三种单抗偶联PAP-S制备的免疫毒素对人白血病T淋巴细胞的细胞毒性作用

混合应用3种抗人T细胞单克隆抗体与美洲商陆抗病毒蛋白(PAP-S)制备免疫毒素进行体外实验。这些免疫毒素均对人类T淋巴细胞具特异性杀灭作用。在浓度为10^(-9)mol/L时,3种免疫毒素混合可杀灭94.5％的自血病T细胞系CEM细胞而不致严重影响骨髓造血细胞功能。这些免疫毒素有可能用于白血病细胞的体外杀灭及白血病异体骨髓移植时T细胞的清除,以避免移植物抗宿主反应的发生。

美洲大蠊多肽PAP-2对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用研究

目的:探讨美洲大蠊多肽PAP-2对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用。方法:通过小鼠腋窝皮下注射H22肝癌小鼠腹水构建荷瘤小鼠模型。将70只小鼠随机分为模型组(生理盐水)、5-氟尿嘧啶组(阳性药对照,20 mg/kg)以及美洲大蠊提取物的脱脂膏组(200 mg/kg,以提取物量计)、CⅡ-3组(从浸膏中提取的以多肽为主要活性成分的组分,200 mg/kg,以提取物量计)和多肽PAP-2高、中、低剂量组(从CⅡ-3中分离得到,200、100、50 mg/kg,以单体量计),每组10只。5-氟尿嘧啶组小鼠隔天腹腔注射给药1次,其余各组小鼠均每天灌胃给药1次,给药周期均为10 d。给药结束后,观察小鼠瘤块变化并测定其脏器(脾、胸腺、肝)指数,苏木精-伊红染色后观察其瘤组织病理变化,并采用酶联免疫吸附试验法测定其血清中血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-4的含量。结果:脱脂膏、CⅡ-3和不同剂量的PAP-2均能不同程度地抑制荷瘤小鼠瘤块的生长并升高其脏器指数,且PAP-2的作用具有一定的量效关系。其中,PAP-2高剂量组的抑瘤率(38.95%)显著高于脱脂膏组和CⅡ-3组(P<0.05),并与5-氟尿嘧啶组(40.87%)接近(P>0.05);PAP-2高剂量组小鼠脾指数、胸腺指数、肝指数较模型组均显著升高(P<0.05),并显著高于CⅡ-3组(P<0.05),且其肝指数显著高于脱脂膏组(P<0.05)。此外,PAP-2还可降低荷瘤小鼠血清中VEGF和IL-4含量、升高其血清中IL-1β含量,其中PAP-2高剂量组与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05);并且PAP-2高剂量组小鼠血清中IL-1β含量显著高于脱脂膏组和CⅡ-3组(P<0.05),IL-4含量显著低于脱脂膏组和CⅡ-3组(P<0.05),但是其血清中VEGF含量显著低于脱脂膏组和CⅡ-3组(P<0.05)。结论:美洲大蠊多肽PAP-2对H22荷瘤小鼠具有一定的抑瘤作用,可升高其脏器指数,降低其血清中VEGF、IL-4含量并升高其血清中IL-1β含量。

抗人T细胞单克隆抗体与商陆毒蛋白结合物的制备及其抗白血病细胞活性

将美洲商陆抗病毒蛋白通过二硫键与抗人T细胞单克隆抗体Wu71偶联制备免疫毒素。结合物经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫双扩散和间接荧光检测,表明该结合物对人T淋巴细胞白血病CEM细胞显示很强的杀伤作用,在10^(-9)mol/L浓度下可杀灭76.4%的靶细胞,而对抗原阴性的SP_2/O细胞杀灭作用很弱。^(14)C-亮氨酸掺入蛋白质合成抑制试验显示结合物在10^(-9)mol/L时可抑制72.4%的蛋白质合成。这一免疫毒素有可能用于白血病自体骨髓移植时白血病细胞的体外清除。

金黄色萄葡球菌L型特异性抗体的免疫组化试验在妇科感染性疾病诊断上的应用

本文对49例慢性子宫内膜炎、慢性宫颈炎等妇科疾病的病理切片,用金黄色葡萄球菌细菌型及L型的特异性杭体作酶免疫组化染色(PAP法)证明在金黄色葡萄球菌引起的各种妇科感染中,细菌型及L型混合感染占60％,单独细菌型感染占28.9％,单独L型感染占11.1％。本研究证明了金葡菌变异为L型后,有特异性杭原出现,并证明细菌L型的特异性抗原有一定的免疫学诊断价值。

毕赤酵母Mut^+和Mut^s重组子表达美洲商陆抗病毒蛋白基因的比较

将N末端信号肽和C末端毒性区域缺失突变的美洲商陆抗病毒蛋白 (pokeweedantiviralprotein ,PAP)基因表达载体pPIC9K P酶切线性化后 ,通过电击转化整合到巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115菌株细胞中 ,PCR筛选出表型为利用甲醇快速型(Mut+ )的重组子。在相同培养条件下比较Mut+ 重组子和利用甲醇缓慢型 (Muts)重组子在表达缺失突变型PAP方面的异同。结果表明 ,诱导培养 4 8h后 ,Mut+ 重组子表达产物在SDS PAGE胶上可见清晰目的带 ,而Muts 重组子培养 72h才能见到微弱的目的带。抗病毒活性实验表明Mut+ 重组子和Muts 重组子的表达产物均对TMV病毒侵染有明显的抑制作用 。

新加坡经济起飞的成功经验

新加坡共和国人民行动党上台执政后通过加强政治控制,从严治吏,加强法制等措施,采取全面开放,灵活运用经济策略以适应不断变化的国际经济形势。仅仅用了30余年的时间,新加坡人民行动党就使新加坡转变为现代化的国家并保持了长期执政地位,值得发展中国家执政党学习。

特异性Kv1.3阻滞剂调节巨噬细胞自噬在抗结肠炎中的作用

目的 探讨特异性Kv1.3阻滞剂PAP-1抗DSS结肠炎小鼠的作用机制。方法 将C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、PAP-1对照组、DSS模型组、DSS+PAP-1组。5% DSS制备结肠炎模型,PAP-1(3 μg·g -1 ,每天3次,连续7 d)腹腔注射给药。进行DAI评分;实验结束行结肠HE染色评分,结肠组织匀浆检测MPO活性及炎症因子水平;免疫荧光显微镜观察结肠巨噬细胞改变;透射电镜观察巨噬细胞自噬结构;qPCR、Western blot检测小鼠结肠和巨噬细胞iNOS、IL-1β及自噬相关标志物表达。结果 PAP-1减少DSS结肠炎小鼠体质量的下降,降低DAI及结肠HI评分( P <0.05);PAP-1降低结肠MPO活性及促炎因子水平( P <0.05)。PAP-1降低结肠F4/80表达,使腹腔巨噬细胞及脾巨噬细胞内自噬泡增多;同时,PAP-1降低结肠、腹腔巨噬细胞和脾巨噬细胞iNOS、IL-1β及p62表达,升高LC3-Ⅱ及Beclin-1表达( P <0.05)。结论 PAP-1可能通过减少结肠炎小鼠巨噬细胞自噬受损,降低炎症因子水平,减轻结肠炎症损害。

醒脑液对PAP双转基因痴呆小鼠NEP和BACE1 mRNA表达的影响

目的:探讨中药醒脑液(XNY)对PAP双转基因痴呆小鼠大脑组织中中性内肽酶(NEP)和β分泌酶(BACE1)mRNA表达的影响。方法:采用实时荧光定量PCR技术分别观测正常对照组、模型组、西药对照组、XNY高剂量组、XNY中剂量组和XNY低剂量组小鼠大脑组织中NEP和BACE1 mRNA的表达。结果:与模型组相比,XNY高剂量组脑内NEP mRNA含量表达上调(P<0.05);XNY高、中剂量组BACE1 mRNA含量表达下降(P<0.01)。结论:醒脑液对双转基因痴呆小鼠大脑组织中NEP和BACE1 mRNA表达有较好的调控作用,说明醒脑液对防治老年性痴呆能起到良好效果。

美洲大蠊多肽PAP-2对Balb/c小鼠肝癌原位移植瘤免疫微环境的影响

目的探讨美洲大蠊多肽PAP-2对肝癌免疫微环境的影响,及其作用机制。方法通过给昆明种小鼠注入H22细胞悬液构建Balb/c小鼠肝癌原位移植瘤模型,将原位移植瘤小鼠随机分为10组:模型组,5-氟尿嘧啶组(20 mg·kg^(-1)5-FU),美洲大蠊多肽PAP-2低、中、高剂量组(50、100、200 mg·kg^(-1)PAP-2),5-氟尿嘧啶(20 mg·kg^(-1)5-FU)+PAP-2低、中、高剂量组(50、100、200 mg·kg^(-1)PAP-2),美洲大蠊CⅡ-3组(200 mg·kg^(-1)CⅡ-3),脱脂膏组(200 mg·kg^(-1)脱脂膏),5-Fu组隔天给药1次,其余各药物组每天1次,腹腔注射。通过检测抑瘤率、胸腺指数及脾指数,检测肿瘤组织中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和IL-1β的表达水平,检测小鼠脾细胞中相关淋巴细胞的变化水平。结果模型组、5-氟尿嘧啶组、美洲大蠊多肽PAP-2高剂量组、5-FU+PAP-2高剂量组、美洲大蠊CⅡ-3组、脱脂膏组的瘤质量分别为(0.96±0.15)、(0.33±0.19)、(0.30±0.23)、(0.12±0.04)、(0.35±0.12)和(0.41±0.06)g,IL-1β含量分别为(18.93±2.68)、(28.88±1.14)、(23.20±2.79)、(24.47±1.79)、(21.65±3.09)和(21.25±2.78)pg·mL^(-1),TNF-α含量分别为(12.32±1.12)、(25.71±0.98)、(14.25±1.94)、(23.06±1.71)、(13.49±1.38)和(14.34±2.18)pg·mL^(-1),巨噬细胞比例分别为(0.94±0.64)%、(3.19±1.12)%、(3.13±1.15)%、(5.45±3.49)%、(2.03±0.59)%和(3.76±0.44)%,B细胞比例分别为(35.53±9.84)%、(61.30±2.57)%、(59.63±3.36)%、(47.20±12.61)%、(53.60±5.68)%和(54.88±4.48)%。模型组的上述指标与其余各组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论美洲大蠊多肽PAP-2能够提高肝癌原位移植瘤小鼠的免疫功能,一定程度上改善其免疫微环境。

醒脑液对PAP双转基因痴呆小鼠行为学及脑内老年斑的早期干预作用

目的:探讨中药醒脑液(XNY)对PAP双转基因痴呆小鼠行为学及大脑组织中老年斑(SP)的干预作用。方法:采用Morris水迷宫测定小鼠空间学习记忆能力,免疫组织化学方法分别观测正常对照组、模型组、西药对照组、XNY高剂量组、XNY中剂量组和XNY低剂量组小鼠大脑组织中老年斑的表达。结果:与正常组相比,模型组小鼠学习记忆能力均有所下降,脑组织中的老年斑表达增加;与模型组相比,XNY高剂量组脑内老年斑的表达下调(P<0.05)。结论:醒脑液对双转基因痴呆小鼠大脑组织中老年斑的表达有较好的调控作用,进一步改善阿尔茨海默病模型的小鼠记忆学习能力,说明醒脑液对防治老年性痴呆能起到良好效果。

美洲大蠊多肽PAP-2对Balb/c裸鼠肝癌原位移植瘤缺氧微环境的影响

目的探讨美洲大蠊多肽PAP-2对肝癌缺氧微环境的影响,及其作用机制。方法BALb/c裸鼠用腋下接种HepG2肝癌细胞的方法构建肝癌原位移植瘤模型。将造模成功的裸小鼠随机分为模型组、阳性对照组(20 mg·kg^(-1)5-氟尿嘧啶)、CⅡ-3组(200 mg·kg^(-1)美洲大蠊提取物CⅡ-3)、脱脂膏组(200 mg·kg^(-1)美洲大蠊脱脂膏)和低、中、高剂量PAP-2组(50、100和200 mg·kg^(-1)美洲大蠊多肽PAP-2)及低、中、高剂量联合组(20 mg·kg^(-1)5-氟尿嘧啶+50、100和200 mg·kg^(-1)美洲大蠊多肽PAP-2),每组10只。各组小鼠均按0.1 mL·10 g^(-1)的剂量腹腔注射给药,除模型组和阳性对照组隔天1次外,其余各组每天1次,共计10 d。检测裸鼠移植瘤的抑瘤率和脏器指数,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测肿瘤组织中缺氧诱导因子(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达水平。结果高剂量PAP-2组、高剂量联合组、CⅡ-3组、脱脂膏组和阳性对照组的抑瘤率分别为62.19%、78.07%、52.14%、51.11%和53.73%。高剂量PAP-2组、高剂量联合组、CⅡ-3组、脱脂膏组、阳性对照组和模型组的脾指数分别为(129.98±3.97)、(139.98±14.18)、(66.48±6.93)、(64.90±5.31)、(108.61±11.32)和(45.47±6.42)mg·g^(-1),肝指数分别为(843.10±59.41)、(1112.62±37.28)、(720.68±77.70)、(709.77±51.80)、(927.66±69.19)和(497.21±59.81)mg·g^(-1),HIF-1αmRNA表达量分别0.96±0.09、0.55±0.22、0.97±0.29、0.86±0.22、0.88±0.32和1.28±0.22,VEGF mRNA表达量分别为0.75±0.29、0.23±0.07、0.84±0.18、0.90±0.21、0.69±0.21和1.12±0.12。高剂量联合组、高剂量PAP-2组、CⅡ-3组、脱脂膏组和阳性对照组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论美洲大蠊多肽PAP-2通过抑制相关血管生成因子的表达水平,抑制肿瘤血管生成和肿瘤细胞迁移,改善肝癌缺氧微环境。