烯醇化酶1过表达促进肺癌PC14细胞的增殖和迁移

目的:探讨烯醇化酶1(enolase 1, ENO1)表达水平对肺癌PC14细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法:构建ENO1过表达载体-pcDNA3.1/ENO1,利用脂质体LipofectamineTM2000转染对数生长期肺癌细胞PC14,G418筛选ENO1稳转细胞株。用CCK-8法、划痕愈合实验和流式细胞术分别检测过表达ENO1对PC14细胞增殖、迁移和凋亡的影响。结果:成功构建了ENO1过表达细胞模型,与PC14-vehicle和野生型PC14细胞相比,PC14-ENO1细胞中ENO1 m RNA及蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05)。PC14-ENO1细胞增殖能力显著高于PC14-vehicle和PC14细胞,差异均有统计学意义(均P<0.05);PC14-ENO1细胞的相对迁移率明显高于pcDNA3.1-vehicle细胞的相对迁移率[(13.26±1.13)%vs(8.46±1.11)%、(7.86±1.00)%,均P<0.05],PC14-ENO1、PC14-vehicle和PC14细胞的凋亡率差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:ENO1过表达促进肺癌PC14细胞的增殖和迁移能力。

染料木黄酮通过ERK及JNK通路抑制人非小细胞肺癌PC14细胞增殖

目的观察染料木黄酮对人非小细胞肺癌PC14细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法 MTT法及集落形成实验检测细胞增殖;蛋白质免疫印迹检测蛋白表达水平。结果染料木黄酮能显著抑制PC14细胞的增殖,其抗增殖活性具有浓度和时间依赖性;MAPK家族特异性抑制剂PD98059、SB203580及SP600125均可显著抑制PC14细胞增殖;染料木黄酮可剂量依赖性地抑制ERK及JNK的磷酸化。结论染料木黄酮可抑制人非小细胞肺癌PC14细胞的增殖,其机制可能与其抑制ERK及JNK的活化有关。

参一胶囊抑制人非小细胞肺癌PC14细胞增殖的信号通路作用机制研究

目的:分析参一胶囊抑制人非小细胞肺癌PC14细胞增殖的信号通路作用机制。方法:采用浓度分别为0 mmol/L、4 mmol/L、8 mmol/L、16 mmol/L的参一胶囊对PC14细胞进行24 h、48 h和72 h的处理,采用流式细胞术和MTT法检测细胞的增殖和凋亡情况。采用5μmol/L的SP600125(JNK抑制剂)与SB203580(ERK抑制剂)对PC14细胞进行30 min处理,并加入不同浓度的参一胶囊继续培养24 h、48 h和72 h培养,观察细胞增殖情况,并检测参一胶囊对JNK和ERK活化的影响。结果:与0 mmol/L浓度组(对照组)比较,PC14细胞采用不同浓度的参一胶囊处理24 h、48 h和72 h后,4 mmol/L组、8 mmol/L组、16 mmol/L组的细胞活力均降低,且随着参一胶囊浓度的增大,细胞活力逐渐降低。浓度为16 mmol/L时,细胞活力最低(P<0.05)。与0 mmol/L浓度组比较,4 mmol/L组、8 mmol/L组、16 mmol/L组的细胞总凋亡率分别为(2.99±1.25)%、(15.37±4.95)%、(19.63±6.00)%,且随着参一胶囊浓度的增大,细胞凋亡率逐渐升高。浓度为16 mmol/L时,细胞凋亡率最高(P<0.05)。与0 mmol/L浓度组比较,处理48 h后,4 mmol/L组、8 mmol/L组、16 mmol/L组PC14细胞处于各期的比例无明显差异(P>0.05)。SP600125与SB203580均能有效抑制参一胶囊诱导的细胞凋亡,单纯加入参一胶囊与加入SP600125或SB203580的组别进行比较,细胞活力均较低(P<0.05)。PC14细胞经过不同浓度的参一胶囊处理后,p-p38MAPK蛋白的表达并未受到药物的影响,但随着药物浓度的增加p-JNK和p-ERK水平呈现降低趋势。结论:参一胶囊通过诱导JNK和ERK表达能够促进其磷酸化,且随着浓度的增大,可导致细胞活力明显降低,细胞凋亡率逐渐升高,p-JNK和p-ERK水平逐渐降低,对非小细胞肺癌PC14细胞增殖有明显的抑制作用。

阿司匹林通过诱导JNK表达促进其磷酸化抑制肺癌PC14细胞增殖

目的:观察阿司匹林对肺癌PC14细胞的作用及其可能机制。方法:用0,4,8,16 mmol·L^-1阿司匹林处理PC14细胞24,48,72 h,用MTT法和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡。为研究其与c-Jun氨基末端激酶(JNK)活化间的关系,先以5μmol·L^-1 SP600125(JNK抑制剂)预处理PC14细胞30 min,加入上述浓度药物继续培养24,48,72 h,检测细胞增殖情况;Western blot检测阿司匹林对JNK活化的影响。结果:MTT结果显示阿司匹林抑制肺癌PC14细胞增殖,同时阿司匹林可引起细胞G0~G1阻滞;阿司匹林通过活化JNK诱导其表达抑制PC14增殖。结论:阿司匹林可抑制PC14细胞增殖,其机制可能与其增强JNK活化及表达有关,这为阿司匹林在肺癌治疗中的进一步应用提供了理论依据。

MSP影响非小细胞肺癌PC14细胞周期和上皮间质转化的研究

目的研究巨噬细胞刺激蛋白(MSP)在无巨噬细胞刺激蛋白受体(RON)的情况下对非小细胞肺癌PC14细胞周期的影响,并分析其对PC14上皮间质转化(EMT)的影响。方法取MSP阴性、RON阴性的PC14细胞系,稳定表达MSP的细胞系PC14-Mst1-pEGFP-N1和稳定表达荧光蛋白的空载质粒细胞系PC14-pEGFPN1,流式细胞术检测各细胞系细胞周期的影响;透射电镜观察在细胞增殖期间细胞之间的连接间隙;逆转录(RT)-PCR和Western blot分别检测E-钙粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)mRNA、蛋白表达水平。结果流式细胞术结果显示与PC14、PC14-pEGFP-N1相比,PC14-Mst1-pEGFP-N1细胞G_1/G_0期数量增多,S期与G_2/M期减少;透射电镜发现PC14-Mst1-pEGFP-N1细胞之间的细胞连接较紧密,细胞之间空隙距离缩小;RT-PCR和Western blot检测结果显示,与PC14细胞相比,PC14-Mst1-pEGFP-N1细胞E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平升高,而Vimentin的mRNA、蛋白表达水平降低。结论 MSP在RON阳性的情况下,可使G_1期肺癌细胞增多、分裂相减少,抑制EMT。