PBK/TOPK在类风湿关节炎患者单核细胞中的表达及临床意义

目的研究PDZ结合激酶/T-淋巴因子激活的杀伤细胞来源的蛋白激酶(PBK/TOPK)在类风湿关节炎(RA)患者单核细胞的表达及临床意义。方法以47例RA患者、20例健康体检者为研究对象,采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中PBK/TOPK的表达。结果PBK/TOPK在RA患者CD14^(+)单核细胞表达水平高于健康体检者,差异具有统计学意义(P<0.05)。RA患者CD14^(+)单核细胞PBK/TOPK低表达组CD14^(+)单核细胞在PBMC中所占比例、白细胞(WBC)计数、类风湿因子(RF)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)的水平均高于PBK/TOPK高表达组,差异具有统计学意义(P<0.05)。RA住院患者单核细胞PBK/TOPK表达低于门诊患者,且住院患者RF水平高于门诊患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论单核细胞PBK/TOPK低表达与疾病炎症有关,对类风湿关节炎的靶向治疗有一定意义。

应用组织芯片研究PBK/TOPK在人体正常及肿瘤组织中的表达

目的观察PBK/TOPK在人体正常组织和常见恶性肿瘤组织的分布和表达,探讨作为肿瘤标志物的可能性。方法应用免疫组织化学EnV ision法,在含有人体19种正常组织的组织芯片和含有19种恶性肿瘤组织的组织芯片上进行PBK/TOPK染色,检测PBK/TOPK蛋白的表达。结果在19种正常组织中,只有头皮的汗腺、睾丸的精原细胞、肝脏的胆管上皮、食管黏膜下腺体、胰腺外分泌部的导管上皮、前列腺的基底细胞和肾脏的远曲小管8种组织有不同数量细胞明确阳性表达。在19种恶性肿瘤组织中,乳腺癌、子宫颈癌、甲状腺癌等多种肿瘤组织中存在PBK/TOPK的大量、强阳性表达。结论PBK/TOPK在少数正常组织特定细胞中的明确表达及其在多种恶性肿瘤细胞的强阳性表达,为其成为研究肿瘤起源与发生的标志物提供了依据。

B细胞非霍奇金淋巴瘤PBK/TOPK表达与增殖活性的关系

目的研究PBK/TOPK在反应性淋巴组织增生和B细胞非霍奇金淋巴瘤组织(B cell non-Hodgkin s lymphoma,B-NHL)中的表达和肿瘤增殖活性的关系,探讨TOPK在淋巴瘤组织中发生发展中的作用及其临床意义。方法运用SP法免疫组化法检测PBK/TOPK和Ki-67在B细胞性侵袭性淋巴瘤22例、惰性淋巴瘤21例、淋巴结反应性增生15例中的表达。结果TOPK在惰性淋巴瘤中的阳性率明显低于侵袭性淋巴瘤(P<0·01)。Ki-67在反应性淋巴结增生和B-NHL中的表达与PBK/TOPK非常一致,二者存在正相关(P<0·01)。在淋巴结反应性增生中,PBK/TOPK主要表达于激活的中心母细胞,同时这些细胞亦表达Ki-67抗原。结论TOPK能激活B淋巴细胞,并与B-NHL的细胞增殖活性和恶性程度密切相关,提示TOPK在B细胞淋巴瘤的恶性增殖过程中发挥重要作用,为B细胞淋巴瘤的预后判断和诊治提供新的依据和靶点。

PBK/TOPK下调对非小细胞肺癌细胞迁移、增殖及存活能力的影响

目的研究PBK/TOPK下调对非小细胞肺癌细胞迁移、增殖及存活能力的影响。方法选择PBK/TOPK高表达的人肺癌细胞株A549、GLC-82进行研究,实验分为干扰组和对照组。干扰组采用si RNA对两株细胞中PBK/TOPK的表达进行干扰,对照组未进行任何处理。荧光定量PCR检测si RNA对PBK/TOPK表达的影响,划痕及Transwell实验检测细胞的迁移能力,MTT实验检测细胞的增殖能力,台盼蓝染色检测细胞存活能力。分析PBK/TOPK下调对非小细胞肺癌细胞迁移、增殖及存活能力的影响。结果干扰组的PBK/TOPK表达水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);PBK/TOPK下调对非小细胞肺癌细胞迁移、增殖及存活能力有一定的抑制作用,干扰组细胞的迁移距离短于对照组,迁移数量少于对照组,OD值和存活率低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 PBK/TOPK下调可明显抑制非小细胞肺癌的细胞迁移、增殖及存活能力,可应用于临床治疗,以改善非小细胞肺癌患者的治疗效果与远期生存率。

PBK/TOPK在TPA诱导的人HL-60细胞分化中的表达及意义

目的:研究PBK/TOPK在TPA(佛波酯)诱导白血病细胞HL-60的分化时的表达及意义.方法:细胞化学染色法观察药物作用后细胞形态的变化;流式细胞仪检测药物对HL-60细胞周期及细胞表面分化抗原CD11b,CD14,CD13和CD33表达的影响;用westernBlot法检测PBK/TOPK在HL-60细胞分化前后表达的变化.结果:经5.1nmol/LTPA处理72h后,NBT阳性细胞数和CD11b,CD13,CD14表达是增加的,HL-60细胞体积缩小,核浆比例减低,核仁减少甚至消失,核形态扭曲折迭或分叶;PBK/TOPK在HL-60细胞向成熟分化后表达下调.结论:TPA能抑制白血病细胞HL-60的增殖,并诱导其向成熟单核、粒细胞分化,在此过程中,PBK/TOPK表达是下调的,但Pho-PBK/TOPK的表达是增加的.

泛素连接酶LNX1促进外源PBK的泛素化和降解

目的研究LNX1对其相互作用蛋白PBK的泛素化和降解。方法克隆、原核表达、纯化了一系列重组人LNX1截断体蛋白和LNX1全长蛋白;在体外泛素化体系中研究其对PBK的泛素化,哺乳动物细胞内研究其对外源PBK的泛素化和降解。结果在体外泛素化体系中LNX1泛素化PBK,并研究了不同LNX1截断体对PBK泛素化的影响;发现在哺乳动物细胞内外源LNX1促进外源PBK的泛素化,进而导致其通过蛋白酶体降解。结论研究发现了LNX1对外源PBK的泛素化和降解,为研究LNX1的生理功能提供了重要线索。

PBK/TOPK在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的：分析PBK/TOPK（PDZ-binding-kinase/T-LAK cell-originated protein kinase）在宫颈癌组织中的表达及临床意义。方法：选取2012年1月~2014年12月期间我院病理科收集的50例低级别宫颈上皮内瘤变（CINI）,45例宫颈癌组织蜡块和40例高级别宫颈上皮内瘤变作为研究对象,免疫组化法检测PBK/TOPK的表达情况,并使用统计学方法分析其表达与临床病理特征之间的关系。结果：PBK/TOPK在宫颈癌的阳性表达率为75.6%,高于非宫颈癌组织的16.7%（P〈0.05）;CINI组织的IS得分明显低于高度宫颈上皮内瘤及宫颈癌组织（P〈0.05,P〈0.01）,高级别宫颈上皮内瘤IS得分明显低于宫颈癌组织（P〈0.01）;经非参数Spearman等级相关分析,PBK/TOPK和P53在宫颈癌癌组织中的表达呈正相关（r=0.68,P=0.008）;PBK/TOPK表达水平与年龄、肿瘤分化程度无关,与肿瘤TNM分期、浸润程度和淋巴结转移密切相关（P〈0.05）。结论：PBK/TOPK的表达与宫颈癌密切相关,可作为临床诊断及治疗的分子标志物。

PBK在前列腺癌组织中的表达及临床意义

目的分析PBK在前列腺癌中的表达及临床意义。方法利用前列腺癌的组织芯片,包含98例前列腺癌及81例对照癌旁组织作为研究对象,免疫组化方法检测PBK的表达情况,并运用统计学方法分析免疫组化芯片及Taylor数据库中PBK表达与前列腺癌临床病理特征之间的关系。结果 PBK在前列腺癌中表达明显升高(P=0.001);且在Gleason高评分组的表达比低评分组表达升高(P=0.001)。Taylor数据库得到相似结果,且运用Kaplan-Meier分析发现PBK与无生化复发生存率显著相关(P=0.007),最后采用Cox回归模型进行多因素综合分析发现在影响前列腺癌预后的队列中,PBK高表达(P=0.041)与Gleason评分、病理分期都是前列腺癌生化复发的独立预测指标。结论 PBK的表达与前列腺癌密切相关,可作为临床诊断及治疗的分子标志物。

PBK/TOPK在直肠癌中的表达及与放射敏感性关系的研究进展

直肠癌是世界第三常见的恶性肿瘤。随着生活方式的不断变化,我国直肠癌发病率正逐年递增,成为危害人们健康的主要疾病之一。放射治疗是直肠癌治疗的主要手段之一,而直肠癌的放射敏感性是决定放疗疗效的关键因素之一,不同程度影响着直肠癌的放射治疗效果。因此,寻找与放疗敏感性相关的生物学标志物,对于直肠癌患者的个体化治疗有着重要的临床意义,甚至可以影响直肠癌患者的预后。PBK/TOPK是一个新近发现的丝-苏氨酸蛋白激酶,是一个重要的信号分子。既往研究表明PBK/TOPK在生理情况下,多种增殖活跃的正常组织中表达呈低阳性。近年来研究显示,PBK/TOPK在多种恶性肿瘤中呈高表达,其中包括直肠癌细胞。为探讨其能否成为诊断直肠癌标志物提供了思路。因此,文章就PBK/TOPK在直肠癌中的表达及与放射敏感性关系的研究进展作一综述。

羟基脲诱导的K562细胞分化中PBK/TOPK的表达变化及其意义

目的研究PBK/TOPK在HU(羟基脲)诱导白血病细胞K562的分化时的表达及意义。方法用不同浓度的羟基脲对K562细胞进行诱导分化实验,通过联苯胺、吉姆萨-瑞氏染色和流式细胞仪证实其分化方向;用Western blot法检测PBK/TOPK在K562细胞分化前后表达的变化。结果400μmol/L的羟基脲对K562作用4d后具有良好的诱导分化效果,并诱导其向红系分化,且PBK/TOPK在K562细胞向成熟分化后表达不变,而Pho-PBK/TOPK和Pho-p38有少量增加。结论HU能抑制白血病细胞K562的增殖,并诱导其向红系分化,在此过程中,有激活的PBK/TOPK参与,推测很可能通过磷酸化下游分子p38而起作用。

PBK/TOPK表达与老年急性髓系白血病患者治疗反应和生存预后的关联分析

目的评估PBK/TOPK表达水平与老年急性髓系白血病(AML)患者治疗反应和生存预后的关系。方法选取2016年7月—2017年3月衢州市人民医院80例AML患者(AML组),以32例行骨髓活检的老年非恶性血液疾病患者为对照组。收集AML组一般临床资料和细胞遗传学、分子生物学相关检测结果。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测所有患者骨髓单个核细胞PBK/TOPK的相对表达量。对AML组进行诱导治疗,并统计完全缓解(CR)率。对AML患者进行随访,采用Kaplan-Meier生存曲线分析患者PBK/TOPK表达与总生存期(OS)和无进展生存期(EFS)的关系。结果RT-qPCR结果显示,AML组骨髓单个核细胞PBK/TOPK表达高于对照组,PBK/TOPK表达与患者血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)计数、染色体核型和基因突变类型有关,且PBK/TOPK高表达患者CR率较低(P<0.05)。PBK/TOPK低表达患者3年生存率高于PBK/TOPK高表达患者(P<0.05),PBK/TOPK高表达患者术后3年EFS短于低表达患者(P<0.05)。结论PBK/TOPK在老年AML患者中表达升高,并且其高表达与患者临床特征有关,对评估老年AML患者生存预后具有一定的意义。

PBK/TOPK在人乳腺及乳腺癌组织的表达及意义

目的:观察PBK/TOPK在人正常乳腺及乳腺癌组织的分布和表达,探讨作为肿瘤标志物的可能性.方法:应用免疫组织化学EnVision法,在含有人体20种正常组织及14种癌组织的组织芯片上进行PBK/TOPK染色,检测PBK/TOPK蛋白的表达.结果:在20种正常组织中,只有头皮的汗腺、睾丸的精原细胞、肝脏的胆管上皮、食管粘膜下腺体、胰腺外分泌部的导管上皮和肾脏的远曲小管7种组织有不同数量细胞明确阳性表达.在14种癌组织中,只有乳腺癌、肺癌、甲状腺癌3种癌组织中存在PBK/TOPK的大量强阳性表达,而在正常乳腺组织不表达PBK/TOPK.结论:PBK/TOPK在正常组织的阴性表达及其相应恶性肿瘤的强阳性表达,为其成为研究肿瘤起源与发生的标志物提供了一定依据.

PBK/TOPK通过改变糖酵解关键酶表达水平增加结直肠癌细胞放射敏感性

目的:探讨在结直肠癌细胞中PDZ结合激酶(PDZ binding kinase,PBK)/T-淋巴因子激活的杀伤细胞来源的蛋白激酶(T-cell-originated protein kinase,TOPK)能否通过影响糖酵解关键酶表达改变放射敏感性。方法:通过慢病毒转染敲低LS174T细胞中的PBK/TOPK表达水平。利用克隆形成实验检测细胞的放射敏感性,Real time-PCR和Western blot检测PBK/TOPK、葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,GLUT1)和己糖激酶(hexokinase 2,HK2)在RNA水平和蛋白水平的表达差异。结果:与对照组比较,敲低PBK/TOPK的表达后细胞克隆形成集落较小较少。通过Western blot和Real time-PCR实验发现:单纯给予8 Gy照射后,细胞中GLUT1相对表达量至48 h最低,72 h呈现升高趋势;HK2相对表达量则呈现完全相反的变化,在48 h表达量最高;PBK/TOPK单纯敲低组,GLUT1相对表达量至48 h最低,72 h呈现升高趋势,HK2相对表达量则呈现完全相反的变化,48 h表达量最高;敲低PBK/TOPK联合8 Gy照射组中,GLUT1相对表达量在48 h内呈现升高趋势,并于48 h达到顶峰,72 h出现降低趋势,而HK2相对表达量的变化为随着时间逐渐降低。结论:敲低PBK/TOPK能够增强结直肠癌细胞放射敏感性,其机制可能与糖酵解关键酶GLUT1及HK2的表达呈现完全相反的变化有关。

肺及肺癌组织芯片PBK/TOPK蛋白表达:检测的可靠性

背景:组织芯片技术可高通量检测组织中的生物分子。但是组织芯片所用的组织很小,直径仅0.6mm,且肿瘤细胞具有异质性,所以组织芯片检测结果是否可靠尚不清楚。目的:比较石蜡组织芯片和对应组织常规石蜡切片PBK/TOPK蛋白在正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞、人胚胎肺泡上皮细胞、肺癌原发灶和相应的淋巴结转移灶的表达差异,探讨组织芯片检测PBK/TOPK蛋白表达的可靠性。方法:采用组织微阵列技术按照正常成人肺组织,胚胎肺组织,肺鳞癌原发灶及其相应淋巴结转移癌,肺腺癌原发灶及其相应淋巴结转移癌,肺小细胞癌原发灶及其相应淋巴结转移癌,肺大细胞癌原发灶及其相应淋巴结转移癌的顺序依次构建包含760点阵的石蜡组织芯片。应用免疫组化SP法,检测石蜡组织芯片和对应组织常规石蜡切片PBK/TOPK蛋白的表达。应用LeicaQ500MC图像分析系统分别对石蜡组织芯片和常规石蜡切片上PBK/TOPK蛋白表达的阳性单位和阳性表达率进行定量测试。结果与结论:组织芯片和对应常规切片相应细胞中PBK/TOPK的阳性强度及阳性表达率基本相同,相对偏差不足0.6%,两者比较差异无显著性意义。结果说明石蜡组织芯片和常规组织切片检测PBK/TOPK蛋白表达结果高度一致;应用组织芯片检测肺癌、胚胎肺及正常肺组织中PBK/TOPK蛋白的表达结果可靠。

乳腺癌中PBK/TOPK mRNA表达的临床意义及功能预测

目的通过生物信息学分析PDZ结合激酶/T-淋巴因子激活的杀伤细胞来源的蛋白激酶(PBK/TOPK)在乳腺癌(BRCA)中的表达及临床意义,并预测其潜在的分子通路和生物学功能。方法挖掘Oncomine数据库分析PBK/TOPK信使核糖核酸(mRNA)在不同癌症中的表达情况。下载癌症基因组图谱(TCGA)数据库BRCA和正常乳腺组织的RNA测序数据和临床信息,分析PBK/TOPK mRNA表达与临床特征的相关性。应用Kaplan-Meier Plotter数据库进行生存分析。通过筛选PBK/TOPK相关基因,并进行功能富集分析,预测PBK/TOPK在BRCA中的潜在分子通路和生物学功能。结果PBK/TOPK基因在BRCA组织中的表达显著高于正常乳腺组织(P<0.05),并与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、三阴性乳腺癌(TNBC)和绝经状态存在关联性(P<0.05)。生存分析结果显示,PBK/TOPK基因高表达提示BRCA预后不良(P<0.05)。功能富集分析显示PBK/TOPK相似基因主要涉及BRCA细胞分裂、细胞周期调节和微管细胞骨架形成等生物功能,参与BRCA细胞周期等信号通路。结论PBK/TOPK mRNA在BRCA组织中高表达,与BRCA患者预后不良密切相关,可能是BRCA潜在的生物标志物和治疗靶标。

PBK基因在膀胱癌中的表达及临床意义

目的探讨PBK基因表达对膀胱癌患者临床病理特征及预后的影响,并寻找膀胱癌诊治的新靶点。方法在GEO数据库中下载膀胱癌样本资料GSE13507及相关临床信息。通过两独立样本t检验分析PBK在膀胱癌组织和正常膀胱组织中的表达差异,运用2检验研究PBK的表达与膀胱癌临床病理特征的相关性;并应用Kaplan-Meier法和对数秩检验进行生存分析,最后运用基因集富集分析(GSEA)寻找PBK调控膀胱癌细胞的相关通路。结果与正常膀胱组织比较,PBK在膀胱癌细胞中高表达(P<0.001);PBK的高表达与膀胱癌患者性别(P<0.001),年龄(P=0.027),侵袭性(P<0.001),高分级(P<0.001),T分期(P=0.001),N分期(P=0.015),M分期(P<0.001),疾病进展(P<0.001)和疾病复发(P<0.001)显著相关。PBK高表达患者的总生存期(P=0.0023)和肿瘤特异性生存期(P=0.0003)显著低于低表达患者。GSEA的结果显示PBK可能通过调节MYC信号通路、G2M检查点、精子发生、E2F转录因子、未折叠蛋白反应等影响膀胱癌的发生发展。结论PBK在膀胱癌中高表达,与膀胱癌的多个临床病理特征相关,可能成为膀胱癌新型肿瘤标志物或者治疗靶点。

PBK轻质内隔墙条板的耐火性试验研究

根据自主开发的建筑火灾模拟试验炉的燃烧特性 ,设计了模拟火灾作用下的试验方法和方案 ,对轻质墙体的绝热性、完整性等耐火性能指标进行了试验研究 ,获得了关于轻质墙体耐火极限的成果 ,为轻质墙体的安全性设计提供了科学的依据。

新型PBK/TOPK抑制剂OTS514的合成

以3-溴噻吩-2-甲酸为起始原料,经酰氯、卤代、酰胺化、氨基保护、分子内环化、溴代得中间体9-溴-8-甲氧基-6-甲基噻吩并[2,3-c]喹啉-4(5H)-酮;以(R)-2-苯基丙胺盐酸盐为原料,经中和游离、酰化保护、溴代、水解去保护、氨基Boc保护、亲核取代得到(R)-(2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二恶硼烷-2-基)苯基)丙基)氨基甲酸叔丁酯; 2个中间体经交叉偶联反应、脱保护得OTS514,纯度99.1%,总收率为24.7%,并采用1H NMR、13C NMR和MS进行其结构确证。该合成路线反应条件温和,适合于实验室研究的小规模制备。

PBK/TOPK表达对膀胱癌BIU-87细胞增殖及迁移能力的影响

目的探讨PDZ连接激酶/T-LAK细胞源蛋白激酶(PDZ-binding kinase/T-LAK cell-originated protein kinase,PBK/TOPK)在膀胱癌中的表达及其表达对BIU-87细胞增殖及迁移能力的影响。方法采用实时定量PCR及免疫印迹试验检测40例配对膀胱癌及癌旁正常组织中PBK/TOPK的表达,随后,分别干扰及过表达PBK/TOPK在BIU-87细胞中的表达,检测PBK/TOPK表达对细胞增殖及迁移能力的影响。结果实时定量PCR及免疫印迹试验检测结果一致表明PBK/TOPK在膀胱癌中的表达明显高于癌旁正常组织(P<0. 05)。干扰PBK/TOPK表达后,BIU-87细胞的增殖及迁移能力明显下降(P<0. 05);而PBK/TOPK过表达后,BIU-87细胞的增殖及迁移能力明显增强(P<0. 05)。结论 PBK/TOPK在膀胱癌组织中,其表达有助于膀胱癌细胞的增殖及迁移。

PBK/TOPK与Ki-67及p53在非小细胞肺癌中表达相关性及预后意义

目的探讨PBK/TOPK、Ki-67、p53在非小细胞肺癌中表达相关性及预后意义,为非小细胞肺癌的预后诊断和临床治疗提供依据。方法选取确诊并接受手术切除治疗的非小细胞肺癌患者88例,其中腺癌患者29例、鳞癌患者30例,大细胞癌患者29例。收集患者原发灶组织的手术切除样本并用免疫组织化学染色法检测PBK/TOPK与Ki-67及p53在细胞中的定量,跟踪记录患者术后的病情发展情况。结果 PBK/TOPK在癌细胞胞质中呈阳性表达,呈黄色或棕褐色;Ki-67及p53在癌细胞胞质中呈阳性表达,呈黄色或棕褐色。PBK/TOPK、Ki-67和p53的高表达率分别为48.6%、69.3%、62.7%。应用统计学方法分析发现PBK/TOPK与Ki-67和p53表达呈正相关。通过跟踪记录发现PBK/TOPK与Ki-67和p53表达越低,患者的中位生存期越高。结论 PBK/TOPK与Ki-67及p53在非小细胞肺癌中的表达呈正相关,PBK/TOPK与Ki-67及p53在非小细胞肺癌中的表达相关性可作为患者临床预后分析治疗的依据。