20(S)-人参皂苷Rg3对前列腺癌PC-3M细胞的诱导凋亡作用

目的研究20(S)-人参皂苷Rg3(SPG-Rg3)对人前列腺癌PC-3M细胞诱导凋亡的作用,并探讨其可能机制。方法采用MTT法观察SPG-Rg3对PC-3M细胞生长的抑制作用,计算IC50;用流式细胞术测定PC-3M细胞周期的变化;AO/EB双染观察SPG-Rg3对PC-3M细胞凋亡的形态学变化;利用免疫细胞化学染色和RT-PCR技术探讨SPG-Rg3对PC-3M细胞的诱导凋亡作用及与其相关基因caspase-8的关系。结果SPG-Rg3可明显抑制PC-3M细胞的生长,IC50为(248.5±0.58)mg.L-1;PC-3M细胞的生长周期中S期细胞数增加,G2/M期细胞数则明显减少,且在G1峰前出现明显的凋亡峰;SPG-Rg3作用后PC-3M细胞呈现明显的凋亡改变,且细胞caspase-8mRNA含量增加、表达明显增强。结论SPG-Rg3能诱导前列腺癌PC-3M细胞发生凋亡,其机制可能与其活化caspase-8作用有关。

人参单体皂甙Rh_2对体外培养的前列腺癌细胞株PC-3M抑制效应的研究

目的 :探讨人参单体皂甙 Rh2 对体外培养的 PC- 3M细胞株的抗肿瘤效应。方法 :采用 MTT实验及 3 H- Td R掺入实验观察 Rh2 对 PC- 3M细胞生长状态及细胞 DNA合成的影响。结果 :高剂量 Rh2可明显抑制 PC- 3M细胞的生长 ,细胞 DNA合成减慢 ,并呈剂量依赖性。结论 :Rh2 对 PC-

Survivin-siRNA对前列腺癌PC-3M细胞增殖的抑制作用

目的:探讨survivin-siRNA对前列腺癌细胞株PC-3M的增殖抑制作用。方法:构建两个针对survivin siRNA表达载体,与脂质体和空质粒两个对照组一起分别转染前列腺癌PC-3M细胞后,利用半定量RT-PCR和Western blotting分别检测细胞survivin mRNA及蛋白表达水平,MTT法测定细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果:转染72h后,两个实验组细胞的survivin mRNA水平是脂质体组的48%±6%(n=3)和30%±5%(n=3),蛋白表达水平是脂质体组的38%±4%(n=3)和36%±4%(n=3)。MTT检测实验组细胞的生长速度分别是脂质体组的44.20%±2.08%(n=3)和39.20%±1.93%(n=3),流式细胞术发现实验组G1期细胞比例明显高于两个对照组,而G2期和S期细胞比例减少,细胞出现凋亡。结论:利用survivin-siRNA可明显抑制前列腺癌PC-3M细胞的增殖,细胞受阻于G1期,诱导细胞凋亡,为进一步进行动物体内研究奠定了基础。

维生素K_3对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞的凋亡诱导作用

目的:观察维生素K3对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3M的凋亡诱导作用。方法:MTT增殖抑制实验;吖啶橙染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞凋亡及周期变化;NAC抗氧化试验;DCFH-DA荧光分光光度法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;RT-PCR检测GSH-Px和CAT基因表达的改变。结果:60μmol/L剂量以上的VK3均可以有效抑制PC-3M细胞的增殖,并且呈时间剂量依赖性;联合应用不同剂量NAC(5、10、20、40、80μmol/L)与VK3(60μmol/L)共同作用于PC-3M细胞后,结果显示与单独应用VK3相比各浓度的NAC能不同程度增加细胞存活率;吖啶橙染色证明在VK3(60μmol/L)作用12h后,PC-3M细胞出现凋亡的形态学改变;流式细胞计数结果显示VK3(60μmol/L)作用12h后细胞出现凋亡峰,细胞周期被阻滞于G0/G1期;DCFH-DA荧光染色,在VK3作用后1-2h,细胞内即出现了较强的荧光表达;RT-PCR结果显示,在VK3作用后细胞内的CAT和GSH-Px两种主要的抗氧化酶类表达降低。结论:VK3可能主要通过引起PC-3M细胞内氧化应激诱导细胞发生凋亡。

双氢青蒿素对前列腺癌细胞PC-3M生长的影响及其机制探讨

目的:观察双氢青蒿素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3M细胞凋亡和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:不同浓度(0、25、50、100μmol/L)的双氢青蒿素分别作用于PC-3M细胞48 h,MTT法检测细胞生长活性;流式细胞仪测定细胞凋亡率;分光光度法检测细胞凋亡过程中caspase-3、caspase-8活性变化;半定量RT-PCR法检测PC-3M细胞内VEGF mRNA的表达;Western印迹法检测细胞VEGF蛋白表达。结果:双氢青蒿素能显著抑制PC-3M细胞的增殖,与对照组(0μmol/L)的细胞凋亡率(2.92±0.45)%相比,各剂量组(25、50、100μmol/L)的细胞凋亡率[(8.85±0.74)%,(12.83±0.84)%,(18.65±1.24)%]显著增加,caspase-8[(0.47±0.05)U/μg vs(1.22±0.15)U/μg,(1.76±0.07)U/μg,(2.91±0.24)U/μg]、caspase-3[(0.44±0.07)U/μg vs(0.95±0.08)U/μg,(1.48±0.14)U/μg,(2.92±0.45)U/μg]活性显著增加,呈剂量依赖性(P<0.01)。PC-3M细胞内VEGF mRNA的表达和蛋白表达呈剂量依赖性降低。结论:双氢青蒿素能显著抑制体外PC-3M细胞的生长,并促进其凋亡,机制可能与增加凋亡蛋白酶和抑制VEGF表达有关。

地衣酸抑制前列腺癌PC-3M细胞增殖效应的初步探讨

目的:从真菌松萝中提取地衣酸并研究地衣酸对体外培养前列腺癌PC-3M细胞增殖的抑制效应.方法:用细胞培养、细胞生长抑制实验(MTT法)观察PC-3M细胞形态、细胞生长密度和检测细胞生长抑制率,用3H-TdR掺入法测定细胞增殖过程中DNA的含量.结果:与对照组相比,实验组PC-3M细胞形态异常、细胞生长密度降低,细胞生长抑制率增强,3H-TdR掺人量明显减少,并呈剂量依赖关系,与地衣酸浓度的相关系数分别为0.9799与-0.9525.结论:地衣酸对体外培养PC-3M细胞具有抑制效应.

多肽K237对PC-3M细胞增殖及bax、bcl-2 mRNA表达的影响

目的:研究多肽K237对体外培养的雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用,及其可能的作用机制。方法:将培养的PC-3M细胞分为4组:实验组(分别以50、100、200μmol/L的多肽K237处理48h)和对照组(K237浓度为0μmol/L),采用MTT法观察多肽K237对前列腺癌PC-3M细胞增殖的影响,用RT-PCR法检测bax、bcl-2mRNA表达的变化。结果:不同浓度的多肽K237处理48h后,PC-3M细胞形状变圆,体积变小,胞质透亮度下降,部分细胞脱落悬浮于培养液中。在50、100、200μmol/L的多肽K237作用48h后,MTT法检测的细胞生长抑制率分别为(12.6±0.95)%、(17.8±0.99)%、(27.2±1.12)%。RT-PCR结果显示:50、100、200μmol/L实验组和对照组的bax/β-actin值分别为0.919±0.071、0.971±0.083、0.992±0.102,(0.889±0.06),bcl-2/β-actin值分别为0.896±0.085、0.791±0.084、0.764±0.702,0.922±0.097,3组中上述两项指标均较对照组有明显变化(P均<0.01),其中,baxmRNA表达水平上调,而bcl-2mRNA表达水平下调,上述作用呈现剂量效应关系。结论:多肽K237可能通过影响bax、bcl-2mRNA的表达来诱导PC-3M细胞凋亡,从而抑制前列腺癌细胞的增殖。

前列腺癌PC-3M细胞hmSD活性与细胞凋亡相关性的实验研究

目的:研究前列腺癌PC - 3M细胞株hmSD的活性与细胞凋亡的相关性。方法:应用丁酸钠诱导前列腺癌PC - 3M细胞发生凋亡,吖啶橙/溴化乙锭染色检测细胞凋亡率;收集丁酸钠作用后的PC - 3M细胞,匀浆后离心取上清,与底物共同孵育,以硫代巴比妥酸(TBA)显色反应检测所生成的唾液酸,计算唾液酸酶活性;将细胞凋亡率与hmSD活性进行相关性分析。结果:丁酸钠诱导PC - 3M细胞凋亡的同时显著下调hmSD的活性,凋亡率与hmSD活性呈负相关。结论:hmSD活性变化与前列腺癌细胞凋亡呈相关性。

单核细胞趋化蛋白-1对前列腺癌PC-3M细胞生长的影响

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)对前列腺癌PC-3M细胞生长的影响。方法选取PC-3M细胞平铺于培养板24h,待细胞达到80%融合度时随机分为对照组、Si-scramble组、MCP-1组和Si-MCP-1组。对照组无特殊处置,MCP-1组加入MCP-150ng/ml,Si-scramble组和Si-MCP-1组分别转染pGCSi-scrambled质粒和pGCSi-mcp-1质粒,细胞处理后再培养24h,比较各组细胞迁移速率变化,72h时进行细胞抑制率检测以及应用流式细胞仪测定各组细胞凋亡率。结果细胞处理培养24h后,MCP-1组细胞迁移速率〔(13.4±3.21)μm/24h〕与对照组〔(7.3±1.24)μm/24h〕和Si-scramble组〔(5.7±1.73)μm/24h〕比较明显加快(P<0.05),而Si-MCP-1组的细胞迁移速率〔(2.1±0.92)μm/24h〕与对照组和Si-scramble组比较明显减慢(P<0.05)。72h后Si-MCP-1组细胞凋亡率可达(19.2±2.69)%,与对照组〔(5.3±0.35)%〕和Si-scramble组〔(5.4±0.35)%〕的细胞凋亡率比较凋亡率明显升高(P<0.05),MCP-1组细胞凋亡率为(3.2±0.42)%,与对照组和Si-scramble组比较凋亡率明显降低(P<0.05)。结论MCP-1对PC-3M细胞有促进增长和转移的作用,而pGCSi-MCP-1质粒可显著抑制肿瘤细胞的生长和转移。

内皮素A受体拮抗剂BQ123对前列腺癌PC-3M细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察内皮素A受体拮抗剂BQ123对转移性前列腺癌(PCa)PC-3M细胞株增殖与凋亡的影响,初步探讨内皮素A受体拮抗剂对转移性PCa细胞的体外抗肿瘤效应。方法:实验分为两组,对照组为PC-3M细胞及含灭活小牛血清的F12/RMPI1640培养液;实验组为PC-3M细胞加入等量的1μmol/LBQ123。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、划痕损伤实验、细胞迁移实验观察BQ123对人PCaPC-3M细胞株增殖的抑制效应,利用Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞术检测BQ123诱导PC-3M细胞凋亡的作用及其与细胞周期的关系。结果:MTT比色法结果显示BQ123随着作用时间的增加,对PC-3M的抑制率分别为24h22.32%、48h44.88%和72h64.47%,表现出良好的时效关系(P<0.05),划痕损伤实验结果提示:实验组PC-3M细胞的迁移距离分别为12h(103.42±75.63)μm、24h(243.75±121.53)μm和48h(422.07±36.01)μm,均低于对照组的12h(162.93±19.87)μm、24h(317.19±43.19)μm和48h(692.74±40.84)μm(P<0.05)。细胞迁移实验中实验组穿入下室的PC-3M细胞为(79.2±9.58)个,亦明显少于对照组的(92.6±5.94)个(P<0.05);Annexin V-FITC/PI双染色法的结果显示对照组PC-3M细胞凋亡率为(9.38±1.37)%,实验组PC-3M细胞凋亡率为(15.03±0.93)%,差异有统计学意义(P<0.05),细胞周期实验的结果显示实验组各期细胞比例与对照组相比差异不显著(P>0.05)。结论:BQ123对PCaPC-3M细胞株的生长、迁移和侵袭能力均有明显的抑制作用,且可以诱导PC-3M细胞凋亡,可为PCa治疗的研究提供一种新的思路。

雌激素受体2对前列腺癌细胞系PC-3M增殖的影响

目的:构建带有人雌激素受体2(ESR2)全长cDNA的重组质粒pcDNA3.1-hERβ,转染人前列腺癌PC-3M细胞株,观察ESR2对细胞增殖能力的影响。方法:RT-PCR方法从人正常卵巢组织中获取ESR2全长cDNA,利用基因重组技术与真核表达载体pcDNA3.1连接,构建重组质粒pcDNA3.1-hERβ;瞬时转染前列腺癌PC-3M细胞株,应用细胞计数、MTT法及流式细胞术检测细胞增殖能力的改变;半定量RT-PCR法及Westernblotting法分别检测增殖相关基因cyclinD1和P21Cip1mRNA及蛋白表达。结果:DNA测序结果显示扩增的ESR2序列与GenBank(NM_001437)所公布的序列完全一致。重组质粒pcDNA3.1-hERβ瞬时转染人PC-3M细胞48 h后,与质粒对照组相比:RT-PCR法及Western blotting法显示,ESR2基因在mRNA水平和蛋白水平的表达均明显增加;细胞计数及MTT结果发现,细胞数目减少,细胞增殖活性下降(P<0.01);流式细胞实验显示,G0/G1期细胞比例增加(P<0.05),S期及G2/M期细胞比例减少(P<0.05);RT-PCR及Western blotting结果还发现cyclinD1的表达减弱,而P21Cip1的表达增强。结论:成功构建pcDNA3.1-hERβ重组质粒;带有ESR2全长基因的重组质粒转染PC-3M细胞后,细胞的增殖活性受到抑制;RSR2可能通过影响细胞增殖相关基因cyclinD1和P21Cip1的表达抑制细胞的增殖。

人前列腺癌PC-3M细胞中与转移相关靶标蛋白的筛选

目的探讨早期诊断前列腺癌和逆转前列腺癌转移的标志物。方法采用一维SDS—PAGE结合高效液相色谱-串联质谱的方法分离并鉴定PC-3M细胞中的膜蛋白。结果在严格的过滤参数条件下（当Charge＋1，Xcorr≥1．9；当Charge＋2，Xcorr≥2．2；当Charge＋3，Xcorr≥3．75；其中DelCN≥0．1），PC-3M细胞中鉴定出2023个蛋白，其中1391（69％）个蛋白经过基因本体评注（GOA）显示为已知细胞组分，其余为未知细胞组分。在已知细胞组分中527（38．30％）个蛋白为膜蛋白或者膜相关蛋白，其中18．32％的蛋白被预测至少有1个跨膜区，49．62％的蛋白有1～3个跨膜区，19．08％的蛋白有4～9个跨膜区，9．92％蛋白预测有≥10个跨膜区。除了已知的与膜相关的蛋白，很多新的蛋白也被鉴定，其中包括假设蛋白和一些cDNA序列。结论一种明显独特的质膜蛋白表达模式存在于高转移前列腺癌细胞系中。这将帮助进一步理解前列腺癌侵袭和转移的分子机制，并且为寻找前列腺癌转移相关的靶标分子提供实验基础。

TRAIL抑制人前列腺癌细胞PC-3M体外生长的实验研究

目的 观察TRAIL对前列腺癌细胞PC 3M的生长抑制作用。方法 采用MTT法检测不同浓度TRAIL对人非激素依赖性前列腺癌细胞株PC 3M的生长抑制率 ,原位末端酶标记技术检测细胞凋亡。免疫组化法观察bcl 2的表达。结果 TRAIL可有效地抑制PC 3M细胞生长 ,具有时间、浓度依赖性特点。经药物作用后 ,前列腺癌细胞凋亡明显增多 ,凋亡率随作用时间的延长而增高 ,PC 3M细胞中的bcl 2基因表达无显著变化。结论 TRAIL蛋白可显著抑制前列腺癌细胞PC 3M生长 ,其诱导细胞凋亡不依赖bcl

前列腺癌PC-3M细胞株膜结合型唾液酸酶的活性测定与基因表达

目的 :研究前列腺癌 PC- 3M细胞株膜结合型唾液酸酶 ( hm SD)的活性和基因表达。方法 :收集指数生长期的 PC- 3M细胞 ,匀浆后离心取上清 ,与底物共同孵育 ,以 TBA显色反应检测所生成的唾液酸 ,计算唾液酸酶活性 ;应用 RT- PCR方法检测 hm SD的 m RNA表达。结果 :在 PC- 3M细胞株可检测到 hm SD活性及其 RNA的表达。结论 :PC- 3M细胞在基因和蛋白水平有 hm SD的表达。

TFAR19蛋白协同米非司酮对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响

目的初步探讨TFARl9协同米非司酮（MIF）对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响。方法构建TFARl9真核表达载体，用脂质体介导的方法转染PC-3M细胞。MTT法检测5、10、20、50和100μmol·L^-1 MIF作用于前列腺癌PC-3M细胞24～96h的吸光度（A）值。在转染TFARl9的细胞中加入20mol·L^-1 MIF培养24、48h，MTT比色法检测细胞增殖，原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡率，透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变。结果构建了PCI-neo-TFARl9真核表达载体并在转染的PC-3M细胞中得到了瞬时表达。MTT实验表明，与对照组相比，5、10μmol·L^-1 MIF组的A值差异无统计学意义（P〉0．05），20、50和100μmol·L^-1MIF组的A值差异有统计学意义（P〈0．01），MIF对前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用呈时间、剂量依赖性；转染PCI-neo-TFARl9并加入20mol·L^-1 MIF后，与对照组及单独应用MIF组相比，细胞生长明显受到抑制（P〈0．01），细胞凋亡率明显增加（P〈0．01），透射电镜观察到典型的细胞凋亡特征（细胞体积缩小，核皱缩、碎裂，染色质呈块状边集等）。结论TFARl9蛋白能够协同米非司酮促进前列腺癌PC-3M细胞凋亡，有望成为前列腺癌的辅助治疗药物。

丁酸钠对前列腺癌PC-3M细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的 :研究丁酸钠对前列腺癌 PC- 3M细胞株的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法 :前列腺癌 PC- 3M细胞经不同剂量丁酸钠作用后 ,相差显微镜观察细胞形态变化 ,MTT测定丁酸钠对 PC- 3M细胞的增殖抑制率 ,吖啶橙 /溴化乙锭染色检测凋亡细胞 ,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡峰。结果 :丁酸钠对 PC- 3M细胞有显著的增殖抑制作用 ,呈时间剂量依赖性 ;并使 PC- 3M细胞产生凋亡形态学变化 ;细胞周期被阻滞于 G1 / G0 期和 G2 / M期 ,S期细胞减少 ,有亚 G1 峰出现。结论 :丁酸钠对 PC- 3M细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用。

E2F陷阱DNA对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的诱导

目的:为观察转录因子E2F陷阱DNA对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3M增殖和凋亡的影响。方法:采用脂质体lipofectam ine将E2F decoy DNA、ARE decoy DNA和control decoy DNA分别转染PC-3M细胞,MTT检测其对细胞增生的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,并进行染色体DNA断裂的测定;通过RT-PCR检测转染的PC-3M细胞中c-Myc mRNA、cyc lin D1 mRNA表达水平的变化,通过W estern b lotting检测细胞中c-Myc蛋白、cyc lin D1蛋白表达水平的变化。结果:E2F decoy DNA转染后的PC-3M细胞的生长受到明显抑制;转染后的细胞形态变化符合凋亡的典型改变,染色体断裂明显,细胞凋亡率为26.35%;c-Myc、cyc lin D1的表达受到抑制。结论:E2F decoy DNA可诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M凋亡和抑制细胞增殖,其机制可能涉及到c-Myc mRNA、cyc lin D1的表达变化。

锌对前列腺癌PC-3M细胞侵袭能力的影响

目的探讨锌对人前列腺癌PC-3M细胞侵袭能力的影响。方法用MTT比色法检测不同剂量锌对PC-3M细胞增殖的影响;Transwell小室检测锌对PC-3M细胞侵袭能力的影响;RT-PCR检测锌作用24 h后MMP-2、MMP-9 mR-NA的表达;酶谱分析检测锌作用后PC-3M细胞MMP-2、MMP-9的活性变化。结果MTT检测结果表明一定剂量的锌可抑制PC-3M细胞的生长;Transwell小室实验结果显示,锌作用下PC-3M细胞穿透Matrigel膜的细胞数减少;RT-PCR结果显示锌抑制了PC-3M细胞MMP-2和MMP-9的表达;酶谱分析表明锌作用后PC-3M细胞MMP-2、MMP-9的活性下降。结论一定剂量的锌可降低PC-3M细胞的侵袭能力,其机制可能与抑制MMP-2、MMP-9的合成和激活有关。

松萝酸抑制前列腺癌PC-3M细胞增殖的生物学效应

为研究从真菌松萝中提取的松萝酸对体外培养前列腺癌PC-3M细胞增殖的抑制效应,用细胞培养、细胞生长抑制实验(MTT法)观察PC-3M细胞形态、细胞生长密度和检测细胞生长抑制率,用3H-TdR掺入法测定细胞增殖过程中DNA的含量。结果表明,与对照组相比,实验组PC-3M细胞形态异常、细胞生长密度降低,细胞生长抑制率增强,3H-TdR掺入量明显减少,并呈剂量依赖关系,与松萝酸浓度的相关系数分别为0·9799与-0·9525。结论:松萝酸对体外培养PC-3M细胞具有抑制效应,使肿瘤细胞增殖减慢,具有明显的抗肿瘤作用。

u-PAR反义核酸载体的构建与高侵袭人前列腺癌细胞PC-3M亚系的转染

目的 :为了特异封闭PC -3M高侵袭亚系尿激酶型纤溶酶原激活物受体 (u -PAR)的表达 ,观察其对侵袭能力的抑制效应。方法 :应用RT -PCR获得u -PAR的cDNA片段 ,反向插入pcDNA3质粒载体中 ,构建u -PAR反义核酸载体并导入高侵袭亚系中 ;借助RT -PCR和免疫组化检测转染细胞u -PAR的表达。结果 :u -PAR反义核酸载体转染株的u -PARmRNA和蛋白质水平明显低于对照组 ,抑制率分别为 53 %和 73 % ,同时其体外侵袭能力亦明显降低 ,抑制率为 79%。结论 :u -PAR反义核酸在PC -3M高侵袭亚系中发挥了特异封闭作用 ,为进一步观察u-PAR反义核酸抑制高侵袭前列腺癌细胞亚系的侵袭效应提供了细胞模型。