人参皂甙Rb1对转化生长因子-β1诱导的肾小管上皮细胞p47phox的表达及细胞外基质的影响

目的探讨人参皂甙Rb1(G-Rb1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞(NRK52E)氧化应激的作用及对细胞外基质(ECM)的影响。方法将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白对照组,10ng/mL TGF-β1刺激组,不同剂量的G-Rb1干预组(在10ng/mL TGF-β1基础上分别加入10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL G-Rb1),40ng/mL G-Rb1组,100nmol/L NADPH氧化酶抑制剂DPI组。采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;应用免疫组化技术、Western blot检测NADPH氧化酶亚单位p47phox的表达;实时荧光定量PCR(RT-PCR)、酶联免疫吸附法观察细胞外基质主要成分胶原Ⅰ(Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(FN)的变化。结果与正常对照组相比,TGF-β1可显著增强NRK52E细胞内ROS水平和p47phox的表达,Col-Ⅰ和FN的含量也显著增加(P<0.05)。G-Rb1和DPI明显抑制了TGF-β1诱导的细胞内ROS的产生和p47phox的表达,同时降低了Col-Ⅰ和FN的水平(P<0.05)。结论TGF-β1可以诱导NRK52E细胞ROS和p47phox水平的升高,刺激细胞外基质成分Col-Ⅰ和FN的形成。G-Rb1呈剂量依赖性地抑制了TGF-β1刺激的NRK52E细胞内的ROS水平的升高和细胞外基质的增加。其作用机制可能与降低p47phox的表达有关。

p47phox向胞膜移位调节高糖导致的内皮细胞内活性氧升高

目的探讨在高浓度葡萄糖刺激下NADPH氧化酶亚单位p47phox调节内皮细胞内活性氧升高的机制。方法Ⅱ型胶原酶法分离人脐静脉内皮细胞,流式细胞仪检测细胞内活性氧的生成量,western blotting和免疫荧光分别检测细胞内p47phox蛋白的表达和其细胞内的定位。结果高浓度葡萄糖刺激HUVECs内活性氧的升高;NADPH氧化酶抑制剂DPI及apo-cynin抑制高糖导致的活性氧升高;高糖刺激状态下p47phox蛋白表达量并不增加,它由胞质向胞膜移位,DPI和apocynin抑制p47phox移位。结论 p47phox通过向胞膜移位调节高浓度葡萄糖导致的HUVECs内NADPH氧化酶源性的活性氧升高。

硫化氢对低氧性肺动脉高压大鼠P47phox表达的影响

目的观察硫化氢H2S对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠P47phox表达的影响。方法 36只体重(180±20)g健康成年雄性SD大鼠,随机分为常氧组、低氧组、低氧+硫氢化钠(Na HS)组,每组12只。低氧16 d后分别检测其平均肺动脉压(m PAP)、右心室肥厚情况和肺血管形态学指标的变化。采用Western印迹检测肺动脉组织P47phox的表达水平。结果与常氧组比较,低氧组m PAP明显升高,右室/(左室+室间隔)比值显著增加(P<0.01);部分肌型动脉百分比明显升高,非肌型动脉百分比明显降低(P<0.05);肺动脉组织P47phox表达升高(P<0.05)。与低氧组比较,低氧+Na HS组m PAP、右室/(左室+室间隔)比值均明显降低(P<0.01);肺小血管中肌型动脉、部分肌型动脉百分比明显降低,非肌型动脉百分比明显升高(P<0.05);肺动脉组织P47phox表达明显降低(P<0.01)。结论 H2S可能通过抑制大鼠肺动脉组织P47phox表达而调节低氧性肺血管结构重建和HPH的形成。

丹蛭降糖胶囊对糖尿病动脉硬化模型大鼠胸主动脉p22phox mRNA、p47phox mRNA表达的影响

目的:探讨益气养阴活血方丹蛭降糖胶囊(DJC)对糖尿病大血管病变的作用机制。方法:SD雄性大鼠60只,适应性喂养1周,随机分为空白对照组10只与造模组50只。空白对照组予普通饲料喂养。造模组按70万IU/kg的总剂量灌胃维生素D3,分3天给完,同时高脂饲料喂养,诱发快速动脉硬化的大鼠模型,4周以后,采用35 mg/kg链脲佐菌素(STZ)腹腔注射,诱发糖尿病合并动脉硬化大鼠模型,最终造模成功的大鼠随机分为模型组,DJC低、中、高剂量组,分别予以相应药物灌胃,疗程12周。检测治疗前后大鼠空腹血糖(FBG)、胸主动脉p22phox mRNA及p47phox mRNA的表达。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠治疗前后FBG水平显著升高,胸主动脉p22phox mRNA、p47phox mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与治疗前比较,DJC中、高剂量组大鼠FBG降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,DJC中、高剂量组大鼠FBG水平降低,胸主动脉p22phox mRNA、p47phox mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。与DJC低剂量组比较,DJC中、高剂量组大鼠FBG水平较低,胸主动脉p22phox mRNA、p47phox mRNA表达较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:丹蛭降糖胶囊能够降低糖尿病大鼠FBG,降低胸主动脉p22phox mRNA和p47phox mRNA的表达,抑制氧化应激,从而有效防治和延缓糖尿病大血管病变。

灯盏花素对糖尿病大鼠肾脏P47phox基因mRNA表达影响的实验研究

目的:探讨灯盏花素对SD大鼠糖尿病模型肾组织中p47phox基因mRNA表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为糖尿病模型(A)组、糖尿病灯盏花素治疗(B)组和正常对照(C)组,取其肾组织采用SYBR Green I实时荧光定量PCR法检测各组SD大鼠肾组织中p47phox基因的mRNA表达,并进行比较分析。结果:(1)对A组、B组和C组样本实时荧光定量PCRCT(cycle time)均数进行方差分析,差别有统计学意义(P<0.05)。2周时A组和B组肾组织中p47phox基因的mRNA表达分别是C组的1.92倍及1.87倍,6周时分别是C组的5.69倍及4.08倍。(2)与C组比,A组和B组的血肌酐、尿素氮和肾重/体重有升高。A组和B组相比,B组下降,相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)糖尿病时肾脏p47phox基因的mRNA表达水平升高,氧化应激增强。(2)灯盏花素治疗降低肾脏p47phox基因的mRNA表达水平,抑制氧化应激。(3)灯盏花素治疗后糖尿病SD大鼠的血肌酐,尿素氮水平降低,肾重/体重降低。提示灯盏花素治疗能改善糖尿病SD大鼠肾脏功能,抑制肾脏肥大。

排石冲剂对草酸钙肾结石大鼠p47phox和TGF-β1表达的影响

目的观察排石冲剂对草酸钙肾结石大鼠p47phox、转化生长因子(TGF)-β1表达的影响,探讨排石冲剂治疗肾结石的作用机制。方法Wistar大鼠60只,随机分为6组:正常对照组、模型对照组、枸橼酸钾组和排石冲剂小、中、大剂量组(1.2,2.4,3.6 g·mL^-1),每组各10只。分别检测各组大鼠尿草酸、尿钙的含量;用Vonkossa钙结晶染色观察肾组织中草酸钙结晶,并采用形态分级评分法比较各组草酸钙结晶的量化评分;通过荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠肾组织中p47phox、TGF-β1、白细胞介素(IL)-6 mRNA的表达水平。结果与正常对照组比较,其余各组大鼠尿草酸及尿钙含量均显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,排石冲剂小剂量组的尿草酸及尿钙含量无明显差异(P>0.05),排石冲剂中剂量组尿草酸及尿钙含量显著降低(P<0.05);排石冲剂大剂量组、枸橼酸钾组的尿草酸及尿钙显著降低(P<0.01),但两组之间差异无统计学意义。与正常对照组比较,模型对照组、排石冲剂小剂量组草酸钙结晶评分显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,排石冲剂中剂量组评分显著降低(P<0.05),排石冲剂大剂量组、枸橼酸钾组评分显著降低(P<0.01)。与正常对照组比较,其余各组p47phox、TGF-β1、IL-6 mRNA表达水平均显著增强;与模型对照组比较,排石冲剂小、中剂量组无明显差异,排石冲剂大剂量组、枸橼酸钾组显著降低(P<0.05),但两组之间无明显差异。结论排石冲剂能降低大鼠尿草酸、尿钙的排泄,能抑制大鼠肾组织的钙质沉积,降低肾组织中p47phox、TGF-β1、IL-6 mRNA的水平。排石冲剂能抑制结石的形成,其作用机制可能与抑制草酸钙结石对肾小管上皮细胞的氧化炎症损伤有关。

北五味子提取物对糖尿病大鼠心肌组织中NOX2和p47phox表达的影响

目的:探讨北五味子提取物(SCE)对糖尿病大鼠心肌组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚单位NOX2和p47phox表达的影响,并阐明其对大鼠心肌的保护作用。方法:选取49只清洁级健康雄性Wistar大鼠采用腹腔单次注射链脲佐菌素(STZ)方法建立糖尿病大鼠模型。45只成模大鼠随机分为模型组(n=12)、低剂量(100 mg·kg^-1)SCE组(n=11)、中剂量(200 mg·kg^-1)SCE组(n=11)和高剂量(400 mg·kg^-1)SCE组(n=11),另取10只Wistar大鼠作为正常对照组。干预12周后麻醉下腹主动脉取血,分离血清,取心脏,称取左心室质量,计算左心室质量指数(LVMI),全自动分析仪检测血清中空腹血糖(FBG)、肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,HE染色观察各组大鼠心肌病理形态表现,比色法测定各组大鼠心肌组织丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽激酶(GSH)活性,实时荧光定量PCR法检测各组大鼠心肌组织中NOX2和p47phox mRNA表达水平,Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中NOX2和p47phox蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠LVMI增加(P<0.01),心肌细胞排列紊乱,血清中FBG、CK和LDH水平及心肌组织中MDA水平升高(P<0.05或P<0.01),心肌组织中SOD和GSH活性明显降低(P<0.05),而NOX2和p47phox mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,不同剂量SCE组大鼠LVMI降低(P<0.05或P<0.01),心肌损伤减轻,血清中FBG、CK和LDH水平及心肌组织中MDA水平降低(P<0.05或P<0.01),心肌组织中SOD和GSH活性升高(P<0.05或P<0.01),NOX2和p47phox mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01),且呈一定的剂量依赖性。结论:SCE可降低糖尿病大鼠FBG水平,抑制心肌NADPH氧化酶表达,降低心肌组织氧化应激水平,该作用可能与其心肌保护作用有关。

p47phox介导活性氧产生与疾病的关系

活性氧（reactive oxygen species）是指氧自由基和氧化作用较强的非自由基含氧产物。主要包括超氧阴离子（· O2－）、羟自由基（· O H ）、过氧化氢（H2 O2）和单线态氧（1 O2）等［1］。活性氧在机体的免疫过程和细胞信号转导中起着重要的作用。然而当活性氧过多积聚，超过抗氧化酶系统的清除能力，就会产生氧化应激。引发脂质过氧化反应损伤细胞膜、引起蛋白质变性、酶活性丧失等损害作用［2‐3］；诱导或加重心血管疾病、高血压、肿瘤、炎症及肺部疾病的发生和进展［4］。机体有多种酶体参与活性氧的生成，如烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ nico‐tinamide adenine dinucleotide phosphate ，NADPH ）氧化酶（NADPH oxidase ，NOX）、线粒体呼吸链复合酶、黄嘌呤氧化酶、细胞色素P450、一氧化氮合成酶等［1，3］。其中 NADPH氧化酶是体内活性氧生成的重要来源。而 p47phox 对于激活NADPH氧化酶起着至关重要的作用。本文主要从 p47phox介导活性氧产生及与疾病的关系方面的进展作一综述。

虫草益肾颗粒对高糖诱导人肾小球系膜细胞氧化应激及p47phox表达的影响

目的:研究虫草益肾颗粒对高糖培养下人肾小球系膜细胞(HMCs)的氧化应激及p47phox表达水平的影响,探讨其防治糖尿病肾病(DKD)的作用机制。方法:将HMCs随机分为6组:正常组、高糖组、福辛普利组和虫草益肾颗粒低、中、高剂量组,分别给予相应的动物含药血清处理后,收集48 h和72 h细胞上清液,用流式细胞术检测各组细胞的活性氧簇(ROS)水平,用比色法分别检测各组超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。用Western Blot和Real-time PCR法分别检测p47phox蛋白和mRNA表达。结果:48 h、72 h时,与正常组比较,各组SOD活性均明显下降(P<0.01),各组ROS及MDA含量均明显上升(P<0.01),HMCs p47phox mRNA及蛋白表达量明显升高(P<0.01);与高糖组比较,福辛普利组、虫草益肾颗粒低、中、高剂量组SOD活性明显上升(P<0.05或P<0.01),ROS、MDA含量明显下降(P<0.01),p47phox mRNA及蛋白表达量均明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论:虫草益肾颗粒可通过增强SOD活性,降低ROS、MDA含量,改善HMCs氧化应激状态,延缓DKD进程。

Effects of Alpinia oxyphylla on oxidative stress and expression of p47phox in diabetic nephropathy rats

Objective:To explore whether Yizhi(Alpinia oxyphylla,AO)could treat diabetic nephropathy(DN)through the inhibition of p47phox expression which is related to oxidative stress.Methods:Model of DN was established in SD rats with high glucose and fat diet for 4 weeks after STZ intraperitoneal injection.The rats were randomly divided into blank group,model group,AO group and irbesartan(IRB)group.Drugs were administered for 4 weeks.Blood glucose and 24-hour urinary protein were measured regularly.The index of ROS,SOD,MDA and Nox2 were tested by ELISA and the expression of p47phox protein in renal tissues were tested by techniques of RT-PCR and Western blot.Results:The decrease of blood sugar in AO group and IRB group were not obvious(P>0.05)while the drugs could significantly reduce the amount of protein in urine(P<0.05).AO could decrease ROS,MDA and Nox2 and increase SOD(P<0.05).It also could inhibit the expression of p47phox which was increased in model group(P<0.05).The IRB group has the similar effects compared with AO group(P>0.05).Conclusion:AO could reduce the amount of 24-hour urinary protein in DN rats and the mechanism may be related to the inhibition of p47phox expression thus alleviates excessive oxidative stress response.

二苯基碘和夹竹桃麻素通过降低早产儿外周血单个核细胞p47phox位移与水平减少活性氧的产生

目的观察NADPH氧化酶抑制剂二苯基碘(DPI)和夹竹桃麻素(apocynin)对NADPH氧化酶亚基p47phox介导的活性氧(ROS)产生的影响,探讨细胞在高氧条件下,p47phox介导ROS产生的机制。方法 32周以下早产儿,尚未吸氧前取外周血2 m L,分离纯化外周血单个核细胞(PBMC)将所得细胞分为对照组、高氧组、高氧联合DPI处理组、高氧联合apocynin处理组进行培养。对照组置于37℃、50 m L/L的CO2培养箱中,高氧及相应处理组置于950 m L/L的O2与50 m L/L的CO2混合气体中培养48 h。采用Mitosox Red标记结合激光共聚焦显微镜检测PBMC内ROS的生成量、硫代巴比妥酸比色法检测培养液丙二醛含量、免疫荧光检测p47phox在细胞内的定位及移位率、Western blot法检测p47phox的蛋白水平。结果与高氧组相比,其余三组ROS和丙二醛明显减少,p47phox移位率与含量也显著降低;与对照组相比,高氧联合DPI处理组及高氧联合apocynin处理组ROS、丙二醛、p47phox移位率与含量并无显著差异。结论 DPI和apocynin能通过降低p47phox移位与含量来减少高氧诱导的ROS升高。

早产儿不同浓度氧暴露后外周血单个核细胞内p47phox蛋白与活性氧产生的相关性研究

目的观察早产儿不同浓度氧暴露后,外周血单个核细胞(PBMCs)内p47phox蛋白变化与活性氧(ROS)产生的相关性。方法 32周以下早产儿不同浓度氧疗48 h后,分离PBMCs,检测PBMCs内p47phox的定位情况、p47phox蛋白表达量及ROS的生成量。结果 p47phox随着吸氧浓度升高向细胞膜移位增加;p47phox的蛋白表达量及ROS生成量也随着吸氧浓度的升高而增加。结论早产儿氧暴露后,p47phox可能通过更多的向胞膜移位,增加其表达量来引起ROS产生的增加。

p47phox介导早产儿氧暴露后体内活性氧簇产生的机制

目的探讨早产儿氧暴露后，患儿外周血单个核细胞（PBMCs）内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶亚单位p47phox调节细胞内活性氧（ROS）升高的机制。方法胎龄〈32周需吸氧早产儿根据吸入氧体积分数（FiO2）不同分为3组：FiO2〈30％为低氧组、FiO2在30％-40％为中氧组、FiO2〉40％为高氧组。同期未吸氧的〈32周早产儿为对照组。氧疗48h后，各组经桡动脉采血3mL，分离PBMCs及血清，应用激光共聚焦显微镜检测PBMCs内ROS生成量，硫代巴比妥酸比色法检测血清丙二醛（MDA）水平，免疫荧光检测p47phox在细胞内定位及p47phox的活化率。结果早产儿氧暴露后，随着Fi02的升高，ROS与MDA逐渐升高，p47phox由胞质向胞膜移位的细胞数增多，p47phox的移位率也在增加；与刘照组相比，余3组ROS明显升高，差异有统计学意义（q=4．48、6．5、16．22，P均〈0．05）；MDA水平显著增加，差异有统计学意义（q=5．08、8．22、12．76，P均〈0．05）；p47phox的活化率比较差异也具有显著性差异（χ^2=134．008，P〈0．05）；与中氧组相比，高氧组ROS和MDA显著升高，差异有统计学意义（q=15．03、4．53，P均〈0．05）；p47phox的活化率明显增加，差异有统计学意义（χ^2=19．26，P〈0．05）。结论早产儿氧暴露后，p47phox可能通过向胞膜移位来调节PBMCs内NADPH氧化酶源性活性氧升高。

山茱萸果核醇提物对大鼠肾性高血压及心肌肥厚的影响

目的:观察山茱萸果核甲醇提取物对大鼠肾性高血压及其所致心肌肥厚的作用及机制。方法:建立大鼠肾性高血压(2K2C)模型。将动物分为假手术组、模型组及山茱萸果核醇提物高、低剂量组,每组10只。术后4w进行药物处理,给药4 w后测各组大鼠血压及左室体质量指数(LVM/BM)、心肌形态学变化;Western blot检测心肌组织中NAD(P)H氧化酶亚基P47phox、Nox4的表达情况。结果:模型组大鼠血压及LVM/BM显著高于假手术组,室内压最大上升/下降速率显著下降;给予山茱萸果核醇提物后,各组大鼠血压及LVM/BM显著降低,室内压最大上升/下降速率显著升高,心肌细胞肥大及纤维化程度显著减弱;模型大鼠P47phox、Nox4的蛋白表达较假手术组显著增加,而山茱萸果核组大鼠左心室P47phox、NOX4蛋白表达显著下降,且呈剂量依赖性。结论:山茱萸果核醇提物具有显著降压作用,并能显著抑制肾性高血压大鼠心肌中NAD(P)H氧化酶亚基P47phox和Nox4的表达,这可能是山茱萸果核醇提物改善心脏功能,减缓心肌重构的基础。

坎地沙坦抑制2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏氧化应激反应

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂坎地沙坦治疗对自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏氧化应激的影响及其作用机制。方法糖尿病KK/Ta小鼠随机分为:非治疗组;早期治疗组:自6周龄起经口给予坎地沙坦(4 mg.kg-.1d-1);晚期治疗组:自12周龄起给予坎地沙坦(4 mg.kg-1.d-1)。正常对照组采用BALB/c小鼠。应用免疫组化染色检测肾脏中DNA氧化损伤的标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG),免疫组化和竞争性RT-PCR检测NADPH氧化酶p47phox亚基mRNA和蛋白的表达。同时测定尿白蛋白排泄率、血压和糖耐量等临床指标。结果与同龄BALB/c小鼠比较,28周龄KK/Ta小鼠尿白蛋白排泄率增加(P<0.01),肾脏NADPH氧化酶p47phox的mRNA和蛋白表达上调(P<0.01),8-OHdG的形成增加(P<0.01)。坎地沙坦治疗减少尿白蛋白排泄率(P<0.01),抑制肾脏NADPH氧化酶p47phox mRNA和蛋白的表达(P<0.01),减少8-OHdG的形成(P<0.01),早期治疗组和晚期治疗组的作用无统计学差异(P>0.05)。结论坎地沙坦治疗通过下调糖尿病状态下肾脏NADPH氧化酶p47phox的表达,抑制氧化应激反应,延缓糖尿病肾病的进展。

健脾清化方对AngⅡ刺激下大鼠系膜细胞NADPH/p38MAPK氧化应激通路的影响

目的研究健脾清化方对AngⅡ刺激下大鼠系膜细胞NADPH/p38MAPK通路的影响。方法 SD大鼠分为正常组、健脾清化方组(5.8 g/kg)、氯沙坦组(10 mg/kg),灌胃给药3d后,腹主动脉取血,得含药血清。大鼠肾小球系膜细胞株随机分为6组,分别予10%正常大鼠血清、10%健脾清化方含药血清、10%氯沙坦含药血清、10%正常大鼠血清和100 nmol/L AngⅡ、10%健脾清化方含药血清和100 nmol/L AngⅡ、10%氯沙坦含药血清和100 nmol/L AngⅡ,处理24 h。RT-PCR法检测p47phox mRNA表达,化学发光法检测MDA、SOD水平,Western blot法检测p-p38MAPK蛋白表达。结果与10%正常大鼠血清组比较,10%正常大鼠血清+AngⅡ组SOD水平明显减弱,MDA水平明显增加,p47phox mRNA以及p-p38MAPK蛋白表达显著增高(P<0.01);健脾清化方干预后,能明显改善AngⅡ刺激后大鼠系膜细胞以上各指标。结论健脾清化方可能通过抑制被AngⅡ激活的大鼠系膜细胞NADPH/p38氧化应激通路,从而延缓慢性肾衰进程。

p47^(phox)基因第6外显子多态性与长沙市汉族人群脑出血的关联研究

目的探讨p47phox基因第6外显子A566G(Asn166Asp)多态性与湖南省长沙市汉族人群脑出血的关系。方法采用PCR-单链构象多态技术和DNA直接测序法检测湖南省长沙市汉族人群110例脑出血患者、10个脑出血家系成员110例和100名健康对照者的p47phox基因第6外显子A566G多态性,同时检测血脂水平。结果脑出血组及脑出血家系组A566G(Asn166Asp)多态基因频率分布与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。脑出血家系组中患病组和未患病组及脑出血组的A566G多态分布与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。脑出血组中各基因型血脂水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论湖南省长沙市汉族人群p47phox基因A566G多态性可能与脑出血的易患性无关。

SM22α通过p47^(phox)调控足细胞氧化应激的研究

在足细胞凋亡的众多原因中,氧化应激是足细胞凋亡发生的基质,是肾脏病进展的最重要特征。足细胞凋亡时,氧化应激的确切机制及信号通路尚不完全明确。目的探讨平滑肌22α(smooth muscle 22 alpha,SM22α)通过phospho-p47^(phox)(p47^(phox))调控血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,Ang Ⅱ)诱导的足细胞的氧化应激。方法①通过实时定量PCR(quantitative real time-polymerase chain reaction,q RT-PCR)技术检测足细胞在正常和AngⅡ刺激下,SM22α、p47^(phox)等蛋白的表达情况。②应用Western Blot技术观察足细胞在正常和AngⅡ刺激下SM22α、p47^(phox)表达变化。③敲减SM22α,检测p47^(phox)等的表达情况。④SM22α的磷酸化p47^(phox)的表达情况。结果①AngⅡ诱导下,足细胞的SM22α的mRNA表达显著下调(t12h=2.215,P12h=0.041),p47^(phox)的mRNA表达显著升高(t12h=3.955,P12h=0.025)。②AngⅡ刺激下,SM22α表达下调(t^(12h)=2.215,P^(12h)=0.041),加速了足细胞氧化应激的发生(12小时的时候达到高峰,t^(12h-DHE)=2.547,P^(12h-DHE)=0.042,t^(12h-TBA)=3.689,P^(12h-TBA)=0.022)。结论 AngⅡ诱导了SM22α功能失调,SM22α磷酸化后活化p47^(phox),揭示了SM22α在足细胞的氧化应激中起到了重要作用。

大鼠局灶性脑缺血再灌注脑内p47^(phox)表达变化的研究

目的通过观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后p47phox基因在脑内表达动态变化,探讨p47phox在局灶性脑缺血再灌注后对脑缺血损害的作用及机制,可能为p47phox基因作为脑卒中的候选基因提供理论依据。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑缺血再灌注组和假手术组再灌后第1、3、6、12和24h和正常对照组p47phox基因在脑内的表达。结果正常对照组和假手术组大鼠脑皮质内有少量p47phox mRNA表达,组内各时间点比较无统计学意义(P>0.05);脑缺血再灌注组,缺血再灌注1h后p47phox mRNA表达增加,至3h达高峰(与假手术组和正常对照组相比差异显著,P<0.01)。结论p47phox可能参与了脑缺血再灌注后损伤,并在其中发挥了重要作用。

利多卡因对人离体中性白细胞超氧阴离子和p47^(phox)磷酸化的影响

目的用人离体中性白细胞研究利多卡因对刺激剂诱导超氧阴离子产生,蛋白质酪氨酸磷酸化和NADPH氧化酶组成因子p47phox和p67phox从细胞质向细胞膜移动的影响。方法用细胞色素C还原法测定不同浓度利多卡因对3种刺激剂介导的中性白细胞释放超氧阴离子量。用Western blot检测中性白细胞蛋白质的磷酸化及NADPH氧化酶细胞质因子p47phox和p67phox的磷酸化。结果利多卡因可呈浓度依赖性抑制f MLP(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine)介导的中性白细胞释放超氧阴离子,而对PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate)或AA(arachidonic acid)介导的中性白细胞释放超氧阴离子并无影响。利多卡因呈浓度依赖性抑制f MLP介导的中性白细胞蛋白质(86.0,58.0,45.0 kDa)的磷酸化,与利多卡因对中性白细胞释放超氧阴离子的影响相一致,另外利多卡因还可抑制细胞质因子p47phox和p67phox的从细胞质向细胞膜的移动,从而抑制NADPH氧化酶释放超氧阴离子。结论利多卡因呈浓度依赖性抑制f MLP介导的中性白细胞产生超氧阴离子,这一作用与抑制细胞的一些蛋白质磷酸化及p47phox和p67phox从细胞质向细胞膜移动有关。