PC-SPESⅡ对雄激素非依赖性前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:观察PC-SPESⅡ对雄激素非依赖性前列腺癌(AIPCa)DU145和PC-3裸鼠移植瘤的疗效及血清IL-6表达的影响。方法:雄性Balb/c-nu/nu裸小鼠128只,随机分成DU145、PC-3两组,每组再分为对照、PC-SPESⅡ125、250、500 mg·kg^(-1)·d^(-1)4个剂量组,每组各16只。接种第2天起按体重给药,共8周。观察成瘤潜伏期;每周测量肿瘤直径,根据体积(L×W×H×π/6)变化.绘制肿瘤生长曲线;第2、4、8周用双抗体夹心ABC-ELISA法检测血清IL-6浓度,并取重要脏器观察不良反应;8周末取肿瘤组织作病理学和透射电镜观察。结果:PC-SPESⅡ可延长DU145成瘤潜伏期(P=0.021),并显著抑制DU145肿瘤生长(P=0.0009),第8周125、250、500 mg·kg^(-1)·d^(-1)组的生长抑制率分别为29.41%、44.2%和66.15%。对PC-3肿瘤的抑制作用随着剂量升高呈增强趋势,但无统计学差异(P=0.0787)。DU145和PC-3组血清IL-6均呈剂量依赖性降低(P≤0.002或P<0.0001)。用药后DU145细胞表现为典型的凋亡征像,PC-3组线粒体显著减少。实验过程中未观察到明显的不良反应。结论:PC-SPESⅡ对AIPCa有抗癌活性,抑制IL-6分泌、诱导凋亡可能是其重要的作用机理。

PC-SPESⅡ对雄激素非依赖型前列腺癌裸鼠移植瘤G1/S期及凋亡相关蛋白表达的影响

目的研究PC-SPESⅡ影响AIPCa细胞周期进展及凋亡的分子机制。方法80只雄性Balb/c-nu/nu裸小鼠分为2大组,分别接种DU145或PC-3细胞,建立AIPCa移植瘤模型,每组再分成对照、PC-SPESⅡ125、250、500mg/kg4个剂量组,每组10只,接种第2天起每天给药,8周后各组中随机抽取3份标本,Westernblot和SABC免疫组织化学法检测G1/S期调节蛋白P16、P21、P-Rb及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved-PARP表达的变化。结果Western blot:用药后DU145组P16表达显著升高(P=0.001),P21和P-Rb表达无变化(P=0.188和P=0.778);Bax、Cleaved-PARP表达升高(P=0.003和P=0.002),Bcl-2显著下降(P=0.001)。PC-3组P16、P21呈剂量依赖性上升(P<0.0001),P-Rb呈剂量依赖性降低(P=0.005);Bax无显著变化,每天500mg/kg时Bcl-2显著降低(P=0.021),Cleaved-PARP升高(P=0.02)。免疫组化:PC-3组6种蛋白及DU145组P16、P-Rb、Bax与Western blot结果一致。DU145组P21阳性率呈剂量依赖性升高(P=0.001),Bcl-2、Cleaved-PARP表现出更明显的剂量依赖性降低或升高趋势。结论PC-SPESⅡ可以通过调节G1/S阻滞和凋亡相关蛋白表达抑制AIPCa生长。

PC-SPESⅡ作用下DU145移植瘤基因表达谱的变化

目的研究PC-SPESⅡ对雄激素非依赖性前列腺癌(AIPCa)基因表达的影响。方法雄性Balb/c-nu/nu裸小鼠20只,随机分为对照、PC-SPESⅡ组,每组10只,接种AIPCa细胞DU145建立动物模型。接种第2天起给药,8周后取肿瘤组织,应用human androgen signaling and prostate cancer gene array基因芯片,分析PC-SPESⅡ引起的基因表达变化。为验证基因芯片结果,选择应用RT-PCR方法检测IGF-1mRNA变化。结果30个基因表达下调,包括AIPCa凋亡耐受基因EIF4EBP和FOXj、AIPCa转化基因ADM和PCNA,AIPCa细胞表面标记物PSCA和FAS,以及侵袭性相关基因IGF-1、Met-1、B-myb等。11个基因表达上调,包括AIPCa细胞生长抑制基因PMEPA1和SFRP4,雄激素依赖性细胞表面标记物TMPPSS2、KLK3(PSA)、DD3和STEAP等。结论PC-SPESⅡ可能通过抑制AIPCa凋亡耐受机制、改善AIPCa表型,恢复雄激素依赖性、降低转移能力等多种途径发挥抗AIPCa作用。

中药复方PC-SPESⅡ抑制人前列腺癌细胞LNCaP增殖及其对AR,PSA表达的影响

基于雄激素受体（AR）信号通路探讨中药复方PC-SPESⅡ抑制人前列腺癌细胞LNCa P增殖的作用。采用MTT法检测PC-SPESⅡ对LNCa P细胞增殖的影响,显示PC-SPESⅡ质量浓度为180-1 440 mg·L-1时能显著抑制LNCa P细胞增殖,PC-SPESⅡ作用24,48 h的IC50分别为311.48,199.01 mg·L-1;流式细胞仪检测细胞周期分布的变化发现240 mg·L-1PCSPESⅡ能阻滞细胞于G2/M期,在G0/G1峰前出现明显的凋亡峰,随作用时间的增加而升高;同时采用Hoechst 33258染色观察凋亡细胞形态和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测凋亡细胞比例,PC-SPESⅡ质量浓度为480 mg·L-1时凋亡细胞比率增加,作用效果均呈一定剂量依赖性;通过ELISA法检测LNCa P细胞分泌PSA的水平,以25 mg·L-1Bic作为阳性对照药,发现480 mg·L-1PC-SPESⅡ能显著降低细胞分泌PSA;采用qRT-PCR和Western blot方法检测AR,PSA mRNA和蛋白表达的变化,结果显示以人工合成雄激素25μg·L-1R1881诱导LNCa P细胞后,240-480 mg·L-1PC-SPESⅡ能显著下调AR,PSA mRNA和蛋白表达,抑制AR由细胞质转移入细胞核。以上结果表明,PC-SPESⅡ对LNCa P细胞体外增殖有抑制作用,阻滞细胞周期于G2/M期并诱导细胞凋亡,其机制可能与下调AR,PSA的表达,抑制AR核转位有关。