PCR-GeneScan法检测转基因产品

利用PCR -GeneScan技术检测转基因大豆和转基因玉米。该方法的特点是PCR扩增反应后 ,用Genescan扫描替代琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。用此方法共检测了 35S启动子、NOS终止子和抗除草剂 (草甘膦 )和抗虫 (Bt) 4种转基因成分。结果显示 ,本方法比传统的PCR -琼脂糖凝胶电泳法灵敏度高 ,重现性好 ,结果易判断 ,为分析检测转基因产品提供了一个实用。

PCR-GeneScan法检测遗传性聋相关基因GJB2 235 delC和mtDNA A1555G突变

目的:检测GJB2 235delC杂合突变和mtDNA A1555G突变。方法:对120例样本进行诊断试验,其中测序GJB2 235delC杂合突变样本16例,mtDNA A1555G突变17例。用PCR方法对目标片段进行扩增,PCR产物在3100DNA sequencer(ABI)上聚丙烯酰胺胶毛细管电泳,GeneScan、GeneMarker软件数据分析。结果:120例样本均得到检测结果,检出GJB2 235delC杂合突变样本17例,mtDNA A1555G突变17例,1例正常样本误诊为235delC杂合突变而出现假阳性。结论:PCR-GeneScan技术可以同时检测2种不同基因的突变,单管多重PCR和GeneScan荧光标记法结合是同时检测多种突变一种新的思路,而且可能是一种有效的方法。

微卫星三重PCR基因扫描技术在中国明对虾家系标识中的应用

在开发中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)微卫星引物的基础上,利用3对微卫星引物,克隆编号分别为H081、RS0683和RS1101,构建中国明对虾的三重PCR稳定扩增体系。在此基础上,进一步利用荧光标记引物的基因扫描技术(Genescan)对利用精荚移植技术建立的中国明对虾7个半同胞家系和16个全同胞家系进行识别研究。结果表明,该项技术可以准确地把7个半同胞家系的子代个体间、16个全同胞家系的子代个体间以及总的31个全同胞家系的子代个体间区别开,且能准确把这些家系产生的任意子代个体定位到各个家系。该技术可以满足大批量家系材料样本的分析,具有较好的应用价值。[中国水产科学,2007,14(1):59-66]

食品中转基因成分的检测

本研究建立了从多种精加工和深加工食品中提取 DNA的简便、易操作的方法。根据转基因农作物最常使用的外源基因设计引物，采用荧光 PCR－ GeneScan技术，在食品中检测出 35S启动子、 NOS终止子、 nptII标记基因以及目的基因 Cry和 EPSPS等转基因成分，并对 PCR产物进行测序或酶切分析确认，防止假阳性。

AML-M1相关TCR Vβ克隆性增殖T细胞的研究

目的 了解急性髓细胞白血病M1亚型 (AML M1 )患者外周血TCRVβ亚家族T细胞的克隆性分布特点。 方法采用RT PCR扩增 9例M1患者外周血的单个核细胞的TCRVβ2 4个亚家族基因 ,分析其TCRVβ亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析 ,了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果 不同标本中可检测到 2～ 5个Vβ亚家族T细胞 ,以Vβ2、Vβ3、Vβ1 7和Vβ1 9为常见 ,并在Vβ2、Vβ3、Vβ5、Vβ8、Vβ9和Vβ1 9中发现克隆性生长T细胞。结论 M1病人外周血TCRVβ亚家族T细胞表达呈现明显的选择性和克隆性增殖情况 ,这可能与M1细胞相关抗原有关 ,且克隆性增殖Vβ亚家族分布以个体特异性为主。

CML相关TCR Vα亚家族T细胞的克隆性分布特点

目的了解慢性粒细胞白血病（CML）患者外周血TCR Vα亚家族T细胞的克隆性分布特点。方法采用RT-PCR扩增10例CML患者外周血的单个核细胞的TCR Vα29个亚家族基因，分析其TCR Vα亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析，了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果不同病人外周血中所能检测出的Vα亚家族数量不等（1～21个），以Vα3、Vα4、Vα8、Vα10和Vα14为常见，并在Vα1、Vα2、Vα3、Vα4、Vα5、Vα8、Vα10、Vα12、Vα14、Vα15、Vα16、Vα19、Vα21和Vα23中发现克隆性生长T细胞。结论CML病人外周血T细胞的TCR Vα亚家族选用呈现明显的选择性并出现克隆性T细胞，这可能与机体对白血病相关抗原产生特异性免疫有关，且克隆性增殖Vα亚家族分布以个体特异性为主。

STR位点基因扫描在亲子鉴定中的应用

目的 探索一种易于标准化的亲子鉴定方法。方法 选用九个群体家系资料明确的四核苷酸重复的STR位点 ,用荧光标记物标记引物、PCR复合扩增、灵敏度更高的 3 77测序仪对 45例亲子鉴定案例进行电泳分型 ,并自动收集数据和分析 ,自动判定STR位点等位基因和基因型。结果 2 1个案例排除亲子关系 ,2 4例不排除亲子关系。结论 STR位点的基因扫描方法简便、省时、快速 ,灵敏度高 。

AML-M2a诱导TCR VβT细胞的克隆性增殖和细胞毒作用

目的:了解急性髓性白血病(AML)M2a细胞诱导的体外增殖T细胞的特异性杀伤作用和克隆性增殖情况。方 法:利用肿瘤细胞-T淋巴细胞混合培养方法(MLTC),分别收集3例经AML-M2a细胞体外诱导不同扩增时间的健康人T细 胞,利用LDH释放方法分析其特异性细胞毒作用,同时利用RT-PCR和基因扫描方法分析经AML-M2a细胞诱导前后T细胞 的24个TCR Vβ亚家族基因的表达和克隆性情况。结果:在培养第12天和第21天时,1例AML-M2a细胞诱导的3例健康人 T细胞对该诱导细胞的平均杀伤率分别为39.88±7.79％和62.14±9.79％,而对AML-M2a患者和健康人外周血T细胞均无 杀伤作用。TCR Vβ谱系分析发现诱导后3例健康人T细胞均出现Vβ16的克隆性增殖。结论:AML-M2a细胞可诱导健康人 T细胞成为具有克隆性增殖的特异性CTL,并以Vβ16的克隆性增殖为主。

单管PCR扩增鉴定ABO血型基因型

本研究目的是建立单管PCR扩增鉴定ABO血型基因型的方法。采用盐析法抽提DNA,应用单管PCR扩增结合基因扫描技术对ABO血型的基因型进行鉴定。结果表明:用本方法鉴定出的132例样本的ABO基因型结果与其血清学结果完全符合,A、B、O基因频率分别为0.205、0.159、0.636,其中AA基因型8例(6.1%),AO基因型31例(23.5%),AB基因型7例(5.3%),BB基因型6例(4.5%),BO基因型23例(17.4%),OO基因型57例(43.2%)。结论:单管PCR扩增结合基因扫描技术能鉴定ABO血型基因型。

免疫球蛋白基因重排在滤泡性淋巴瘤中的应用

目的探讨免疫球蛋白(Ig)基因重排检测在滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma,FL)不同分级中的应用。方法采用PCR-GeneScan法检测广东省人民医院病理科2016年9月~2019年2月收集的39例FL免疫球蛋白重链/轻链(IgH/L)基因重排,统计分析克隆性IgH/L基因重排与肿瘤分级的关系。结果39例FL石蜡标本中29例IgH/L基因重排阳性,其中FL1基因重排的检出比例为8/15,FL2、FL3重排的检出比例分别为5/7、16/17。Spearman等级相关检验和χ2检验结果显示,IgH/L基因重排与FL的分级呈正相关(rp=0.376,P<0.001),IgH/L基因重排率随着肿瘤分级的增加而增加,FL1、FL2和FL3中表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论利用Ig基因重排检测对于滤泡性淋巴瘤的诊断有辅助性作用,并且利用PCR-GeneScan法可提高重排检测的敏感性和特异性,对于滤泡性淋巴瘤的早期诊断有较高的价值。

bcr-abl多肽诱导健康人外周血αβ^+T细胞克隆性增殖

目的分析bcr-abl多肽诱导健康人外周血T细胞TCR Vα和TCR Vβ基因选用和克隆性增殖情况,了解bcr-abl多肽相关的αβ+T细胞克隆。方法利用T细胞液体培养法,应用bcr-abl多肽(KQSSKALQR)联合IL-2+抗CD3单抗+抗CD28单抗体外诱导T细胞(HLA-A0201限制性)扩增,同时设不含多肽诱导为对照组。收集诱导后第10、18天的细胞,RT-PCR-基因扫描分析其TCR Vα和Vβ基因谱系变化特点。结果①诱导前健康成年供者的PBMCs可检测到20个TCR Vα亚家族(其中Vα6、Vα14、Vα16亚家族呈寡克隆性)和22个TCR Vβ亚家族(其中Vβ21亚家族呈寡克隆性);②与诱导前相比,TCR Vα亚家族数目无明显变化,诱导第10、18天对照组中TCR Vα亚家族均表达21个亚家族,实验组中分别检测到22、18个TCR Vα亚家族;而TCR Vβ亚家族在诱导后则明显减少,诱导第10、18天对照组中分别检测到15、12个TCR Vβ亚家族,实验组中分别检测到13、11个TCR Vβ亚家族;③bcr-abl多肽诱导后,TCR Vα11呈克隆性增殖趋势,Vβ22和Vβ24亚家族T细胞由多克隆性演变为寡克隆性增殖趋势。结论获得bcr-abl多肽诱导的特定正常αβ+T细胞(HLA-A0201限制性)克隆性增殖,这些选择性增殖的T细胞可能是具有针对bcr-abl抗原特异的T细胞。