GARP、Foxp3及TGF-β在桥本甲状腺炎病人PBMC中的表达及意义

目的:探讨桥本甲状腺炎(HT)病人外周血单个核细胞(PBMC)中糖蛋白A重复序列为主的蛋白(GARP)、叉头框蛋白p3(Foxp3)、转化生长因子β(TGF-β)mRNA表达水平和意义。方法:选取HT病人32例作为观察组,选取同期健康体检者32名作为对照组。采用化学发光免疫法测定2组血清促甲状腺激素(TSH)、总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、总甲状腺素(TT4)水平,放射免疫法检测甲状腺抗体TmAb、TgAb水平。采用实时荧光定量PCR检查HT病人PBMC中GARP、Foxp3、TGF-βmRNA,分析HT病人PBMC中GARP、Foxp3、TGF-βmRNA表达量与甲状腺功能指标水平的相关性。结果:2组TT3、TT4、TSH水平差异均无统计学意义(P>0.05),观察组TgAb和TmAb水平均明显高于对照组(P<0.01)。观察组GARP、Foxp3、TGF-βmRNA表达水平均明显低于对照组(P<0.01)。Pearson相关分析显示,HT病人PBMC中GARP mRNA表达水平与TgAb水平呈负相关关系(P<0.05),与TT3水平呈明显正相关关系(P<0.01)。结论:HT病人PBMC中GARP、Foxp3、TGF-βmRNA表达降低。GARP mRNA与TgAb水平呈负相关关系,与TT3水平呈明显正相关关系,可能与HT的发生、发展相关。

乳腺癌组织中FOXP3、CMTM6、Shoc2表达及其临床意义

目的探讨叉头框蛋白P3(FOXP3)、趋化素样因子超家族6(CMTM6)、Shoc2在乳腺癌组织中的表达及与患者临床病理特征、预后的关系。方法选取51例女性乳腺癌患者为研究对象,采集癌组织与癌旁正常组织,以免疫组织化学法测定FOXP3、CMTM6、Shoc2的阳性表达。收集患者的年龄等一般资料,分析FOXP3、CMTM6、Shoc2表达与乳腺癌临床病理特征之间的关系;随访3年,分析三项指标表达与患者预后的关系。结果癌组织FOXP3、CMTM6、Shoc2阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。FOXP3、CMTM6、Shoc2表达与乳腺癌患者的年龄、体重指数(BMI)、肿瘤大小无关(P>0.05);FOXP3、CMTM6、Shoc2表达与患者的分化程度、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。FOXP3、CMTM6、Shoc2阳性表达患者的3年生存率低于阴性表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论FOXP3、CMTM6、Shoc2在乳腺癌组织内呈高表达,与患者的分化程度、临床分期、淋巴结转移联系紧密,参与疾病的发生与发展,且三项指标表达水平越高,则患者预后越差。

抗磷脂综合征患者血清sVCAM-1、HMGB1与NLRP3炎症小体信号通路与血栓事件的关系

目的探讨抗磷脂综合征(APS)患者血清可溶性血管细胞黏附分子-1(sVCAM-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与NOD样受体P3(NLRP3)炎症小体信号通路和血栓事件的关系。方法选择2021年6月至2023年6月上海市浦东新区人民医院收治的124例APS患者作为APS组和67例健康志愿者作为对照组。检测所有受检者的血清sVCAM-1、HMGB1水平、外周血单个核细胞的NLRP3信使核糖核酸(mRNA)和下游炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平。采用Pearson相关性分析血清sVCAM-1、HMGB1水平与外周血单个核细胞的NLRP3 mRNA表达、IL-1β和IL-18水平的相关性。根据是否发生血栓事件将APS患者分为血栓组(n=32)和非血栓组(n=90)。采用多因素Logistic回归分析APS患者发生血栓事件的影响因素。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析sVCAM-1、HMGB1预测APS患者发生血栓事件的价值。结果APS组患者的血清sVCAM-1、HMGB1、IL-1β和IL-18水平以及外周血单个核细胞的NLRP3 mRNA分别为(806.35±204.75)μg/L、(125.42±24.57)μg/L、(13.62±3.09)pg/mL、(16.24±3.72)pg/mL、1.62±0.42,明显高于对照组的(395.12±77.24)μg/L、(35.01±10.30)μg/L、(3.15±0.67)pg/mL、(4.02±1.13)pg/mL、0.85±0.23,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析结果显示,APS组患者的血清sVCAM-1、HMGB1水平与外周血单个核细胞的NLRP3 mRNA以及血清IL-1β和IL-18水平均呈正相关(P<0.05);血栓组患者的血清sVCAM-1、HMGB1水平分别为(915.35±70.28)μg/L、(136.42±10.17)μg/L,明显高于非血栓组的(767.59±61.43)μg/L、(121.51±15.03)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);经多因素Logistic回归分析结果显示,3个抗体阳性、高水平sVCAM-1、HMGB1是APS患者发生血栓事件的危险因素(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清sVCAM-1联合HMGB预测APS患者血栓事件的曲线下面积(AUC)为0.885,高于单独预测(P<0.05)。结论APS患者血清sVCAM-1、HMGB1水平均增高,且与NLRP3及其下游炎症因子水平增加、血栓事件发生有关,NLRP3炎症小体信号通路的激活可能进一步促进血栓形成。

宫颈脱落细胞miR-218-5p和FOXP3的表达与宫颈病变及HPV感染状态的关系

目的探究宫颈脱落细胞miR-218-5p和叉头蛋白3(FOXP3)的表达与宫颈病变及人乳头状瘤病毒(HPV)感染状态的关系。方法选取2020年2月至2022年2月收治的98例慢性宫颈炎患者作为慢性宫颈炎患者组;宫颈上皮内瘤变(CIN)患者92例作为CIN组,其中CINⅠ级45例为CINⅠ组,CINⅡ级25例为CINⅡ组,CINⅢ级22例为CINⅢ组;宫颈鳞癌患者88例为宫颈鳞癌组。qRT-PCR法检测宫颈脱落细胞miR-218-5p表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测FOXP3以及炎性因子白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-10(IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平;采用Pearson法分析miR-218-5p和FOXP3表达以及二者与炎性因子的相关性。Spearman法分析宫颈脱落细胞miR-218-5p、FOXP3表达水平与CIN组以及宫颈鳞癌组HPV感染的相关性。结果慢性宫颈炎患者组、CIN组、宫颈鳞癌组miR-218-5p水平依次显著降低,FOXP3水平依次显著升高,HPV感染率依次增加(P<0.05)。CINⅢ组miR-218-5p、IL-2的表达水平显著低于CINⅡ组及CINⅠ组,CINⅡ组显著低于CINⅠ组;CINⅢ组FOXP3、IL-10、TNF-α的表达水平显著高于CINⅡ组及CINⅠ组,CINⅡ组显著高于CINⅠ组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,miR-218-5p的表达水平与IL-2水平呈正相关(P<0.05),与FOXP3、IL-10、TNF-α水平呈负相关(P<0.05);FOXP3的表达水平与IL-2水平呈负相关(P<0.05),与IL-10、TNF-α水平呈正相关(P<0.05)。宫颈脱落细胞中miR-218-5p表达水平与CIN组以及宫颈鳞癌组患者HPV感染呈负相关(P<0.05),FOXP3表达水平与CIN组以及宫颈鳞癌组患者HPV感染呈正相关(P<0.05)。结论CIN以及宫颈鳞癌患者宫颈脱落细胞FOXP3的表达水平显著升高,miR-218-5p水平显著降低,二者与宫颈病变以及HPV感染状态有关。

不同丙种球蛋白用药剂量治疗免疫性血小板减少症患儿的效果及对血清FOXP3、sCD40L表达的影响

目的:探究不同丙种球蛋白(IVIG)用药剂量治疗免疫性血小板减少症(ITP)患儿的效果及对血清叉头蛋白P3(FOXP3)、可溶性CD40配体(sCD40L)表达的影响。方法:回顾性分析2020年1月—2022年12月九江市妇幼保健院(儿童血液科)收治的65例ITP患儿临床资料,根据IVIG用药剂量分为对照组(32例)和观察组(33例),对照组给予标准剂量[400 mg/(kg·d)],观察组给予中等剂量[600 mg/(kg·d)]。比较两组患儿临床指标,治疗前和治疗2周后血小板指标[血小板压积(PCT)、血小板分布宽度(PDW)、平均血小板容积(MPV)]、免疫功能[FOXP3、sCD40L、调节性T细胞(Treg)]、炎症因子[γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-4(IL-4)]水平,记录治疗期间不良反应发生情况。结果:两组患儿起效时间、出血消失时间、血小板计数(PLT)恢复正常时间、住院时间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组患儿PCT、Treg、FOXP3水平均较治疗前升高,PDW、MPV、sCD40L、IFN-γ、TNF-α、IL-4水平均降低(P<0.05),但两组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:中等剂量与标准剂量IVIG在ITP治疗中效果相当,均可改善患儿临床指标、血小板指标,提高患儿免疫能力,减轻患儿炎症反应。

叉头框蛋白P3阳性调节性T细胞和程序性死亡受体1/程序性死亡受体配体1通路在早期胃癌中的表达及相关性分析

目的探讨叉头框蛋白P3阳性调节性T细胞(FOXP3+Tregs)与程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)通路在早期胃癌患者中的表达及相关性。方法收集2020年10月至2022年6月南京市浦口区中医院收治的早期胃癌患者(早期胃癌组)和慢性胃炎患者的胃黏膜组织(对照组)各10例,采用组织免疫荧光法分别检测早期胃癌组和对照组的胃黏膜组织中FOXP3+Tregs及PD-1/PD-L1通路的表达情况,分析早期胃癌组织中两者表达的相关性。结果早期胃癌组FOXP3+Tregs、PD-1、PD-L1表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。早期胃癌组胃黏膜组织中FOXP3+Tregs分别与PD-1、PD-L1表达水平呈正相关(r>0,P<0.01)。结论早期胃癌组织中存在FOXP3+Tregs和PD-1/PD-L1通路的共同表达,提示联合二者可为临床早期胃癌的判定提供重要参考。

直肠癌患者MDSC百分比和RORαmRNA、IL-17E mRNA、FOXP3 mRNA表达的临床意义

目的探讨外周血单个核细胞(PBMC)中视黄酸相关孤儿核受体α(RORα)mRNA、白细胞介素17E(IL-17E)mRNA、叉头框蛋白P3(FOXP3)mRNA和髓源性抑制细胞(MDSC)百分比在直肠癌中的临床价值。方法选取直肠癌患者95例(直肠癌组)、健康体检者45名(正常对照组),收集所有研究对象的临床资料,检测所有研究对象PBMC中RORαmRNA、FOXP3 mRNA、IL-17E mRNA水平和MDSC百分比。结果直肠癌组FOXP3 mRNA、IL-17E mRNA相对表达量和MDSC百分比均高于正常对照组(P<0.05),RORαmRNA相对表达量低于正常对照组(P<0.05)。有淋巴转移、TNM分期Ⅲ期的直肠癌患者FOXP3mRNA、IL-17E mRNA相对表达量和MDSC百分比分别高于无淋巴转移、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的患者(P<0.05),RORαmRNA相对表达量分别低于无淋巴转移、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的患者(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤直径的直肠癌患者之间RORαmRNA、FOXP3 mRNA、IL-17E mRNA相对表达量和MDSC百分比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论直肠癌患者IL-17E mRNA、FOXP3 mRNA水平和MDSC显著升高,RORαmRNA水平显著降低,且与TNM分期和淋巴转移有关,或可作为直肠癌筛查和病情监测的指标。

肛周脓肿组织中Foxp3、IL-15表达情况及其与疾病复发的关联性研究

目的探讨肛周脓肿组织中叉头样转录因子3(Foxp3)和白细胞介素-15(IL-15)的表达情况,分析其与疾病复发的关联性。方法选取2019年1月至2020年7月于北京中医医院顺义医院进行手术治疗的肛周脓肿患者98例,收集患者术中的脓肿壁组织以及脓肿壁周围的正常组织。采用免疫组织化学染色法检测组织中Foxp3和IL-15的表达情况。分析肛周脓肿组织Foxp3及IL-15表达与患者临床病理特征和疾病复发的关联性。结果Foxp3蛋白主要表达于细胞核区域,IL-15蛋白主要表达于胞质和胞膜。脓肿壁组织中Foxp3、IL-15蛋白的阳性表达率高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。脓肿壁组织中Foxp3、IL-15表达情况与脓肿直径、愈合时间和术前肛瘘形成情况具有显著关联性(P<0.05),与性别、年龄、脓肿位置和病程无显著关联(P>0.05)。Cox回归分析结果显示,术前肛瘘、Foxp3阳性、IL-15阳性是促进肛周脓肿患者疾病复发的独立危险因素(P<0.05)。结论肛周脓肿组织中Foxp3和IL-15表达升高,与患者临床病理特征及疾病复发密切相关。

外周血Foxp3、RANTES联合检测对原因不明复发性流产的临床诊断价值

目的探讨外周血叉头框蛋白p3(Foxp3)、T细胞正常表达和分泌刺激因子(RANTES)联合检测对原因不明复发性流产的临床诊断价值。方法选择2021年7月至2022年9月本院收治的128例原因不明复发性流产患者为病例组,另选取同期于本院体检的128例健康早孕者为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测所有研究对象外周血的Foxp3和RANTES水平,流式细胞仪检测外周血辅助性T细胞(Th17)和调节性T细胞(Treg)水平。采用Pearson和Spearman相关性分析法分析外周血Foxp3和RANTES水平与免疫指标和原因不明复发性流产的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血Foxp3和RANTES水平对原因不明复发性流产的诊断价值。结果与对照组比较,病例组外周血Foxp3、RANTES水平和Treg比例显著下降(P<0.05),Th17比例和Th17/Treg显著升高(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,病例组外周血Foxp3和RANTES水平与Th17、Th17/Treg均呈显著负相关(P<0.05),与Treg均呈显著正相关(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,外周血Foxp3和RANTES水平均与原因不明复发性流产的发生呈显著负相关(r=-0.539,-0.554,P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清Foxp3水平单独诊断原因不明复发性流产发生的曲线下面积(AUC)为0.820[95%CI(0.767,0.865)],其敏感度、特异度分别为70.31%、85.94%;血清RANTES水平单独诊断原因不明复发性流产发生的AUC为0.840[95%CI(0.789,0.883)],其敏感度、特异度分别为69.53%、85.16%;血清Foxp3和RANTES联合诊断原因不明复发性流产发生的AUC为0.909[95%CI(0.867,0.942)],显著大于Foxp3单独诊断的AUC(Z=4.165,P=0.000)和RANTES单独诊断的AUC(Z=3.183,P=0.002)。结论Foxp3和RANTES水平均与原因不明复发性流产孕妇的免疫平衡失调有关,二者联合对原因不明复发性流产具有较高的诊断价值。

甘蔗条纹花叶病毒 P3 蛋白与甘蔗 Rubisco 大亚基互作的研究

该研究以甘蔗条纹花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)的P3蛋白(SCSMV-P3)为诱饵,采用酵母双杂交技术(yeast two-hybrid system,Y2HS)从甘蔗酵母文库中筛选到1个编码核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase,Rubisco)大亚基的基因,命名为ScRbcL。序列分析表明,该基因开放读码框(open reading frame,ORF)长度为1 337bp,编码478个氨基酸残基。Y2HS和双分子荧光互补(bimolecular flourescence complementation,BiFC)实验表明,ScRbcL与SCSMV-P3存在互作关系。研究认为SCSMV-P3与ScRbcL的互作可能是SCSMV侵染甘蔗导致花叶症状发生的分子基础。

针刺对胚胎着床障碍大鼠CD4^+ CD25^+ Foxp3^+调节性T细胞的影响

目的:观察针刺对胚胎着床障碍大鼠CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的影响。方法:144只孕鼠随机分为对照组(N)、米非司酮组(M)、米非司酮+针刺组(A)和米非司酮+黄体酮组(W),每组随机再分为6 d组、8 d组和10 d组。其中M组、A组和W组妊娠1 d给予米非司酮-麻油溶液造模,N组则给予等量麻油溶液。同时,每天下午A组固定并行针刺三阴交和后三里,N组和M组仅固定,W组肌肉注射黄体酮,直到处死当天结束。统计孕鼠胚胎着床数,用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和子宫内膜的CD4+Foxp3+Treg细胞的比例,Western blotting和real-time PCR测定着床点的子宫内膜Foxp3的表达。结果:与N组相比,M组的着床胚胎数、外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和子宫内膜CD4+Foxp3+Treg细胞的比例、着床点子宫内膜Foxp3蛋白和mRNA的表达均明显下降(P<0.05);与M组相比,A组和W组的着床胚胎数、外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞和子宫内膜CD4+Foxp3+Treg细胞的比例以及着床点子宫内膜Foxp3蛋白和mRNA的表达均有不同程度地升高。结论:针刺改善胚胎着床障碍大鼠的胚胎着床可能与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的调节密切相关。

脊髓背角p38MAPK活化在瑞芬太尼诱发术后痛觉过敏中的作用

目的：探讨脊髓背角磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）在瑞芬太尼诱发术后痛觉过敏中的作用。方法：取鞘内置管成功的雄性SD大鼠40只,体重230~270 g,采用数字表法将其随机分为5组：对照组（C组）、术后切口痛组（I组）、瑞芬太尼组（R组）、p38MAPK特异性抑制剂SB203580组（S组）和SB203580的溶媒二甲基亚砜DMSO组（D组）。C组、I组、R组大鼠鞘内分别给予NS 10μl,S组和D组大鼠鞘内分别给予2.65 mmol SB203580 10μl和溶剂2%DMSO 10μl;I组大鼠在1.5%异氟烷吸入麻醉下行右侧跖底切口手术,C组大鼠不行右侧跖底手术,其余三组均在瑞芬太尼持续泵注下行右侧跖底切开手术。采用热辐射刺激仪和von Frey纤维丝分别测定双侧后爪热刺激缩爪潜伏期及机械性痛阈。应用免疫组织化学法检测脊髓背角p-p38MAPK表达的变化。结果：与I组比较,R组、D组在术后4 h、1 d、2 d、3 d双侧跖底热刺激缩爪潜伏期、机械性痛阈值均降低,双侧脊髓背角p-p38MAPK表达增多;与R组比较,S组双侧跖底的机械性痛阈值、手术侧跖底热刺激缩爪潜伏期值增高,双侧脊髓背角p-p38MAPK表达减少。结论：脊髓背角p38MAPK活化可能参与了瑞芬太尼诱发的术后痛觉过敏。

口蹄疫病毒非结构蛋白P3区的基因序列及分析

以口蹄疫Akesu/ 5 8分离株的 5 3代牛舌皮病料为材料 ,采用RT PCR法 ,扩增和克隆了两个约 1.5kb的DNA片段。核酸序列测得结果对接后 ,涵盖了全部P3区的基因序列。口蹄疫Akesu/ 5 8分离株基因组P3区的核酸序列共计 2 ,72 4nt,包括一个终止密码子TAA ,共编码 90 7个氨基酸 ;其中非结构蛋白 3A的基因是 45 9nt,编码 15 3个氨基酸 ;3个 3B(VPg)基因分别是 6 9、72和 72nt,氨基酸分别为 2 3、2 4和 2 4;3C是 6 39nt,2 13个氨基酸 ;3D是1,413nt ,471个氨基酸。各蛋白间由Glu/Gly(Ser)连接。序列比较显示 :3A的C端易变 。

缬沙坦对血管平滑肌细胞增殖、迁移及p-ERK1/2、p-P38表达的影响

目的观察缬沙坦（Val）对血管紧张素1I（AngⅡ）刺激下大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）的增殖与迁移及对p-ERK1／2、P—P38表达的影响。方法组织贴块法培养VSMCs，取3～5代细胞进行实验。采用MTT法检测Val对AngⅡ诱导下细胞增殖的影响，采用划痕试验法进行细胞迁移实验，采用蛋白质印迹法检测VSMCs中ERK1／2、PERK1／2、P38、p-P38的表达。结果（1）Angll能明显促进VSMCs的增殖，AngⅡ促进VSMCs增殖的作用能被Val和PD98059所抑制，并且Val呈浓度依赖性抑制VSMCs增殖。SB23015能明显促进VSMCs增殖。（2）细胞经AngⅡ作用后，迁移活性明显增加，Val及PD98059抑制AngⅡ诱导的大鼠VSMCs迁移，但SB23015作用与之相反。（3）Va1和PD98059能抑制AngⅡ的促VSMCs胞内PERKl／2表达的作用，而SB23015则能增强这种作用。Val和SB23015能抑制AngⅡ的促VSMCs胞内PP38表达的作用，而PD98059则对此无显著影响。（4）Val单独作用于VSMCs时，对细胞的增殖、迁移及P～ERK1／2、P—P38的表达均无明显影响。结论（1）Val呈浓度依赖性抑制AngII诱导VSMCs的增殖和迁移。（2）Val抑制AngⅡ诱导VSMCs的增殖和迁移与其抑制AngⅡ诱导的PERK1/2的表达相关。（3）P—P38对AngⅡ诱导的p—ERK1／2的激活起负调节作用。

P38MAPK信号通路与uPA在卵巢癌细胞及组织中表达的相关性

背景与目的:P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)信号通路参与多种肿瘤的发生、发展和转移过程,尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)在肿瘤浸润和转移中发挥着重要作用。本实验研究卵巢癌组织中P38MAPK、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(serine threonine kinase,AKT)及uPA的表达与临床病理特征的关系,并分析上述蛋白与u PA表达的相关性,探讨P38MAPK信号通路与uPA在卵巢癌细胞及组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学法检测49例卵巢癌组织中u PA、P38MAPK、ERK和AKT蛋白的表达,采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测不同卵巢癌细胞系HO8910、HO-8910PM、SKOV3和CAOV3中uPA和P38MAPK蛋白的表达,使用特异性抑制剂SB203580阻断P38MAPK信号通路后检测u PA蛋白表达水平的变化。结果:uPA、P38MAPK、ERK和AKT蛋白在卵巢癌组织中的表达阳性率分别为61.22%、57.14%、53.06%和55.10%。uPA蛋白的表达与P38MAPK呈正相关(r=0.865,P=0.001),且与卵巢癌组织的临床病理分期(P=0.029)、分化(P=0.03)和转移程度(P淋巴=0.022,P大网膜=0.012)有关,而与患者的年龄(P=0.754)及组织学类型(P=0.652)无关。ERK、AKT蛋白的表达与卵巢癌淋巴结转移(PERK=0.011,PAKT=0.022)和大网膜转移(PERK=0.006,PAKT=0.000)有关,而与患者的年龄(PERK=0.000,PAKT=0.022)、组织类型(PERK=0.771,PAKT=0.245)及病理分期(PERK=1.000,PAKT=0.254)无关。卵巢癌细胞系HO-8910PM中uPA蛋白的表达水平明显高于HO8910、SKOV3和CAOV3细胞系,使用SB203580阻断P38MAPK信号通路后可降低uPA蛋白的表达,且随着SB203580浓度升高u PA蛋白表达水平逐渐降低。卵巢癌中P38MAPK及u PA蛋白的表达与卵巢癌的预后显著相关(Log-rank=3.897和11.044,P=0.048和0.001)。结论:卵巢癌组织中P38MAPK信号通路处于激活状态;P38MAPK信号通路的激活可上调u PA的表达,促进卵巢癌的恶性进展;P38MAPK信号通路和u PA可能在卵巢癌侵袭和转移的过程中发挥重要作用。P38MAPK和uPA蛋白有望成为卵巢癌预后评估的重要指标。

带PTD的小鼠Foxp3 PRD缺失突变体对小鼠脾混合淋巴细胞反应的影响

目的:构建和表达带蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)的Foxp3(forkhead boxP3)PRD缺失突变体(PTD-ΔPRD)融合蛋白,并探讨其对脾混合淋巴细胞反应的影响。方法:应用PCR技术扩增获得小鼠ΔPRD片段核酸序列,将其分列插入到带PTD的pET28a-PTD和pET28a-PTD-eGFP原核表达载体中,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中表达融合蛋白,利用镍柱获得并复性融合蛋白;Western印迹鉴定目的蛋白表达的正确性、流式细胞术和Western印迹检测融合蛋白穿膜进入小鼠T淋巴细胞瘤株EL-4细胞中的能力、双向混合淋巴细胞反应分析融合蛋白对T淋巴细胞增殖的影响。结果:融合蛋白可在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中表达,并获得了大量纯化的融合蛋白。流式细胞术和Western印迹显示融合蛋白穿越细胞膜进入EL-4细胞核中,混合淋巴反应初步证明融合蛋白具有抑制T淋巴细胞增殖的功能。结论:成功表达小鼠PTD-ΔPRD Foxp3融合蛋白,该融合蛋白能有效进入细胞核内,抑制T淋巴细胞增殖。

亚洲1型口蹄疫病毒RS株非结构蛋白P3区基因特征分析

经RT-PCR扩增得到一株口蹄疫亚洲1型流行毒株的非结构蛋白P3基因核苷酸序列,与其他代表性参考毒株的P3基因进行比较,分析该毒株P3区基因特征。结果表明,该毒株P3基因含有2721个核苷酸,编码907个氨基酸;其中非结构蛋白3A的基因长度为459bp,编码153个氨基酸;3个3B(VPg)基因长度分别是69、72、72bp,分别编码23、24、24个氨基酸;3C基因长度为639bp,编码213个氨基酸;3D基因长度为1410bp,编码470个氨基酸。氨基酸序列比较分析显示,3A基因C末端比其他基因更容易变异,根据3A基因构建的系统进化分析提示该流行毒株与YNBS/58和IND 321/01亲缘关系较近,属同一亚系谱。

三株牛瑟氏泰勒虫P32表面蛋白基因的克隆与序列分析

为分析我国分离的3株牛瑟氏泰勒虫P32基因序列,根据GenBank上登录的牛瑟氏泰勒虫P32表面蛋白基因序列设计合成1对引物,用PCR方法分别扩增出牛瑟氏泰勒虫辽阳株、宁县株和汶川株的P32基因片段,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-T Easy载体上,将经PCR鉴定和EcoRⅠ酶切鉴定为阳性的重组质粒进行测序。结果表明,克隆的这3株牛瑟氏泰勒虫P32基因片段长度均为875 bp,编码283个氨基酸。核苷酸同源性分析表明,该基因辽阳株与宁县株的同源性最高,为99.4%,汶川株与这2株的同源性分别是92.1%和91.9%,而我国辽阳株与日本株(AB016280)、俄罗斯株(AB016279)的同源性较高,分别为99.8%和99.6%。

食管癌患者根治手术前后外周血中GATA3、Foxp3 mRNA的表达及其意义

目的研究食管癌患者根治手术前后外周血中GATA结合蛋白3(GATA3)、叉头蛋白P3(Foxp3)mRNA的表达及其意义。方法选取196例食管癌患者为病例组,另选同期的60例体检健康者作为正常组,采用定量PCR检测手术前后患者外周血单核细胞中GATA3、Foxp3 mRNA表达,用流式细胞仪检测外周血样本中CD_(3)^(+)、CD _(4)^(+)T细胞的表达水平,分析GATA3、Foxp3 mRNA表达与食管癌临床病理特征及患者预后的关系。结果病例组手术前的GATA3、Foxp3 mRNA表达水平高于手术后1周和正常组,CD_(3)^(+)、CD _(4)^(+)T细胞水平低于手术后1周和正常组(P<0.05);病例组手术后1周与正常组的GATA3、Foxp3 mRNA、CD_(3)^(+)、CD _(4)^(+)T细胞水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不同TNM分期、病理分级、肿瘤大小和淋巴结转移的食管癌患者术前GATA3 mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同TNM分期、淋巴结转移的食管癌患者术前Foxp3 mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同TNM分期、病理分级、肿瘤大小、淋巴结转移、GATA3、Foxp3 mRNA表达的食管癌患者1年生存率比较,差异有统计学意义(P<0.05);TNM分期晚(RR=1.610)、Foxp3高表达(RR=1.473)是影响食管癌患者预后的危险因素,差异有统计学意义(P<0.05)。结论食管癌患者术前的GATA3、Foxp3 mRNA呈现高表达,行根治术后水平有所下降。临床应重视Foxp3的高表达,其对患者的预后有重要意义。

高迁移率族蛋白B1对小鼠调节性T细胞Foxp3表达的影响

目的观察高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)对调节性T细胞(regulatory Tcell,Treg)叉头翼状螺旋转录因子(forkhead/winged helix transcription factorp3,Foxp3)基因及蛋白表达的影响,并对其机制进行初步探讨。方法免疫磁珠法分离正常BALB/c小鼠脾脏Treg。采用固相包被抗-CD3及可溶性CD28辅助活化,给予HMGB1刺激,观察HMGB1刺激与Foxp3基因及蛋白表达的时间-效应关系及剂量-效应关系。结果经HMGB1刺激后的TregFoxp3蛋白表达于24～72h明显下调(P<0.05,P<0.01),其中以作用48、72h后表达下调尤为显著(P<0.01);给予不同剂量HMGB1刺激72h后,10、100、1000ng/ml的HMGB1均可诱导Foxp3表达减弱(P<0.05,P<0.01),其中HMGB1的浓度在1000ng/ml时Foxp3表达下调最明显。Foxp3mRNA表达呈现出与蛋白表达相同的时间、剂量依赖关系。结论HMGB1通过诱导TregFoxp3mRNA表达下调,进一步影响其蛋白产物合成,从而影响Treg免疫调节活性。