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PADRE/MUC4重组腺病毒转染树突状细胞诱导特异性CTL体外杀伤作用研究
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作者 吴峻立 卫积书 +5 位作者 孟凯 高文涛 陈建敏 张静静 朱毅 苗毅 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1349-1352,F0002,共5页
目的:观察PADRE/MUC4重组腺病毒转染树突状细胞(DC)诱导特异性细胞毒性T细胞(CTL)及体外特异性杀伤作用。方法:pAd-CMV-PADRE/MUC4转染HLA-A2健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)来源的未成熟DC,TNF-α诱导成熟后与自体PBMC混合培养刺激3... 目的:观察PADRE/MUC4重组腺病毒转染树突状细胞(DC)诱导特异性细胞毒性T细胞(CTL)及体外特异性杀伤作用。方法:pAd-CMV-PADRE/MUC4转染HLA-A2健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)来源的未成熟DC,TNF-α诱导成熟后与自体PBMC混合培养刺激3周,Cr51和Elispot实验检测CTL体外杀伤活性。结果:Cr51和Elispot检测结果显示PADRE/MUC4转染DC可以诱导产生特异性CTL,而pAd-CMV-GFP组和空白对照组不能产生有效特异性CTL。结论:腺病毒载体介导多表位嵌合基因(PADRE/MUC4)转染未成熟DC,在体外可以诱导产生特异性CTL,对表达MUC4肿瘤细胞具有杀伤效应。 展开更多
关键词 padrE/MUC4 腺病毒 树突状细胞 细胞毒性T淋巴细胞
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PadR对须糖多孢菌丁烯基多杀菌素生物合成及转运相关蛋白表达的影响 被引量:3
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作者 何思颖 柏丹 +4 位作者 夏伦 万千千 罗粤雯 邱玉玲 夏立秋 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2019年第5期44-51,共8页
为研究padR基因表达对须糖多孢菌(Saccharopolyspora pogona)次级代谢产物生物合成及相关蛋白表达的影响,在对须糖多孢菌基因组测序结果的基础上,从基因组中克隆了padR基因上、下游同源臂,利用融合PCR将硫链丝菌素抗性基因插入上、下游... 为研究padR基因表达对须糖多孢菌(Saccharopolyspora pogona)次级代谢产物生物合成及相关蛋白表达的影响,在对须糖多孢菌基因组测序结果的基础上,从基因组中克隆了padR基因上、下游同源臂,利用融合PCR将硫链丝菌素抗性基因插入上、下游同源臂之间,将融合片段与穿梭载体pOJ260连接,构建敲除载体pOJ260-UHA-tsr-DHA。通过接合转移将其导入野生型须糖多孢菌中,通过同源臂双交换获得须糖多孢菌敲除菌株S.pogona-ΔpadR。经HPLC检测分析,敲除菌株次级代谢产物丁烯基多杀菌素产量与原始菌株相比提高了27.3%,且有7个转运相关蛋白出现表达上调。这一研究表明padR基因的敲除能够有效促进须糖多孢菌丁烯基多杀菌素的生物合成。该研究对优化须糖多孢菌丁烯基多杀菌素的生物合成途径具有一定的指导意义,为研究padR基因表达在链霉菌次级代谢产物合成中的作用打下了基础。 展开更多
关键词 须糖多孢菌 padr 转录调控因子 转运蛋白 丁烯基多杀菌素
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PADRE-TGFβ1融合蛋白的原核表达及鉴定
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作者 许道军 余兴龙 +1 位作者 刘雪燕 薛立群 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第3期61-65,共5页
构建PADRE-TGFβ1原核表达质粒,并对其进行诱导表达和反应原性分析。对PADRE、联接序列(Linker)及TGFβ1的基因序列进行密码子优化,采用全基因合成的方法人工合成全长PADRE-Linker-TGFβ1序列,合成产物克隆至pET-28a(+)质粒。将构建好... 构建PADRE-TGFβ1原核表达质粒,并对其进行诱导表达和反应原性分析。对PADRE、联接序列(Linker)及TGFβ1的基因序列进行密码子优化,采用全基因合成的方法人工合成全长PADRE-Linker-TGFβ1序列,合成产物克隆至pET-28a(+)质粒。将构建好的质粒转化至E.coliBL21(DE3)感受态细胞,经1 mmol/L IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,在约19.87 ku处出现与预期目的蛋白一致的新蛋白条带,Western blot鉴定结果显示,该蛋白能够与TGFβ1抗体发生特异性结合。表明成功构建了pET28-PADRE-TGFβ1原核表达质粒,表达的融合蛋白质具有TGFβ1的反应原性,为TGFβ1自体疫苗的制备及应用奠定了基础。 展开更多
关键词 转生长因子β1 通用型辅助性T淋巴细胞表位 融合蛋白 原核表达
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季节变化对辣椒品种Padr ón果实辣味程度的影响
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作者 伊斯特奈达·彼 戴兹·吉 +2 位作者 默利诺·夫 伯那尔·门·埃 张竹青 《中国辣椒》 2002年第1期46-47,共2页
1997年6月至10月,我们对Padr (?)n辣椒果实进行了研究,结果表明,季节变化对Padr (?)n辣椒果实重和干重的积累无显著影响,不同月份果实辣椒素类物质(类辣椒素)的积累方式相同,但整个研究阶段的最后几个月辣椒素类物质水平却显著增加。
关键词 辣椒 季节变化 padr ón”品种 辣味 影响因素 果实重 干重
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Against the Authoritarian Orator and His Paterfamilias:Deviant Literarity and Orphaned Speech in El padre mlo by Diamela Eltit and Lotty Rosenfeld
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作者 Nan Zheng 《Journal of Foreign Languages and Cultures》 2021年第2期12-21,156,共11页
Published in the last year of Augusto Pinochet Ugarte’s military dictatorship saw its end,My Father(Elpadre mid)constitutes an interprofessional,collaborative work between Chile National Literature Prize winner Diame... Published in the last year of Augusto Pinochet Ugarte’s military dictatorship saw its end,My Father(Elpadre mid)constitutes an interprofessional,collaborative work between Chile National Literature Prize winner Diamela Eltit and visual artist Lotty Rosenfeld,composed of unaltered transcriptions of three monologues(dis)articulated by a schizophrenic vagrant who referred to himself as My Father.By re-enacting the vagrant’s irrational utterances in a truthfill but parodic manner,Eltit and Rosenfeld“orphaned”these spoken words into a work of written literature that mocked the authoritarian voice of the dictator who had imposed himself as the Grand Orator of the Nation and the Father of Chile.The main objective of the present work,which is principally based on the conceptualization of Mute Speech by Jacques Ranciere,is to examine the political dimension of Eltit and Rosenfeld’s aesthetic endeavor:through an exploration of the possibilities of political emancipation that the vagrant’s fatherless monologues fostered in My Father,our study demonstrates that what neoliberal civil society presupposes as objectionable animalistic noises may be capable of intervening in what Ranciere refers to as the“distribution of sensible”and its consolidated aesthetics of hierarchy,thus subverting the fable of paterfamilias and pater patriae concocted by Pinochet’s right-wing military regime. 展开更多
关键词 El padre mio Diamela Eltit Lotty Rosenfeld Chile DICTATORSHIP Jacques Ranciere
原文传递
Hsp65与HBV多表位融合基因的表达及其免疫应答研究 被引量:4
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作者 王华 尹晓光 +3 位作者 张培因 卫红飞 于永利 王丽颖 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期487-490,共4页
目的用基因工程的方法构建并表达一种由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV表面抗原与核心抗原的多个表位组成的乙型肝炎治疗性疫苗(简称为Hsp65-HBV)。方法采用PCR方法人工合成由PADRE和HBV的多个表位组成的基因片段,将此片段克隆... 目的用基因工程的方法构建并表达一种由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV表面抗原与核心抗原的多个表位组成的乙型肝炎治疗性疫苗(简称为Hsp65-HBV)。方法采用PCR方法人工合成由PADRE和HBV的多个表位组成的基因片段,将此片段克隆入原核表达质粒pET28a/Hsp65后,利用大肠杆菌进行融合蛋白的表达。用纯化后的蛋白免疫Balb/c小鼠。将小鼠脾细胞用HBsAg装载的P815细胞在体外刺激5d后,用流式细胞仪检测IFN-γ+细胞的频率。用ELISA方法检测小鼠血清中的特异性抗体(IgG1和IgG2a)的产生。结果由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV的多个表位组成的融合蛋白能在大肠杆菌中进行高水平的表达,能诱导小鼠产生IgG2a亚型的特异性抗体,并能诱导HBV特异性的IFN-γ+的淋巴细胞的产生。结论获得了大肠杆菌表达的由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV的多个表位组成的融合蛋白,并能被机体以MHC-Ⅰ途径递呈,为检测本融合蛋白是否能激发出HBV特异性CTL反应奠定了基础。 展开更多
关键词 热休克蛋白65 padrE 乙型肝炎病毒 多表位
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修饰的ORF5基因增强猪繁殖与呼吸综合征DNA疫苗的体液免疫 被引量:6
7
作者 江云波 方六荣 +3 位作者 肖少波 牛传双 张辉 陈焕春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期1-3,共3页
为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) ORF5基因 DNA疫苗的免疫效力 ,将通用型辅助性 T淋巴细胞表位 (PADRE)插入 ORF5的中和表位和覆盖表位间 ,获得修饰后的 ORF5基因 ORF5 M。在此基础上 ,进一步构建了ORF5 M的真核表达质粒 p CI- ... 为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) ORF5基因 DNA疫苗的免疫效力 ,将通用型辅助性 T淋巴细胞表位 (PADRE)插入 ORF5的中和表位和覆盖表位间 ,获得修饰后的 ORF5基因 ORF5 M。在此基础上 ,进一步构建了ORF5 M的真核表达质粒 p CI- 5 2 M。间接免疫荧光证实体外表达后 ,免疫 BAL B/c小鼠 ,检测免疫后的 EL ISA抗体和中和抗体 ,并与未经修饰的 ORF5基因真核表达质粒 p CI- 5 2进行比较。结果表明 ,修饰后的 DNA疫苗 p CI- 5 2 M诱导的 EL ISA抗体和中和抗体均明显优于未经修饰的 DNA疫苗 p CI- 5 2 ,是一种具有良好开发前景的 展开更多
关键词 ORF5基因 ELISA抗体 猪繁殖与呼吸综合征病毒 PRRSV 新型疫苗 免疫效力 覆盖 DNA疫苗 中和抗体 体液免疫
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T辅助细胞在疫苗研制中的作用(英文) 被引量:2
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作者 Waiyan Candy Ng 冯明钊 《热带医学杂志》 CAS 2002年第3期207-214,共8页
发展感染性疾病疫苗之关键挑战在于利用确定的抗原以刺激产生能引起保护作用的合适的免疫反应。肽类疫苗的运用得到了极大的关注 ,其意义在于 ,已知不同的多表位构成单一结构以诱导出所希望的免疫反应所表现出的灵活性。这一般比利用减... 发展感染性疾病疫苗之关键挑战在于利用确定的抗原以刺激产生能引起保护作用的合适的免疫反应。肽类疫苗的运用得到了极大的关注 ,其意义在于 ,已知不同的多表位构成单一结构以诱导出所希望的免疫反应所表现出的灵活性。这一般比利用减毒的活疫苗要安全并且相对而言比制造亚单位疫苗要容易。然而 ,多肽疫苗的发展面临巨大挑战。这一方法在诱导遗传背景复杂的人群免疫反应方面受到限制 ,这与主要组织相溶性复合物 (MHC)多态性有关。因同样的理由 ,肽类免疫应答常因缺乏适当的辅助T淋巴细胞 (HTL)而引导出不充分的细胞毒素T淋巴细胞 (CTL)和抗体反应。另一个运用线性肽链结构的可能缺点是 :为了引导出合适抗体反应 ,表面免疫球蛋白受体簇对于激活静息的B细胞就成为必须因素。由MHC多肽性引起的问题可由运用不加区别的T细胞表位来解决。从麻疹病毒F蛋白 (氨基酸 2 88到 30 2 )中得到的不加区别的T细胞表位和鼠的确定结合在多种MHC分子上的辅助T细胞表位 (V1EB ,aa 191- 2 0 9)已被定性并且被用于能极大激发免疫应答的结构中 ,以克服单一限制型免疫应答的缺陷。合成的 ,非自然PanDR表位 (PADRE)具有退化的结合几种通常HLA DR的能力 ,能以绝对效价和抗体反应质量两种形式来增强激发短肽链的免疫应答。另外 ,? 展开更多
关键词 T细胞表位 疫苗 padrZ MHCⅡ 免疫反应 灵活性 辅助T淋巴细胞 细胞毒素T淋巴细胞 肽类
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用辅助性T细胞表位增强猪带绦虫DNA疫苗的免疫保护反应 被引量:1
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作者 刁振宇 邓小昭 +6 位作者 周宗安 陶开华 王元伦 刘玉 顾志香 吴琳 高键 《药物生物技术》 CAS CSCD 2004年第4期225-228,共4页
在猪绦虫融合抗原 pCC2 7(本室从六钩蚴cDNA表达文库筛选的 3个保护性抗原经拼接所得 )基因片段 5′末端引入 1个通用型辅助性T淋巴细胞表位、2个谷胱甘肽还原酶的辅助性T淋巴细胞表位 (TGG) ,构建成DNA疫苗。通过肌肉注射途径将这种DN... 在猪绦虫融合抗原 pCC2 7(本室从六钩蚴cDNA表达文库筛选的 3个保护性抗原经拼接所得 )基因片段 5′末端引入 1个通用型辅助性T淋巴细胞表位、2个谷胱甘肽还原酶的辅助性T淋巴细胞表位 (TGG) ,构建成DNA疫苗。通过肌肉注射途径将这种DNA疫苗免疫小鼠和仔猪。动物试验结果表明 ,TGG表位可提高小鼠血清 pCC2 7抗体IgG、IgG1、IgG2a的水平 ,且长时间保持较高应答水平。用该疫苗免疫仔猪获得了 89%的保护率。 展开更多
关键词 猪带绦虫 DNA疫苗 辅助性T淋巴细胞表位 谷胱甘肽还原酶
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美军随军牧师制度的特点分析与启示 被引量:1
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作者 高莉莉 翟琼 《空军预警学院学报》 2013年第6期452-454,457,共4页
为了加强我军政治思想建设,简单回顾了美军随军牧师制度的历史演变,从法律依据、配备形式、工作职责、选拔任命、问题挑战等方面对该制度进行了特点分析,提出了对我军政治思想工作的七点启示.
关键词 美军随军牧师 思想建设 特点分析 核心价值观
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信号肽和辅助性T细胞表位以及GST表位增强猪带绦虫保护性抗原诱导免疫应答的初步研究
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作者 刁振宇 邓小昭 +4 位作者 张双全 周宗安 陶开华 刘玉 王元伦 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期45-48,71,共5页
目的 研究信号肽和辅助性T细胞表位以及GST表位增强猪带绦虫保护性抗原诱导的免疫应答。方法 在猪绦虫融合抗原 pCC2 7(本室从六钩蚴cDNA表达文库筛选的三个保护性抗原经拼接所得 )基因片段 5′末端引入人IL - 2信号肽、一个通用型辅... 目的 研究信号肽和辅助性T细胞表位以及GST表位增强猪带绦虫保护性抗原诱导的免疫应答。方法 在猪绦虫融合抗原 pCC2 7(本室从六钩蚴cDNA表达文库筛选的三个保护性抗原经拼接所得 )基因片段 5′末端引入人IL - 2信号肽、一个通用型辅助性T淋巴细胞表位 ,谷胱甘肽还原酶的T和B淋巴细胞表位 (TGG) ,经pGEX4T - 2表达鉴定 ,序列分析后构建成DNA疫苗 ,通过肌肉注射途径将这种DNA疫苗免疫小鼠。结果 这种含辅助表位的DNA疫苗诱导的免疫应答效果明显超过对照组 ,对绦虫卵攻击的保护率为 90 %。结论 构建了含绦虫融合抗原 pCC2 7及TGG的核酸疫苗 ,动物试验结果表明 ,TGG表位既可提高IgG、IgG1、IgG2a的水平 ,又进一步增强Th1和Th2细胞间的平衡关系。免疫小鼠对绦虫卵的攻击具有很好的保护作用。 展开更多
关键词 信号肽 辅助性T细胞表位 GST 绦虫 保护性抗原 免疫应答
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胰腺癌MUC4抗原多表位嵌合基因重组腺病毒载体的构建及其在COS-7细胞的表达
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作者 高文涛 卫积书 +2 位作者 吴竣立 孟凯 苗毅 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1358-1362,F0002,共6页
目的:构建含有胰腺癌MUC4抗原多表位嵌合基因的腺病毒载体,并转染真核细胞COS-7。方法:多参数分析预测MUC4抗原HLA-A1、HLA-A2限制性CD8+T细胞表位kozac序列、引导序列以及通用Th表位PARDE和多表位基因串连后合成嵌合全基因。嵌合基因... 目的:构建含有胰腺癌MUC4抗原多表位嵌合基因的腺病毒载体,并转染真核细胞COS-7。方法:多参数分析预测MUC4抗原HLA-A1、HLA-A2限制性CD8+T细胞表位kozac序列、引导序列以及通用Th表位PARDE和多表位基因串连后合成嵌合全基因。嵌合基因克隆到腺病毒穿梭载体pAdshuttle-CMV获得重组质粒pAdshuttle-CMV-PE。酶切鉴定后,将正确的重组质粒转化含有腺病毒骨架载体的BJ5183菌进行同源重组。PacⅠ酶切和测序鉴定正确的重组子,脂质体介导转染Ad293细胞,通过观测绿色荧光蛋白(GFP)的表达和PCR扩增目的基因的方法鉴定重组腺病毒(rAd-PE)。Ad293细胞反复感染冻融扩增病毒,流式细胞仪和TCID50检测病毒滴度。病毒颗粒感染COS-7细胞,荧光显微镜观测绿色荧光蛋白的表达以及SDS-Page分析多表位嵌合蛋白的表达。结果:成功构建了含有胰腺癌MUC4的多表位嵌合基因重组腺病毒,病毒滴度为1×1010pfu/ml。SDS-Page发现在16kD处有一符合预期大小的蛋白表达。结论:该重组腺病毒成功构建并能够在真核细胞COS-7中表达,为下一步胰腺癌的肿瘤疫苗研究奠定相应的基础。 展开更多
关键词 腺病毒载体 MUC4 通用Th表位 嵌合基因 肿瘤疫苗
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基于以太网层PPPoe协议流程分析与研究 被引量:2
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作者 罗恩韬 《湖南科技学院学报》 2008年第8期85-88,共4页
PPPOE协议提供了在广播式的网络(如以太网)中多台主机连接到AC(接入集中器)的一种标准。在这种网络模型中,我们不难看出所有用户的主机都需要能独立的初始化自已的PPP协议栈,而且通过PPP协议本身所具有的一些特点,能实现在广播式网络上... PPPOE协议提供了在广播式的网络(如以太网)中多台主机连接到AC(接入集中器)的一种标准。在这种网络模型中,我们不难看出所有用户的主机都需要能独立的初始化自已的PPP协议栈,而且通过PPP协议本身所具有的一些特点,能实现在广播式网络上对用户进行计费和管理。为了能在广播式的网络上建立、维持各主机与AC之间点对点的关系,那么就需要每个主机与Ac之间能建立唯一的点到点的会话,本文根据PPPOE协议的约定对PPPOE协议流程进行了分析和利用Ethereal工具进行抓包研究实现。 展开更多
关键词 基于以太网层PPPoe协议流程分析与研究
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美国军事文化特点分析
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作者 高莉莉 刘文俊 《空军雷达学院学报》 2012年第5期364-366,共3页
从组织文化的定义和特点出发,介绍了美国军事文化的内涵以及纪律、职业道德、仪式和礼仪、凝聚力和集体精神四大要素.从美国军事文化的本源出发,分析了美国军队在构建核心价值观的同时注重军兵种文化的建设、各种激励机制的保障制度的... 从组织文化的定义和特点出发,介绍了美国军事文化的内涵以及纪律、职业道德、仪式和礼仪、凝聚力和集体精神四大要素.从美国军事文化的本源出发,分析了美国军队在构建核心价值观的同时注重军兵种文化的建设、各种激励机制的保障制度的建立、利用宗教对美军官兵进行的精神控制和道德引导.这对深入理解美国战略思想、提高我军军事文化这一软实力有一定的参考. 展开更多
关键词 美国军事文化 职业道德 核心价值观 随军牧师 软实力
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趋化因子受体CCR5胞外段重组蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定 被引量:3
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作者 吴孔田 张英起 颜真 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第5期412-415,共4页
目的:构建趋化因子受体5(CCR5)胞外段重组蛋白(命名为:rCCR5)原核表达载体,并进行诱导表达.对表达产物进行纯化和鉴定.方法:截取CCR5胞外结构4个片段N-Term,ECL1,ECL2和ECL3的氨基酸序列,应用柔性linker分别串联,模拟CCR5胞外结构,依据... 目的:构建趋化因子受体5(CCR5)胞外段重组蛋白(命名为:rCCR5)原核表达载体,并进行诱导表达.对表达产物进行纯化和鉴定.方法:截取CCR5胞外结构4个片段N-Term,ECL1,ECL2和ECL3的氨基酸序列,应用柔性linker分别串联,模拟CCR5胞外结构,依据大肠杆菌偏爱密码子人工合成基因.运用基因重组方法在大肠杆菌中进行表达,表达产物经纯化、复性后进行Westernblot鉴定.结果:目的蛋白以包涵体形式存在,经包涵体洗涤、变性溶解,SephacrylS-300凝胶过滤层析及SephacrylS-100凝胶柱复性获得了纯化的蛋白质,目的蛋白能与CCR5mAb特异性结合.结论:获得了大量纯化的rCCR5重组蛋白,可作为研制CCR5自体蛋白疫苗以阻断HIV-1感染的候选抗原蛋白. 展开更多
关键词 CCR5 人工手动HTL表位 包涵体 复性 自体疫苗 HIV-1感染
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