PD098059对IL-6诱导的M1细胞生长停止与终末分化的影响

为探讨 IL- 6在 M1细胞中激活 Ras/MAPK通路的意义 ,以 MEK激酶的特异性抑制剂PD0 980 59阻断 Ras/MAPK通路的组成型激活及诱导激活 ,观测 PD0 980 59对 IL - 6诱导的 M1细胞生长停止及终末分化的影响 .发现 PD0 980 59可抑制 M1细胞的生长 ,并加强 IL- 6对 M1细胞的生长抑制效应 .PD0 980 59不影响 IL - 6诱导的 M1细胞形态改变及 CD1 1 b表达 ,但可显著降低 IL-6诱导的 M1细胞获得吞噬功能 .说明 Ras/MAPK途径的组成型激活及诱导激活是有重要意义的 ,它与 JAK- STATs途径既相互拮抗又相互协同 ,共同组成了 IL- 6对急性髓系白血病细胞生物学效应的精密调控作用 .

PD098059对长春新碱诱导胃癌细胞MGC803凋亡的调节作用

目的:探讨MAPK/ERK kinase(MEK)抑制剂PD 098059对长春新碱(VCR)诱导胃癌细胞系MGC 803细胞凋亡的影响。方法:用流式细胞术对VCR及PD 098059作用下的细胞进行周期解析,观察细胞周期的变化。结果:通过细胞的周期解析发现VCR和PD 098059共同作用的细胞其凋亡比例为35.61％,显著高于VCR单独作用引起的凋亡(18.41％)(P<0.05)。结论:PD 098059可能通过抑制MAPK的活性、抑制胃癌细胞增殖,对VCR诱导MGC 803细胞的凋亡具有协同作用。

PD098059抑制血管紧张素Ⅱ对心肌细胞活力的影响

目的 :观察分裂酶原激活的蛋白激酶系统 (MAPK)特异阻断剂PD0 980 5 9对心肌细胞活力与增殖能力的影响 ,探讨细胞内信号传递通路的阻断是否能有效地干预细胞能量代谢 ,为寻找新的心衰的预防与治疗药物提供实验依据。方法 :利用培养的乳鼠心肌细胞 ,根据活细胞线粒体在能量代谢过程中可作用于MTT产生蓝紫色结晶产物formazan这一原理 ,应用比色法测定血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对培养心肌细胞的活力的影响和PD0 980 5 9的干预作用。结果 :与对照组相比 ,AngⅡ在 12h之内使formazan产物的OD值逐渐上升 ,12h达到高峰 ,此后开始下降 ,至 2 4h已低于正常水平 ,它们的OD值之间均有显著的统计学差异 (P <0 0 5或 0 0 1) ,PD0 980 5 9可以显著的拮抗AngⅡ对心肌细胞活力的影响。 结论 :该结果提示PD0 980 5 9可以显著的拮抗AngⅡ对心肌细胞活力的影响。

长春新碱对MGC803细胞多药耐药的短期诱导及PD098059、myr-ψPKC对其耐药的逆转

本实验采用长春新碱(VCR)在短期内对胃癌细胞株MGC803的作用,观察其多药耐药(MDR)相关基因表达的变化.并通过特异性促分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)/ERK蛋白激酶(MEK1/2)抑制剂PD098059及特异性蛋白激酶C(PKC)抑制剂myr-ψPKC,观察其对MDR的影响.

MAPKs阻断剂对乳鼠心肌细胞能量代谢的影响

目的 :在原代培养的心肌细胞上观察分裂酶原激活的蛋白激酶系统 (MAPKs)特异阻断剂PD0 980 5 9对心肌细胞活力与增殖能力的影响 ,旨在探讨细胞内信号传递通路的阻断是否能有效地干预细胞能量代谢 ,为寻找新的心衰预防与治疗药物提供实验依据 .方法 :利用培养的乳鼠心肌细胞 ,根据活细胞线粒体在能量代谢过程中可作用于MTT产生蓝紫色结晶产物formazan这一原理 ,应用比色法测定血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对培养心肌细胞的活力的影响和PD0 980 5 9的干预作用 .结果 :AngⅡ在 12h内使formazan产物的值逐渐上升 ,12h达到高峰 (A值 :0 .36 4 3± 0 .0 2 4 1) ,此后开始下降 ,至2 4h已低于正常水平 (A值 :0 .2 785± 0 .0 912 ) ,它们的值之间均有显著性统计学差异 (P <0 .0 5或 0 .0 1) ,PD0 980 5 9可以显著地拮抗AngⅡ对心肌细胞活力的影响 .结论 :PD0 980 5

肾上腺髓质素对于喉癌细胞的增殖作用

目的观察肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)对于喉癌细胞系Hep-2的促进增殖作用。方法采用氚胸腺嘧啶(H3-thymidine,H3-TDR)掺入方法观察不同药物作用下ADM对于喉癌细胞系Hep-2增殖的影响。结果在ADM浓度为1×10-10、1×10-9、1×10-8mol/L时均可以显著促进Hep-2细胞增殖(t=-2654.8、P<0.01,t=-1732.3、P<0.01和t=-836.5、P<0.01),三组浓度的ADM促进Hep-2增殖作用差别有显著性(F=18.5,P<0.01),且有剂量依赖性(r=0.9996,P<0.01)。加入ADM受体阻断剂ADM(22-52)Hep-2细胞的H3-TDR掺入量与单纯ADM孵育组掺入量差别有显著(t=2721.5,P>0.05)。Hep-2细胞经ADM孵育后分别加入丝裂素活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen-acti-vatedproteinkinase/extracellularsignal-regulatedkinase,MAPK/MEK)阻断剂PD098059、蛋白激酶A(proteinkinaseA,PKA)阻断剂H-89、H3-TDR掺入量与单纯ADM刺激组掺入量差别有显著意义(t=2723.8,P<0.01、t=2095.2,P<0.01〉;但加入P38MAPK通路阻断剂SB202190后,H3-TDR掺入量与单纯ADM刺激组差别无显著性。(t=121.83,P>0.05)。结论肾上腺髓质素对于喉癌细胞Hep-2的增殖有促进作用,阻断ADM受体后Hep-2细胞生长受抑制,ADM促进Hep-2细胞生长信号可以通过MEK、PKA通路起作用,未发现p38MAPK参与该作用。

MAPK抑制剂在高浓度葡萄糖介导大鼠动脉血管平滑肌细胞增殖反应中的调节作用

目的:研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂在高浓度葡萄糖(HG)介导的大鼠动脉平滑肌细胞增殖反应中的作用及其可能的调控机制。方法:将HG处理的血管平滑肌细胞给予MAPK特异性抑制剂PD098059预处理,通过测定3H-亮氨酸和3H-胸苷掺入率,观察其对细胞蛋白合成、DNA代谢及细胞增殖的影响。结果:HG(25×10-3mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸和3H-胸苷掺入率明显增高;这种作用可被MAPK特异性抑制剂PD098059所抑制。结论:MAPK激活在HG致平滑肌细胞增殖反应中具有明显促进作用,但这种作用可被MAPK信号途径的特异性抑制剂所抑制。

ERK1/2介导姜黄素抑制STS诱导神经元毒性损伤的作用

目的观察姜黄素对星形孢菌素(staurosporine,STS)介导的神经元毒性损伤细胞存活率的影响,以阐明细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)介导姜黄素抑制STS诱导神经元毒性损伤的作用。方法运用SD大鼠乳鼠海马神经元原代培养细胞,STS诱导建立细胞毒性损伤模型。实验随机分6组:正常对照组、STS模型组、PD098059+STS模型组、姜黄素+STS预处理组、姜黄素+PD098059+STS组和姜黄素组。用MTT法测定细胞活性,以乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率分析细胞毒性,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞凋亡效应,Western blot法检测ERK1/2在姜黄素预处理对STS介导神经元凋亡抑制中的作用。结果姜黄素+STS预处理组的细胞活性比STS模型组明显升高(P<0.001);与PD098059+STS模型组比较,姜黄素+PD098059+STS预处理组细胞活性差异无统计学意义;与姜黄素+STS预处理组比较,姜黄素+PD098059+STS神经元存活率明显降低(P<0.001);姜黄素+STS预处理组的细胞毒性明显小于STS模型组(P<0.001)。STS模型组呈现典型的细胞凋亡特征,姜黄素可抑制STS介导的神经元凋亡;姜黄素+STS预处理组p-ERK1/2蛋白表达量明显高于STS模型组(P<0.001)。结论姜黄素通过上调p-ERK1/2的表达抑制STS介导的神经元毒性损伤;PD098059阻断神经细胞p-ERK1/2的表达后,姜黄素抑制STS介导的神经元毒性损伤作用未能顺利实施,说明ERK1/2能够介导姜黄素抑制STS诱导神经元毒性损伤。

Morris水迷宫训练后丘脑前核胞外信号调节蛋白激酶表达的变化

目的探讨在空间记忆中丘脑前核细胞内信号转导是否与MAPK途径有关。方法成年雄性SD大鼠34只,分为3组:①PD组:侧脑室内注射PD098059溶液;②PD对照组;③正常组。在Morris水迷宫中,定位航行训练后,行侧脑室内注射,24h后空间探索实验。免疫组化和Western-Blot检测p-ERK的变化。结果在空间探索实验中PD组寻找平台次数及在靶象限停留时间与PD对照组及正常对照组相比明显减少(p<0.01)。在p-ERK免疫组化和Western-Blot中,PD组与PD对照组比较,丘脑前核内p-ERK表达明显减弱,光密度分析有显著性差异(p<0.01)。在PD对照组,丘脑前背侧核与丘脑前腹侧核相比,p-ERK表达显著增强,光密度分析有显著性差异(p<0.05)。结论丘脑前核空间记忆细胞内信号转导可能与MAPK途经有关。