应用SSP-PCR/SSO方法进行中国辽宁汉族人HLA-DRB1基因的遗传多态性研究

对１５９名中国辽宁汉族个体的基因组ＤＮＡ进行分析，共检出４２种等位基因，其中以ＤＲＢ１０９０１２（１２．８％）、０７０１（１０．７％）、１５０１（１０．４％）最为常见，其次为ＤＲＢ１１２０１（７９％）、１２０２（７５％）、１１０１（６６％）、０３０１（５．０％）。并发现辽宁汉族人ＤＲＢ１等位基因频率与白种人间存在明显差异，揭示不同人种有其自己的主要等位基因。

用PCR-SSO方法研究云南西部彝族HLA-DQB1基因的多态性

应用PCR朣SO基因分型技术，对我国云南西部地区3代内无血缘关系的76个彝族健康个体进行了HLA-DQB1位点的基因分型。结果显示，在DQB1的38个等位基因中，观察到13个等位基因。云南西部彝族表现为DQB1*0301（36.18%～36.84%）最常见。其他频率大于5%的等位基因还有DQB1*0502（10.53%～11.18%）、DQB1*0401（9.21%）、DQB1*0302（8.55%～9.21%）、DQB1*0601（7.89%）、DQB1*05031（6.58%）、DQB1*03032（5.92%～6.58%）。和其他13个华人群体DQB1等位基因的频率比较分析表明，总体上，云南西部彝族和其他各华人群体间都存在很大的差异。显示其HLA等位基因频率分布的民族独特性。

洛阳地区汉族HLA—DRB1^＊04等位基因的PCR—SSO分型

对河南洛阳地区汉族进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０４等位基因的ＰＣＲ－ＳＳＯ分型，采用第１２届国际组织相容性专题讨论会（１２ｔｈＩＨＷＣ）推荐的引物和序列特异性寡核苷酸探针，可检测１７个ＤＲＢ１＊０４组特异性等位基因（ＤＲＢ１＊０４０１－０４１７）。在１１６份无血缘关系健康人ＤＮＡ标本中有１６份为ＤＲＢ１＊０４，其中１份为纯合，ＤＲＢ１＊０４的基因频率为０．０７１５。ＤＲＢ１＊０４等位基因分布于５个不同的型别，分别是ＤＲＢ１＊０４０１、０４０３、０４０４、０４０５和０４０６。基因频率以ＤＲＢ１＊０４０５最高（０．０２６２），ＤＲＢ１＊０４０６其次（０．０１７４），二者分别构成ＤＲＢ１＊０４基因组的３５．８％和２３．８％。其它３种等位基因的基因频率均较低（０．００８７）。此外对ＤＲＢ１＊０４等位基因在中国南北方汉族、民族（日本，中国）及人种（白种，黄种）中的分布进行了比较与讨论。将为ＨＬＡ与疾病相关性、移植免疫及人类学研究提供有价值的参考数据。

PCR-SSP/PCR-SSO两种KIR基因分型方法的比较

目的杀伤细胞免疫蛋白样受体(KIR)基因在自然杀伤细胞活性调节、机体抗感染、移植免疫过程中发挥重要作用。在脐带血移植中,KIR基因分型的效率和准确关系到移植的成败。为了满足临床上对KIR基因分型的要求,对比分析聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)和聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSO)两种方法,试图建立一个高效便捷检测KIR基因分型的方法学体系。方法从2018年到2019年已外送到第三方检测实验室(北京博富瑞医学检验实验室有限公司)做过KIR基因分型检测的脐带血样本中随机取出12份,分别用PCR-SSP及PCR-SSO商品化试剂盒进行KIR基因分型检测,并通过凝胶电泳分析或MATCH IT!DNA软件分析,获取KIR基因分型结果。结果12例脐带血样本中,PCR-SSO方法学检测的结果与原PCR-SSO方法检测结果完全一致,PCR-SSP方法学检测的结果与原PCR-SSO方法检测结果9例相同,有2例因出现漏孔而无法判读,有1例出现了假阳性带。结论PCR-SSO方法学检测KIR基因效果优于PCR-SSP,但是PCR-SSO方法学也存在当微珠的荧光校准值接近于临界值时,结果出现错判的现象;为保证KIR基因分型的准确度,建议PCR-SSP方法出现漏孔或者PCR-SSO方法荧光校准值接近于临界值时两种方法相互验证。

HLA DRB基因SSO分型方法的研究

按照第11届国际组织相容性抗原研讨会（IHW）工作会议HLAⅡ类PCR－SSO分型标准和美国国立骨髓供者计划组织（NMDP）对HLADRB基因分型要求，设计合成一对引物，可同时扩增HLA-DRB1＋B3＋B4＋BSDNA片段，长度为256bp，设计合成不同片段大小探针27种，可检出DRB座位上DRB1的39种等位基因，DRB3的3种等位基因，DRB4的1种等位基因和DRB5的3种等位基因。

甘肃汉族HLA-DRB1基因多态性与白血病的相关性研究(英文)

为了研究甘肃地区汉族白血病病人易感性与HLADRB1基因多态性的相关性研究并寻找白血病的易感基因,采用PCR和特异性寡合苷酸探针杂交(PCR/SSO)法,对74名西北汉族白血病工人和82名健康对照者的HLADRB1基因分型进行了研究。结果表明:甘肃地区汉族急性髓性白血病病人HLADRB103(χ2=8.125,P=0.004),HLADRB107(χ2=13.526,P=0.000),HLADRB108(χ2=18.855,P=0.000)和HLADRB113(χ2=7.039,P=0.008)明显增多;慢性髓性白血病病人HLADRB107(χ2=5.689,P=0.017),HLADRB111(χ2=7.73,P=0.005),HLADRB112(χ2=4.234,P=0.040),HLADRB113(χ2=38.333,P=0.000)明显增多。急性淋巴细胞白血病病人HLADRB101(χ2=5.294,P=0.021)明显增多。这些数据与对照组比较有差异性。结论:HLADRB103,HLADRB107,HLADRB108,HLADRB113与急性髓性白血病正相关。HLADRB107,HLADRB111,HLADRB112,HLADRB113与慢性髓性白血病的发病正相关。HLADRB101急性淋巴细胞白血病病人的发病有一定联系。可以推测,HLA构象的多态性与白血病发生有相关性。

上海地区汉族白塞病与HLA-B*51关联研究

为探讨白塞病的发病机制与HLAI类基因之间的关系,我们采用聚合酶链反应/顺序特异的寡核苷酸探针(PCR-SSO)反向杂交方法,对上海地区汉族69例白塞病患者及296例正常对照进行HLA-A、B基因的检测。结果显示白塞病患者组中HLA-B*51基因检出频率(34.8%)显著高于正常对照组(12.8%),X2和RR值分别为19.11和3.62(P<0.0001,Pc<0.005)。完全型白塞病患者组HLA-B51基因频率(52.4%)更是远远高于对照组,X2和RR值分别为39.4和7.5,(P<0.00001,Pc<0.001)。此外,HLA-B*46基因检出频率(26.1%)较对照组(11.1%)高,Pc<0.05。推测上海地区汉族白塞病的发病与HLA-B*51基因相关;患者组中HLA-B*46频率升高,可能与HLA-B*51一起参与白塞病的发病或因与患者组中某些HLA单倍型组合之间存在连锁不平衡有关。

系统性红斑狼疮临床特征与HLA-DR、DQ基因的相关研究

采用聚合酶链反应结合顺序特异的寡核苷酸（ＰＣＲ／ＳＳＯ）探针杂交方法对ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＱ亚区作ＤＮＡ分型，分析了系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）的各种临床特征与ＨＬＡ－ＤＲ、ＤＱ基因的关联。结果发现汉族ＳＬＥ中肾脏损害与ＤＲ２相关，而与ＤＲ４呈负相关。口、鼻腔粘膜溃疡与ＤＲ１２相关，未发现ＳＬＥ的其他临床特征与ＤＲ、ＤＱ基因有关。发病年龄小于３５ａ者，ＤＲ２、ＤＱ６阳性率高，而ＤＲ３则多见于发病年龄大于３５ａ者。提示对ＤＲ２阳性及发病年龄小于３５ａ的ＳＬＥ患者要谨防肾脏损害的发生，而ＤＲ４则对肾脏损害的发生有一定的保护性。

中国甘肃地区汉族白血病易感性与HLA-Ⅰ类抗原之间的相关性(英文)

目的 :探讨中国甘肃地区汉族白血病易感性与HLA Ⅰ类抗原之间的相关性 ,找出白血病的易感基因。方法 :采用特异性寡核苷酸探针杂交 (PCR SSO)法 ,初步对 4 3名白血病病人和 6 6名健康对照进行了HLA Ⅰ抗原分型。结果 :经过SSPS 10 0统计软件分析 ,中国甘肃地区汉族白血病患者HLA A 0 1和HLA A 11基因的统计结果分别为X2 =6 35 0 ,P =0 0 2 8、X2 =5 5 74 ,P =0 0 18。显示相关性。结论 :中国甘肃地区汉族人群中HLA A 0 1和HLA A

中国广东汉族群体HLAⅡ类基因多态性的研究

为探讨中国广东汉族群体HLAⅡ类基因多态性，采用PCR／SSO方法，随机选择102名广东籍汉族人进行了HLAⅡ类基因的DNA分型。测定了包括HLA－DRB1，DRB3，DNB5，DQA1，DQB1和DPBI等6个基因座位的等位基因。结果：共检出23种DRB1，3种DRB3，4种DRB5，8种DQA1，12种DQB1和12种DPB1基因。该人群的HLAⅡ类等位基因多态性的典型性表现在HLA－DRB*1202的不寻常优势和DRB1*02单倍型的结构的高度复杂性。还发现了很高频率的一个近年才被正式命名的DP新型：HLA－DPB1*2101，并且此型具有极不寻常的DRB1*1202－DPB1*2101的连锁不平衡。为分子流行病学研究提供了资料。

寡核苷酸DNA Microarray用于HLA DRB1基因分型的研究

对寡核苷酸DNAMicroarray用于HLADRB1基因分型的技术进行研究。常规的酚 /氯仿法提取标准血样基因组DNA ,在DRB1的exon 2区域设计一对引物 ,经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5 dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针 ,将探针固定在APS PDC法制作的DNAMicroarray上 ,用标记的PCR产物与之杂交 ,扫描仪对杂交结果进行扫描 ,Imagene软件对杂交图象进行分析。共检测了 33例标准血样的HLADRB1基因型。检测结果证明研制的DNAMicroarray准确、灵敏。DNAMicroarray技术可以有效地检测DRB1等位基因 ,对比常规的PCR SSP和PCR SSO方法、分型基因芯片方法更为直观 。

西藏珞巴族HLA-DRB1基因多态性

目的:检测西藏珞巴族HLA DRB1等位基因及基因型频率,并将其与18个人群的HLA DRB1频率进行比较,绘制系统发生树。方法:应用聚合酶链反应序列特异性寡核苷酸探针(PCR SSO)技术,对我国西藏南部林芝地区3代内无血缘关系的92个珞巴族健康个体进行了HLA DRB1位点的基因分型。采用不加权配对组算术方法(UPGMA)绘制系统发生树。结果:在92例珞巴族个体的184个等位基因中共检出11种HLA DRB1等位基因,其中HLA DRB1*04(27. 20% ),DRB*12(25. 50% )在珞巴族中最常见,共占珞巴族可检出等位基因的52. 70%;其他频率大于5%的等位基因还有DRB1*14(15. 20% ),DRB1*15(9. 80% )和DRB1*08(8. 20% )。结论:西藏珞巴族HLA DRB1等位基因分布与其他华人群体均存在很大的差异,显示其HLA等位基因频率分布的民族独特性;在遗传距离上珞巴族和藏族最近,这与民族学、历史学和社会学研究结果相一致。

青海土族、撒拉族HLA-DQA1和-DQB1基因多态性探讨

目的 :检测青海土族和撒拉族健康个体HLA DQA1和 DQB1等位基因频率 ,了解和分析这两个民族的HLA DQA1和 DQB1基因多态性。方法 :用PCR SSO方法检测 132名土族和 80名撒拉族健康个体的HLA DQA1和 DQB1的基因多态性 ,并将所得结果与国内其他民族的同类资料进行比较。结果 :土族和撒拉族在HLA DQA1和 DQB1高频率等位基因分布上有共同点 ,也有一定的独特性。这两种民族HLA DQA1 0 10 2和 0 5 0 1以及DQB1 0 2 0 1、 0 30 1、 0 4 0 2和 0 6 0 2基因分布频率上具有显著性差异。结论 :土族和撒拉族与北方诸民族的等位基因频率接近 ,而与其他南方诸民族的差异相对较大。

原发性IgA肾炎与HLA-DQB1等位基因遗传多态性的研究

应用ＰＣＲ／ＳＳＯ方法对５１例经肾穿刺证实ＩｇＡ 肾病患者和９６名健康对照人员进行了ＨＬＡ－ＤＱＢ１等位基因分型。结果显示ＩｇＡＮ 患者组中ＤＱＢ１０３０２基因频率明显高于正常对照组（Ｐｃ ＜ ０．００１，ＲＲ为８．２０）；ＩｇＡＮ患者组中ＤＲ４、ＤＱＢ１０３０２均为阳性的表型频率也明显高于对照组（Ｐ＜ ０．００１，ＲＲ为６．４３），而ＤＲ４阳性、ＤＱＢ１０３０２阴性的表型频率在两组中无差异。推测ＤＱＢ１０３０２等位基因可能与上海汉族ＩｇＡＮ的发病有一定的关联。

河南人群病毒性丙型肝炎与HLA多态性的关联研究

目的了解河南地区病毒性丙型肝炎和HLA多态性的相关性,为丙型病毒性肝炎的预防、治疗以及预后提供理论依据。方法本研究从河南某医院随机抽取110例临床上确诊为病毒性丙型肝炎的患者为研究对象,并以河南省红十字血液中心3 874名健康献血者为对照,采用聚合酶链-序列特异性寡核苷酸链技术(polymerse chain reaction-sequence-specific oligonucleotide,PCR-SSO)对HLA-Ⅰ类(A和B)和Ⅱ类(DRB1)基因进行分型。通过比较分析2组研究对象间HLA等位基因频率分布差异,找出HLA多态性和病毒性丙型肝炎的相关性。结果在低分辨水平上,A*03在健康对照组中更为常见;而A*29、B*51则在慢性HCV感染组中频率更高。这说明在HCV感染时,A*03可能是保护机体的基因,而A*29、B*51与促进感染发生具有一定的相关性。在高分辨水平上,A*03:01在健康对照组中更为常见;而A*29:01、A*33:01、B*07:05、B*13:01、B*27:03、B*44:02、DRB1*08:01、DRB1*14:01则在慢性HCV感染组中频率更高。这说明在HCV感染时,A*03:01可能是保护机体的基因,而A*29:01、A*33:01、B*07:05、B*13:01、B*27:03、B*44:02、DRB1*08:01、DRB1*14:01与感染发生具有一定的相关性。结论我们的研究反映了河南地区人群中病毒性丙型肝炎与HLA多态性的相关性,为丙型病毒性肝炎的预防、治疗以及预后提供理论依据。

人类白细胞抗原-DQB1与儿童十二指肠溃疡和幽门螺杆菌感染的相关性研究

目的探讨人类白细胞抗原(HLA)-DQB1等位基因与儿童十二指肠溃疡(DU)和幽门螺杆菌(H.pylori)感染的遗传关联性。方法采用非同位素标记的聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSO)杂交的方法,对上海地区汉族健康儿童80例、DU患儿58例的HLA-DQB1等位基因进行分型;并同时检测DU患儿H.pylori感染情况。结果在DU患儿中,HLA-DQB1×05031等位基因频率明显高于正常健康儿童(分别为:6.02%、0.63%,P<0.05,RR=9),而在H.pylori阳性和H.pylori阴性DU组之间差异无显著性。结论HLA-DQB1×05031与DU呈正相关,DU患儿与正常对照组儿童之间存在着遗传学的差异;虽然H.pylori感染是DU的重要致病因素,但HLA-DQB1×05031并不是通过H.pylori感染而影响DU的遗传易感性。

急性淋巴细胞白血病患者HLA-DRB1基因多态性研究

目的 :研究北方汉族人群HLA DRB1等位基因多态性与急性淋巴细胞性白血病 (ALL)患者的遗传关联。方法 :采用聚合酶链反应 序列特异性寡核苷酸探针 (PCR SSO)方法 ,对 184例北方汉族人群ALL患者和 3 5 78例健康脐带血样本HLA DRB1等位基因多态性进行研究。结果 :184例ALL患者HLA DR9( 18 2 1%,χ2 =16 .0 7,P <0 0 1,RR =1 74,EF =0 0 774) ,DR12 ( 14 13%,χ2 =7.12 ,P <0 0 1,RR =1 5 2 3,EF =0 0 49) ,DR14( 7 88%,χ2 =5 .194,P <0 0 5 ,RR =1 5 74,EF =0 0 2 87)和DR16 ( 4 89%,χ2 =8.5 2 7,P <0 0 1,RR =2 0 6 5 ,EF =0 0 2 5 )基因频率显著高于正常人群 ,而HLA DR7( 8 15 %,χ2 =7.0 78,P <0 0 1,RR =0 6 0 ,EF =0 0 86 )和DR15 ( 12 2 3%,χ2 =4.0 49,P <0 0 5 ,RR =0 710 9,EF =0 0 6 7)基因频率显著下降。结论 :HLA DR9、DR12、DR14、DR16等位基因对ALL患者有遗传易感作用 ,而HLA DR7、DR15等位基因对ALL患者有遗传拮抗作用。

HLA-DQA1、DQB1、DRB1 02,07,09等位基因及单倍型在华东地区汉族人群的分布

应用ＰＣＲ－ＳＳＯ方法，对华东地区汉族人群进行了ＨＬＡ－ＤＱＡ１、－ＤＱＢ１和ＤＲＢ１＊０２，０７，０９基因分型。ＤＱＡ１中以ＤＱＡ１＊０３０１基因频率最高（０．３８４４），其次为＊０５０１（０．１４０６）和０１０２（０．１２１９），＊０４０１最低（０．０２８１）；ＤＱＢ１中以ＤＱＢ１＊０３０３基因频率最高（０．２３４２），其次为＊０３０１（０．１８９９）、＊０６０１（０．１２０３）和＊０２０１（０．１１０８），＊０５０１、＊０６０４和＊０６０５最低（均为０．０１２７）；ＤＲ９基因频率较高（０．２３１０），ＤＲ２中ＤＲＢ１＊１５０１占７３％，基因频率为０．０８５４，未见＊１６０１。ＤＱＡ１、ＤＱＢ１及ＤＲＢ１等位基因之间存在显著的连锁不平衡。ＤＲＢ１＊０９０１－ＤＱＡ１＊０３０１－ＤＱＢ１＊０３０３、ＤＱＡ１＊０１０３－ＤＱＢ１＊０６０１等为常见单倍型。本资料与我国其他汉族人群资料有可比性，也存在一定差异。

成都地区儿童消化道疾病及HLA-DQB1多态性分析

目的:对行胃镜检出的慢性胃炎患儿行H.pylori检查,分析其检查阳性和阴性患儿的HLA-DQB1等位基因的遗传多态性。方法:病例对照法研究H.pylori阳性和阴性患儿,采用PCR-SSO杂交方法确定HLA-DQB1等位基因型别,病例对照为健康儿童。结果:胃镜检查242例,有上消化道疾病患儿222例,占91.74%。对86例慢性胃炎者行H.pylori检查,阳性57例,占66.28%;阳性患儿DQB1*0602等位基因阳性率低于阴性患儿(χ2=6.97,P<0.01),阳性健康儿DQB1*03032阳性率低于阴性健康儿(χ2=6.97,P<0.01)。结论:胃镜检查儿童上消化道疾病以慢性胃炎为主,H.pylori感染率超过2/3。DQB1*03032和DQB1*0602可能是抵抗H.pylori感染和相关性胃炎的遗传保护因素。