双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞自噬的诱导作用及其机制

目的探讨双氢青蒿素(DHA)对前列腺癌PC-3细胞的自噬诱导作用及其机制。方法用0、12.5、25、50、100μmol/L DHA处理PC-3细胞,采用CCK-8法检测细胞活力,克隆形成实验检测细胞增殖能力。取PC-3细胞,设置对照组(不做处理)、DHA组(50μmol/L DHA处理48h)、自噬抑制剂3-MA组(5mmol/L 3-MA处理48h)、DHA+3-MA组(50μmol/L DHA+5mmol/L 3-MA处理48h),采用Western blotting和RT-qPCR检测自噬相关蛋白[微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、酵母Atg6同源物(Beclin-1)]的表达情况,透射电镜观察自噬小体形成情况,使用自噬双标慢病毒mCherry-GFP-LC3B转染PC-3细胞检测自噬流变化,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。设置对照组(不做处理)、DHA组(50μmol/L DHA处理48h)、ROS抑制剂NAC组(5mmol/L NAC处理48h)、DHA+NAC组(50μmol/L DHA+5mmol/L NAC处理48h),采用Western blotting检测ROS/AMPK/mTOR信号通路相关蛋白的表达。用50μmol/L DHA处理PC-3细胞48h后提取总蛋白,分成Input组(全蛋白裂解液)、IP组(加入Beclin-1抗体)、IgG组(加入同等质量的IgG),采用免疫共沉淀(Co-IP)实验检测Beclin-1与Vps34、Bcl-2及HMGB1蛋白的相互作用。结果CCK-8法检测结果显示,PC-3细胞存活率随着DHA浓度的升高而降低,且呈剂量和时间依赖性(P<0.05);DHA作用24、48、72h的半数抑制浓度(IC50)分别为97.12、57.10、29.35μmol/L,据此选择50μmol/L DHA作用48h进行后续实验。克隆形成实验结果显示,PC-3细胞克隆形成率随着DHA浓度的升高而明显降低(P<0.01)。Western blotting和RT-qPCR检测结果显示,与对照组比较,DHA组PC-3细胞中Beclin-1、LC3B mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与DHA组比较,DHA+3-MA组PC-3细胞中Beclin-1、LC3B mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。透射电镜观察可见DHA组PC-3细胞中出现明显的自噬小体,且自噬小体数较对照组明显增多(P<0.05)。mCherry-GFP-LC3B慢病毒转染实验结果显示,与对照组比较,DHA组每细胞红黄斑点比增高(P<0.01),DHA+3-MA组每细胞红黄斑点比降低(P<0.01)。与DHA组比较,DHA+3-MA组细胞存活率降低,凋亡率增高(P<0.01)。与对照组比较,DHA组PC-3细胞中p-mTOR蛋白相对表达水平降低(P<0.05),p-AMPK蛋白相对表达水平升高(P<0.01);与DHA组比较,DHA+NAC组p-mTOR蛋白相对表达水平升高(P<0.01),p-AMPK蛋白相对表达水平降低(P<0.01)。Co-IP实验结果显示,DHA处理后Beclin-1与Bcl-2的作用减弱,与Vps34、HMGB1的结合增强。结论DHA可诱导前列腺癌PC-3细胞发生自噬,其机制可能与调控自噬相关基因Beclin-1、LC3及ROS/AMPK/mTOR信号通路有关。

肉桂醛对PC-3细胞增殖、EMT及干细胞特性的影响

目的 探索肉桂醛(cinnamaldehyde,CA)对PC-3细胞增殖、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及干细胞特性的作用及机制,为CA作为潜在抗前列腺癌骨转移药物提供前期实验参考。方法 通过CCK-8法、Transwell实验、基质黏附实验及成球实验检测CA对PC-3细胞增殖、迁移、侵袭、黏附及成球的影响,qRT-PCR分析CA处理PC-3细胞后miR-143及AGO2 mRNA表达情况,Transwell实验和基质黏附实验检测单独加入CA、转染miR-143mimic、AGO2-siRNA同时处理CA及AGO2、同时转染miR-143mimic及AGO2后PC-3细胞的侵袭、迁移及黏附情况。Western blot实验检测CA或转染miR-143mimic后PC-3细胞AGO2、EMT及干细胞特性相关蛋白的表达情况。结果 CA呈浓度依赖性抑制PC-3细胞的增殖、迁移、侵袭、黏附及成球能力,与对照组相比差异均有统计学意义(P <0.01);qRT-PCR分析发现CA可上调PC-3细胞中miR-143表达、抑制AGO2 mRNA表达;过表达miR-143及沉默AGO2均能抑制PC-3细胞的迁移、侵袭及黏附,而同时上调AGO2及CA、同时上调miR-143及AGO2后PC-3细胞迁移、侵袭及黏附的抑制作用并不明显。此外,过表达miR-143及CA均能抑制PC-3细胞中AGO2、ZEB1、Vimentin、N-cadherin、fibronectin及CD44、Oct-4、c-Myc蛋白的表达。结论 CA可在体外抑制PC-3细胞的增殖、迁移、侵袭及黏附能力,此外,CA可抑制PC-3细胞的EMT及干细胞特性,其机制可能与其能上调miR-143/AGO2轴有关。

基于NF-κB通路探讨苗药酢浆草调控人前列腺癌PC-3细胞生物学作用的机制研究

目的:本研究旨在探讨苗药酢浆草对人前列腺癌PC-3细胞的生物学作用机制。方法:通过体外实验,用苗药酢浆草对PC-3细胞进行干预,采用了MTT法检测细胞活力,细胞流式技术检测PC-3细胞凋亡情况,Transwell法检测迁移及侵袭状况以及蛋白质印记技术检测NF-κB通路中p65、p-p65、Ikba、p-Ikba蛋白的表达情况。结果:苗药酢浆草以抑制PC-3细胞的增殖、诱导的PC-3细胞的凋亡,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),苗药酢浆草呈浓度依赖性抑制PC-3细胞的侵袭与迁移,差异较对照组有统计学意义(P<0.05),同时上调IκBα,下调p-p65及p-IκBα的表达水平,差异较照对照组有统计学意义(P<0.05)。结论:苗药酢浆草可抑制PC-3细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导PC-3细胞凋亡,且这些作用可能与抑制p-p65、p-Ikba的表达并调节NF-κB信号通路活性有关。

The multikinase inhibitor sorafenib induces caspase-dependent apoptosis in PC-3 prostate cancer cells

The present study investigated the effects of the multikinase inhibitor sorafenib on androgen-independent can- cer cells viability and intracellular signaling. Human androgen-independent PC-3 prostate cancer cells were treated with sorafenib. At concentration that suppresses extracellular signal-regulated kinase phosphorylation, sorafenib treatment reduced the mitochondrial transmembrane potential. Sorafenib also down-modulated the levels of mye- loid cell leukemia 1, survivin and cellular inhibitor of apoptosis protein 2. Sorafenib induced caspase-3 cleavage and the mitochondrial release of cytochrome c. However, no nuclear translocation of apoptosis inducing factor was detected after treatment and the pan-caspase inhibitor Z-VAD-FMK had an obvious protective effect against the drug. In conclusion, sorafenib induces apoptosis through a caspase-dependent mechanism with down-regulated antiapoptotic proteins in androgen-independent prostate cancer cells in vitro.

Ad-ING4对人前列腺癌细胞PC-3体内外抑癌效应的研究

背景与目的:腺病毒作为载体已被广泛用于肿瘤的基因治疗。ING4是生长抑制因子家族中的一个成员,是一种潜在的抑癌基因。本研究旨在探讨腺病毒介导的人ING4基因(Ad-ING4)对人前列腺癌细胞PC-3的体内外抑癌效应及其分子机制。方法:将扩增的Ad-ING4重组腺病毒感染PC-3细胞,用RT-PCR法检测ING4在PC-3细胞中的转录;MTT法检测ING4基因对PC-3细胞增殖的影响;流式细胞术和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡的变化;半定量RT-PCR法检测ING4基因的表达对PC-3细胞中的bcl-2、bax、p53和caspase-3凋亡相关基因表达的影响。用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠PC-3移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,15d后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重;用免疫组化法检测瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3和CD34蛋白的表达。结果:腺病毒介导的人ING4基因在PC-3细胞中成功转录,明显抑制PC-3细胞增殖,上调p53、bax、caspase-3基因表达和下调bcl-2基因表达,并诱导细胞凋亡。Ad-ING4重组腺病毒能显著抑制裸鼠PC-3移植瘤的生长,瘤重的抑制率达37%,与空病毒载体Ad-GFP组和细胞对照PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示Ad-ING4重组腺病毒能明显上调Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,下调Bcl-2和CD34蛋白的表达水平。结论:腺病毒介导的ING4基因在体内外均可明显抑制人前列腺癌细胞PC-3的生长,诱导其凋亡,其机制可能是上调P53、Bax、Caspase-3蛋白和下调Bcl-2蛋白表达水平。

槲皮素对前列腺癌PC-3细胞凋亡作用的研究

目的:研究槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞的凋亡作用。方法:体外培养PC-3细胞,给予不同浓度(50、100、150、200、250μmol/L)的槲皮素处理,MTT法检测槲皮素对细胞抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:槲皮素能抑制人前列腺癌PC-3细胞的体外生长,且呈时间与剂量依赖性,浓度由低到高,其24 h的抑制率(%)分别为3.01±1.32、4.84±1.73、20.35±1.30、16.78±1.89、27.25±4.01,48 h的抑制率(%)分别为10.18±1.16、6.22±0.04、24.29±4.19、22.4±4.26、41.42±5.43,当药物浓度>150μmol/L时P<0.05,具有统计学意义;流式细胞术显示PC-3细胞凋亡率随槲皮素浓度升高和作用时间延长而增加(P<0.05),其中浓度150μmol/L和200μmol/L组,24 h的凋亡率(%)分别19.10±0.28、26.55±0.78,48 h的凋亡率(%)分别为27.65±1.06、38.30±5.96;电镜观察到细胞的典型凋亡形态学变化。结论:在适当的条件下,槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞增殖有明显的抑制作用,同时可诱导PC-3细胞凋亡,其具体作用机制有待进一步深入研究。

沙棘黄酮制备及体外抑制人前列腺癌PC-3细胞作用研究

采用AB-8大孔树脂纯化沙棘黄酮初提物,用10%、30%、50%乙醇溶液梯度洗脱,以总黄酮含量和黄酮苷元含量为指标,筛选纯化样品;采用MTT法、实时无标记细胞分析技术检测沙棘黄酮样品体外对人前列腺癌PC-3细胞的增殖抑制作用,流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期情况,Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达情况。实验结果表明50%乙醇梯度洗脱样品(S50)中,总黄酮含量达到25.42%;水解后得到SH50样品,其槲皮素、异鼠李素含量分别达到5.03%、18.64%;25μg/m L的SH50样品对PC-3细胞即有增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;同时25μg/m L的SH50样品作用48 h即可显著诱导细胞凋亡(P<0.01),并将细胞周期阻滞在G2/M期,此外,样品可提高Bax蛋白和降低Bcl-2蛋白的表达。说明沙棘黄酮SH50样品对体外人前列腺癌PC-3细胞具有抑制增殖并诱导细胞凋亡作用,其机制可能与阻滞细胞周期,调节Bax和Bcl-2蛋白的表达有关。

ATRA联合IFN-α对PC-3细胞株的生长抑制作用以及对GRIM-19和STAT3基因表达的影响

目的:研究ATRA联合IFN-α对人激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株的生长抑制作用及对凋亡相关基因GRIM-19和原癌基因STAT3表达的影响。方法:采用MTT比色法筛选ATRA和IFN-α联合应用的最佳时间和剂量;相差显微镜及吖啶橙染色观察其对PC-3细胞的促凋亡作用;DNA ladder提取试剂盒检测用药后细胞凋亡;RT-PCR方法观察用药后PC-3细胞GRIM-19 mRNA的表达;Western blot分别检测GRIM-19、STAT3的蛋白表达。结果:ATRA 1μmol/L联合IFN-α1 000 U/mL作用72 h对PC-3细胞有显著的增殖抑制作用,与溶媒对照组、ATRA或IFN-α单独应用组比较,差异显著(P<0.05)。形态学观察两药合用后PC-3细胞呈现典型的凋亡征象。DNA电泳图谱在ATRA和IFN-α两药合用组可见较AT-RA单独应用组更为明显的DNA ladder,IFN-α单独用药组及对照组没有出现DNA降解。RT-PCR结果表明,ATRA和IFN-α两药合用GRIM-19 mRNA表达增强,与对照组和ATRA、IFN-α组比较,差异显著(P<0.05)。Western blot结果显示,两药合用组GRIM-19蛋白表达增强,STAT3蛋白表达减弱,与对照组、ATRA、IFN-α组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:ATRA和IFN-α联合应用可抑制PC-3细胞的增殖并诱导凋亡,其机制之一可能是通过上调GRIM-19基因表达,进而下调原癌基因STAT3表达实现的。

扶正抑瘤方含药血清对PC-3细胞作用的实验研究

目的:通过体外细胞实验,探讨扶正抑瘤方有效治疗前列腺癌的作用机理。方法:以人前列腺癌PC-3细胞为模型,观察扶正抑瘤方高、中、低剂量(9.58、19.17、38.33 g/kg)及不同浓度含药血清对PC-3细胞形态、细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。结果:扶正抑瘤方含药血清处理后,PC-3细胞可发现不同程度的细胞皱缩,染色质凝集,或细胞核固缩碎裂;MTT实验表明含药血清能明显抑制PC-3细胞增殖,且剂量越高细胞增殖抑制率越高,20%高剂量含药血清组抑制率约50%;流式细胞仪检测发现,含药血清组处理后48 h,各组在非凋亡细胞二倍体峰(G1)之前均出现大小不等的凋亡细胞峰,凋亡率均显著高于空白血清组,而且G0/G1期细胞比例增加,S期及G2/M期细胞比例下降。结论:扶正抑瘤方含药血清能抑制PC-3细胞增殖,且呈剂量、浓度依赖性,其抗肿瘤活性可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。

靛玉红对前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用

目的:研究中药成分靛玉红对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞的杀伤作用及可能的机制。方法:采用MTT方法研究靛玉红对前列腺癌PC-3细胞增殖抑制作用,采用Western印迹检测细胞周期蛋白cyclin D1及c-myc表达,采用流式细胞术检测细胞周期。结果:靛玉红降低前列腺癌细胞的存活率呈浓度依赖性,当浓度为5μmol/L时,可降低存活率至52.2%,当浓度为10μmol/L时,PC-3细胞存活率降至13.6%。靛玉红浓度为5μmol/L时可明显抑制PC-3细胞的细胞周期,结果显示G0/G1期PC-3细胞增多,而与此同时S期和G2/M期细胞减少。此外,靛玉红可以抑制细胞周期进展关键调控蛋白cyclin D1,以及与之相关Wnt信号通路的下游基因c-myc的表达。结论:靛玉红可以抑制雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞的增殖,其机制可能与其抑制细胞周期以及抑制Wnt信号通路有关。

参附注射液对前列腺癌PC-3细胞凋亡诱导的影响

目的:研究参附注射液(SF)对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及可能机制。方法:实验设立对照组和SF 50、100、200μl/ml组,Annexin V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测p53 mRNA表达。结果:与对照组比较,作用24、48、72 h后,SF 50、100、200μl/ml组PC-3细胞存活率显著减少(P均<0.05)。SF各组24 h存活率分别为(93.76±2.63)%、(81.21±1.80)%、(18.01±3.84)%;48 h存活率分别为(94.67±1.11)%、(78.33±2.89)%、(10.34±1.44)%;72 h存活率分别为(91.30±0.47)%、(36.67±1.56)%、(1.33±0.32)%,呈浓度和时间依赖性。作用48 h后,p53 mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论:SF可以诱导PC-3细胞凋亡,其作用机制可能与p53表达增高相关。

乌贼墨肽聚糖对前列腺癌PC-3、DU-145细胞作用机制研究

目的:研究乌贼墨肽聚糖对前列腺癌PC-3和DU-145细胞凋亡的影响,以及细胞凋亡的机制。方法:用HE染色观察肽聚糖作用后细胞形态变化,流式细胞术检测细胞早期凋亡率,免疫组化检测肽聚糖作用前后细胞中COX-2和VEGF蛋白阳性表达情况,原位杂交检测肽聚糖作用前后细胞中Bcl-2 mRNA和Caspase-3 mRNA表达的变化。免疫印迹检测肽聚糖作用前后细胞中COX-2、VEGF、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达情况。结果:肽聚糖作用后的细胞出现凋亡的形态学改变,流式细胞术检测后发现,早期凋亡细胞随着作用时间和药物质量浓度的增加而增加,两种细胞中的COX-2和VEGF蛋白表达量下降,Bcl-2 mRNA的表达量减少,而Caspase-3 mRNA表达量增加。免疫印迹结果显示,COX-2、VEGF和Bcl-2蛋白表达量下降,Caspase-3蛋白表达量增加。结论:乌贼墨肽聚糖可以诱导前列腺癌PC-3和DU-145细胞的凋亡,机制可能是下调COX-2、VEGF蛋白和Bcl-2 mRNA的表达;上调Caspase-3 mRNA的表达。

参附注射液对前列腺癌PC-3细胞增殖及细胞周期蛋白表达的影响

目的研究参附注射液(SF)对人前列腺癌PC-3细胞增殖的影响及可能机制。方法实验设立空白对照组和参附注射液不同浓度组,用MTT方法检测细胞增殖,碘化丙碇(PI)染色流式细胞术检测细胞周期分布,RT-qPCR检测细胞周期蛋白Cyclin D、Cyclin E mRNA的表达。结果与空白对照组比较,作用24,48,72 h后,参附注射液100μL/mL对PC-3细胞均有明显的增殖抑制作用(P<0.05),细胞增殖指数下降,Cyclin D、Cyclin E mRNA的表达量均明显降低(P<0.05)。结论参附注射液可以抑制PC-3细胞增殖,作用机制可能与降低Cyclin D、Cyclin E mRNA表达相关。

COX-2反义寡核苷酸对胰腺癌PC-3细胞株COX-2 mRNA和蛋白表达的影响

目的 探讨环氧合酶 (COX) 2反义寡核苷酸 (ODNs)对胰腺癌PC 3细胞株COX 2mRNA和蛋白表达的影响 ,并进一步阐明COX 2反义ODNs基因治疗胰腺癌的可行性。方法 设计和合成COX 2反义ODNs,体外转染胰腺癌PC 3细胞 ,然后通过荧光显微镜、RT PCR及Westernblotting证实转染效果。结果 转染COX 2反义ODNs后 ,PC 3细胞COX 2mRNA和蛋白表达均下降 ,且体现出一定的剂量和时间依赖性关系。结论 COX 2反义ODNs转染胰腺癌PC 3细胞株后 ,可下调细胞中COX 2mRNA和蛋白表达 ,COX 2反义ODNs有可能达到胰腺癌基因治疗的效果。

康莱特联合5-Fu治疗人胰腺癌PC-3裸鼠皮下移植瘤的实验研究

目的通过研究胰腺癌Bcl-2、Bax和血管内皮生长因子((VEGF)的变化情况与细胞凋亡的关系,探讨康莱特和5-Fu治疗胰腺癌的机制。方法建立人胰腺癌PC-3细胞裸鼠皮下移植瘤模型,采用免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax和VEGF在胰腺癌移植瘤中的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡比率,测量肿瘤体积。结果康莱特和5-Fu都可明显提高胰腺癌细胞凋亡率,降低细胞Bcl-2在蛋白水平上的表达,两者对Bax在蛋白水平上的表达无影响;康莱特明显降低移植瘤VEGF蛋白的表达;康莱特和5-Fu联合组,胰腺癌细胞凋亡比率显著高于单药组,而Bcl-2蛋白表达率显著低于单药组;康莱特和联合用药组VEGF蛋白表达率低于5-Fu组;联合用药组肿瘤体积小于单药组。结论康莱特联合5-Fu治疗胰腺癌的效果明显优于两药单独使用的效果。

昆布多糖硫酸酯对PC-3细胞PTEN和P27kip1基因表达的影响

目的:研究昆布多糖硫酸酯(LAMS)对体外培养的非激素依赖型人前列腺癌细胞株PC-3的作用,以及对PC-3细胞PTEN和P27kip1基因表达的影响,并探讨其抗肿瘤的作用机制。方法:分别用0、50、100、200μg/ml浓度的LAMS作用于PC-3细胞,用WST-8法检测其对细胞生长的抑制作用,利用流式细胞术(FCM)分析细胞周期和凋亡的变化,用荧光显微镜观察PC-3细胞形态的变化,RT-PCR和Western印迹检测细胞增殖、凋亡相关基因PTEN和P27kip1mRNA及蛋白的表达。结果:LAMS能抑制PC-3细胞的增殖,呈时间-剂量效应;不同浓度LAMS诱导PC-3细胞出现剂量依赖性S期阻滞;LAMS作用于PC-3细胞后凋亡率增加,并出现凋亡的形态学改变,相关基因PTEN和P27kip1mRNA及蛋白的表达呈剂量依赖性增加。结论:LAMS能抑制体外PC-3细胞的生长,并促进其S期阻滞和凋亡,PTEN和P27kip1mRNA及蛋白的表达明显增加,可能是其抑制前列腺癌生长的机制之一。

参附注射液对前列腺癌PC-3细胞免疫逃逸的影响

目的研究参附注射液(SF)对前列腺癌PC-3细胞免疫逃逸的影响及可能机制。方法实验设立空白对照组(包括PC-3细胞组、淋巴细胞Jurkat细胞组、PC-3-Jurkat共培养组),参附注射液低、中、高(5,10,20μL·m L^(-1))剂量组。用MTT法检测PC-3细胞活性,Hoechst 33258检测PC-3细胞凋亡,Annexin V/PI染色流式细胞术检测Jurkat细胞凋亡,同时用流式细胞术检测PC-3细胞表面CD95表达。结果分别与对照组比较,作用24 h后,SF中、高剂量组PC-3细胞凋亡增多(P<0.05),SF低、中、高剂量组Jurkat细胞凋亡减少,同时SF低、中、高剂量组PC-3细胞表面CD95阳性表达率增高。结论 SF对PC-3-Jurkat共培养体系中淋巴细胞凋亡有抑制作用,增强PC-3细胞表面CD95表达,SF可能通过此途径阻滞前列腺癌细胞的免疫逃逸,从而发挥抗肿瘤作用。

三种环境内分泌干扰物对前列腺癌细胞PC-3增殖的影响

[目的 ]通过观察环境内分泌干扰物对 壬基酚 (n 4 noniphenol,NP)、双酚A(bisphenolA ,BisA)和邻苯二甲酸二丁酯 (dibutylphthalate ,DBP)对前列腺癌细胞PC 3增殖的影响 ,探讨近几年来前列腺癌发病率增加的原因。 [方法 ]前列腺癌细胞株PC 3在RPMI 164 0培养液中采用开放式单层贴壁培养 ,培养条件为 3 7℃ ,5 %CO2 ,10 0 %相对饱和湿度 ,采用MTT法、3 H TdR掺入法及流式细胞术对PC 3细胞的增殖情况进行分析。实验设溶剂对照组及每种受试物各四个剂量组。 [结果 ]NP、BisA和DBP均可促进PC 3细胞增殖和细胞DNA合成并推进G0 /G1期细胞进入S期 ,提高细胞增殖指数 ;随着培养时间的延长至 96h ,在较低浓度条件下 ,0 5 μmol/LNP、0 .5 μmol/LBisA和 2 5 μmol/LDBP也能明显促进PC 3细胞增殖 (P <0 0 5 ) ,且其促进PC 3细胞增殖效应存在剂量 效应关系和时间 效应关系。 [结论 ]NP、BisA和DBP可促进前列腺癌细胞株PC 3的增殖 ,提示环境中内分泌干扰物污染增加 ,可能是近几十年来前列腺癌发病率上升的原因之一。

Rho GTP酶在ω-3多不饱和脂肪酸抑制人前列腺癌PC-3细胞转移中的作用

背景与目的:近年来,多不饱和脂肪酸对肿瘤发生、发展影响的研究备受关注。本实验主要观察两种ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 polyunsaturated fatty acid,ω-3PUFA)二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对人前列腺癌细胞株PC-3转移的影响,并通过检测ω-3 PUFA对细胞内Rho GTP酶蛋白表达及细胞骨架重组影响,揭示Rho GTP酶在ω-3 PUFA抑制肿瘤转移中的作用。方法:MTT法观察ω-3 PUFA对PC-3细胞增殖能力的影响,体外粘附实验、侵袭实验和迁移实验观察ω-3 PUFA对肿瘤细胞转移的影响。Western blot法检测ω-3 PUFA对与细胞骨架重组相关的RhoA、Rac1、Rac2和Cdc42蛋白表达的影响。免疫荧光细胞化学法标记微丝和微管,激光共聚焦扫描显微镜观察ω-3 PUFA对细胞骨架重组的影响。结果:EPA及DHA均能抑制PC-3细胞增殖,增殖抑制率均随处理浓度增大和作用时间延长而增加。与对照组比较,60μmol/L的EPA或DHA处理后的PC-3细胞体外粘附性、侵袭性和迁移性均显著下降(P<0.05)。ω-3 PUFA能显著下调Rac1、Rac2和Cdc42蛋白表达(P<0.05),并能明显影响细胞内微丝和微管细胞骨架的结构和分布。结论:ω-3 PUFA能够通过下调RhoGTP酶基因表达,抑制Rho GTP酶对细胞骨架重组的调控,导致细胞骨架结构改变,削弱肿瘤细胞的粘附性、侵袭性和迁移性,抑制PC-3细胞的转移。

三氧化二砷诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡P_(38)信号通路的研究

目的:探讨P38信号通路在三氧化二砷(As2O3)诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡中的作用。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度(0.312 5、0.625、1.25、2.5、5、10、20μmol/L)As2O3作用PC-3细胞24、48、72 h后的细胞生长抑制情况。Western印迹检测As2O3作用PC-3细胞后P38信号转导通路的表达。Annexin V/PI双染色法检测As2O3作用PC-3细胞后细胞凋亡,同时检测应用P38通路高选择抑制剂SB203580干扰P38信号通路后As2O3诱导PC-3细胞凋亡的变化。结果:As2O3诱导PC-3细胞凋亡呈现时间、剂量依赖性。As2O3可以使P38信号通路蛋白快速磷酸化,激活P38信号通路。2、10、20μmol/L As2O3作用PC-3细胞24 h后,PC-3细胞凋亡率分别为(18.9±0.43)%、(24.7±0.29)%和(49.7±1.79)%。应用P38信号通路高选择抑制剂SB203580干扰P38信号通路后,PC-3细胞凋亡率分别降低为(14.8±0.81)%、(22.1±0.51)%和(39.6±1.74)%,抑制P38信号通路可以显著降低As2O3诱导PC-3细胞的凋亡(P<0.05)。结论:P38信号通路在As2O3诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡中有表达,干扰P38信号通路可影响As2O3诱导PC-3细胞凋亡,提示P38信号通路参与了As2O3诱导的PC-3细胞凋亡。