近缘新对虾PCNA基因的克隆及表达分析

增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)作为DNA聚合酶δ的辅助蛋白,在DNA复制过程中发挥重要作用。近缘新对虾(Metapenaeus affinis)卵巢发育过程中存在细胞增殖活动旺盛的阶段,但目前关于其卵巢发育的分子机制研究较少。利用RACE (Rapid amplification of cDNA ends)技术获得近缘新对虾PCNA (MaPCNA)基因的cDNA序列全长,并通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)对其进行卵巢发育相关的表达分析。MaPCNA全长为1 144 bp,包含140 bp的5’非编码区,221 bp的3’非编码区,开放阅读框(ORF)为783 bp,编码260个氨基酸。MaPCNA蛋白的相对分子质量为28.82 kD,理论等电点为4.5。多重比对分析表明,PCNA氨基酸序列在甲壳动物中较为保守。组织表达结果显示,MaPCNA基因在检测的组织中均有表达,其中在卵巢中的表达量最为显著(P<0.05)。在不同发育阶段的卵巢中,MaPCNA基因的表达出现变化(P<0.05),从Ⅰ期开始逐渐上升,到Ⅲ期表达量最高,之后显著降低并趋于平稳。MaPCNA基因在幼体发育不同时期的表达呈现出一定的规律性趋势,在受精卵时期的表达量最高,之后呈下降趋势,从无节幼体Ⅵ期开始表达平稳。研究结果提示PCNA基因可能在近缘新对虾的卵巢发育过程中发挥重要作用。

甜菜基因BvPCNA-like的克隆及结构分析

本文旨在利用分子标记位点克隆糖用甜菜(Beta vulgaris L.)中的BvPCNA-like基因的基因组位点及完整的编码区(Coding sequence,CDS),并对该CDS在基因组中的结构进行分析与验证,为进一步研究该基因的功能奠定基础。利用甜菜EST-SSR标记BvRE049,以糖用甜菜种质‘DP02’(标记检测阳性)为材料,通过电子克隆策略获得标记相关基因的基因组位点,进而克隆基因CDS片段;预测CDS在基因组中的外显子和内含子个数及内含子剪接位点分布范围,并设计PCR引物组合对以上结构进行验证;同时用在线生物信息学分析软件分析该基因产物的基本特征。克隆获得了甜菜基因BvPCNA-like的编码区,全长1164 bp,编码产物含387个氨基酸,分子量约42736.25 Da,等电点约4.46,在基因组中,该基因由3个内含子分隔成4个外显子。本研究克隆了BvPCNA-like基因的完整编码区,预测并验证了其在基因组位点中的结构,为进一步深入研究BvPCNA-like基因在甜菜体内的功能奠定了基础。

反流性食管炎和食管腺癌组织中P16、P53、PCNA表达及其临床意义

为了探讨P16、P5 3、PCNA基因表达在反流性食管炎、Barrett食管和食管腺癌中的临床生物学行为之间的关系。采用免疫组织化学法 ,检测了 30例食管腺癌、2 0例反流性食管炎和 10例Barrett食管组织中P16、P5 3、PCNA基因表达 ,2 0例正常人的食管组织作为正常对照。结果表明 :三项基因在食管腺癌中的蛋白表达率均较正常对照组显著增高 (P <0 .0 5 )。P5 3在食管腺癌、Barrett食管和反流性食管炎中的阳性表达率分别为 5 6 .7%、30 %和 2 0 % ;P16在食管腺癌、Barrett食管和反流性食管炎中的阳性表达率为 36 .7%、30 %和 2 5 % ;PCNA在食管腺癌组织和Barrett食管中较正常食管表达强度和阳性表达率明显增强 (P <0 .0 1) ;食管腺癌组织中蛋白表达较Barrett食管和反流性食管炎表达增强 ,但统计学检验却差异无显著性意义 ,Barrett食管较反流性食管炎表达增强。食管腺癌患者 3项基因的表达至少有 1项呈现为阳性。

Bcl-2、PCNA基因在鸡、鹌鹑及其杂交种睾丸组织中的表达研究

为探讨鸡(♂)与鹌鹑(♀)属间杂交种睾丸生长发育不良的分子机理,试验采集新罗曼蛋用型公鸡、朝鲜公鹌鹑、鸡与鹌鹑的雄性杂交种不同发育时期的睾丸组织样共计84份,并用实时荧光定量PCR对公鸡、公鹌鹑及其杂交种各阶段睾丸组织中Bcl-2、PCNA基因的mRNA表达进行了检测。结果显示,鸡和鹌鹑不同生长发育期睾丸组织中Bcl-2、PCNA基因mRNA的表达具有相似性,Bcl-2基因整体呈波动性变化,下降到最低值后,迅速回升到较高水平,PCNA基因均有一个极显著的峰值;与鸡和鹌鹑相比,杂交种Bcl-2、PCNA基因mRNA表达均无明显变化,表明杂交种睾丸发育过程中,Bcl-2基因调控睾丸中细胞凋亡的模式不同于鸡和鹌鹑,也不存在明显的细胞增殖过程,从而推测鸡与鹌鹑的杂交种睾丸生长发育不良的分子影响因素与其睾丸组织中Bcl-2、PCNA基因mRNA的异常表达有关。本试验结果为进一步研究鸡与鹌鹑属间杂交种睾丸发育不良的分子机理提供了参考依据。

食管腺癌组织中p53、p16和PCNA的表达及其临床意义

目的 :探讨 p5 3、p16和 PCNA的表达在食管腺癌中的临床生物学意义。 方法 :采用免疫组织化学法 ,检测 30例食管腺癌黏膜组织中 p5 3、p16和 PCNA的表达 ,2 0例正常人的食管组织作为正常对照。结果 :p5 3在食管腺癌黏膜组织中的阳性表达率为 5 6 .7% ,较正常对照组 (10 .0 % )明显增高 ;p16在食管腺癌黏膜组织中的阳性表达率为 36 .7% ,较正常对照组 (5 0 .0 % )降低 ;PCNA在食管腺癌黏膜组织较正常食管表达强度和阳性表达率明显增强 ,统计学处理均有明显差异 (P <0 .0 1或 P<0 .0 5 ) ,表达强度在食管腺癌组以 ( )～ ( )多见 ,而正常对照组则多为 (- )～ (+)。食管腺癌患者三项基因的表达至少有一项呈现为阳性。 结论 :p5 3、p16和 PCNA在食管腺癌的发生发展过程中起重要作用 ,其蛋白表达对估价食管腺癌具有重要意义。

P53和PCNA在辐射诱导犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡中的表达及意义

目的探讨在辐射诱导犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡中,P53和PCNA的表达及意义。方法12只犬随机分两组,每组6只犬,在犬胆管内分别植入103pd(103钯)放射性支架和普通胆管支架,术后30d取出胆管标本采用ABC法进行PCNA免疫组化染色,核出现棕色反应为阳性细胞;原位杂交进行P53细胞染色,细胞浆出现棕褐色反应为阳性细胞;又行平滑肌细胞凋亡染色,阳性细胞为细胞核有棕黄色颗粒即为凋亡细胞。结果103Pd支架组PCNA蛋白阳性表达率明显低于普通支架组,两组之间比较差异有非常显著性(P<0.01),103Pd支架组P53蛋白阳性表达率明显高于普通支架组,两组之间比较差异有非常显著性(P<0.01)。103Pd支架组平滑肌细胞凋亡数较普通支架组明显增多,两者有显著差异(P<0.05),103pd放射性支架组犬胆管腔无明显狭窄,而普通支架组犬胆管腔有明显狭窄。结论以上结果证实103Pd支架组犬胆管平滑肌组织PCNA表达较弱,而普通支架组犬胆管平滑肌组织PCNA表达却增高,说明辐射可以抑制平滑肌细胞增殖,辐射可激活P53基因而诱导犬胆管平滑肌细胞凋亡,同时抑制犬胆管损伤后胆管狭窄。

肝癌中Survivin表达与PCNA和AFP的关系及意义

目的 :探讨Survivin在原发性肝细胞癌 (HCC)组织中的表达及与PCNA和AFP的关系。方法 :采用Westernblot和RT -PCR检测 4 3例肝癌组织、2 0例癌旁组织和 11例正常肝组织中Survivin蛋白和mRNA的表达情况。免疫组化 (SP法 )检测Sur vivin、PCNA和AFP蛋白的表达情况。结果 :4 3例HCC标本中分别有 30例表达Survivin蛋白 (6 9.8% ) ,除 1例癌旁组织外 ,其它癌旁组织和正常肝组织中未见Survivin蛋白表达。Survivin表达与肝癌的病理分级、临床分期和AFP的表达等无明显相关。Survivin表达与肝癌细胞增殖活性 (PCNA -LI)显著相关 (P <0 .0 5 )。结论 :Survivin在肝癌组织中高表达 ,提示Survivin在肝癌的发生、发展过程中起重要作用 ;Survivin的表达与肝癌细胞增殖活性 (PCNA -LI)显著相关 。

视网膜母细胞瘤组织中Bcl-2,p16和PCNA的表达意义

目的:研究视网膜母细胞瘤组织中Bcl-2,p16和PCNA的表达方法:视网膜母细胞瘤标本36例采用免疫组织化学方法观察Bcl-2,p16和PCNA表达水平。结果:Bcl-2,p16和PCNA阳性检出率分别是55.6%,47.2%,61.1%,分化型与未分化型之间比较差异有显著性(P<0.01)。结论:Bcl-2,p16和PCNA在视网膜母细胞瘤的产生和发展过程中起重要作用。

p16、p21、p53和PCNA在视网膜母细胞瘤中的表达

目的 研究 p16、p2 1、p5 3和增殖细胞核抗原 (proliferating cell nuclear antigen,PCNA )在视网膜母细胞瘤的表达。方法 对 36例视网膜母细胞瘤标本采用免疫组织化学方法观察 p16、p2 1、p5 3和 PCNA表达水平。结果 36例标本中 p16、p2 1、p5 3和 PCNA阳性检出率分别是阳性表达率在肿瘤的分化程度方面有显著差异 (P<0 .0 5 )。结论 p16、p2 1、p5 3和

EGF,EGFR和PCNA表达与大肠癌临床病理学特征及关系

目的 探讨EGF ,EGFR和PCNA表达与大肠癌临床病理学特征及预后的关系。方法 对5 0例大肠癌和 10例正常的大肠组织 ,通过免疫组化法观察EGF ,EGFR与PCNA的表达。结果 大肠癌组织中EGF ,EGFR表达阳性率分别是 76.0 7%和 84.15 % ,正常大肠组织无表达 (P <0 .0 5 ) ;大肠癌组织中PCNA表达为 ( 3 7.2 2± 14 .49) % ,正常大肠组织为 ( 15 .12± 3 .2 1) % ( P <0 .0 5 )。三者表达与大肠癌组织类型、临床Dukes分期及转移、复发有关 (P <0 .0 5 ) ,但与肿瘤大小及部位无关 (P>0 .0 5 )。结论 大肠癌组织EGF ,EGFR和PCNA的表达 ,对判断肿瘤的恶性程度、估计预后、判断复发及指导患者术后化疗具有一定的临床意义。

p57^(kip2)在肝癌组织中的表达及其与临床病理因素、PCNA和p53的关系

目的 :检测细胞周期抑制因子 p5 7kip2 在肝癌中的表达水平 ,探讨它与临床病理因素、增殖细胞核抗原 (PCNA)、p5 3的关系 .方法 :用免疫组织化学法检测 32例肝癌组织和1 0例正常肝脏组织中 p5 7kip2 ,PCNA和 p5 3的表达水平 .结果 :p5 7kip2 在肝癌组织中的阳性率 5 6 .2 % ,显著低于正常肝脏组织 (1 0 0 % ) (P =0 .0 1 1 ) ,p5 7kip2 的缺失表达与肝癌细胞的分化较差 (P =0 .0 0 7)、临床分期较晚 (P =0 .0 4 1 )及预后较差有关 (P =0 .0 36 ) ,与年龄、AFP ,肿瘤大小及肿瘤侵犯转移无显著相关 (P >0 .0 5 ) ;PCNA在肝癌组织中阳性率为 5 6 .2 % ,与 p5 7kip2 的表达有关 (P =0 .0 36 ) ;p5 3在肝癌组织中的阳性率 4 6 .9% ,与p5 7kip2 表达在统计学上无相关性 (P >0 .0 5 ) .结论 :肝癌组织中存在 p5 7kip2 的表达缺失、PCNA的高表达 ,共同参与肝癌的发生、发展 ,而p5 7kip2 和p5

PCNA、CD44和nm23基因产物在膀胱癌的表达及临床意义

应用流式免疫法对４５例膀胱癌标本的ＰＣＮＡ、ＣＤ４４ｖ和ｎｍ２３－Ｈ１基因产物的表达进行研究。结果显示，ＰＣＮＡ高表达仅与膀胱癌的浸润程度有关（Ｐ＜０．０５），ＣＤ４４高表达与膀胱癌的浸润程度和复发有关（Ｐ＜０．０５）；而ｎｍ２３－Ｈ１低表达与膀胱癌的浸润程度和复发有关（Ｐ＜０．０５）。提示检测ＰＣＮＡ、ＣＤ４４ｖ和ｎｍ２３－Ｈ１基因产物的表达。

p21^(waf1)、p53和PCNA在肺癌组织中的表达

目的 了解肺癌组织中p2 1waf1、p5 3和PCNA蛋白表达情况 ,研究肺组织良恶性增殖的不同机制。方法 运用免疫组织化学方法 ,检测 76例肺癌组织p2 1waf1、p5 3及PCNA的表达情况 ,分析三种蛋白表达与肺癌临床特征的关系 ,并与 5 9例肺良性疾病组织相关指标进行比较。结果 (1)肺癌组织p2 1waf1和p5 3蛋白表达阳性率分别为 75 %和47 37% ,PCNALI值为 0 44± 0 32 ,均显著高于肺良性疾病组织 (分别为 35 5 9%、3 39%和 0 0 9± 0 14)。 (2 )肺癌组织p2 1waf1、p5 3和PCNA蛋白表达与肺癌临床分期及细胞分化程度无关。各型肺癌之间p2 1waf1、p5 3蛋白表达也无明显差异。(3)肺鳞癌PCNALI值为 0 5 1± 0 32 ,明显高于小细胞肺癌(0 30± 0 36 )。 (4)肺癌组织p2 1waf1和p5 3蛋白表达与PCNA无关 ,p2 1waf1和p5 3蛋白表达之间也未发现相关性。而肺良性疾病组织p2 1waf1和p5 3蛋白表达与PCNA相关。结论 (1)肺癌组织p2 1waf1与p5 3蛋白表达明显上调。 (2 )肺癌细胞增殖程度很高。 (3)肺鳞癌细胞DNA损伤修复能力可能高于小细胞肺癌。 (4)肺良性疾病细胞增殖过程中 ,p2 1waf1、p5 3及PCNA三种蛋白有协调作用 ,而在肺癌细胞则否。

子宫内膜癌组织中Survivin和PCNA的表达

目的:探讨子宫内膜癌(EMC)组织中Survivin表达与细胞增殖活性和临床病理特性、预后的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测10例正常子宫内膜、20例子宫内膜增生过长及33例EMC组织中Survivin及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果:EMC及子宫内膜增生过长组织中Survivin的阳性率分别为78.8%和55.0%,明显高于正常子宫内膜组织(20.0%),差异有统计学意义(P<0.05);子宫内膜癌组织中Survivin表达且与PCNA呈正相关(r=0.446,P=0.005)。结论:Survivin阳性表达率与肿瘤的恶性程度及细胞增殖活性明显相关,可用来鉴别肿瘤恶性程度、预测预后。

细胞增殖相关基因p16,PCNA和CyclinD1在尖锐湿疣中的表达

目的探讨细胞增殖相关基因p16,PCNA和CyclinD1在尖锐湿疣中的表达及意义。方法分别采用免疫组织化学和RT-PCR法检测30例尖锐湿疣、寻常疣、跖疣中细胞增殖基因p16,PCNA和CyclinD1的表达情况,并与30例正常包皮组织进行对照。结果 p16蛋白在尖锐湿疣、寻常疣、跖疣和正常对照中的阳性表达率分别为:26.67%,16.67%,6.67%和0;p16 mRNA的阳性表达率分别为:23.33%,16.67%,6.67%和0。疣皮损p16蛋白表达评分和mRNA光密度高于正常对照,差异有统计学意义(P<0.05)。PCNA蛋白在各组的阳性表达率分别为:93.33%,86.67%,76.67%和70.00%;PCNA mRNA的阳性表达率分别为:90.00%,76.67%,70.00%和70.00%。疣皮损PCNA蛋白表达评分和mRNA光密度高于正常对照,差异有统计学意义(P<0.05)。CyclinD1蛋白和mRNA在各型疣和正常对照阳性表达率均为0。结论 p16和PCNA基因在尖锐湿疣、寻常疣和跖疣的发生发展中起一定作用,尤其是对尖锐湿疣的促增殖作用显著。

胃癌PCNA和CD44V6表达的相互关系及其临床意义的研究

目的 研究增殖细胞核抗原 (PCNA)和CD44V6表达与胃癌侵袭转移及预后的关系 ,探讨胃癌组织PCNA和CD44V6表达的相互关系。方法 采用SP免疫组化染色方法 ,检测 90例胃癌组织PCNA和CD44V6的表达情况。结果 胃癌组织PCNA标记指数 (LI)为6 3 83 %± 17 16 % ,CD44V6阳性表达率为 74 4% (6 7 90 ) ;PCNALI和CD44V6表达强度与胃癌淋巴结转移、浸润深度及TNM分期均呈显著正相关 (P <0 .0 5 ) ;PCNALI≥ 5 0 %或CD44V6强阳性表达的胃癌患者术后 1,3 ,5年生存率均显著降低 (P <0 .0 5 ) ;CD44V6阳性表达胃癌组织的PCNALI显著高于CD44V6阴性表达者 (P <0 .0 5 )。结论 PCNA和CD44V6表达与胃癌侵袭转移及预后显著相关 ;

大肠癌及癌旁粘膜中p21,p185,PCNA的表达及意义

目的 探讨癌基因相关蛋白p2 1,p185及增殖细胞核抗原 (PCNA)在大肠癌癌旁移行粘膜、近端断端大肠粘膜、腺瘤型息肉中表达的意义及其与大肠癌的关系。方法 应用免疫组织化学方法对 40例原发性大肠癌及癌旁移行粘膜 ,2 0例腺瘤型息肉中p2 1,p185及PCNA的表达进行检测。结果 p2 1,p185及PCNA在大肠癌癌旁移行粘膜中的阳性表达率分别为 2 2 5 % (9 40 ) ,17 5 % (6 40 ) ,10 0 % (4 0 40 ) ;p2 1,p185的阳性表达与临床病理分期无关 ;p2 1,p185 ,PCNA表达分级在癌组织及癌旁移行粘膜中存在正相关。结论 在癌旁移行粘膜中p2 1,p185表达异常、细胞增殖力学异常 ,反映癌旁移行粘膜是一种不稳定的癌前状态 。

大肠癌中CD44V6、p53、PCNA的表达及意义

目的 探讨 CD44 V6、p5 3、PCNA在大肠癌中的表达与病理及生理学行为之间的关系。方法 采用免疫组化S- P法检测 CD44 V6、p5 3、PCNA在 5 1例大肠癌中的表达。结果 5 1例大肠癌 CD44 V6阳性表达率 41.18% (2 1/ 5 1)。CD44 V6在低分化大肠癌的检出率为 5 3.85 % (7/ 13)明显高于高分化大肠癌 36 .84% (7/ 19) (P<0 .0 5 ) ,在浆膜外的阳性表达率 5 3.38% (8/ 15 )明显高于肌层 33.33% (2 / 6 ) (P<0 .0 5 ) ,有淋巴结转移者阳性表达率为 6 3.16 % (12 / 19)明显高于无淋巴结转移者 31.2 5 % (10 / 32 ) (P<0 .0 5 )。p5 3在 5 1例大肠癌中阳性检出率为 5 0 .5 9% (2 6 / 5 1) ,其表达与大肠癌的组织类型、分化程度和淋巴结转移未见明显相关。而与浸润深度呈正相关 ,p5 3在浆膜外层的阳性表达率为5 3.33% (8/ 15 )明显高于肌层 33.33% (2 / 6 ) (P<0 .0 5 )。 PC-NA的表达与病理分级、浸润深度和淋巴结转移未见显著相关性 (P>0 .0 5 )。结论 CD44 V6的表达与大肠癌的临床病理生理学行为密切相关 ,而 p5 3与大肠癌浸润深度关系密切。因此 CD44 V6和 p5 3蛋白可为一个准确预测大肠癌预后的生物学指标。而

P16、P15及PCNA在子宫颈癌中的表达及临床病理意义

目的研究p16、p15蛋白及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在子宫颈癌中的表达特点,并探讨其与病理分级的关系。方法应用免疫组织化学ElivisionTM二步法检测41例宫颈癌及30例正常宫颈组织中p16、p15及PCNA的表达情况,并结合病理分级进行分析。结果(1)p16和p15蛋白在宫颈癌组织的表达率分别为14.63%(6/41)和17.07%(7/41),明显低于在正常宫颈组织中的表达率100%(30/30)和96.67%(29/30),χ2=8.834,P=0.003;(2)p16、p15蛋白阳性表达率与宫颈癌组织的病理学分级有关,p16、p15在宫颈癌Ⅰ级中的阳性表达率28.57%(4/14)、28.57%(4/14)明显高于Ⅱ级18.75%(3/16)、12.50%(2/16)χ2=6.069,P=0.014和Ⅲ级9.09%(1/11)、9.09%(1/11),χ2=7.86,P=0.005;(3)宫颈癌组织PCNA阳性表达率95.12%(39/41)及阳性细胞指数(47.97±8.69)%均明显高于正常对照组的阳性表达率3.33%(1/30)及阳性细胞指数(3.56±0.53)%,χ2=10.773,P=0.001;并且与病理学分级存在相关性。结论抑癌基因p16、p15的表达缺失在子宫颈癌中同时存在,p16、p15及PCNA检测,对于研究宫颈癌的发生、发展和评估子宫颈癌恶性程度具有重要意义。

口腔黏膜白斑及鳞癌组织中核因子-κB p65与PCNA的表达

目的:探讨口腔黏膜白斑(OLK)及鳞癌(OSCC)组织中核因子-κBp65及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。方法:应用免疫组织化学技术检测正常口腔黏膜上皮(n=10)、单纯增生型OLK(n=11)、异常增生型OLK(n=35)、OSCC(n=36)组织中的NF-κB p65和PCNA的表达情况。结果:正常口腔黏膜上皮组织中p65不表达,由单纯增生型OLK转变到异常增生型OLK最后到OSCC的发生发展过程中NF-κB p65的表达明显上调(9.1%,42.9%,72.2%),差异有统计学意义(χ2=30.323,P<0.05);正常口腔黏膜、OLK组织和OSCC组织中均有PCNA阳性表达,且增殖指数逐渐升高(4.90±1.18,6.45±2.03,28.43±13.91,63.89±15.31),差异有统计学意义(F=21.55,P<0.05)。二者在OLK癌变过程中密切相关。结论:二者可能是检测OLK恶变潜能及OSCC早期诊断的敏感指标。