基于PCPA大鼠下丘脑蛋白互作网络分析挖掘失眠发病的分子机制

目的采用蛋白质组学技术对PCPA失眠大鼠模型下丘脑蛋白质表达差异进行分析,探讨失眠模型大鼠在失眠过程中下丘脑的差异蛋白互作网络关系。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型A组、模型B组,除空白组外全都给予PCPA造模,模型A组造模成功后立即取下丘脑,空白组与模型B组饲养7 d,待PCPA药效减退后取下丘脑。运用蛋白质组学技术检测各组大鼠下丘脑蛋白差异,以差异表达量上调或下调超过1.5倍作为变化阈值,筛选差异蛋白并分析其互作用关系。结果戊巴比妥钠翻正反射试验显示,模型A组、模型B组与空白组的大鼠睡眠潜伏期时间比较,潜睡眠时间均延长(P<0.01),睡眠持续时间均缩短(P<0.01);自发活动试验显示造模后模型A组、模型B组与空白组比较,自发举爪次数均增加(P<0.05)。根据蛋白互作关系网络分析,模型A组与空白组之间蛋白网络中有16个蛋白有较重要作用,其中Map1(T-kininogen 1)、Mfge8(Lactadherin)、P4hb(Protein disulfide-isomerase)与失眠关系较为密切。模型B组与模型A组之间蛋白网络中有12个蛋白具有重要作用,其中Apoa1(Apolipoprotein A-I)、Mfge8(Lactadherin)、Sympk(Symplekin)、Plg(Plasminogen)与失眠关系密切。结论通过PCPA大鼠下丘脑的蛋白互作网络分析挖掘,失眠的发生发展可能与HPA轴的应激反应下神经变性保护、血管内皮细胞、内分泌调节、免疫系统平衡、学习记忆能力以及衰老具有相关性。

蒙医温针对PCPA致失眠大鼠一般行为及内源性代谢产物的影响

目的通过观察蒙医温针对氯苯丙氨酸(P-ChloroPhenylalanine,PCPA)致失眠模型大鼠一般行为及粪便代谢物的影响,以期从代谢物水平探讨温针改善睡眠的作用机制。方法选择腹腔注射PCPA的方法建立失眠模型,采用旷场实验和跳台实验检测大鼠一般行为变化,使用粪便LC-MS/MS非靶代谢组学技术研究PCPA致失眠大鼠粪便代谢谱的变化,鉴定蒙医温针治疗失眠症的相关代谢标志物。结果体质量变化:与空白组比较,模型大鼠体质量显著下降(<0.05),经温针治疗后大鼠体质量明显增高(<0.05)。旷场实验:与空白组比较,模型组大鼠运动时间和距离延长,站立次数显著增多(<0.05),经温针治疗后运动时间和距离明显缩短,站立次数减少(<0.05)。跳台实验:与空白组比较,模型组大鼠错误次数增加,登台潜伏期缩短(<0.05),经温针治疗后错误次数减少,登台潜伏期显著增加(<0.05)。粪便LC-MS/MS检测:蒙医温针可显著回调PCPA致失眠大鼠粪便样本中L-乙酰肉碱、β-羟基睾酮、去甲肾上腺素、6-羟基-5-甲氧基吲哚葡糖苷酸、4-氧代-1-(3-吡啶基)-1-丁酮等5种差异代谢物水平。结论蒙医温针可以改善PCPA致失眠大鼠焦虑情绪以及学习记忆能力;蒙医温针可能通过调节失眠大鼠粪便中L-乙酰肉碱、β-羟基睾酮、去甲肾上腺素、6-羟基-5-甲氧基吲哚葡糖苷酸、4-氧代-1-(3-吡啶基)-1-丁酮等5种代谢产物,使体内异常的代谢水平有所恢复,从而发挥改善失眠的作用。

酸枣仁-五味子药对醇水双提物对PCPA致失眠大鼠氨基酸类神经递质的影响

目的:观察酸枣仁-五味子药对醇水双提取物对PCPA所致失眠大鼠氨基酸类神经递质的影响,探讨其治疗失眠可能的作用机制。方法:腹腔注射PCPA诱导大鼠失眠模型,造模成功后,灌胃给药,1次/d,连续1 w。HE染色观察大鼠下丘脑病理变化,ELISA法测定下丘脑中GABA、Glu含量,免疫组织化学法测定下丘脑中GABA和Glu蛋白的表达,RT-PCR法检测下丘脑中GABA A Rα1和GABA A Rγ2mRNA的表达。结果:与模型组比较,酸枣仁-五味子药对醇水双提物中、高剂量组不仅能显著提高GABA含量,升高GABA A Rα1和GABA A Rγ2mRNA表达,还能降低Glu水平。结论:酸枣仁-五味子药对具有较好的镇静催眠作用,其作用机制可能与调节下丘脑内氨基酸类神经递质的含量有关。

滋阴养血安神方对PCPA诱导失眠小鼠睡眠的影响

目的:探讨滋阴养血安神方对睡眠剥夺小鼠睡眠的影响及其机制。方法:利用腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)制造睡眠剥夺模型,模定失眠小鼠戊巴比妥钠致睡眠的阈下及阈上剂量,分6组,空白对照组、模型组、滋阴养血安神方低剂量组(73 g/kg)、滋阴养血安神方中剂量组(146 g/kg)、滋阴养血安神方高剂量组(292 g/kg)、地西泮组(1.5 mg/kg),造模并给药7 d后,给予戊巴比妥钠诱导睡眠,观察对小鼠睡眠的影响,并检测小鼠海马5-羟色胺(5-HT)含量。结果:滋阴养血安神方可增加阈下剂量戊巴比妥钠小鼠睡眠个数,缩短阈上剂量戊巴比妥钠的小鼠入睡潜伏期,与模型组对比有显著性差异(P<0.01),能延长阈上剂量戊巴比妥钠诱导的睡眠时间,与模型组对比有显著性差异(P<0.01);滋阴养血安神方高剂量组小鼠脑内5-HT含量显著高于模型组,与模型组对比有显著性差异(P<0.05)。结论:滋阴养血安神方具有镇静、催眠作用,对失眠症的有一定的治疗作用,其对小鼠睡眠的影响机制之一可能是通过升高脑内海马5-HT含量实现的。

从5-HT1A、5-HT2A后信号通路探讨针刺治疗PCPA失眠机制

为探明针刺5-HT1A、5-HT2A后信号通路的影响,以及其与改善PCPA失眠中枢5-HT障碍机制的关系,将48只PCPA失眠大鼠随机均分为3组,并与16只正常鼠对照。正常组、模型组无特殊处理,针刺组予针刺脐内环合失眠穴方干预,非穴组针刺非穴处理,治疗6天后,处死动物、分离海马并匀浆,拟ELISA检测5-HT、PLCβ和cAMP含量,WB检测Gαi/o、Gαq/11表达,统计学分析5-HT与cAMP、PLCβ相关性。结果PCPA失眠大鼠海马5-HT、cAMP明显降低,PLCβ明显升高,针刺组5-HT、cAMP含量显著升高,PLCβ含量显著降低;各组内5-HT与cAMP呈正相关性、与PLCβ呈负相关性;模型组Gαq/11显著下降,针刺显示显著上调作用,各组间Gαi/o表达比较无统计意义;实验提示该针法能良性调控5-HT1A/Gαi/o/cAMP、5-HT2A/Gαq/11/PLCβ信号通路起改善PCPA失眠作用,该作用与改善中枢5-HT障碍机制有一定的相关性。

PCPA饮食干预模式对社区老年糖尿病患者生活质量及血糖的影响

目的探讨PCPA模式的饮食干预对社区老年糖尿病患者生活质量及血糖的影响。方法选取银川市两个社区内共106名糖尿病患者进行问卷调查及生化指标检测,内容包括生活质量状况、空腹血糖、体质指数和腰围。并以社区为基础随机分为对照组(52例)和干预组(54例),干预组患者实施PCPA模式的社区饮食干预策略,于半年后进行效果评价。结果两组患者的生活质量状况及空腹血糖差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 PCPA理论指导下的社区饮食干预能够有效降低患者血糖水平,提高患者的生活质量。

外源生长素PCPA对番茄果实蔗糖代谢的影响

以自然坐果的普通栽培型番茄为对照,PCPA蘸花处理后,取不同发育期的番茄果实内各部位,测定糖的组成和浓度、蔗糖代谢相关酶的活性。结果表明:在番茄果实各发育期,PC-PA蘸花处理的果实内各部位糖分含量的总体变化趋势与对照基本相同,果实成熟期中果皮和心室隔壁、胶质胎座中葡萄糖和果糖含量较高,但PCPA蘸花处理的果实中葡萄糖和果糖含量增幅高于对照。果实成熟期PCPA处理的番茄果实内维管束酸性转化酶和中性转化酶活性都明显高于对照,中果皮和心室隔壁、胶质胎座中也有较高的酸性转化酶和中性转化酶活性。

PCPA,NAA防治甜椒落花的生理效应初探

甜椒在逆境条件下易发生落花，研究结果表明：PCPA与NAA对花粉发育有不良影响，减少落花生理效应不是促进受精，而是调节了生长发育，应用PCPA、NAA后能在逆境条件下保蕾保花，提高座果率；而且气象因子对药剂干扰很明显、因此，只有与改善栽培条件结合，才能较好的发挥PCPA，NAA的实际应用效果。

滋阴养血安神方对PCPA诱导的失眠小鼠GABA能系统通路递质含量及受体表达的影响

目的:探讨滋阴养血安神方对睡眠剥夺小鼠GABA能系统氨基酸递质含量、受体表达及GAD67酶蛋白表达的影响。方法:利用腹腔注射氯苯丙氨酸(PCPA)制造睡眠剥夺模型,分6组,空白对照组、模型组、滋阴养血安神方低剂量组(73 g/kg)、滋阴养血安神方中剂量组(146 g/kg)、滋阴养血安神方高剂量组(292 g/kg)、地西泮组(2 mg·kg^-1·d^-1),造模并给药7 d后,检测小鼠下丘脑GABA受体GABAARα1蛋白表达及mRNA表达,检测下丘脑组织中关键酶GAD67蛋白含量。结果:滋阴养血安神方可提高GABAARα1、GAD67蛋白表达及GABAARα1mRNA表达(P<0.05)。结论:滋阴养血安神可以通过GABA能系统通路影响PCPA诱导的失眠小鼠GABAARα1、GAD67蛋白表达及GABAARα1mRNA表达影响PCPA诱导的失眠小鼠睡眠。

安神脐贴对PCPA致失眠大鼠自主活动及GABA、5-HT含量的影响

目的:本实验主要观察安神脐贴对对氯苯丙氨酸(P-chlorophenylalanine,PCPA)致失眠大鼠自主活动的影响及血清神经递质γ-氨基丁酸(GABA)、单胺类神经递质5-羟色胺(5-HT)含量的变化。方法:采用腹腔注射PCPA的方法制备失眠大鼠模型,将健康SD大鼠按随机数字表法随机分为空白对照组、模型对照组、安神脐贴低剂量组、安神脐贴高剂量组、同仁安神丸组。采用Etho Vision大小鼠行为学系统记录大鼠自主活动情况,采用ELISA法测定各组大鼠血清五羟色胺(5-HT)、γ-氨基丁酸(GABA)的含量变化。结果:安神脐贴和同仁安神丸均能减少大鼠的自主活动次数,提示安神脐贴有明显的镇静作用。腹腔注射PCPA可导致大鼠血清神经递质GABA、5-HT表达量发生显著变化,采用安神脐贴低剂量、高剂量及同仁安神丸干预后,与模型组相比,GABA、5-HT的表达量升高。结论:安神脐贴有明显的镇静作用,安神脐贴调节睡眠的机制与调节具有促眠作用的因子GABA、5-HT有关。

PCPA和6-BA对茄子果实生长及其激素含量变化的影响

以"L1吉杂花长茄"为试材,用对氯苯氧乙酸和6-苄基腺嘌呤混合处理茄子花,研究混合液对茄子果实生长和激素含量变化的影响。结果表明:2种激素的混合液能显著增加茄子直径、长度和单果重;果实内脱落酸含量明显增加,生长素含量呈现先增加后减少再增加的"Z"字型走势,赤霉素含量呈现总体上升趋势,玉米素含量缓慢减少;茄子单果重与果内脱落酸(ABA)和赤霉素(GA)含量变化呈显著正相关,与生长素(IAA)和玉米素(ZR)含量变化无明显的相关性。

生酸枣仁、炒酸枣仁、酸枣果肉对PCPA失眠模型大鼠学习记忆能力影响的对比研究

目的:观察酸枣果肉、生酸枣仁、炒酸枣仁氯苯丙氨酸(PCPA)失眠模型大鼠学习与记忆能力的影响,对比3种药物的药用功能。方法:采用腹腔注射PCPA建立失眠大鼠模型。实验大鼠分为正常组、模型组、生酸枣仁组、炒酸枣仁组、酸枣果肉组,通过Morris水迷宫实验,观察各组大鼠逃避潜伏期、游泳速度、目标象限停留时间的变化情况。结果:与模型组比较,3个给药组大鼠逃避潜伏期时间均明显减少(P<0.001),游泳速度和目标象限停留时间也有增加趋势,其中酸枣果肉组大鼠变化尤为明显,其游泳速度和目标象限停留时间与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:生酸枣、炒酸枣仁、酸枣果肉对PCPA失眠大鼠的学习和记忆能力均有改善作用,酸枣果肉优于生酸枣仁和炒酸枣仁,提示酸枣果肉具有良好的镇静安眠作用。

PCPA饮食干预模式对社区老年糖尿病患者知识知晓及依从性的影响

目的探讨PCPA模式的饮食干预对社区老年糖尿病患者知识及饮食控制依从性的影响。方法采用糖尿病饮食疗法相关知识及饮食控制依从性调查表对银川市2个社区的106例老年糖尿病患者进行调查,并以社区为基础随机分为对照组(52例)和干预组(54例)。对照组患者不进行任何形式的干预,干预组患者实施PCPA模式的社区饮食干预策略,并于半年后进行效果评价。结果干预后干预组的饮食疗法相关知识得分(14.10±3.96分vs 10.85±4.09分,P<0.05)和饮食控制依从性得分(59.69±8.74分vs 53.76±8.51分,P<0.05)明显高于对照组。干预后干预组患者糖尿病饮食疗法相关知识掌握程度好的所占比例与对照组相比明显增加(P<0.05),并且干预组饮食控制依从性好的所占比例与对照组相比明显增加(P<0.05)。结论 PCPA理论指导下的社区饮食干预能够有效增加患者的糖尿病相关知识,提高患者饮食控制的依从性。

对氯苯氧乙酸(PCPA)对小南瓜结实性状和果实品质的影响

[目的]研究PCPA对小南瓜结实性状和果实品质的影响,为冀西北坝上地区农业高效生产和农民增收提供参考。[方法]以自然生长的小南瓜(经人工授粉)为对照,用不同浓度的PCPA处理经人工授粉或未授粉的小南瓜雌花花柱,研究其结实性状和果实品质的变化。[结果]用浓度为138 mg/kg的PCPA处理小南瓜未授粉的雌花花柱对增加单果重效果较好;用浓度79 mg/kg的PCPA处理小南瓜能显著改善籽粒分配比率,提高净瓜率和果肉厚,利于增加果肉比重;用浓度为50 mg/kg的PCPA处理小南瓜经人工授粉的雌花花柱,能显著提高VC和β-胡萝卜素含量,对果实品质的改善有良好的促进作用。[结论]低浓度的PCPA对改善小南瓜的结实性状和提高其果实品质起决定性作用。

不同波形电针对PCPA致失眠大鼠脑内单胺类神经递质含量的影响

目的:通过观察不同波形电针对PCPA致失眠大鼠脑内5-HT、NE、DA的影响,初步探讨不同波形电针治疗失眠的效应差异及可能机制。方法:将50只健康SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组3组(疏波组、密波组、疏密波组),每组各10只。模型组及3组电针组采用连续2 d腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)复制失眠模型。第3天起,电针各组按照所选波形参数对大鼠神门、三阴交穴进行电针治疗,模型组大鼠按照电针组相同的方式进行抓取固定,20 min/d,共干预7 d。于末次电针干预后隔天处死动物、取材,采用酶联免疫吸附法对脑组织中5-HT、NE、DA的含量进行测定。结果:模型组脑组织中5-HT含量低于空白组(P<0.01),NE和DA含量均高于空白对照组(P<0.01);3组电针组5-HT含量均高于模型组(P<0.01),NE和DA含量均低于模型组(P<0.01);电针各组之间比较疏波组在调整5-HT和NE方面优于密波组和疏密波组(P<0.05,P<0.01),对于DA的调整,3组电针组间未见显著差异(P>0.05)。结论:电针改善失眠的机制可能是通过调节脑内单胺类神经递质紊乱,加速5-HT的合成和转化,降低NE和DA含量,调节睡眠-觉醒周期实现的,疏波电针优于其他组,说明低频电针对失眠的疗效更好。

于世家教授自拟安眠方对PCPA诱导失眠大鼠脑内递质及GABA的影响

目的探讨安眠方镇静催眠作用及其作用机制。方法采用对氯苯丙氨酸(PCPA)建立失眠大鼠模型,以高效液相色谱-荧光检测法检测大鼠脑组织5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、去甲肾上腺素(NE)以及多巴胺(DA)含量,以氨基酸自动分析仪及酶联免疫法检测γ-氨基丁酸(GABA)的含量。结果安眠方三个剂量组的5-HT检测值均明显低于模型组;通过不同检测方法测定GABA,结果均提示安眠方中、高剂量组GABA含量较模型组显著升高,P<0.05,有显著差异;结论安眠方对PCPA诱导的失眠大鼠脑组织的5-HT没有明显影响,说明該制剂不是通过影响5-HT神经递质产生的镇静催眠作用。但安眠方对PCPA诱导的失眠大鼠脑组织的GABA含量却产生一定影响。

电针五脏俞治疗PCPA诱导大鼠失眠的疗效观察

目的:比较电针五脏俞刺激与常规西药治疗PCPA致失眠大鼠的疗效并探讨其作用机制。方法:建立大鼠PCPA失眠模型,分别采用电针五脏俞及西药地西泮给予治疗,监测大鼠治疗期间行为学与体质量变化,治疗结束后试剂盒检测血清SOD活性及MDA含量,TUNEL检测神经元凋亡,RT-PCR及Western blot检测海马NeuN、BDNF的mRNA及蛋白表达。结果:相较PCPA模型组,电针五脏俞刺激与西药地西泮处理能够显著促进失眠大鼠海马区BDNF的合成,增加脑内能正常表达NeuN的神经元数目,减少神经元细胞凋亡,提高血清SOD活性,下调MDA含量以缓解PCPA造成的机体氧化与抗氧化系统紊乱,使大鼠外在精神面貌愈发转好、体质量增速愈发恢复,从而达到治疗失眠的目的。结论:电针五脏俞刺激能对失眠大鼠大脑发挥明显的修复损伤和保护作用,其促进体内生理功能、改善中枢神经活动的效果好于常规西药地西泮或与其相当,具有较强的临床实用性。

PCPA大鼠失眠模型的证候属性研究

目的:建立PCPA大鼠失眠模型,确定其中医证候属性。方法:通过以方测证的方法,采用高效液相法观察大鼠中枢神经递质(5-HT、NE、E、DA)及放免法检测血中ACTH的含量变化。结果:交泰丸可以增加大脑5-HT含量,初步推测PCPA大鼠失眠模型的证候属性与中医心肾不交型类似。

叶酸对PCPA模型大鼠的抗抑郁作用

基于对氯苯丙氨酸(PCPA)抑郁模型,将60只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组、模型组、氟西汀组和叶酸组(50mg/kg,75mg/kg),通过悬尾、强迫游泳实验和糖水消耗量实验评价大鼠抑郁行为,探究了叶酸的抗抑郁效果及其作用机制。采用高效液相色谱法(HPLC)测定大鼠体内血清皮质酮及脑组织中5-HT神经递质的含量。结果显示,PCPA模型大鼠情绪低落,不动时间明显增加(P<0.05);血清中皮质酮含量显著上升(P<0.05),联合皮质和海马脑区的5-HT含量均显著下降(P<0.05)。叶酸可以显著缓解以上变化(P<0.05或P<0.01),叶酸对PCPA模型的抗抑郁作用可能与降低大鼠血清皮质酮含量,进而提高前额叶联合皮质与海马5-HT水平有关。