PBDC1蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

目的原核表达、纯化PBDC1蛋白,制备PBDC1多克隆抗体。方法将PBDC1基因克隆到pET-28a(+)质粒中,构建成重组质粒pET-28a(+)-PBDC1。将此重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)后,IPTG诱导其在宿主菌中大量表达,并进行SDS-PAGE检测。经镍离子亲和柱纯化得到PBDC1融合蛋白,并以此免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。结果经质谱鉴定,获得了高纯度的PBDC1蛋白。经Western blot验证,获得了抗PBDC1蛋白的多克隆抗体。结论成功获得抗PBDC1蛋白的多克隆抗体,为研究PBDC1在红系分化中的功能提供了有利工具。

巴什拜羊A-FABP、PBDC1基因多态性及其与巴什拜羊生长性状的相关分析

本试验旨在研究脂肪型脂肪酸结合蛋白(adipocyte fatty-acid binding protein,A-FABP)、多糖生物合成域1蛋白(polysaccharide biosynthesis domain containing)基因在巴什拜羊中的多态性及其与生长性状的关系,探寻可用于巴什拜羊选育的分子遗传标记。试验以随机采取的120只巴什拜羊个体的血样作为试验材料,运用PCR-SSCP和DNA测序等技术对120只新疆巴什拜羊个体的A-FABP、PBDC1基因进行遗传多态性分析,统计基因和基因型频率,进行Hardy-Weinberg平衡性检测,计算纯合度、杂合度、多态信息含量和有效等位基因数等遗传多态指标,分析A-FABP、PBDC1基因不同基因型与体高、体重、体斜长、胸围、管围等生长性状的关联性。结果表明A-FABP、PBDC1基因的外显子部分均存在多态性,多态性检验均存在2种基因型,测序分析表明A-FABP基因在外显子2的3159bp处存在G到A的突变,且该突变为同义突变,PBDC1基因在第1外显子170bp处发生A碱基缺失,使苏氨酸产生移码突变。关联分析可知A-FABP基因的GA型个体的胸围、体重、体长均显著高于GG型个体(P<0.05)。PBDC1基因的AB型个体的体重和体长均显著高于AA型个体(P<0.05)。巴什拜羊A-FABP、PBDC1基因存在的突变位点有可能作为一种遗传标记。

CLEC4M介导HCV感染人PBDC实验研究

目的通过对表达CLEC4M的CD14细胞与HCV结合来证实CLEC4M是介导HCV感染的特异性受体。方法应用磁珠分选出健康人的CD14+细胞,检测表达CLEC4M后将细胞共分4组,阳性对照组:CLEC4M+HCV RNA+血清;干扰组:CLEC4M+鼠抗人CLEC4M抗体+HCV RNA+血清,每组均与收集到的3份HCV阳性患者血清作用,阴性对照组:CLEC4M+正常人血清;空白对照组:CLEC4M+5%DMEM。干扰组在加入3组HCV RNA+血清之前,先分别加入CLEC4M抗体进行干预,其余3组滴入同体积PBS。培养24h后利用RT-PCR检测细胞表面结合的HCV RNA含量,培养48h后用免疫荧光法检测细胞与病毒结合情况。结果流式结果表明分离出的CD14细胞中CLEC4M阳性率高达80%以上。RT-PCR结果显示干扰组HCV RNA含量明显低于阳性对照组。免疫荧光可直观看到阳性对照组有大量绿色荧光,而干扰组只有很少的部分,空白对照组和阴性对照组无荧光。结论表达CLEC4M的CD14细胞可以与HCV结合,而病毒的结合可以被CLEC4M抗体竞争性抑制。

人血树状突细胞对T细胞增殖活性的影响

本文采用ＭＴＴ法探讨了人外周血树状突细胞对Ｔ细胞增殖活性的影响。在５０μｇ／ｍｌＰＨＡ刺激下，Ｔ细胞增殖活性随树状突细胞浓度的增高而增强，培养上清中ＩＬ－１的活性亦随树状突细胞浓度的增高而增强。ＩＬ－１参与树状突细胞促Ｔ细胞增殖的作用机制。