中国家驴TYRP1基因第二内含子多态性分析

为了探究TYRP1基因对中国家驴毛色的影响,试验采集410只不同毛色中国家驴的血液样本,采用聚合酶链式反应及单链构象多态性(polymerase chain reaction and single-strand conformation polymorphism, PCR-SSCP)方法检测中国家驴TYRP1基因第二内含子中的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)位点,对不同毛色中国家驴个体进行基因分型,并计算基因型频率和等位基因频率,分析TYRP1基因第二内含子多态性与中国家驴不同毛色之间的关系。结果表明:在中国家驴TYRP1基因第二内含子中检测到1个SNP位点(g.1 702A→G),该位点存在AA、AG、GG三种基因型;乌头、黑三粉、青三粉、灰三粉、白色和白化家驴的优势等位基因均为A。乌头、黑三粉和青三粉均为AA基因型频率最高,GG基因型频率最低;灰三粉为AA基因型频率最高,AG基因型频率最低(0)。在乌头、黑三粉、青三粉、灰三粉家驴中,AA基因型频率为灰三粉最高,然后依次为青三粉、黑三粉和乌头;以黑毛色为主色调的家驴(乌头、黑三粉、青三粉)GG基因型频率低于以灰毛色为主色调的家驴(灰三粉),有白毛混杂的黑三粉和青三粉的GG基因型频率低于纯黑的乌头。样本中的白色家驴和白化家驴各有2头,其基因型均为AA纯合子。说明随着中国家驴黑色被毛比例的增加,TYRP1基因g.1 702A→G位点的AA基因型频率逐渐降低,推测该位点可能与中国家驴毛色性状有关。

5个绵羊品种DLK1基因多态性与生长性状的关联性分析

为挖掘与绵羊生长性状相关的分子标记基因,探究DLK1多态性与绵羊生长性能之间的关联性。以240头不同品种绵羊(甘肃高山细毛羊、蒙古羊、藏绵羊和小尾寒羊各50头,滩羊40头)为试验对象,分别测定不同品种各年龄段绵羊生长性能指标;采集绵羊血液,提取DNA,运用PCR-SSCP方法结合DNA测序技术分析不同品种绵羊DLK1基因多态性;SPSS 20.0软件分析不同基因型与各绵羊品种不同年龄段生长性能之间的相关性。结果表明,不同品种绵羊DLK1基因均具有多态性,其中共检测到2个等位基因(A和B)和3种基因型(AA、AB和BB),优势等位基因和基因型分别为B和AB;DLK1基因第5内含子30412 bp处发生G→A单个碱基突变;G30412A突变位点与绵羊1月龄和3月龄的体质量和胸围具有显著相关性(P<0.05),且BB基因型个体表型优于AA基因型个体,突变位点与绵羊体长和体高无相关性(P>0.05)。总之,不同品种绵羊DLK1基因均存在第5内含子上G30412A突变位点,该位点显著影响绵羊1,3月龄的体质量和胸围,其可作为选择甘肃地方绵羊品种生产性状的候选基因。

绵羊iNOS基因突变与布鲁杆菌侵染率的关系分析

探究绵羊诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因多态性与布鲁菌易感性的关系。使用虎红平板血清凝集试验检测哈萨克羊布鲁菌患病情况。参考GenBank中绵羊iNOS基因序列,针对其15、16、17外显子及其邻近内含子片段设计引物,PCR扩增出目的基因片段。采用SSCP凝胶电泳检测不同基因型分型,DNA测序进行多态性检测,分析其SNPs与哈萨克羊布鲁菌易感性之间的关系。经检测发现阳性羊数67只,占比29.00%。在哈萨克羊iNOS基因的exon 15片段上有F15-C29002T和F15-G29076A两个多态位点。在exon 16片段上有F16-A30045G位点。在exon 17片段上有F17-T31213G位点。卡方检验表明,F15-C29002T和F15-G29076A多态位点与布鲁菌易感性的相关性不显著(P>0.05),F16-A30045G和F17-T31213G多态位点与布鲁菌易感性的相关性极显著(P<0.01)。哈萨克羊iNOS基因F15-C29002T和F15-G29076A与布鲁菌易感性没有相关性,F16-A30045G和F17-T31213G与布鲁菌易感性存在相关性。

中国家驴TYR基因第一外显子多态性分析

为了探究TYR基因对中国家驴毛色的影响,试验利用PCR-SSCP方法对14个品种408个毛色表型记录清晰的中国家驴TYR基因第一外显子的多态性与毛色的关系进行了研究,并根据其毛色进行分类,计算不同毛色的基因型频率和基因频率。结果表明:中国家驴TYR基因在第一外显子存在g.259A→G突变位点,由此产生了三种基因型AA、AG和GG,该位点为异亮氨酸到缬氨酸的非同义突变。AA基因型频率在乌头驴、黑三粉驴、青三粉驴和灰三粉驴中的分布逐渐降低,GG基因型频率分布逐渐提高,2头白驴均为GG基因型;等位基因A和G的频率在灰三粉驴中相等,在其他毛色中,等位基因A的频率大于G。说明随着中国家驴被毛中黑色被毛分布的减少,AA基因型频率逐渐下降,GG基因型频率逐渐提高,该位点与中国家驴黑白被毛的形成有关。

人恶性胸膜间皮瘤组织中K-ras基因点突变的研究

目的:探究云南省大姚县青石棉污染区恶性胸膜间皮瘤(MPM)患者组织K-ras基因点突变。方法:应用聚合酶链式反应(PCR)-单链构象多态性分析和PCR-DNA测序技术联合检测59例MPM患者和13例非MPM患者胸膜间皮组织中K-ras基因密码子12、13和61的点突变情况。结果:59例MPM患者和13例非MPM患者胸膜间皮组织中均没有发生K-ras基因点突变,K-ras基因点突变的检出率为0.0%。结论:云南省大姚县青石棉污染区MPM患者组织K-ras基因突变型的比例较低,提示K-ras原癌基因点突变在此地区MPM的诱导发生中并不发挥关键作用。

猪PIGR基因多态性分析

多聚免疫球蛋白受体(PIGR)是免疫球蛋白超家族的一员,在机体免疫过程中发挥重要作用。本试验以40个晋汾白猪、40个新山西黑猪、30个杜洛克×晋汾白猪、23个大白×晋汾白猪的猪耳基因组DNA为实验对象,采用PCR-SSCP技术对PIGR基因多态性位点差异性进行分析。结果显示,PIGR基因在晋汾白猪、新山西黑猪、杜洛克×晋汾白猪中有2种基因型:AA、AG,优势等位基因均为A,在大白×晋汾白猪中有一种基因型:AA。应用SAS8.1进行基因型分布差异分析,显示PIGR基因多态位点在晋汾白猪、新山西黑猪、杜洛克×晋汾白猪、大白×晋汾白猪的基因型分布差异极显著(P=0.0070,P<0.01)。本试验为发现减轻仔猪腹泻的优势基因提供理论基础。

人纤维性肿瘤p53基因与nm23基因的分子病理学研究

通过银染ＰＣＲＳＳＣＰ及ＡＢＣ法对８２例人纤维性肿瘤进行了ｐ５３基因及ｎｍ２３基因改变的研究。结果显示，ｐ５３基因点突变率为２３％，蛋白表达率为２２％，ＮＤＰＫ／ｎｍ２３蛋白表达率为６１％。随着肿瘤恶性程度的增加，ｐ５３基因点突变及蛋白表达增加，而ＮＤＰＫ／ｎｍ２３蛋白表达降低，在有转移的肿瘤中，这种现象更为明显。ｐ５３基因点突变及ＮＤＰＫ／ｎｍ２３蛋白表达可作为判断纤维性肿瘤恶性程度。

绵羊线粒体DNA控制区5’端序列PCR-SSCP与序列分析

通过绵羊线粒体ＤＮＡ控制区左功能域（５’端序列）ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和序列分析，发现小尾寒 羊、乌珠穆沁羊、湖羊、萨福克羊和夏洛来羊以及多赛特公羊与小尾寒羊杂交家系共２０２只绵羊 可归纳为两种类型：突变型和野生型，提示现代绵羊品种在起源上存在两种主要的进化途径。

活性污泥微生物菌群研究方法进展

活性污泥是活性污泥法处理污水系统的功能主体。人类对活性污泥微生物菌群的认识随着其研究方法的发展而逐步深入。传统培养方法只能检测到活性污泥中1％～15％的微生物。随着一系列基于免培养的分子生物学技术的出现，活性污泥中菌群的复杂性和多样性以惊人的速度被人们认识，大量依靠传统检测方法未能发现却在活性污泥中起关键作用的微生物逐渐被发现。许多模拟活性污泥菌群生存环境条件的现代培养技术开始发展，且已成功培养了一部分传统培养方法不能培养的细菌类群，这为研究基于免培养方法发现的大量新的微生物菌群的生理特性和作用机制提供了可能，也无疑将把人们对活性污泥菌群的认识推向一个新的层次．主要介绍活性污泥微生物菌群研究的一系列方法，从传统培养方法到基于免培养的现代分子生物学技术，再到现代培养技术，着重论述了现代分子生物学技术及其在活性污泥微生物菌群研究中的进展。

微生物生态学研究方法进展

微生物培养及显微技术作为鉴定微生物种群的手段有很大的局限性 ,因为环境中大多数微生物处于“存活但不能培养”的状态。因此 ,不依赖于微生物培养的生物化学以及分子生物学方法正被广泛地用于微生物生态学研究。主要介绍了荧光技术 ,基于 PCR的分析技术和

生长激素基因多态性与山羊体重性状的关系

以鲁北白山羊、波尔山羊以及波尔山羊与鲁北白山羊的杂交一代、回交一代共计224只山羊为材料,根据山羊生长激素基因5′调控区的序列(GenBank登录号:D00476)设计两对引物,用PCRSSCP法进行多态性分析。多态性片段的纯合基因型经克隆测序,发现共有5处突变。对突变位点产生的不同基因型与体重、体尺性状进行分析表明:第一对引物扩增片段波尔山羊AA型个体的初生重、周岁重显著高于BB型和AB型(P<0.05);杂交一代中断奶重、周岁重也以AA型偏高,但不同基因型间的差异均不显著(P>0.05);而鲁北白山羊BB基因型的体重相对于另外两种基因型的偏低,且断奶重的差异达到显著水平(P<0.05)。第二对引物扩增片段不同基因型对体重、体尺没有显著影响。由此初步推断生长激素基因可能是影响山羊体重性状的主基因或与主基因相连锁,可以用该位点对山羊体重性状进行标记辅助选择。

MyoG基因多态性与优质肉鸡屠宰性状和肉质性状的相关性分析

采用PCR-SSCP分析方法,对8个品系240只个体的大恒优质肉鸡进行了MyoG基因5′调控区的研究。结果表明,MyoG基因5′调控区存在A、B2个多态位点,结合测定的生产资料,分析了该基因5′调控区两个变异位点产生的基因型之间在屠宰性状和肉质性状的差异并进行了最小二乘分析和显著性检验。表明MyoG基因对鸡的肌纤维生长发育有显著的正相关。

优质细毛羊羊毛细度的候选基因分析

采用PCR-SSCP的分子标记技术,选择编码羊毛纤维组成蛋白基因中的KAP1.1、KAP1.3的部分序列、KAP6.1的外显子区作为候选基因,通过对其多态性的研究,探索将该基因作为候选基因来间接选择羊毛细度性状的可行性。得出其中在角蛋白辅助蛋白的多基因家族中的高硫蛋白辅助蛋白基因(KAP1.1、KAP1.3)中,位点W08667与羊毛细度有显著的相关性(P<0.05)。在甘氨酸酪氨酸角蛋白辅助蛋白中,外显子位点W06933的AA基因型和BB基因型与羊毛细度之间有显著的相关性(P<0.05)。

小尾寒羊高繁殖力候选基因ESR的研究

利用PCR-SSCP技术对高繁殖力绵羊品种(小尾寒羊、湖羊、德国肉用美利奴羊)和低繁殖力绵羊品种(多赛特羊、萨福克羊)的雌激素受体(estrogenreceptor,ESR)基因第一外显子部分序列进行单核苷酸多态性研究。结果表明:小尾寒羊、湖羊和德国肉用美利奴羊中存在3种基因型(AA、BB、AB),而在多赛特羊和萨福克羊中只存在两种基因型(AA、AB)。统计结果表明:湖羊、德国肉用美利奴羊、小尾寒羊、萨福克羊和多赛特羊A等位基因频率分别为0.672、0.786、0.846、0.857和0.867,B等位基因频率分别为0.328、0.214、0.154、0.143和0.133。测序结果表明:BB型和AA型相比在外显子1第363位发生1处碱基突变(C→G)。独立性检验表明:小尾寒羊和湖羊之间基因型分布差异极显著(P<0.01),湖羊和多赛特羊之间基因型分布差异显著(P<0.05),其他各个绵羊品种之间基因型分布差异均不显著。AB基因型和BB基因型小尾寒羊产羔数比AA基因型分别多0.51只(P<0.05)和0.7只(P<0.05)。研究结果表明:ESR基因可能是控制小尾寒羊多胎性能的一个主效基因或与之存在紧密的遗传连锁。

哈萨克绵羊MC1R和ASIP基因多态性及表达量与被毛颜色表型相关性的研究

旨在探究黑色素皮质受体-1基因(MC1R)和刺鼠基因(ASIP)多态性及其mRNA的表达量与哈萨克绵羊被毛颜色之间的关系。本研究利用PCR-SSCP和DNA测序技术,对168只哈萨克绵羊(62只黑色被毛,56只白色被毛及50只棕色被毛)的MC1R和ASIP基因的多态性进行检测,并分析突变位点与不同毛色之间的相关性,同时利用实时定量PCR技术检测3种毛色皮肤组织中这2个基因的表达量,分析基因的表达量与不同毛色之间的相关性。结果显示,MC1R基因的多态位点(P.M73K)与被毛颜色极显著的相关(P<0.01);ASIP基因的多态位点与被毛颜色没有相关性(P>0.05)。实时定量PCR检测黑色被毛中MC1R基因的表达量与白色被毛中差异极显著(P<0.01),与棕色被毛差异显著(P<0.05),ASIP基因的表达量在不同颜色被毛中没有显著差异(P>0.05)。该研究初步表明,MC1R基因是影响哈萨克绵羊被毛颜色的主效基因。

6个山羊品种高繁殖力候选基因BMP15多态性研究

骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic prote in 15,BMP15)基因为控制Belc lare和Cambridge绵羊高繁殖力的主效基因。采用PCR-RFLP和PCR-SSCP技术检测BMP15基因中与绵羊高繁殖力相关的两个突变位点在高繁殖力山羊品种济宁青山羊(130只母羊、20只公羊)以及低繁殖力山羊品种(波尔山羊30只母羊、文登奶山羊30只母羊、辽宁绒山羊30只母羊、内蒙古绒山羊50只母羊、北京本地山羊30只母羊)中的单核苷酸多态性,同时研究这两个突变位点对济宁青山羊高繁殖力的影响。结果表明,在6个山羊品种中都没有检测到BMP15的B2突变(C→T);检测到的BMP15的B4突变(G→T)在6个山羊品种中均呈现杂合子状态。这表明BMP15基因中影响Belc lare和Cambridge绵羊高繁殖力的突变位点对济宁青山羊的高繁殖力没有显著影响。

催乳素受体基因外显子10多态性及其与济宁青山羊高繁殖力关系的研究

设计5对引物,采用PCR-SSCP技术检测催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因外显子10及部分3′非翻译区在高繁殖力山羊品种(济宁青山羊)和低繁殖力山羊品种(辽宁绒山羊、波尔山羊和安哥拉山羊)中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对济宁青山羊高繁殖力的影响。结果表明:首次拼接出的山羊PRLR基因外显子10及部分3′非翻译区的核苷酸序列长度为1,118bp,与已公布的绵羊、牛、人PRLR基因mRNA相应序列的同源性分别为98.33%、93.92%、74.52%,与已公布的羊驼PRLR基因部分序列的同源性为78.29%。引物P1、P2与P4扩增片段具有多态性,其余2对引物的扩增片段不存在多态性。对于P1扩增片段,在济宁青山羊和辽宁绒山羊中检测到AA型和AB型,在安哥拉山羊中检测到AA型和AC型,在波尔山羊中只检测到AA型;克隆测序表明AB型与AA型相比有两处突变(186G→A和220T→C),分别导致氨基酸由天冬氨酸变为天冬酰胺、亮氨酸变为脯氨酸;AC型与AA型相比有1处突变(140A→G),该突变没有导致氨基酸变化;济宁青山羊AA和AB基因型之间产羔数的最小二乘均值差异不显著(P>0.05)。对于P2扩增片段,在济宁青山羊、辽宁绒山羊和波尔山羊中都检测到DD型和DE型,而在安哥拉山羊中只检测到DD型;克隆测序表明DE型和DD型相比有两处突变(52G→A和122G→A),其中122bp处的突变导致氨基酸由精氨酸变为甘氨酸;济宁青山羊DD和DE基因型之间产羔数的最小二乘均值差异不显著(P>0.05)。对于P4扩增片段,在济宁青山羊中检测到FF型和FG型,在辽宁绒山羊中检测到FF型和GG型,在波尔山羊中只检测到FF型,在安哥拉山羊中检测到FF型、FG型和GG型;克隆测序表明GG型和FF型相比在扩增片段的143bp处发生1处碱基突变(A→G),并导致氨基酸由蛋氨酸变为缬氨酸;FG基因型济宁青山羊产羔数最小二乘均值比FF基因型的多0.76只(P<0.05)。研究结果初步表明:PRLR基因可能是控制济宁青山羊多胎性能的一个主效基因或是与之存在紧密遗传连锁的一个标记。

布鲁氏菌PCR鉴定方法的研究与应用

目的采用PCR、PCR-SSCP方法对布鲁氏菌进行快速鉴定,并对其种、型鉴别。方法分析已发表布鲁氏菌属、种、型基因序列,寻找出不同布鲁氏菌的种、型特异性碱基分布规律,设计特异性引物,用于布鲁氏菌属、种、型的鉴定;根据聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析原理,建立PCR-SSCP方法,用于区分牛种A19疫苗株与其他型布鲁氏菌。结果所建立的PCR方法能高效、准确鉴定出布鲁氏菌,并能对其种、型进行区分;PCR-SSCP方法可将A19疫苗株从其他型布鲁氏菌中区分出来。结论利用PCR、PCR-SSCP方法能快速、准确地进行布鲁氏菌属、种、型以及疫苗株A19的鉴别,且简便、可靠,便于临床应用。

猪雌激素受体基因(ESR)点突变的PCR-SSCP检测

雌激素受体基因(ESR)是控制猪高产仔数的主效基因之一,具有明显的基因效应:BB型比AA型母猪胎总产仔数和产活仔数分别高出1 40～3 37和0 63～3 58头,是目前商品猪育种和生产中重点检测的主要基因之一。常规采用PCR -RFLPs方法区分该基因由点突变造成的3种不同的基因型。本研究建立1种基于PCR的SSCP(single-strand edconformationpolymorphism)方法对猪ESR该位置的点突变进行检测,具有操作简便、灵敏度高和不需要酶切等优点 。

秦川牛GHR基因SNPs及其与生长性状关系的研究

利用PCR-SSCP技术研究了136头秦川牛GHR基因第10外显子多态性,所研究的秦川牛群体GHR基因该座位存在多态性,发现了A、B、C3个等位基因,其基因频率依次为0.5956、0.2905、0.1140,并且群体处于Hardy-Weinberg平衡状态。对纯合基因型个体进行测序,测序结果,该座位存在两个突变位点。通过构建最小二乘线性模型,分析了生长激素受体基因与生长性状的关系,表明生长激素受体基因的AB基因型效应在部分生长性状上高于其他基因型,差异达到显著水平,提示GHR基因有可能作为秦川牛生长性状的侯选基因。