Construction and evaluation of anti-gastrin immunogen based on P64K protein

瞄准：从奈瑟氏菌属 meningitids 基于 P64K 蛋白质构造二种 anti-gastrin 免疫情报并且比较他们的产生免疫性的效果。方法：G17P64K 基因被克隆并且绑扎进 pET28a 原生质标志，然后转变了成 BL21 (DE3 ) 。在磅媒介和 IPTG 正式就职的接种以后， recombinant 蛋白质 solubly 在高水平被表示。G17P64K 熔化蛋白质的纯化类似于 P64K 的。纯化由 30% 组成的起始的步浸透了硫酸铵降水被做。另外的好优化包括了 phenyl-sepharose， G200 Sephadex 胶化过滤和 Q-sepharose 阴离子 exchanger 层析。高度净化的蛋白质在 N 终端氨基酸残余被获得并且定序。多肽被 MBS 方法然后兔子 anti-gastrin 被 Fmoc 稳固的阶段化学法和 cross-linked 综合到搬运人蛋白质 P64K 和 DT 异种 17 抗体被与 cross-linked 使兔子免疫准备并且熔化了蛋白质。效价和抗体的活动在试管内被估计。结果：G17P64K 基因和 recombinant 细菌被获得。在四步纯化以后，超过 90% 有纯净的蛋白质样品被完成。在 84 (th ) 在第一免疫以后的白天，对 cross-linked 蛋白质的抗体的效价到达了 51,200。抗体在试管内的评估表明了那它在肿瘤房间 SW480 的生长上举办了一项高禁止的活动。结论：P64K 多肽 cross-linked 免疫情报使兔子免疫并且对促胃液素完成了更高的效价抗体 17 比 G17P64K 熔化蛋白质免疫情报，它能禁止肿瘤细胞 SW480 的生长。

新型载体蛋白P64K在大肠杆菌中的可溶性表达与纯化

用常规PCR方法从脑膜炎球菌中克隆出P64K基因,构建重组质粒pET28a-P64K转化BL21穴DE3雪宿主菌,经IPTG诱导表达筛选P64K蛋白的高表达菌株。结果证实P64K蛋白为胞内可溶性表达,表达量约占胞内总蛋白的30%。重组P64K蛋白经Butyl疏水柱、G200分子筛柱和Q阴离子柱三步层析后纯度达到95%以上,为今后进一步的功能和应用研究打下了良好的基础。

重组脑膜炎球菌P64K蛋白的表达、纯化及载体作用

目的表达并纯化重组脑膜炎球菌P64K蛋白，观察其载体作用。方法利用基因工程技术在大肠杆菌中表达P64K蛋白，用硫酸铵盐析沉淀和两步层析纯化P64K蛋白。以重组P64K蛋白为载体蛋白，以已二酰肼为连接剂，在碳化二亚胺的作用下，将P64K蛋白与活化的A群脑膜炎球菌多糖（group A meningococcal polysaccharide, GAMP）结合，制备GAMP-P64K结合物。免疫BALB／c小鼠，间接ELISA法测定血清特异性抗P64K蛋白和GAMPIgG抗体，分析P64K蛋白的免疫原性。结果重组P64K蛋白在大肠杆菌中主要以可溶性形式表达，表达量约占菌体总蛋白的35％。动物实验证明，重组P64K蛋白具有较强的免疫原性，表明P64K蛋白具有载体蛋白作用。结论在大肠杆菌中成功表达了重组P64K蛋白，以重组P64K蛋白为载体制备的GAMP—P64K结合物具有良好的免疫原性。这为以重组P64K蛋白为蛋白载体制备其他结合疫苗奠定了实验基础。