红景天多糖对猪卵母细胞体外成熟及其发育潜力的影响

旨在探讨红景天多糖(Rhodiola sachalinensis polysaccaride,RSP)对猪卵母细胞体外成熟及发育潜力的影响。在猪卵母细胞成熟液中添加不同浓度的RSP,以排出第一极体作为核成熟的标志,观察卵母细胞核成熟情况,统计孤雌激活(PA)及体外受精(IVF)后胚胎的卵裂率和囊胚率,并检测卵母细胞内谷胱甘肽(GSH)的浓度及活性氧(ROS)水平。结果表明:与对照组(83.50%±1.00%)相比,添加0.6、6.0和60.0mg.L-1的RSP均能提高其核成熟率,但差异不显著(P>0.05);6.0和60.0mg.L-1的RSP组能显著提高卵母细胞内GSH含量(P<0.05),随着RSP浓度的增加可以降低ROS水平,但是各组之间差异不显著(P>0.05);孤雌激活中,60.0mg.L-1 RSP组的卵裂率(88.44%±5.06%)和6.0 mg.L-1 RSP的囊胚率(40.94%±8.23%)最高,且显著高于对照组(72.16%±7.38%和24.06%±5.16%,P<0.05);与对照组(33.52%±4.05%)相比,0.6、6.0和60.0mg.L-1RSP组体外受精卵裂率均显著提高(P<0.05),60.0mg.L-1 RSP组的囊胚率达(19.20%±3.13%),显著高于对照组的(9.60%±0.65%,P<0.05)。由此可见,在猪卵母细胞成熟过程中添加适当浓度的RSP,能提高其核成熟率,促进胞质成熟,从而提高其孤雌激活和体外受精后的胚胎发育能力。

亮甲酚蓝染色对水牛卵母细胞体外受精和孤雌激活胚胎发育的影响

[目的]探讨亮甲酚蓝(BCB)染色对水牛卵母细胞体外受精及孤雌激活胚胎发育的影响。[方法]卵丘卵母细胞复合体(COCs)在体外成熟培养前用浓度26μmol/L的亮甲酚蓝染色90 min,然后根据卵母细胞胞质蓝色的有无分为阳性(BCB+,蓝色)和阴性组(BCB-,不着色)。以未经染色处理的COCs为对照组,控制对照组卵母细胞在含0.4%牛血清白蛋白(BSA)的杜氏磷酸盐缓冲液(DPBS)中孵育90 min。体外成熟培养后统计各组的成熟率、体外受精和孤雌激活后的发育率。[结果]BCB+组的成熟率(65.70%)显著高于对照组(59.86%)、控制对照组(58.42%)和BCB-组(48.86%)。在体外受精后的囊胚发育率方面,BCB+组(27.08%)和对照组(25.49%)差异不显著,但显著高于控制对照组(20.50%)和BCB-组(8.45%)。在孤雌激活后的囊胚发育率方面,BCB-组显著低于其他各组,但BCB+组、对照组以及控制对照组之间无显著差异。[结论]亮甲酚蓝染色筛选出的阳性卵母细胞具有较好的核成熟发育潜能,但并不能显著提高卵母细胞体外受精及孤雌激活后的胚胎发育率。

组织蛋白酶抑制剂E-64对猪卵母细胞体外发育能力的影响

为探明外源性组织蛋白酶抑制剂(E-64)对猪卵母细胞体外发育能力的影响,通过向成熟液中添加1、5、10μmol/L的外源性组织蛋白酶抑制剂,对猪卵丘-卵母细胞复合体(COCs)进行体外成熟培养46 h,统计第一极体率,随后分别进行体外受精和孤雌激活,统计第2天的卵裂率和第7天的囊胚率。结果表明,成熟液中加入1μmol/L E-64的第一极体排出率显著高于未添加的对照组以及5、10μmol/L E-64的添加组。将体外成熟的卵母细胞进行体外受精及孤雌激活,体外受精后胚胎的卵裂率与囊胚率结果均为成熟液中加入1μmol/L E-64的添加组显著高于对照组以及5、10μmol/L E-64的添加组;孤雌激活后,4组间胚胎的卵裂率差异不显著,囊胚率为10μmol/L E-64的添加组显著低于其他3组。因此1μmol/L E-64能促进猪卵母细胞的核成熟,并能进一步提高其体外受精后的卵裂率和体外培养的囊胚率。