05)。结论食管癌患者术前的GATA3、Foxp3 mRNA呈现高表达,行根治术后水平有所下降。临床应重视Foxp3的高表达,其对患者的预后有重要意义。

高迁移率族蛋白B1对小鼠调节性T细胞Foxp3表达的影响

目的观察高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)对调节性T细胞(regulatory Tcell,Treg)叉头翼状螺旋转录因子(forkhead/winged helix transcription factorp3,Foxp3)基因及蛋白表达的影响,并对其机制进行初步探讨。方法免疫磁珠法分离正常BALB/c小鼠脾脏Treg。采用固相包被抗-CD3及可溶性CD28辅助活化,给予HMGB1刺激,观察HMGB1刺激与Foxp3基因及蛋白表达的时间-效应关系及剂量-效应关系。结果经HMGB1刺激后的TregFoxp3蛋白表达于24～72h明显下调(P<0.05,P<0.01),其中以作用48、72h后表达下调尤为显著(P<0.01);给予不同剂量HMGB1刺激72h后,10、100、1000ng/ml的HMGB1均可诱导Foxp3表达减弱(P<0.05,P<0.01),其中HMGB1的浓度在1000ng/ml时Foxp3表达下调最明显。Foxp3mRNA表达呈现出与蛋白表达相同的时间、剂量依赖关系。结论HMGB1通过诱导TregFoxp3mRNA表达下调,进一步影响其蛋白产物合成,从而影响Treg免疫调节活性。

3×P3-eCFP基因在中华蜜蜂幼虫中瞬时表达的研究

本研究用显微注射法将PiggyBacc转座子载体pXL-BacII-ECFP导入中华蜜蜂幼虫,并利用荧光显微镜检测了转基因载体上的报告基因3×P3-eCFP的表达情况。实验结果显示,注射外源DNA 4 h后,eCFP基因在幼虫的注射部位出现微弱蓝色,36 h后检测到强烈的荧光信号,意味着ECFP蛋白已在在蜜蜂幼虫中高水平表达。本研究证实人工启动子3×P3可用于驱动外源基因在蜜蜂细胞中表达。

雷公藤多甙对骨缺损模型大鼠Foxp3及骨形态发生蛋白7表达的影响

目的探讨雷公藤多甙对骨缺损模型大鼠叉头框蛋白P3(Foxp3)及骨形态发生蛋白7(BMP7)表达的影响。方法清洁级雌性SD大鼠36只,随机数字表法分为2组:雷公藤多甙组与对照组,每组各18只。2组均建立骨缺损模型,雷公藤多甙组给予雷公藤多甙20 mg处理缺损部位,对照组于缺损部位放入等体积的小牛血清。术后6周与12周,记录2组大鼠形态变化、最大载荷与最大应变量;测量椎体骨组织学形态参数,包括骨小梁体积(TBV)百分比和骨小梁表面(TRS)百分比;免疫组化分析Foxp3和BMP7表达情况;观察2组大鼠病理组织情况。结果所有大鼠均顺利建模成功,精神状况良好,反应灵敏、迅速,饮食、饮水均正常,毛发整洁。术后6周与12周,雷公藤多甙组大鼠的最大载荷、最大应变量均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。雷公藤多甙组大鼠TBV%显著高于对照组,TRS%显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。雷公藤多甙组大鼠Foxp3、BMP-7相对表达水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。雷公藤多甙组缺损部位病理病变较对照组轻,炎性细胞浸润明显减少,软骨基质及软骨细胞无退行性变,关节软骨表面光滑。结论雷公藤多甙在骨缺损模型大鼠中的应用安全性佳,能促进Foxp3及BMP-7的表达,可改善骨缺损组织的组织学形态与椎体力学状况,有利于提高修复效果。

宫颈脱落细胞miR-218-5p和FOXP3的表达与宫颈病变及HPV感染状态的关系

目的探究宫颈脱落细胞miR-218-5p和叉头蛋白3(FOXP3)的表达与宫颈病变及人乳头状瘤病毒(HPV)感染状态的关系。方法选取2020年2月至2022年2月收治的98例慢性宫颈炎患者作为慢性宫颈炎患者组;宫颈上皮内瘤变(CIN)患者92例作为CIN组,其中CINⅠ级45例为CINⅠ组,CINⅡ级25例为CINⅡ组,CINⅢ级22例为CINⅢ组;宫颈鳞癌患者88例为宫颈鳞癌组。qRT-PCR法检测宫颈脱落细胞miR-218-5p表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测FOXP3以及炎性因子白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-10(IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平;采用Pearson法分析miR-218-5p和FOXP3表达以及二者与炎性因子的相关性。Spearman法分析宫颈脱落细胞miR-218-5p、FOXP3表达水平与CIN组以及宫颈鳞癌组HPV感染的相关性。结果慢性宫颈炎患者组、CIN组、宫颈鳞癌组miR-218-5p水平依次显著降低,FOXP3水平依次显著升高,HPV感染率依次增加(P<0.05)。CINⅢ组miR-218-5p、IL-2的表达水平显著低于CINⅡ组及CINⅠ组,CINⅡ组显著低于CINⅠ组;CINⅢ组FOXP3、IL-10、TNF-α的表达水平显著高于CINⅡ组及CINⅠ组,CINⅡ组显著高于CINⅠ组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,miR-218-5p的表达水平与IL-2水平呈正相关(P<0.05),与FOXP3、IL-10、TNF-α水平呈负相关(P<0.05);FOXP3的表达水平与IL-2水平呈负相关(P<0.05),与IL-10、TNF-α水平呈正相关(P<0.05)。宫颈脱落细胞中miR-218-5p表达水平与CIN组以及宫颈鳞癌组患者HPV感染呈负相关(P<0.05),FOXP3表达水平与CIN组以及宫颈鳞癌组患者HPV感染呈正相关(P<0.05)。结论CIN以及宫颈鳞癌患者宫颈脱落细胞FOXP3的表达水平显著升高,miR-218-5p水平显著降低,二者与宫颈病变以及HPV感染状态有关。

慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞中T-bet、GATA3和FoxP3 mRNA的表达及其意义

目的:检测慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中T-bet、GATA3和FoxP3mRNA的表达水平,探讨其对慢性HBV感染者病情转归的影响。方法:选择86例住院患者,根据慢性乙型肝炎防治指南诊断标准,共分为4组,包括慢性乙型肝炎(CHB)中度组患者33例、CHB重度组患者21例、重型肝炎组患者16例和乙型肝炎肝硬化组患者16例,另选取健康者10名作为对照组。采用RT-PCR法检测外周血单个核细胞T-bet、GATA3和FoxP3mRNA的表达水平。结果:CHB中度、CHB重度、重型肝炎、肝硬化组患者和对照组研究对象PBMCs中T-bet的表达水平分别为0.597±0.094、0.724±0.071、0.860±0.060、0.528±0.059和0.514±0.071;CHB重度及重型肝炎组患者T-bet表达水平均高于对照组(P<0.05);CHB中度组患者T-bet表达水平低于CHB重度组患者(P<0.05);CHB重度组患者T-bet表达水平低于重型肝炎组患者(P<0.05)。CHB中度、CHB重度、重型肝炎、肝硬化组患者和对照组GATA3的表达水平分别为0.966±0.037、0.973±0.021、0.725±0.028、0.759±0.037和0.535±0.028;各组患者GATA3表达水平均高于对照组(P<0.05);重型肝炎组患者GATA3表达水平低于CHB中、重度组患者(P<0.05)。CHB中度、CHB重度、重型肝炎、肝硬化组患者和对照组FoxP3的表达水平分别为0.935±0.034、0.919±0.047、0.804±0.021、0.984±0.060和0.772±0.083,除重型肝炎组患者外其他各组患者FoxP3表达水平均较对照组显著升高(P<0.05);重型肝炎组患者FoxP3表达水平低于其他各组(P<0.05)。CHB中度、CHB重度、重型肝炎、肝硬化组患者和健康对照组T-bet/GATA3的表达分别为0.618±0.100、0.744±0.072、1.187±0.082、0.697±0.078和0.963±0.133,各组比值与健康对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),CHB中度组患者T-bet/GATA3比值低于CHB重度组和重型肝炎组(P<0.05);重型肝炎组患者T-bet/GATA3比值高于其他各组(P<0.05)。结论:随着肝病炎症的加剧,T-bet与GATA3的表达呈反方向变化,慢性HBV感染患者T-bet/GATA3比值与FoxP3mRNA表达呈显著负相关关系。

小麦黄花叶病毒P3蛋白致病功能域的鉴定和分析

小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)隶属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)大麦黄花叶病毒属(Bymovirus),其基因组由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。先前的研究表明,马铃薯Y病毒组多种病毒编码的保守蛋白P3具有多种功能,在病毒复制、致病性、克服宿主抗性、细胞间移动等方面均具有重要作用,而P3在大麦黄花叶病毒属中是否有类似功能目前还未见报道。本研究利用烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的本氏烟基因沉默系统,明确了WYMV的P3碳端在本氏烟上具有致病功能域P3-C,但完整的P3则不具有致病能力。进一步移码突变研究表明,P3-C的致病性是由其编码的多肽引起的,而非病毒来源的小干扰RNA介导的宿主基因沉默。同时P3-C的两个跨膜结构域对致病性具有重要作用,单独表达任何一个跨膜结构域P3-C均不能在本氏烟上引起明显症状。

外周血叉头框蛋白P3的表达与原因不明复发性流产关系的研究

目的:探讨外周血叉头框蛋白P3(Foxp3)的表达与原因不明复发性流产(URSA)的关系。方法:选择2018年5月至2020年5月于本院进行治疗的126例URSA患者作为URSA组,选择同期于本院进行产前检查的82例健康孕妇作为对照组。比较两组的一般资料;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Foxp3的mRNA表达;多因素Logisitic回归分析影响URSA发生的相关因素;Pearson相关性分析外周血Foxp3水平与导致URSA发生的危险因素的相关性;流式细胞术检测Foxp3对Th17/Treg平衡的调控作用;ROC曲线分析Foxp3水平对发生URSA的预测价值,并评价其准确度和有效性。结果:两组的孕酮、白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-17、转化生长因子-β(TGF-β)、Foxp3、Th17、Treg、Th17/Treg差异均有统计学意义(P<0.05)。孕酮、IL-10、TGF-β、Treg、Foxp3水平及IL-6、IL-17、Th17水平、Th17/Treg比值均是影响URSA发生的独立危险因素(OR>1,P<0.05)。Foxp3分别与孕酮、IL-10、TGF-β、Treg呈显著正相关(r>0,P<0.05),与IL-6、IL-17、Th17、Th17/Treg呈显著负相关(r<0,P<0.05);Foxp3刺激CD4+T细胞12小时和24小时能够显著降低Th17细胞比例和Th17/Treg比值,增加Treg细胞比例。ROC曲线分析Foxp3预测URSA发生的曲线下面积为0.795,准确度和有效性较好。结论:孕酮、IL-10、TGF-β、Treg、Foxp3水平降低及IL-6、IL-17、Th17水平及Th17/Treg比值增加均可能导致URSA的发生风险增加,Foxp3对Th17/Treg平衡具有调控作用。