獐牙菜苦苷通过调控miR-351-5p表达对6-羟基多巴胺诱导PC12细胞帕金森模型损伤的影响

目的探讨獐牙菜苦苷对6-羟基多巴(6-OHDA)诱导PC12细胞损伤的影响及其分子机制。方法以100μmol/L 6-OHDA处理PC12细胞建立帕金森病细胞模型,将PC12细胞分为对照组、6-OHDA组、獐牙菜苦苷低、中、高剂量组(30、60、120μmol/L)、anti-miR-NC组、anti-miR-351-5p组、獐牙菜苦苷(120μmol/L)+miR-NC组、獐牙菜苦苷(120μmol/L)+miR-351-5p组。MTT法检测细胞存活率,采用试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白表达,RT-qPCR法检测miR-351-5p表达。结果与对照组比较,6-OHDA组PC12细胞存活率、SOD活性、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),LDH活性、MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达升高(P<0.05),miR-351-5p表达升高(P<0.05);与6-OHDA组比较,獐牙菜苦苷处理或干扰miR-351-5p表达可升高PC12细胞存活率、SOD活性、Bcl-2蛋白表达(P<0.05),降低LDH活性、MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达(P<0.05);獐牙菜苦苷处理可下调6-OHDA诱导的miR-351-5p表达(P<0.05),且上调miR-351-5p表达逆转了獐牙菜苦苷对6-OHDA诱导PC12细胞损伤的作用(P<0.05)。结论獐牙菜苦苷可通过下调miR-351-5p表达抑制6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡和氧化应激。

地磁脉动Pc5在2000年7月15～16日磁暴期间的特征

采用IMAGE链 2 2个台站的地磁脉动 10s数据 ,分析了 2 0 0 0年 6月 15～ 16日磁暴期间Pc5地磁脉动的频率、振幅、位相和极化特征 :( 1)磁暴初相和主相期间Pc5脉动的主频率随纬度的升高而降低 ,但是恢复相期间主频率随纬度的升高而升高 ,主相期间Pc5的主频率比初相和恢复相期间的低 ;( 2 )Pc5脉动初相期间的振幅有一个主峰在 6 4°N附近 ,主相期间在 6 6°N附近 ,恢复相期间在 71°N附近 ;位相在主峰两侧随着纬度变化了大约 180° ,从初相到恢复相主峰位置向高纬地区大约移动了 7° ;( 3)Pc5地磁脉动的偏振极化椭圆初相期间在PEL站 ( 6 3 46°N)接近线偏振 ,主相期间在MAS站 ( 6 6 0 7°N)接近线偏振 ,恢复相期间在BJN站 ( 71 33°N)接近线偏振 ,并分别在这几个台站两侧的偏振椭圆的旋转方向反向 .

咖啡酸对氧化应激诱导的PC12细胞5-脂氧酶激活的抑制作用

目的探讨咖啡酸是否通过抑制氧化应激诱导的5-脂氧酶（5-LOX）激活而减轻细胞损伤。方法稳定转染绿荧光蛋白（GFP）-5-LOX的PC12细胞,预先给予咖啡酸0.001~10μmol.L-1和对照药MK886,30min后观察缺氧缺糖/恢复（OGD/R）及过氧化氢（H2O2）160μmol.L-1处理后的变化。MTT法和碘化丙啶染色法分析细胞存活率和死亡率;荧光显微镜观察OGD 2 h/R2 h和H2O2处理40 min时5-LOX的核膜移位;ELISA法测定OGD 2 h/R 3 h时5-LOX代谢产物的生成;DCF法检测OGD 2 h/R 0.5 h细胞内活性氧（ROS）的产生。结果 OGD 2 h/R 24 h GFP-5-LOX转染和GFP-转染PC12细胞的存活率分别为（63.1±6.6）%和（70.7±6.9）%;H2O2处理24 h细胞存活率分别为（62.5±7.7）%和（75.7±9.5）%。在GFP-5-LOX转染的PC12细胞中,咖啡酸和对照药MK886可使OGD/R细胞存活率从（63.1±6.6）%分别增加到（87.3±2.0）%和（89.9±6.3）%,细胞坏死率从（31.4±1.5）%降低到（10.1±2.0）%和（11.7±1.3）%（P〈0.01）;使H2O2处理细胞存活率从（62.51±7.65）%增加到（92.59±4.02）%和（75.31±6.60）%;使OGD/R细胞CysLTs的生成从261.1±33.7降低到108.5±16.7和（90.6±19.5）ng.g-1蛋白（P〈0.01）。此外,咖啡酸抑制OGD/R诱导PC12细胞的ROS产生,IC50值为8.021μmol.L-1;抑制OGD/R诱导的GFP-5-LOX转染的PC12细胞5-LOX核膜移位,IC50值为0.974μmol.L-1;抑制H2O2诱导的GFP-5-LOX转染的PC12细胞5-LOX核膜移位,IC50值为0.501μmol.L-1;MK886无上述作用。结论咖啡酸可抑制氧化应激诱导的PC12细胞5-LOX激活,对缺血损伤的PC12细胞具有保护作用。

藁本内酯通过下调miR-292-5p表达改善氧糖剥夺对PC12细胞的促凋亡和炎症因子表达效应

目的探讨藁本内酯对氧糖剥夺(OGD)诱导的PC12神经细胞炎症因子表达的影响及分子机制。方法将PC12细胞缺糖缺氧处理6 h、12 h、24 h,用MTT法检测细胞存活率;将缺糖缺氧处理24 h的PC12细胞作为模型组,不处理的细胞作为对照组;用0.1、1、10μmol/L藁本内酯处理再进行缺糖缺氧,记为低、中、高剂量藁本内酯组;将miR-NC、miR-292-5p转染至PC12细胞后用1μmol/L藁本内酯处理,再进行氧糖剥夺,记为中剂量藁本内酯+miR-NC组、中剂量藁本内酯+miR-292-5p组。MTT检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-6、IL-1β和TNF-α水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-292-5p表达水平。结果氧糖剥夺处理后PC12细胞存活率显著降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平升高,IL-6、IL-1β和TNF-α水平升高,miR-292-5p表达水平升高(P<0.05)。不同剂量藁本内酯处理后,OGD诱导的PC12细胞中细胞凋亡率降低,Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低,IL-6、IL-1β和TNF-α水平降低,miR-292-5p表达水平降低(P<0.05)。上调miR-292-5p表达逆转了藁本内酯对OGD处理PC12细胞凋亡和炎症因子表达的影响。结论藁本内酯通过下调miR-292-5p表达可缓解氧糖剥夺(OGD)对PC12神经细胞的炎症因子表达。

转染miR-17-5p对PC12细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和形态学影响

目的:观察基因miR-17-5p转染对PC12细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和形态学影响。方法:用质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFP-N1-miR-17-5p表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、空载组、miR-17-5p组。应用免疫细胞化学染色法和Western-blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,电镜观察各组细胞超微结构改变。结果:对照组与空载组Bcl-2、Bax蛋白表达无显著性差异,miR-17-5p组与空载组比较,Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.01),而Bax蛋白表达明显增多(P<0.01),Western blot检测其凋亡相关蛋白表达变化与免疫组化结果一致。电镜下观察可见正常对照组与空载组细胞形态无明显差异,细胞形态结构正常,无明显病理改变;miR-17-5p转染组细胞胞体肿胀,线粒体髓样变和空泡样变,胞核扭曲凹陷,异染色质边集。结论:miR-17-5p基因过表达能引起PC12细胞促凋亡的Bax蛋白表达增多,抗凋亡的Bcl-2蛋白表达减少,导致PC12细胞形态学损伤。

Cdk5及p35在NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡中的作用研究

目的:探讨Cdk5及p35在神经生长因子(NGF)撤退诱导的PC12细胞凋亡中的作用机制。方法:建立NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡模型,Western blotting检测Cdk5及p35在凋亡过程中表达变化情况,利用Cdk5特异性抑制剂Roscovitine预处理已分化PC12细胞,检测其对NGF撤退诱导的凋亡作用影响,向已分化PC12细胞转染真核表达质粒pCMV-p35-IRES-Cdk5,检测过表达Cdk5/p35对PC12细胞凋亡的影响。结果:NGF撤退36h会引起已分化PC12细胞出现典型的DNA Ladder凋亡特征,MTT检测结果也显示,NGF撤退对PC12细胞的损伤呈时间依赖性;Roscovitine预处理已分化PC12细胞可以抑制NGF撤退诱导的细胞凋亡率,但不影响Cdk5/p35蛋白表达水平;向已分化PC12细胞中转染真核表达质粒后,能检测到Cdk5/p35蛋白的过表达,并引起PC12细胞出现凋亡样改变。结论:Cdk5及p35的活化与NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡过程密切相关,抑制Cdk5的活化有抑制细胞凋亡保护神经元的作用。

稳定表达miR-17-5p的PC12细胞株构建及鉴定

目的:构建稳定表达miR-17-5p的PC12细胞株。方法:将质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFPN1-miR-17-5p表达载体扩增、抽提,利用脂质体转染技术将质粒转染PC12细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白GFP表达,Real-time PCR检测转染PC12细胞miR-17-5p的表达。结果:荧光显微镜观察到空载组和miR-17-5p组细胞都有绿色荧光蛋白高表达,Real-time PCR检测稳定转染miR 17-5p后PC12细胞内miR-17-5p的表达较空载组明显升高(P<0.01)。结论:miR-17-5p在PC12细胞稳定表达,为进一步研究miR-17-5p对神经细胞的调制作用提供有用的细胞模型。

1,5-二咖啡酰奎宁酸对MPP^+所致PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨1,5-二咖啡酰奎宁酸(1,5-dicaffeoylquinic acid,1,5-diCQA)对多巴胺能神经元的保护作用及其可能的机制。方法采用1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导具有多巴胺能神经元特性的PC12细胞作为帕金森病的体外模型,实验分为正常对照组、MPP+组和1,5-diCQA预处理组,根据1,5-diCQA预处理的浓度,将后者又分为10、20、50、100μmol/L 4组。用MTT法测定各组细胞存活率,酶标仪检测细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平,RT-PCR法检测细胞突触核蛋白(α-synuclein)的mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞α-synuclein蛋白表达水平。结果 MPP+(250μmol/L)处理PC12细胞24 h后,与正常对照组相比,细胞存活率下降,ROS生成增多,GSH耗竭;不同浓度的1,5-diCQA预处理可以减轻MPP+导致的细胞损伤,且在一定范围内具有量-效关系;50μmol/L的1,5-diCQA预处理可以显著抑制MPP+诱导的α-synuclein转录和翻译水平的增加。结论 1,5-diCQA对MPP+诱导的PC12细胞氧化应激损伤具有浓度依赖性的抑制作用,并抑制α-synuclein的过表达,提示1,5-diCQA对帕金森病细胞模型具有保护作用。

lncRNA LINC00308作为ceRNA通过调控miR-361-5p/TRIP13轴促进前列腺癌PC3细胞的增殖和侵袭

目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LINC00308对前列腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移的影响及其相关作用机制。方法:利用基因芯片在前列腺癌组织与癌旁对照组织中筛选差异表达的lncRNA及mRNA,并确定LINC00308及甲状腺激素受体因子13(thyroid hormone receptor interactor13,TRIP13)为研究对象。MTT实验、平板克隆及Transwell和划痕实验检测LINC00308对前列腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,应用裸鼠移植瘤在体内验证上述影响,应用Western blotting及免疫组化实验在瘤组织和癌细胞中探究LINC00308对TRIP13表达的影响。生物信息学分析技术与RNA免疫共沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)及qPCR和双荧光素酶基因报告实验预测并探究miR-361-5p与LINC00308及TRIP13之间的相互作用机制,并利用平板克隆、Transwell侵袭实验对癌细胞恶性生物行为进行验证。结果:芯片结果及qPCR共同证实LINC00308(P<0.01)与TRIP13(P<0.05)在前列腺癌组织及4种细胞系中均异常高表达;细胞功能实验结果表明过表达LINC00308可以促进前列腺癌细胞PC3的增殖、侵袭及迁移能力(均P<0.05),而下调前列腺癌细胞中LINC00308表达起相反作用。裸鼠移植瘤实验证实,LINC00308能够在体内促进前列腺癌PC3细胞的成瘤(P<0.05或P<0.01),且能够在体内体外促进TRIP13表达(P<0.05)。生物信息学分析与RIP及qPCR和双荧光素酶基因报告实验结果证实miR-361-5p能够分别与LINC00308与TRIP13的3'-UTR靶向结合,且LINC00308能够通过吸附miR-361-5p而作为内源性竞争RNA(competing endoge-nous RNA,ceRNA)调控TRIP13的表达,MTT、平板克隆及Transwell实验检测癌细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力变化证实了三者之间的调控作用。结论:在前列腺癌组织和细胞中异常高表达的LINC00308通过发挥ceRNA的功能抑制miR-361-5p表达而增强TRIP13表达,从而促进前列腺癌的增殖、侵袭及迁移能力。

转染基因miR-17-5p对PC12细胞增殖和功能的影响

目的:观察基因miR-17-5p转染对体外培养PC12细胞增殖和功能的影响。方法:用质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFP-N1-miR-17-5p表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、空载组、miR-17-5p组。倒置显微镜观察PC12细胞形态学改变,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期分布,荧光分析法测定儿茶酚胺类(CA)递质的分泌量。结果:显微镜下,空载组细胞形态边缘清晰,细胞贴壁能力强,细胞密度高。miR-17-5p组可见部分细胞有损伤的表现,细胞肿胀圆缩,粘附能力下降,部分细胞裂解成碎片,漂浮于培养基中,细胞密度低。与对照组比较,空载组PC12细胞增殖率、细胞周期分布和CA递质含量无明显变化(P>0.05);与空载组比较,miR-17-5p组细胞增殖率明显降低(P<0.05);细胞处于G1期的百分比明显高于空载组(P<0.01),而处于S期、G2的细胞百分比低于空载组(P<0.05);CA分泌量明显降低(P<0.01)。结论:miR-17-5p基因的过表达对PC12细胞的结构和功能有损伤作用,抑制PC12细胞分裂增殖能力和CA分泌功能。

5-脂氧酶/绿荧光蛋白转染评价PC12细胞损伤后5-脂氧酶核膜移位

目的:通过绿荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)/5-脂氧酶(5-lipoxygenase,5-LOX)稳定转染PC12细胞,以可视化方法观察5-LOX在不同损伤后的变化。方法:将带有5-LOX基因的pEGFP-C2质粒及pEGFP-C2质粒(对照),稳定转染至PC12细胞;在缺糖缺氧(oxygen-glucose deprivation,OGD)、H2O2和NMDA处理后,荧光显微镜下观察GFP/5-LOX在细胞内的定位;同时,以免疫细胞化学方法观察野生型5-LOX分布及其变化。结果:转染GFP/5-LOX的细胞内,GFP/5-LOX主要均匀表达于细胞核内;仅转染GFP的细胞GFP表达于胞核和胞浆。OGD和H2O2处理后,分别有50.6%和57.7%细胞的GFP/5-LOX移位到核膜;NMDA处理或仅转染GFP的细胞,未见核膜移位现象。野生型5-LOX分布在细胞核和细胞浆内,3种损伤处理均诱导核膜移位。结论:稳定转染GFP/5-LOX的PC12细胞,GFP/5-LOX主要分布在细胞核;不同损伤处理诱导的5-LOX核膜移位,有不同的特点。

在PC机上安装MM5的方法和运行要点

本文对如何获取MM5模式的各程序模块和相应的做图软件，如何在PC机上安装以及运行该模式的要点作一介绍，以方便有兴趣的气象工作者更快的了解和运行该模式。详细介绍可参看文献1。

基于S5PC100实现OPC Server功能的嵌入式系统的硬件设计

本文针对在自动化监控系统中,由于工业控制计算机价格昂贵、体积大、笨重、移动不方便等原因,将嵌入式系统引进工业监控领域,通过以太网实现其功能。基于Samsung公司的S5PC100作为核心处理器,设计出具有OPC Server功能的专用计算机。

经PCS区域动脉灌注健择和5-氟尿嘧啶治疗中晚期胰腺癌的疗效观察

目的 评价经PCS区域动脉灌注健择和 5 氟尿嘧啶治疗中晚期胰腺癌的疗效和安全性。方法 36例中晚期胰腺癌患者分为 2组 ,16例行经PCS区域动脉灌注化疗 (B组 ) ,另 2 0例行外周静脉全身化疗 (A组 )。结果 B组临床受益反应有效率为 75 .0 % (12 / 16 ) ,A组为 4 5 .0 % (9/ 2 0 ) (P <0 .0 5 ) ,A组和B组 6个月、1年生存率和中位生存期分别为 35 .0 %、15 .0 %、6 .8个月和 6 8.7%、37.5 %、11.4个月 ,P<0 .0 5。结论 经PCS区域动脉灌注化疗较外周静脉化疗能提高中晚期胰腺癌的临床受益反应、改善生活质量 ,提高远期生存率。

Pc5频段上电离层离子加热估值

本文利用欧洲非相干散射雷达（ＥＩＳＣＡＴ）的观测数据和地面同步测量的地磁脉动Ｐｃ５活动，采用维纳滤波器方法对电离层离子速度和离子温度的波动与Ｐｃ５活动的相关进行分析和估值。四天的实验结果表明，在Ｐｃ５频段（０．８～８ＭＨｚ），离子速度、离子温度与磁脉动Ｈ分量有着良好的相关。利用电离层Ｆ层离子加热的简化公式，当二者相关良好时，实验离子加热估值与理论值符合较好，并且给出了在何种漂移速度阀值下，离子将产生加热效应。

PCS-5型立式破碎机过热轴承原因分析及对策

简要介绍PCS-5型立式粉碎机的结构、工作原理,根据用户反馈信息,发现导致主轴轴承发热失效的两个主要原因:电机转子同主轴不同心、转盘质量偏小。运用转子不平衡理论,着重分析联轴套零件对电机转子同主轴同心度的影响;根据冲击载荷与电机负载电流对应关系,通过试验确定转盘尺寸大小。通过改进措施,大幅度减小轴承过热产生的故障率。

PC5级多用途集装箱船线型设计

以某型具有一定破冰能力的PC5级多用途集装箱船为对象,分析其冰级、船型、破冰能力需求,研究其线型设计。对线型首部形式、首柱角度对PC5级多用途船航行性能影响进行分析。总结了具有一定破冰能力的冰区运输船的线型设计方向,可为后续此类船舶的线型设计提供参考。

5-HT_(1A)受体蛋白在PC12细胞膜转运的动态变化

目的在神经元样PC12活细胞上进行实时、可视和定量研究5-羟色胺1A受体的时空分布、膜转运和信号传导机制。方法运用RT-PCR方法获得小鼠5-HT1A基因,并插入到pEGFP-N1真核表达载体中。采用阳离子脂质体方法将质粒转染至PC12细胞和HEK293细胞中,通过G418筛选出稳定表达5-HT1A-EGFP的PC12细胞系。运用激光共聚焦成像系统观察活细胞中5-HT1A-EGFP的表达情况,利用光漂白荧光恢复(FRAP)技术在PC12细胞膜局部漂白后观察5-HT1A-EGFP荧光蛋白在细胞膜上转运的情况。结果克隆所获得的小鼠5-HT1A基因是准确的。5-HT1A-EGFP蛋白清晰的分布于PC12和HKE293细胞膜上。通过FRAP技术观察到漂白区域的细胞膜在100s内有部分恢复,说明受体在细胞膜上发生转运。结论建立了稳定表达5-HT1A-EGFP融合蛋白的PC12细胞系,并利用活细胞成像和FRAP技术观察分析并证实了5-HT1A受体在PC12细胞的膜表面的表达和转运的动态变化。

基于S5PC100的存储器设计与移植实现

根据S5PC100微处理器的存储器特性,论文提出了扩展DRAM、Nand Flash、Nor Flash三种存储器的方法和硬件连接示意图,给出了扩展后所对应的存储器地址。通过为其搭建嵌入式系统的软件开发环境,并在Android 2.1系统上移植实现,验证了系统的可行性。最后,分析了实验结果,系统运行良好。

基于S5PC100核心的温度监控警报系统的设计

针对LM75串行可编程温度传感器在火灾报警和仓储环境过热报警中的应用,给出了一种温度监控与温度异常自动报警系统的设计方法。该方法以S5PC100核心开发板为研究重点,设计了开发板端的温度监控自动报警系统程序,并利用I2C总线串行通信协议实现温度数据的采集,然后通过JTAG仿真器实现宿主机对目标机功能的调试。实验表明,基于LM75温度传感器的温度监控系统,可以满足以S5PC100为核心的多领域温度监控和温度异常警报功能的集成需求。