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E2F1对TFDP3表达的调控及其对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响 被引量:1
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作者 李蕊 马越云 +4 位作者 辛艺娟 刁艳君 杨静 岳乔红 郝晓柯 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期125-129,共5页
目的:构建含TFDP3基因启动子和荧光素酶报告基因的重组载体pGL3-TFDP3-promoter,观察E2F1对TFDP3转录及表达的调控作用以及TFDP3对E2F1诱导肿瘤细胞凋亡的影响。方法:以人前列腺癌PC3细胞系基因组DNA为模板,PCR扩增TFDP3启动子序列并克... 目的:构建含TFDP3基因启动子和荧光素酶报告基因的重组载体pGL3-TFDP3-promoter,观察E2F1对TFDP3转录及表达的调控作用以及TFDP3对E2F1诱导肿瘤细胞凋亡的影响。方法:以人前列腺癌PC3细胞系基因组DNA为模板,PCR扩增TFDP3启动子序列并克隆入荧光素酶报告基因载体,与E2F1表达载体pCMV-E2F1-HA瞬时单独或共同转染PC3细胞,测定荧光素酶活性以观察E2F1对TFDP3启动子的调控作用,Western blotting检测pCMV-E2F1-HA转染对PC3细胞内TFDP3表达的影响,流式细胞术检测TFDP3与E2F1相互作用对前列腺癌细胞凋亡的影响。结果:成功构建TFDP3基因启动子重组质粒pGL3-TFDP3-promoter,与E2F1表达载体pCMV-E2F1-HA共转染PC3细胞后,TFDP3启动子诱导的荧光素酶活性较单独转染pGL3-TFDP3-promoter显著升高[(1.14±0.06)vs(0.61±0.05),P<0.05]。转染pCMV-E2F1-HA的PC3细胞的TFDP3蛋白表达是未转染细胞的2.7倍[(0.24±0.03)vs(0.09±0.02),P<0.05]。pCMV-E2F1-HA转染后PC3细胞凋亡率较未转染组显著上升[(7.10±0.003)%vs(2.66±0.001)%,P<0.05],而pCMV-E2F1-HA与pcDNA3.1-TFDP3共转染后细胞凋亡率较pCMV-E2F1-HA组显著下降[(4.92±0.002)%vs(7.10±0.003)%,P<0.05]。结论:E2F1可增强TFDP3启动子的活性,增加TFDP3蛋白的表达,其可能通过此机制抑制E2F1诱导的前列腺癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 E2F1 转录因子二聚化配体3 双荧光素酶报告基因 启动子 前列腺癌 pc3细胞
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通过CRISPR/Cas9技术抑制TFDP3基因对前列腺癌PC3细胞生物学功能的影响 被引量:2
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作者 李蕊 杨柳 +4 位作者 李金洁 刁艳君 苏明权 郝晓柯 刘家云 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期443-450,共8页
目的:通过CRISPR/Cas9技术构建前列腺癌PC3细胞TFDP3基因敲除的稳转株,探讨抑制TFDP3表达对PC3细胞周期、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。方法:通过生物信息学筛选sgRNA,通过CRISPR/Cas9技术、构建抑制TFDP3基因表达的sgRNA-Cas9共转染慢... 目的:通过CRISPR/Cas9技术构建前列腺癌PC3细胞TFDP3基因敲除的稳转株,探讨抑制TFDP3表达对PC3细胞周期、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。方法:通过生物信息学筛选sgRNA,通过CRISPR/Cas9技术、构建抑制TFDP3基因表达的sgRNA-Cas9共转染慢病毒,感染PC3细胞后筛选获取稳转细胞株。通过流式细胞术对TFDP3基因敲除的实验组与空白对照组进行细胞周期和凋亡检测,并进一步通过划痕实验和Transwell实验进行细胞迁移和侵袭能力检测。结果:通过生物信息学筛选获得3条sgRNA,其中sgRNA2有明显的抑制前列腺癌细胞基因表达的功能;通过CRISPR/Cas9技术成功构建了基于CRISPR/Cas9介导的TFDP3低表达的PC3细胞稳转株。抑制TFDP3基因表达后,相比于对照组,KO组中G0/G1期细胞百分比增加、G2/M期细胞百分比下降(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),细胞迁移率明显下降[24 h迁移率:(44.00±1.60)%vs(65.00±4.40)%,P<0.01],穿过聚碳酸酯膜的侵袭细胞数明显下降[(185.89±11.71)vs(248.33±11.95)个,P<0.01]。结论:通过CRISPR/Cas9技术抑制TFDP3基因表达后,PC3细胞发生周期阻滞、凋亡率也有所增加、迁移和侵袭能力显著减弱,提示TFDP3是一个前列腺癌促癌基因。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 TFDP3基因 前列腺癌 pc3细胞 细胞周期 凋亡 迁移 侵袭
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鸭ChREBP基因表达载体构建及其对原代肝细胞和PC3细胞脂质性状的影响
3
作者 谭光辉 覃媛钰 +5 位作者 王单单 李万贵 罗华伦 吴磊 李杰章 张依裕 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期937-944,共8页
【目的】探究鸭原代肝细胞脂质含量与碳水化合物反应元件结合蛋白基因(ChREBP)表达的关联性,为深入研究ChREBP基因对畜禽脂质代谢的遗传调控机制提供参考依据。【方法】采用Ⅳ型胶原酶消化法分离孵化21 d的鸭胚原代肝细胞,以DMEM高糖培... 【目的】探究鸭原代肝细胞脂质含量与碳水化合物反应元件结合蛋白基因(ChREBP)表达的关联性,为深入研究ChREBP基因对畜禽脂质代谢的遗传调控机制提供参考依据。【方法】采用Ⅳ型胶原酶消化法分离孵化21 d的鸭胚原代肝细胞,以DMEM高糖培养基进行培养。利用RT-PCR扩增鸭ChREBP基因编码区(CDS)序列,构建携带His标签的真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His,通过脂质体法分别转染鸭胚原代肝细胞和人前列腺癌细胞(PC3);采用His标签检测试剂盒检测ChREBP基因的表达量,以脂质指标测定试剂盒测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的含量,并分析鸭胚原代肝细胞和PC3细胞中ChREBP基因表达与脂质指标含量的相关性。【结果】以构建的真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His转染鸭原代肝细胞和PC3细胞均能发出绿色荧光,表明携带His标签的ChREBP基因能在鸭原代肝细胞和PC3细胞中表达。ChREBP基因表达量与鸭原代肝细胞和PC3细胞中的TG、TC和HDL含量均呈极显著正相关(P<0.01,下同),与LDL含量呈极显著负相关。【结论】以构建的真核表达载体pEGFP-N3-ChREBP-His转染鸭原代肝细胞和PC3细胞后均能发出绿色荧光,说明ChREBP基因表达对鸭原代肝细胞和PC3细胞中的脂质代谢作用机理相似,可促进细胞脂质累积。 展开更多
关键词 ChREBP基因 鸭原代肝细胞 pc3细胞 脂质代谢
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黄颡鱼源铜绿假单胞菌PA-5的分离及其对寄主抗菌肽基因的影响 被引量:3
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作者 阎华 王会 +5 位作者 汤尚文 于博 黄升谋 李云捷 吴进菊 李玉奇 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第6期1351-1358,共8页
【目的】本文分离和鉴定了湖北省汉川市同旺养殖场患病黄颡鱼的病原菌种类并分析其影响寄主抗菌肽基因表达的特点,能够为该病症预防和治疗提供研究基础。【方法】以患病黄颡鱼肝脏作为样本,使用划线培养的技术,分离得到病原菌PA-5。对... 【目的】本文分离和鉴定了湖北省汉川市同旺养殖场患病黄颡鱼的病原菌种类并分析其影响寄主抗菌肽基因表达的特点,能够为该病症预防和治疗提供研究基础。【方法】以患病黄颡鱼肝脏作为样本,使用划线培养的技术,分离得到病原菌PA-5。对病原菌进行革兰氏染色和显微镜观察,其形态为长棒状,革兰氏染色为阴性。再进行VITEK-32全自动微生物分析鉴定仪操作,该病原菌对D-葡糖酸、丙二酸和葡萄糖等反应灵敏,对黏菌素、七叶苷和阿拉伯糖等反应迟钝。采用多重PCR技术对该菌16SrRNA和gyrB基因序列分析后发现。【结果】该菌与铜绿假单胞菌的特征序列相似,亲缘关系较为接近,综合后鉴定该病原菌为铜绿假单胞菌。同时以该病原菌为样本,分析其感染黄颡鱼后,对寄主抗菌肽基因PC1/PC2/PC3的表达影响。在黄颡鱼的腹腔中注射3.0×10^(6 )cfu/mL铜绿假单胞菌PA-5,侵染完成后0~96 h分别解剖获取黄颡鱼的肝脏,肾脏以及表皮组织。然后利用Trizol试剂盒操作获取黄颡鱼总RNA,反转录合成cDNA后应用实时荧光定量PCR技术分析黄颡鱼抗菌肽基因PC1/PC2/PC3基因表达变化特点。铜绿假单胞菌PA-5侵染黄颡鱼后,寄主肝脏组织中的抗菌肽基因PC1/PC2/PC3相对表达量24,36 h较高,与对照组比较显著(P<0.05);寄主肾脏组织中的抗菌肽基因PC1/PC2/PC3相对表达量24,36 h较高,与对照组比较显著(P<0.05);寄主表皮组织中的抗菌肽基因PC1/PC2/PC3相对表达量36,48 h较高,与对照组比较显著(P<0.05)。寄主肝脏组织,肾脏组织,表皮组织抗菌肽基因的表达均快速增加,但是肝脏组织和肾脏组织反应时间早于表皮组织。【结论】因此铜绿假单胞菌PA-5是湖北省汉川市同旺养殖场黄颡鱼的主要病原体,其感染黄颡鱼后,寄主抗菌肽基因PC1/PC2/PC3会积极响应,这些基因的大量表达有助于鱼体天然免疫应答,有助于抵抗病原微生物的感染。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 黄颡鱼 PC1基因 PC2基因 pc3基因
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前列腺特异的转录因子NKX3.1上调Dicer1基因的表达 被引量:1
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作者 张菊 关恒云 +7 位作者 张鹏举 陈蔚文 陈兆波 倪娜娜 朱闻捷 王坤 胡小燕 姜安丽 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1764-1768,共5页
目的:研究前列腺特异转录因子NKX3.1对Dicer1基因表达的影响。方法:转染pcDNA3.1-NKX3.1至前列腺癌PC3细胞,通过G418筛选,有限稀释法克隆培养获得NKX3.1稳定转染的PC3细胞-PC3(+);采用基因芯片检测NKX3.1对前列腺癌PC3细胞基因组表达谱... 目的:研究前列腺特异转录因子NKX3.1对Dicer1基因表达的影响。方法:转染pcDNA3.1-NKX3.1至前列腺癌PC3细胞,通过G418筛选,有限稀释法克隆培养获得NKX3.1稳定转染的PC3细胞-PC3(+);采用基因芯片检测NKX3.1对前列腺癌PC3细胞基因组表达谱的影响。进一步应用RT-PCR、Western blot-ting进行验证。为进一步检测Dicer1表达增高、促进microRNA的成熟作用,构建了microRNA let-7a-1靶序列-报道基因融合质粒,转染PC3细胞和PC3(+)细胞,通过报道基因检测成熟microRNA let-7a-1对其靶序列的作用。结果:基因组芯片显示,NKX3.1稳定表达的PC3(+)细胞中,Dicer1表达明显高于PC3细胞。RT-PCR、Western blotting结果验证PC3(+)细胞中Dicer1mRNA和蛋白质的表达水平均高于PC3细胞。microRNA let-7a-1靶序列-报道基因融合质粒,转染PC3细胞和PC3(+)细胞后,报告基因检测,PC3(+)细胞中荧光素酶活性明显低于PC3细胞。结论:NKX3.1可上调前列腺癌PC3细胞中Dicer1的表达,促进microRNA的成熟及作用。 展开更多
关键词 同源盒基因NKX3.1 pc3细胞 基因 Dicer1
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人PSMP重组蛋白在CHO细胞中表达、纯化及功能鉴定 被引量:2
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作者 马靖 裴晓磊 +1 位作者 张扬 王应 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期669-675,共7页
目的:构建新的具有趋化作用的人类细胞因子PSMP的真核表达载体,在仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)中表达并纯化,为PSMP的功能机制研究奠定基础。方法:从pcDNA3.1-PSMP-myc/His中切下PSMPmyc/His片段,插入pMH3表达载体。利用电... 目的:构建新的具有趋化作用的人类细胞因子PSMP的真核表达载体,在仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)中表达并纯化,为PSMP的功能机制研究奠定基础。方法:从pcDNA3.1-PSMP-myc/His中切下PSMPmyc/His片段,插入pMH3表达载体。利用电穿孔法将该表达载体转染CHO细胞,G418抗性筛选稳定克隆株。以Dot blot及Western blot法检测上清液中PSMP蛋白的表达,利用有限稀释法对抗性筛选出的混合克隆单克隆化,悬浮无血清大批培养工程细胞,通过镍亲和层析法纯化蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度,Boyden小室体外趋化实验分析蛋白功能活性。结果:PSMP-myc/His基因插入pMH3载体后成功构建真核表达载体pMH3-PSMP,转染CHO细胞后经2次克隆化获得稳定表达PSMP的基因工程细胞株。镍亲和层析纯化的重组蛋白PSMP纯度达95%以上且具有生物学活性。结论:成功构建了PSMP蛋白的真核表达载体,并获得其稳定表达的CHO细胞株,获得了较高纯度的、具有生物学活性的重组蛋白,为下一步PSMP功能和机制研究提供有用工具。 展开更多
关键词 pc3-分泌微量蛋白 CHO细胞 遗传 重组 基因表达 分离和提纯
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鸭CD36基因表达对前列腺癌PC3细胞增殖的影响 被引量:1
7
作者 杨英仓 李万贵 +1 位作者 王单单 张依裕 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1950-1954,共5页
为了探讨鸭CD36基因表达对前列腺癌PC3细胞增殖的效应,通过克隆鸭CD36基因CDS区,构建真核表达载体pEGFP-N3+CD36+His,空载体pEGFP—N3为对照,转染培养的前列腺癌PC3细胞。结果表明:前列腺癌PC3细胞均被pEGFP-N3+CD36+His和pEGF... 为了探讨鸭CD36基因表达对前列腺癌PC3细胞增殖的效应,通过克隆鸭CD36基因CDS区,构建真核表达载体pEGFP-N3+CD36+His,空载体pEGFP—N3为对照,转染培养的前列腺癌PC3细胞。结果表明:前列腺癌PC3细胞均被pEGFP-N3+CD36+His和pEGFP—N3成功转染,转染效率均较高;通过检测转染48h的CD36+His-tag融合蛋白表达量和细胞数量,CD36+His—tag融合蛋白表达量为98.81pg/mL,pEGFP-N3+CD36+His组细胞数为0.72×106^个,pEGFP-N3组细胞数为0.61×106^个,pEGFP-N3+CD36+His组细胞数显著高于pEGFP-N3组。研究结果揭示,鸭CD36基因的表达对前列腺癌PC3细胞增殖和生长可能有促进作用。 展开更多
关键词 CD36基因 前列腺癌pc3细胞 转染 增殖
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前列腺癌PC3细胞表达鸭SREBP1基因的分析 被引量:1
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作者 杨英仓 李万贵 +1 位作者 王单单 张依裕 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1702-1706,共5页
为了探讨鸭SREBP1基因对前列腺癌PC3细胞增殖的影响,通过构建携带His标签鸭SREBP1基因第310位至403位氨基酸序列的真核表达载体p EGFP-N3+SREBP1+His,转染前列腺癌PC3细胞,空载体p EGFP-N3为对照,结果表明:p EGFP-N3+SREBP1+His和空载... 为了探讨鸭SREBP1基因对前列腺癌PC3细胞增殖的影响,通过构建携带His标签鸭SREBP1基因第310位至403位氨基酸序列的真核表达载体p EGFP-N3+SREBP1+His,转染前列腺癌PC3细胞,空载体p EGFP-N3为对照,结果表明:p EGFP-N3+SREBP1+His和空载体均成功转染前列腺癌PC3细胞,p EGFP-N3+SREBP1+His转染效率高于空载体,通过检测转染48 h的细胞数量和SREBP1表达量,p EGFP-N3+SREBP1+His组细胞数为0.82×10~6个,SREBP1基因表达量为124.128 pg/m L;空载体组细胞数为0.74×10~6个,没有检测到His标签表达量。研究结果揭示,鸭SREBP1基因第310位至403位氨基酸序列对前列腺癌PC3细胞的增殖有促进作用。 展开更多
关键词 前列腺癌pc3细胞 SREBP1基因 细胞转染 细胞增殖
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二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌过程中PC3/BTG2基因表达的变化 被引量:1
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作者 张志敏 王阁 +8 位作者 杨志祥 单锦露 陈川 金丰 许文 李琼 雒喜忠 王东 李增鹏 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期107-111,共5页
目的探讨PC3/BTG2在肝细胞癌形成过程中的变化趋势及作用。方法建立改进的二乙基亚硝胺(DEN)诱发的大鼠肝癌模型。免疫组织化学法检测PC3/BTG2蛋白的表达情况,用RT—PCR和Western blot检测诱癌不同时期PC3/BTG2、p53、细胞周期素D... 目的探讨PC3/BTG2在肝细胞癌形成过程中的变化趋势及作用。方法建立改进的二乙基亚硝胺(DEN)诱发的大鼠肝癌模型。免疫组织化学法检测PC3/BTG2蛋白的表达情况,用RT—PCR和Western blot检测诱癌不同时期PC3/BTG2、p53、细胞周期素D1的mRNA和蛋白表达情况。统计学处理采用单因素方差分析。结果PC3/BTG2蛋白在大鼠肝细胞中主要表达于细胞核,亦可见于部分细胞质,随着DEN诱癌过程的发展,PC3/BTG2的表达有由细胞核向细胞质易位的趋势。在DEN诱发的大鼠肝癌模型中,PC3/BTG2 mRNA早期表达增高,5周达高峰(0.653±0.023),晚期降低(16周为0.312±0.021);p53 mRNA早期增高(5周为0.493±0.027),晚期降低(16周为0.187±0.026);细胞周期素D1 mRNA早期未检测到,晚期增高并达高峰(16周为0.582±0.029)。PC3/BTG2蛋白在诱癌早期表达增高,诱癌5周时达高峰(0.630±0.032),成癌后降低(16周为0.113±0.019);p53蛋白在诱癌早期及中期(5~12周)持续增高(12周为1.186±0.049),到成癌后降低(16周为0.622±0.035);细胞周期素D1在整个诱癌过程中表达都高于正常对照大鼠,在肝癌形成时增高并达高峰(16周为0.912±0.038)。结论PC3/BTG2表达降低可能与HCC进展有密切联系;在肝癌形成过程中,PC3/BTG2与p53的表达可能存在正调控作用,而与细胞周期素D1可能存在负调控作用。 展开更多
关键词 肝细胞 基因 p53 肿瘤抑制蛋白质P53 pc3/BTG2
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Rapid induction of mRNAs for PC3 by partial hepatec-tomy and epidermal growth factor 被引量:3
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作者 WANG Ge WANG Siying +1 位作者 XU Wangxiang YANG Xiaoming 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2001年第7期571-574,共4页
The expression of immediate early gene plays a pivotal role in rat hepatocyte proliferation from G0 to G1 phases and the progression through G1 phase of the cell cycle within several hours after 2/3 hepatectomy. We in... The expression of immediate early gene plays a pivotal role in rat hepatocyte proliferation from G0 to G1 phases and the progression through G1 phase of the cell cycle within several hours after 2/3 hepatectomy. We investigated the different gene expressions within 1 h after 2/3 hepatectomy by representational difference analysis. Sequence analysis indicated that PC3 induced by NGF was a kind of immediate early gene and might be correlated with liver regeneration. Moreover, we found that 2/3 hepatectomy could induce the expressing of PC3 mRN A by Northern blot with a peak 1-2 h after surgery. In primary cultures of rat hepatocytes, addition of EGF resulted in rapid and transient induction of PC3 mRNA. It was first reported that PC3 gene belongs to immediate early gene associated with liver regeneration. 展开更多
关键词 liver REgeneRATION IMMEDIATE early gene pc3 gene.
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鸭CD36基因表达载体构建及其对原代肝细胞和PC3细胞脂质性状的影响 被引量:1
11
作者 覃媛钰 罗华伦 +1 位作者 吴磊 张依裕 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期2075-2081,共7页
脂肪酸转位酶(CD36)具有广泛的生物学功能,能够促进长链脂肪酸转入脂肪细胞、心肌细胞和骨骼肌细胞,对细胞脂质代谢有重要调控作用。为探究CD36对鸭原代肝细胞和PC3细胞脂质效应,本试验采用Ⅳ型胶原酶消化法成功分离孵化了21日龄鸭胚原... 脂肪酸转位酶(CD36)具有广泛的生物学功能,能够促进长链脂肪酸转入脂肪细胞、心肌细胞和骨骼肌细胞,对细胞脂质代谢有重要调控作用。为探究CD36对鸭原代肝细胞和PC3细胞脂质效应,本试验采用Ⅳ型胶原酶消化法成功分离孵化了21日龄鸭胚原代肝细胞并进行培养,RT-PCR法获取鸭CD36基因序列,构建了携带HIS标签的pEGFP-N3-CD36真核表达载体pEGFP-N3-CD36-His,脂质体法转染至鸭胚原代肝细胞和PC3细胞,His标签检测试剂盒测定CD36在2种细胞中的过表达量,探讨鸭CD36基因过表达与原代肝细胞和PC3细胞中脂质性状的关联性。结果显示,pEGFP-N3-CD36-His重组质粒在鸭原代肝细胞和PC3细胞中均能发出绿色荧光,说明构建的载体转染成功;CD36过表达对2种细胞中脂质指标的影响相似,均与细胞中的甘油三酯(TG)呈极显著正相关(P<0.01),与总胆固醇(TCH)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)呈极显著负相关(P<0.01);揭示CD36基因过表达可能引起2种细胞中脂质代谢活动的不平衡而引起脂质代谢相关疾病的发生,为进一步研究CD36基因对细胞脂质代谢的调控奠定了基础。 展开更多
关键词 CD36基因 原代肝细胞 pc3细胞 脂质性状
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人β-catenin启动子的克隆及活性分析 被引量:1
12
作者 张菊 关恒云 +5 位作者 张鹏举 陈蔚文 刘帅 尚进 唐传刚 姜安丽 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2009年第11期21-24,共4页
目的克隆β-catenin基因5′上游1.8 kb启动子,构建启动子-荧光素酶报告基因载体pGL3-1.8 kb,测定其启动子活性,为进一步研究β-catenin基因表达调控机制奠定基础。方法采用PCR方法从人基因组DNA中扩增β-catenin基因5′上游1.8 kb片段... 目的克隆β-catenin基因5′上游1.8 kb启动子,构建启动子-荧光素酶报告基因载体pGL3-1.8 kb,测定其启动子活性,为进一步研究β-catenin基因表达调控机制奠定基础。方法采用PCR方法从人基因组DNA中扩增β-catenin基因5′上游1.8 kb片段并构建到荧光素酶报道基因pGL3-basic载体中,与内参照质粒pRL-Tk共转染前列腺癌PC3细胞,通过双荧光素酶活性检验测定其启动子活性。结果PCR扩增的1.8 kb片段经测序正确无误;pGL3-1.8 kb转染PC3细胞48 h后,双荧光素酶活性测定启动子活性(M1/M2)为11.71,是pGL3-control活性的2.43倍,为pGL3-basic活性的206.31倍,为pGL3-promoter活性的21.38倍。结论克隆的β-catenin基因5′上游1.8 kb片段具有较强的启动子活性。 展开更多
关键词 Β-CATENIN 克隆 启动子 pc3细胞
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