PCV2通过NF-κB/NLRP3信号通路调控体外培养PAMs分泌IL-1β

为探讨猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)诱导猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)产生白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的分子机制,试验选取2头PCV2和PRRSV抗原、抗体均为阴性的6周龄普通仔猪,无菌分离PAMs,以体外培养的PAMs为研究对象,采用ELISA方法检测PAMs培养上清液中IL-1β的生成,采用实时荧光定量PCR方法检测PAMs中NLRP3和凋亡相关点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)的mRNA表达水平,分别用小干扰RNA(siRNA)方法和核因子-kappa B(NF-κB)抑制试验分析NLRP3和NF-κB对PCV2诱导PAMs产生IL-1β的调控作用。结果显示,PCV2感染PAMs后能够显著或极显著增加IL-1β、NLRP3(1h除外)和ASC(1、3h除外)的生成(P<0.05;P<0.01)。siRNA能使58.3%的NLRP3基因沉默,且NLRP3沉默后PCV2诱导PAMs产生IL-1β的水平显著下降(P<0.05)。NF-κB被抑制后PCV2诱导PAMs产生IL-1β的水平也明显下降。结果表明,PCV2通过NF-κB/NLRP3信号通路调控体外培养PAMs分泌IL-1β。

脂多糖对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β及TNF-α的影响

研究了脂多糖的浓度、刺激时间对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α的影响。分别用不同浓度的脂多糖和不同的刺激时间处理猪肺泡巨噬细胞，收集细胞，提取RNA，用实时荧光定量PCR方法检测IL-1、TNF-αmRNA表达水平；同时收集培养上清，用ELISA检测试剂盒检测IL-1β、TNF-α蛋白表达水平。结果表明，脂多糖浓度（1-1000ng／mL）对IL-1β、TNF-α影响显著（P％0．05）；刺激时间（1-24h）对IL-1β、TNF-α影响显著（P〈0．05），且蛋白的表达水平迟于mRNA的表达水平。脂多糖诱导猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α具有剂量、时间依赖性。