正交设计优化柿属植物SSR-PCR反应体系

为了快速有效地确定柿属植物SSR-PCR反应体系,给柿属植物遗传多样性的SSR标记研究奠定基础,采用正交设计的方法,利用2×Taq PCR Master Mix,将Taq酶、dNTPs和Mg2+3个因素作为整体,综合评价其对柿属植物SSR-PCR反应体系的影响。结果显示:反应各因素水平对PCR反应均具有显著影响,其中Mix影响最大,引物次之,模板DNA最小;确定柿属植物SSR-PCR反应体系为模板DNA 2μL(40～100 ng)、2×TaqPCR Master Mix 10μL、引物1μL,总体积25μL;反应体系具有较高的重复性和稳定性,筛选出20对多态性较高的柿属植物SSR引物。

番茄SSR-PCR反应体系的优化

为了确定番茄的SSR-PCR的最佳反应体系,采用2×Taq PCR Master Mix,对Taq酶、Mg2+、dNTPs进行综合考虑,探究其对番茄SSR-PCR反应体系的影响,并优化出最佳的反应体系。结果表明:引物用量对结果影响最大,其次是DNA用量,Master Mix用量对结果影响最小。最佳反应体系为:模板(50ng·μL-1)DNA2μL,Master Mix 9μL,引物3μL。

金槐ISSR-PCR反应体系的优化研究

目的:优化金槐快速品种鉴定的ISSR-PCR反应体系。方法:选用UBC840[(GA)_8YT]和UBC843[(CT)_8RA] 2套引物,比较ISSR-PCR传统扩增方法和PCR Master MIX扩增方法在鉴定金槐品种的应用效果。结果:与常规PCR扩增方法相比,采用PCR Master MIX进行金槐DNA-PCR扩增效果稳定,分析结果更加可靠,扩增效率高。结论:采用PCR Master MIX进行金槐DNA-PCR扩增的方法可做为金槐品种快速鉴定的一种分子标记技术。

预混指示剂的PCR系统使用与评测

[目的]研究预混系统对于PCR以及其下游试验是否会产生影响。[方法]采用"dye"及"density"预混的PCR系统与正常PCR系统进行PCR以及下游试验,使用琼脂糖凝胶电泳及Nano Drop2000检测。[结果]预混系统与正常系统对于PCR产物的特异性以及质量未见明显差别。[结论]预混系统也完全适合于下游的转化、连接、酶切试验。

泡桐属植物cpDNA分子发育PCR反应体系快速建立及优化

为了快速有效地确定泡桐属植物分子发育系统PCR反应体系,将影响PCR扩增体系的主要单因素因子Taq DNA聚合酶、Mg^(2+)、dNTPs替换成Taq PCR Master Mix;通过模板DNA,引物浓度和退火温度对体系进行优化,建立最适合泡桐属植物叶绿体DNA的PCR最适反应体系(25μL):5μL模板DNA,1.0μL引物,12.5μL Taq PCR Master Mix,5.5μL ddH_2O,反应体系具有较高的稳定性和重复性;筛选出了适合泡桐属植物分子系统发育学研究的引物:trb V-ndh C,Agt1F-Agt1R,ITS4-ITS5.