空肠弯曲菌、沙门氏菌的16SrDNA的PCR-RDB检测方法的研究

目的 建立一种可一次性检测多种腹泻致病菌的快速诊断方法。方法 根据原核生物 16SrDNA独特的序列特性 ,以 16SrDNA为模板 ,用PCR结合RDB方法来检测腹泻病原菌。结果 肠道常见致泻病原菌均可扩增出同样大小的片段 ,而特定的病原菌仅与其相应的探针杂交 ,敏感性试验可检测出约 12 0 μg/ml的DNA。 结论 利用原核生物 16SrDNA序列特异性而建立起来的PCR -RDB方法具有特异性高、重复性好、灵敏度高等优点 。

基于PCR-RDB技术的膜芯片开发并应用于遗传性非综合征耳聋检测

目的研究基于PCR-RDB技术的膜芯片开发并应用于遗传性非综合征耳聋检测效果。方法以2015年11月至2017年1月期间东莞市儿童医院1865例新生儿为研究对象,采集足跟血并提取基因组DNA。根据文献报道的中国人群常见耳聋易感基因的热点突变,选取4个基因(GJB2、GJB3、SLC26A4和12S r RNA)20个突变位点,通过PCR-RDB方法,对新生儿体内4个基因之中9个高发突变位点相应基因片段进行PCR扩增,且于扩增产物两端作出生物素标记,同时在膜条上固定9个不同待检位点的突变阵列与正常探针阵列,将正常阵列作为对照,当扩增产物以及探针杂交后,通过显色反应与是否存在杂交信号判断基因突变情况。结果检出耳聋基因突变携带新生儿62例,携带率为3.32%,其中杂合突变60例(3.22%),复合杂合突变1例(0.05%),纯合突变1例(0.05%)。在阳性检出样本中,GJB2及SLC26A4基因突变占总阳性突变的83.87%(56/62)。阳性突变位点最常见的是GJB2基因的235del C突变,共检出31例(50%,31/62),其次是SLC26A4基因的IVS7-2A>G(19.35%,12/62)。本研究检出纯合突变样本中,1例为12S rRNA基因的1555A>G突变;235de1C杂合突变基因样本以及1VS7-2A>G杂合突变基本样本各位点显色具有均一性。结论经临床研究验证,基于PCR-RDB技术的膜芯片可用于遗传性非综合征耳聋的检测,具有较高准确性与重复性。

PCR-RDB技术在HCV分型中的应用效果观察

目的观察聚合酶链式反应-反向点杂交法(PCR-RDB)技术在丙型肝炎病毒(HCV)分型中的应用效果。方法选取2016年5月至2018年9月南阳市第一人民医院经PCR检测HCVRNA含量>1×103U·mL^-1血清样本146份[其中肝硬化(LC)3例,肝癌(HS)16例,慢性丙型肝炎(CHC)44例,无临床症状HCV携带者83例],均借助PCR-RDB技术检测HCV基因型,并对其检测结果进行统计学分析。结果146份血清样本全部分型成功,包含10例2a和1b混合型、60例2a型、1例3b型、2例3a型、72例1b型和1例6a型,其中以1b型、2a型居多;CHC、HS、LC、无临床症状HCV携带者等疾病在HCV基因型1b型、2a+1b混合型、3b型、3a型、6a型、2a型所占比例比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论PCR-RDB技术适用于临床鉴别HCV基因型别,具有操作简便,结果准确可靠等优势,可为临床确定诊治方案提供参考。

基于PCR-RDB法对陕西地区HCV基因型别的研究

目的探讨聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)-反向点杂交法(reverse dot blot,RDB)在陕西地区丙型肝炎病毒基因分型中的应用。方法选取陕西地区610例丙型肝炎患者,利用PCR-RDB法进行丙肝病毒基因型检测,并使用SPSS对检测结果进行统计学分析。结果 610例丙肝患者检出1b型273例(44.75%),2a型286例(46.89%),3a型30例(4.92%),3b型11例(1.80%),6a型10例(1.64%);各基因型间的患者性别比例的差异具有统计学意义(P<0.05);与其他基因型别相比,HCV 3a型患者年龄水平最低,差异显著(P<0.05)。结论陕西地区丙肝病毒以2a、1b型为主,患者性别及年龄与所感染HCV型别有关联性;PCR-RDB技术在丙型肝炎病毒基因分型中的应用有利于HCV分型在临床上的推广。

应用PCR-RDB技术对β地中海贫血进行快速产前基因诊断

目的 为了降低 β地中海贫血重症患儿的出生率 ,达到优生的目的。 方法 对 5 2 7对孕妇及其配偶进行血液学筛查 ,用 PCR- RDB法对夫妇双方均为 β地中海贫血携带者的孕期夫妇进行产前基因诊断 ,并取脐血验证结果。 结果 共筛出 β地中海贫血阳性患者 2 8例 ,轻型 β地中海贫血阳性率为 2 .6 6 %。男女阳性率为 1∶ 1.15 ,4例产前基因诊断中 ,确定正常胎儿 1例 ,重症胎儿 3例(纯合子 1例 ,双重杂合子 2例 ) ,重型 β地中海贫血胎儿于诊断后两周内终止妊娠。 结论 PCR-RDB技术可有效减少 β地中海贫血重症患儿的出生 ,具有重要的优生学意义。

PCR-RDB技术检测中国籍OSCC及OLK患者中的HPV

目的:研究口腔鳞癌(OSCC)及口腔白斑(OLK)中国患者中的人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)感染率。方法:提取35例OSCC及35例OLK患者病损组织DNA,通过聚合酶链式反应结合反向点杂交技术(Polymerase Chain Reaction-Reverse Dot Blot Hybridization,PCR-RDB)检测23型HPV DNA,包括HPV6,11,16,18,31,33,35,39,42,43,45,51,52,53,56,58,59,66,68,73,81,82和83。结果:35例OSCC及35例OLK患者中HPV DNA均为阴性。结论:HPV感染在中国的OSCC及OLK患者中非常见分子事件。

基于PCR-RDB的地中海贫血基因复合型检测方法的临床应用

目的探讨基于PCR结合反向斑点膜杂交技术(PCR-RDB)的地贫基因复合型检测方法的准确性、稳定性、临床应用优势及前景。方法收集165份已知不同地贫基因型和地贫阴性血液标本,采用基于PCR-RDB的地贫基因复合型检测方法进行检测;另外与现有临床地贫基因分开检测的方法进行对比实验,采用两种方法同时检测300例血液和干血斑标本。结果 165份血液标本的PCR-RDB复合型检测方法的结果和已知基因型完全一致。两种方法对比实验的检测结果也完全一致。300份临床标本中检测结果为:地贫阴性标本235例,占78.3%;地贫阳性标本65例,占21.7%,阳性标本中缺失型α地贫33例,非缺失型α地贫2例,β地贫25例,α地贫复合β地贫标本5例。结论基于PCR-RDB的地贫基因复合型检测方法可以准确、稳定性地进行地贫缺失型突变和点突变的检测,具有实验操作更加简捷和方便等优点,并提高了检测通量,在临床和地贫防控工作中将得到广泛的推广应用。

9647例宫颈脱落细胞人乳头瘤病毒感染情况分析

目的探讨清远地区女性宫颈脱落细胞人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况,分析不同年龄段HPV感染率和感染特点。方法收取清远市人民医院就诊者和体检者宫颈上皮脱落细胞9 647例,采用PCR-RDB技术进行HPV基因分型检测。结果 19 647例样本中,共有1 960例检出HPV感染,HPV总感染率为20.32%,各年龄组的感染率差异有统计学意义(2=75.58,P<0.01);HPV感染率与年龄关系呈U字曲线趋势。21 960例阳性样本中,单一感染1 497例(76.10%),多重感染436例(23.90%),多重感染以二重感染为主;多重感染构成比与年龄的关系呈现U型曲线趋势;中青年的多重感染构成比最低。31 960例阳性标本中,高危基因型HPV(HR-HPV)感染1 635例,HR-HPV感染率为16.94%,占感染总人数的83.42%。HR-HPV感染率与年龄关系呈U字型曲线趋势;高危型HPV感染构成比与年龄关系呈钟形曲线趋势。结论清远地区女性宫颈脱落细胞HPV总感染率为20.32%,人群感染以单一基因型感染、HR-HPV感染为主;多重感染以二重感染为主;该地区人群HPV感染率、多重感染率、多重感染构成比、HR-HPV感染率与年龄关系呈U字型曲线趋势;高危型HPV感染构成比呈钟形曲线趋势。

重型β地中海贫血患者突变基因及同种血型抗体频率调查

目的了解重型β地中海贫血(β-TM)患者同种血型抗体类型与基因突变的频率。方法用PCR-RDB和微柱凝胶法检测定期输血的280名重型β-TM患者基因型和同种抗体类别。以卡方检验分析其基因与同种血型抗体频率,以累计输血量40 U为界值探讨输血量与患者同种抗体产生的关系。结果本组重型β地中海贫血患者中,CD41-42基因型占51.79%(145/280),IVS-2-654基因型占35.36%(99/280);检出同种血型抗体27例、检出率9.64%(27/280),其中Rh血型系统抗体85.19%(23/27)、Kidd 11.11%(3/27)、MNSs U 3.70%(1/27)。输血量<40U的患者产生有临床意义的同种抗体的比例5.90%(8/135),输血量>40 U患者产生同种抗体的比例为13.10%(19/145)(P<0.05)。结论随着输血量的增加,重型β-TM患者产生同种血型抗体的比率相应增加;CD41-42和IVS-2-65基因突变型重型β-TM患者产生同种抗体的几率高,因而这些患者输血应采用Rh表型同型血液,以减少同种抗体的产生频率,为长期配合性输血创造条件。

佛山地区孕产妇G6PD基因缺陷调查及干预模式研究

目的：调查佛山地区孕产妇葡萄糖‐6‐磷酸脱氢酶（G6PD ）缺陷状况，探讨干预指导模式的效果。方法选择2013年4～12月到该院产检的孕产妇及其丈夫各1646例，以反向膜杂交法检查夫妇双方的G6PD基因、以生化仪法检测G6PD活性，分析两性基因突变率、酶活性缺陷率，给予遗传咨询指导并跟踪随访新生儿G6PD基因突变与酶活性低下情况。结果 G6PD基因突变率男性4．7％，女性2．3％；G6PD酶活性缺陷率男性3．5％，女性1．6％；G6PD 基因突变发生较高的位点是 G1376T （36．2％）、G1388A （21．6％）、A95G （13．7％）和 G1024T （11．2％）。结论佛山地区是G6PD缺陷高发地区，G1376T、G1388A、A95G和G1024T是主要的点突变类型。

乙型肝炎病毒基因分型及其与肝脏疾病的关系

目的调查川南地区乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因型的分布,探讨其临床价值。方法采用PCR-反向点杂交法对172例HBV病毒载量≥1.00×104IU的乙肝患者进行HBV基因分型,了解基因型在不同临床类型肝病中的分布及其与患者肝功能、HBV病毒载量、年龄、性别之间的关系。结果①共检测了172例患者,成功分型166例,占96.51%。其中B型98例,占56.98%;C型60例,占34.88%;B/C混合型8例,占4.65%;未知型6例,占3.49%;②B型多见于无症状乙肝病毒携带者(ASC,占59.18%);在急、慢性肝炎(AHB、CHB)、肝硬化患者(HC)、肝细胞癌(HCC)等疾病中,C基因型比例明显高于ASC(P<0.05),但几者之间差异无显著性(P>0.05);③C基因型患者年龄高于B基因型患者(P<0.05);C基因型患者肝功能指标ALT、TBiL均高于B基因型患者(P<0.05),但GGT、HBV载量、性别比差异无显著性(P>0.05)。结论川南地区乙型肝炎病毒基因型以B型为主,C型次之,B型和C型共占91.86%,其他型别偶见;C基因型可能与乙肝患者肝功能损害和严重肝脏疾病的发生有关而与患者性别、HBV病毒载量高低无关。

深圳市宝安区妇女人乳头瘤病毒感染现状及影响因素分析

目的：了解深圳市宝安区女性宫颈人乳头瘤病毒（HPV）感染及基因分型情况，探讨影响HPV感染的相关因素，为本地区更有效地开展宫颈癌防治提供依据。方法：采用聚合酶链式反应一反向斑点杂交法（PCR—RDB）对2015年1～12月自愿参加宫颈癌筛查的1652例女性进行23种HPVDNA检测，同时对筛查对象的一般情况进行问卷调查。结果：1652例筛查对象中，HPV阳性266例，阳性率为16．10％，其中61例为混合型感染。高危型HPV感染最常见的亚型为HPV52、HPV16亚型，低危型HPv感染最常见的亚型为HPV43亚型。单因素分析结果示：年龄、户籍类型、文化程度、家庭经济收入、初次性行为年龄、初产年龄、怀孕次数、性伴侣数、伴侣性伴侣数为HPV感染的影响因素（P〈0．05）。多因素非条件Logistic回归分析结果表明：家庭经济收入、初次性行为年龄、怀孕次数、性伴侣数为影响HPV感染的危险因素（P〈0．05）。结论：HPV感染多见于家庭月平均收入低，初次性行为年龄早，怀孕次数多，性伴侣数多的女性人群，应重视对此类人群的筛查。

桂西地区869例慢性乙型肝炎病毒基因分型与耐药突变分析

目的乙型肝炎病毒(HBV)基因型及耐药突变情况与疾病进展和药物疗效密切相关,有效开展其测定具有重要意义。文中旨在检测桂西地区869例HBV的基因型及耐药突变基因,为临床抗HBV治疗提供依据。方法收集2016年1月至2018年3月右江民族医学院附属医院感染性疾病科门诊及住院的来自桂西地区且HBV DNA>1.0×103IU/mL的869例慢性乙型肝炎病毒携带(CHB)患者。采用PCR和反向点杂交法技术检测其HBV基因分型与耐药突变情况。结果共检出7种基因分型,分别为B基因型304例(34.98%),C基因型268例(30.84%),D基因型147例(16.92%)及B+C基因型、B+D基因型、C+D基因型、B+C+D基因型。63例患者发生耐药突变,耐药突变率为7.25%,其中C基因型31例(49.21%),B基因型19例(30.16%);突变模式有rt204I、rt181V、rt236T、rt180M+rt204V+rt204I等14种,其中rt180M+rt204V突变频率最高(17.46%)。B、C基因型的总体突变率(19%、31%)差异有统计学意义(P<0.05)。结论桂西地区CHB患者HBV基因型多样,主要以B、C基因型为主,且耐药突变率较高,突变模式复杂,这一结果为桂西地区临床抗HBV治疗提供了依据。

铜陵地区乙型肝炎病毒基因型分布与临床的相关性研究

目的 了解铜陵地区乙型肝炎病毒（HBV）基因型分布,分析该地区HBV不同基因型别与肝功能损害、病毒复制水平及血清标志物的关系,探讨不同基因型的临床意义.方法 采用聚合酶链式反应-反向点杂交法（polymerase chain reaction-reverse dot blot,PCR-RDB）对铜陵地区228例ABV阳性感染者的血清分别进行HBV基因型的分型、HBV-DNA载量以及HBV血清标志物和肝功能等的检测,并结合其指标进行相关性分析.结果 在228份患者的血清样本中,226份样本成功分型,其中B型54.4％（124/228）,C型37.3％（85/228）,B/C混合型7.5％（17/228）,2例未检出占0.88％（2/228）.在各临床分型的慢性HBV感染者中,B基因型在慢性乙型肝炎组（CHB）、肝硬化组（LC）和原发性肝细胞癌组（HCC）中的构成比依次为61.8％,36.4％和60％,C基因型依次为25.7％,63.6％和40％,B型在CHB组占优势（χ^2=19.253,P=0.001）;C型在LC组占优势,差异有统计学显著性意义（χ^2=9.818,P＜0.001）.C基因型HBV-DNA载量明显高于B型及B/C混合型,差异具有统计学非常显著性意义（P＜0.01）.在不同基因型HBV患者中,除了性别,男性高于女性外,患者的生化指标经方差分析各组差异均无统计学显著性意义（P＞0.05）.结论 铜陵地区HBV基因型主要以B型为主,对HBV基因分型有助于了解患者的病情,对HBV感染患者的临床诊治具有重要指导意义.

贵州西江苗族β地中海贫血筛查及基因分析

目的 对贵州省西江苗族进行了一次大样本的 β地中海贫血筛查及基因分析。方法 采用 Hb F和Hb A2 定量测定对人群进行 β地中海贫血初筛 ,然后用常规酚—氯仿抽提法提取 β地中海贫血携带者 DNA,再经PCR—反向点杂交法对β珠蛋白进行突变基因分析。结果 在受检的 890人中 ,共检出β地中海贫血携带者 37例 ,发生率为 4.16 %。经基因分析该地人群的β地中海贫血基因突变类型主要为 CD41 - 4 2 (TCTT)移码突变(5 4.1% )和 CD1 7(A→ T)无义突变 (4 5 .9% )。结论 完成对贵州西江苗族进行的β地中海贫血调查 ,获取其流行病学资料及其基因类型特征 ,对该地人群进行婚姻指导、产前诊断。

少数民族β-地中海贫血基因突变型分布特点

目的 了解 β-地中海贫血在贵州省苗族、水族、瑶族中的基因突变型特点、基因型频率及分布规律。 方法 采用“红细胞休克 -管定量法”测定红细胞脆性 ,HbF和HbA2定量等方法对人群进行 β -地中海贫血初筛 ,用常规酚 -氯仿抽提法提取 β地中海贫血携带者DNA ,经PCR -反向点杂交法对β株蛋白进行突变基因分析。 结果 受检 2 5 6 6人中 ,共检出 134例 β -地中海贫血携带者 ,总检出率为 5 2 2 % ,其中苗族、水族、瑶族检出率分别为 4 72 % ,6 0 6 % ,4 4 5 %。经β珠蛋白突变基因分析 ,在这 3个民族中仅检出两种中国人常见突变型CD41-42 和CD17,检出率分别为 88 1% ,6 0 0 % ,2 3%。结论 在贵州省少数民族中 β -地中海贫血有很高的发病率 ,基因突变类型具有显著的民族特征 。

利用PCR结合膜芯片技术检测结核分支杆菌的实验研究

目的:探讨聚合酶链反应(PCR)结合膜芯片技术用于检测结核分支杆菌的方法。方法:标记生物素的特异性引物,扩增17株菌标本IS6110插入序列的245bp目的基因,结合膜芯片杂交检测结核分支杆菌基因。结果:15株结核分支杆菌标本中有12株扩增出245bp目的基因,2株大肠杆菌及阴性对照标本PCR扩增结果为阴性。经膜芯片杂交,12株结核分支杆菌标本中有11株显色结果为阳性,其余显色结果为阴性。PCR结合膜芯片检测结核分支杆菌的灵敏度为73.3%,特异度为100%。结论:PCR结合膜芯片技术是一种具有发展潜力的检测结核分支杆菌的方法。

贵州江口土家族β-地中海贫血筛查及基因分析

目的分析贵州省江口县土家族人群β-地中海贫血(β-thalassemia)的发病状况、基因突变类型及特点。方法随机选取贵州省江口县太平乡土家族居民485名,抽取静脉血,采用血红蛋白电泳分析法、一分钟碱变性法初筛β-地中海贫血阳性参考指标,同时应用全自动血细胞分析仪进行红细胞计数(RBC)等7项血液学指标分析;用常规酚-氯仿抽提法提取筛检阳性者DNA,经PCR/反向斑点杂交(PCR/RDB)技术确定基因突变类型。结果江口县土家族人群中,共检出β-地中海贫血杂合子携带者13例,检出率为2.68%。基因分析显示,该人群β-地中海贫血基因突变类型主要为CD41-42(TCTT)移码突变9例,占69.2%,CD17(A→T)无义突变3例,占23.1%和βE(Codon26)1例,占7.7%。结论贵州省江口土家族β-地中海贫血具有自身特点,检出率较高,可能与当地土家族通婚区域半径小有关,应深入研究该地区β-地中海贫血患病特征,指导当地积极预防该病,提高少数民族人口素质。