肿瘤抑制蛋白PDCD4结构特性与疾病关系解析及研究进展

程序性细胞死亡蛋白PDCD4(programmed cell death 4)是一种肿瘤抑制蛋白,在多种肿瘤组织中下调并提示不良预后,是第一种被发现通过抑制翻译抵抗肿瘤转化、侵袭和转移的蛋白质。PDCD4自身结构与功能关系密切,并受细胞外信号影响,其蛋白表达水平和功能与人体两大信号通路PI3K-Akt-mTOR和MAPK密切相关,通过多种机制调节与肿瘤相关的其他蛋白质。本文通过解析PDCD4结构、功能与疾病的关系,总结了近年来PDCD4在凋亡、自噬、肿瘤、炎症等生理过程和疾病中的作用,为PDCD4及相关蛋白的信号传导路径研究和以它们为靶标的疾病治疗提供启发和思路。

沉默PDCD4表达可减轻脓毒症血管内皮细胞损伤:基于改善线粒体动力学

目的探究程序性细胞死亡因子4(PDCD4)在缓解脓毒症血管内皮细胞损伤中的作用机制。方法通过体外分别培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和小鼠血管内皮细胞(C166)并给予脂多糖(LPS)处理,建立脓毒症血管内皮损伤细胞模型。分别设立对照组(NC)、LPS诱导组(NC+LPS)、si-PDCD4转染组(si-PDCD4)、si-PDCD4转染后LPS诱导组(si-PDCD4+LPS)、si-PDCD4转染后LPS诱导加线粒体分裂激动剂(FCCP)组(si-PDCD4+LPS+FCCP)。通过LC-MS/MS技术,分析PDCD4敲低前后蛋白组学变化。通过RT-PCR检测对照组和LPS组转染前后PDCD4、细胞炎症、凋亡以及线粒体分裂融合相关基因的mRNA表达量的变化;蛋白质印迹法检测线粒体分裂融合关键蛋白FIS1、DRP1和OPA1的表达水平;通过激光共聚焦技术观察JC-1、MitoSOX探针荧光强度以检测线粒体膜电位和线粒体活性氧变化。结果与对照组相比,LPS组炎症相关指标白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白1(MCP1)基因的mRNA表达升高(P<0.05);PDCD4在脓毒症血管内皮细胞损伤中高表达(P<0.05);蛋白组学分析结果表明,PDCD4敲低与线粒体动力学存在相关性;Westernblot结果表明与对照组相比,LPS组诱导线粒体分裂蛋白FIS1、DRP1表达增加,融合蛋白OPA1减低(P<0.05);MitoSOX和JC-1荧光探针结果提示LPS诱导下内皮细胞线粒体发生氧化应激,膜电位显著降低(P<0.05),敲减组的氧化应激和线粒体膜电位有所缓解。PDCD4敲减后的保护效应可被线粒体分裂激动剂FCCP逆转。敲减PDCD4后能够抑制LPS所引起的炎症和氧化应激水平,线粒体分裂和融合指标恢复平衡。结论沉默PDCD4基因通过调控线粒体的动力学维持线粒体功能正常,减轻氧化应激,从而有利于缓解脓毒症血管内皮细胞损伤。

结肠癌组织中PADI3、CDK5RAP3及PDCD4的表达及其与临床病理特征和预后关系的研究

目的分析结肠癌组织中肽基精氨酸脱亚胺酶3(PADI3)、周期素依赖性激酶5激活结合蛋白3(CDK5RAP3)及程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的表达及其与临床病理特征和预后关系。方法回顾性分析,选取2016年3月1日至2019年12月28日在徐州医科大学附属淮安医院接受治疗的70例结肠癌患者为研究对象,检测PADI3、CDK5RAP3、PDCD4的表达量,观察其与结肠癌临床病理特征的关系,并采用双变量Spearman相关性分析PADI3、CDK5RAP3、PDCD4与临床病理特征的相关性;同时建立多因素Logistic分析模型,分析PADI3、CDK5RAP3、PDCD4对预后的影响因素。结果结肠癌PADI3蛋白低表达、高表达率分别为38.57%、61.43%,CDK5RAP3蛋白低表达、高表达率分别为58.57%、41.43%,PDCD4蛋白低表达、高表达率分别为60.00%、40.00%。低表达PADI3、CDK5RAP3和PDCD4的染色强度×细胞阳性百分比乘积值水平均明显低于高表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。低表达PADI3的mRNA水平均明显低于高表达,低表达CDK5RAP3和PDCD4 mRNA水平均明显高于高表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。PADI3高表达TNMⅢ~Ⅳ期、有淋巴结转移率明显高于低表达,CDK5RAP3、PDCD4低表达TNMⅢ~Ⅳ期、有淋巴结转移率均明显高于高表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结肠癌组织PADI3与TNM分期、淋巴结转移呈正相关(P<0.05);CDK5RAP3、PDCD4与TNM分期、淋巴结转移呈负相关(P<0.05)。中位无疾病进展(PFS)、总生存期(OS)比较,PADI3高表达明显比低表达短;CDK5RAP3、PDCD4低表达明显比高表达短,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic分析结果显示,TNM分期、淋巴结转移、PADI3、CDK5RAP3、PDCD4均是影响结肠癌PFS和OS的独立危险因素(P<0.05)。结论PADI3、CDK5RAP3、PDCD4与结肠癌分期、淋巴结转移及其预后密切相关,其表达变化可评估结肠癌的疾病严重程度及其预后。

miR-21-5p/PDCD4轴对结肠癌的调控机制研究

目的:探究miR-21-5p/PDCD4轴对结肠癌的调控机制。方法:采用生物信息学分析检测miR-21-5p和PDCD4在结肠癌组织和正常组织中的相对表达量、相关性以及潜在靶向结合点;采用qRT-PCR和Western blot实验检测miR-21-5p和PDCD4的表达;采用双荧光素酶实验验证miR-21-5p与PDCD4的靶向关系;采用细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕实验以及Transwell实验检测结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力;采用流式细胞术实验检测细胞凋亡率。结果:miR-21-5p在结肠癌细胞中表达上调,且miR-21-5p过表达后结肠癌细胞的增殖能力明显增强,迁移速度提高,侵袭细胞数目增多;miR-21-5p靶向下调PDCD4表达;miR-21-5p通过下调PDCD4表达促进结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并且抑制细胞凋亡。结论:在结肠癌细胞中,miR-21-5p表达上调,PDCD4表达下调;miR-21-5p通过靶向下调PDCD4的表达,从而促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭并抑制细胞凋亡。

miR-21靶向PDCD4对舌鳞癌细胞上皮间质转化及侵袭能力的影响

目的:探究微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)靶向程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)对舌鳞癌细胞(tonguel squamous cell carcinoma,TSCC)上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及侵袭能力的影响。方法:qRT-PCR实验检测人口腔上皮细胞(human oral epithelial cell,HOEC)与舌鳞癌细胞系CAL-27中miR-21和PDCD4的表达水平。将miR-21 inhibitor阴性对照(NC inhibitor)、miR-21抑制剂(miR-21 inhibitor)转染至CAL-27细胞中,qRT-PCR实验检测miR-21的表达水平;采用CCK-8实验检测细胞增殖情况;采用划痕实验和Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;采用免疫印迹法(Western blot)和qRT-PCR实验评估PDCD4、EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)在蛋白和mRNA水平的表达情况。双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与PDCD4的靶向关系。结果:CAL-27细胞中miR-21的表达明显高于HOEC细胞(P<0.001),而PDCD4表达低于HOEC细胞(P<0.001)。与对照组相比,抑制miR-21后miR-21的表达水平明显降低(P<0.001),并能显著抑制细胞的增殖、迁移、侵袭能力(P<0.05);抑制miR-21能上调CAL-27细胞中PDCD4(P<0.05)和E-cadherin(P<0.05)的表达,而下调N-cadherin(P<0.05)、Vimentin(P<0.01)、MMP-2(P<0.01)、MMP-9(P<0.01)蛋白和mRNA水平。双荧光素酶报告基因实验证明miR-21与PDCD4的靶向关系。结论:抑制舌鳞癌细胞中miR-21的表达能抑制其增殖、侵袭和上皮间充质转化,这可能与靶向激活和促进PDCD4的表达有关。

LncRNA-MALAT1/miR-125b-5p/PDCD4分子轴参与心力衰竭发生发展的机制研究

目的 探讨LncRNA-MALAT1/miR-125b-5p/PDCD4分子轴参与心力衰竭发生发展的机制。方法 购置SD大鼠40只,随机取大鼠10只为对照组,剩余大鼠30只采用结扎大鼠左冠状动脉前降支造成心肌梗死后形成心肌梗死模型,于第14日取材组织并完成HE染色;观察组随机分为模型组、空载组和MALAT1沉默组,利用慢病毒转染干扰LncRNA-MALAT1序列(LV-shMALAT1)及其空载(LV-Control)观察治疗大鼠的干预效果。采用实时荧光PCR法和Western Blot检测LncRNA MALAT1、miR-125b-5p和PDCD4表达水平;采用酶联免疫吸附试验测定炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)。结果 观察组EF及左室短轴缩短率低于对照组(P<0.05);MALAT1沉默组EF及左室短轴缩短率高于模型组及空载组(P<0.05);HE染色结果显示,模型组和空载组心肌纤维断裂,细胞核紊乱、肥大、间隙增宽、染色加深;MALAT1沉默组心肌纤维断裂有所改善,细胞排列相对整齐;MALAT1沉默组LncRNA MALAT1 mRNA、miR-125b-5p及蛋白表达低于模型组与空载组(P<0.05);PDCD4mRNA及蛋白表达高于模型组与空载组(P<0.05);模型组与空载组炎性因子TNF-α和IL-1β水平差异无统计学意义(P>0.05);MALAT1沉默组炎性因子TNF-α和IL-1β水平低于模型组与空载组(P<0.05)。结论 心力衰竭大鼠中LncRNA-MALAT1表达显著下调,能竞争性结合miR-125b-5p,使其解除对PDCD4的抑制,促进PDCD4表达,从而抑制炎性反应。

薯蓣皂苷通过调控PDCD4对高糖诱导的血管内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨薯蓣皂苷(DIO)通过调控程序性细胞死亡(PDCD)4对高糖诱导的血管内皮细胞增殖、凋亡的影响。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为对照组(葡萄糖浓度为5 mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度为30 mmol/L)、高糖+DIO-L组(DIO 5μg/ml,进行高糖处理)、高糖+DIO-M组(DIO 15μg/ml,进行高糖处理)、高糖+DIO-H组(DIO 30μg/ml,进行高糖处理),高糖+si-NC组(转染si-NC后进行高糖处理)、高糖+si-PDCD4组(转染si-PDCD4后进行高糖处理)、高糖+DIO+pcDNA组(转染pcDNA后进行高糖和DIO 30μg/ml处理)、高糖+DIO+PDCD4组(转染PDCD4后进行高糖和DIO 30μg/ml处理)。采用MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测PDCD4、p21、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PDCD4 mRNA表达。结论高糖组细胞活力、Bcl-2蛋白表达明显低于对照组,细胞凋亡率、Bax和p21蛋白表达明显高于对照组(P<0.05);高糖+DIO各剂量组的细胞活力、Bcl-2蛋白表达明显高于对照组,细胞凋亡率、Bax和p21蛋白表达明显低于对照组(P<0.05)。高糖处理HUVECs后,PDCD4 mRNA和蛋白明显增加,加入30μg/ml DIO作用细胞后PDCD4 mRNA和蛋白明显降低(P<0.05)。高糖+si-PDCD4组细胞活力、Bcl-2蛋白表达明显高于高糖+si-NC组,而细胞凋亡率、Bax和p21蛋白表达明显低于高糖+si-NC组(P<0.05)。高糖+DIO+PDCD4组细胞活力、Bcl-2蛋白表达明显低于高糖+DIO+pcDNA组,而细胞凋亡率、Bax和p21蛋白表达明显高于高糖+DIO+pcDNA组(P<0.05)。结论薯蓣皂苷可以通过下调PDCD4表达抑制高糖诱导的血管内皮细胞的增殖和促进细胞的凋亡。

miR-21调控PTEN及PDCD4基因治疗化疗性卵巢早衰

目的:探讨miR-21在化疗性卵巢早衰大鼠模型中的治疗潜能及其可能机制。方法:体外构建miR-21慢病毒载体(LV-miR-21)。将大鼠随机分为空白对照组、模型组、空载组及miR-21组,通过腹腔注射环磷酰胺(CTX)建立化疗所致卵巢早衰大鼠模型。建模后往miR-21组大鼠双侧卵巢注射LV-miR-21,注射后第1、15、30、45、60天分批处死大鼠。阴道脱落细胞涂片检测大鼠动情周期;化学发光法与免疫放射法测定性激素水平;进行卵巢称重、计数各级卵泡数;TUNEL法测定卵巢组织颗粒细胞凋亡率;qRT-PCR、Western blot法检测miR-21靶基因PTEN、PDCD的mRNA及蛋白水平。结果:体外成功构建miR-21慢病毒载体。实验结束时,miR-21组有64%(16/25)大鼠恢复规律动情周期。注射后第15、30、45、60天,miR-21组的E_2水平、卵巢颗粒细胞凋亡率均高于模型组和空载组(P=0.000),FSH水平以及PTEN、PDCD4的mRNA、蛋白表达较相应时间点的模型组和空载组显著下降(P=0.000)。注射后第30、45、60天,miR-21组的卵巢重量显著高于模型组和空载组,但仍低于空白对照组;注射后第45、60天,miR-21组各级卵泡数均多于模型组和空载组(P=0.000);结论:miR-21在化疗诱导卵巢早衰大鼠模型中具有治疗潜能,其具体作用机制可能与下调靶基因PTEN、PDCD4有关。

miR-21靶向调控PDCD4在四逆汤减轻大鼠心肌细胞损伤中的意义

目的探讨四逆汤含药血清在减轻大鼠心肌细胞损伤中,微小RNA-21(miR-21)靶向调控程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的意义。方法选择SD大鼠制备四逆汤含药血清,体外培养大鼠心肌细胞(H9C2),通过RNA干扰技术,转染miR-21 mimic及miR-21 inhibitor,建立稳定的miR-21 mimic和miR-21 inhibitor细胞系。细胞分别给予阿霉素(ADR)10μg/mL作用24 h损伤和无ADR处理,再各分为四个水平,分别为miR-21 mimic、miR-21 inhibitor、四逆汤+miR-21mimic、四逆汤+miR-21 inhibitor,另设正常对照组及四逆汤组,共10组。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞miR-21、PDCD4表达,采用流式细胞术检测各组心肌细胞凋亡百分率。结果与正常对照组相比,ADR+miR-21 mimic组、ADR+miR-21 inhibitor组、ADR+四逆汤+miR-21 mimic组、ADR+四逆汤+miR-21 inhibitor组细胞凋亡百分率、PDCD4表达量增加,而miR-21的表达量下降(P均<0.05或0.01);ADR+miR-21 mimic组相比,ADR+四逆汤+miR-21 mimic组miR-21表达上升,PDCD4下降,凋亡百分率降低(P均<0.05);与ADR+miR-21 inhibitor组相比,ADR+四逆汤+miR-21 inhibitor组细胞miR-21表达上升,PDCD4下降,凋亡百分率降低(P均<0.05)。结论四逆汤可抑制阿霉素损伤大鼠心肌细胞凋亡,减轻心肌细胞损伤,其机制可能与上调miR-21的表达靶向调控PDCD4有关。

结直肠癌组织中PAQR3、PDCD4基因甲基化水平与结直肠癌的关系

目的研究结直肠癌组织抑癌基因PAQR3、PDCD4甲基化水平,以及二者与结直肠癌临床资料之间的关系。方法收集2013~2014年结直肠癌及癌旁正常组织标本各54例,用甲基化特异性PCR(MSP)法检测结直肠标本中PAQR3、PDCD4基因甲基化水平。结果 (1)PAQR3癌组织和癌旁组织甲基化率分别为33.3%(18/54)和5.6%(3/54),差异显著(P<0.05);PDCD4癌组织和癌旁组织发生甲基化率为分别为53.7%(29/54)和7.4%(7/54),差异显著(P<0.001)。二者同时检测的甲基化阳性率为87%,PAQR3和PDCD4没有相关性(R=0.155,P=0.408)。(2)结直肠癌组织中PAQR3基因甲基化与性别、肿瘤部位无关,年龄越大、分化程度越低、淋巴结转移、浸润越深者,PAQR3甲基化发生率越高。结直肠癌组织中PDCD4基因甲基化与性别、年龄、肿瘤部位无关,分化程度越低、淋巴结转移、浸润越深者,PDCD4甲基化发生率越高。结论结直肠癌中PAQR3、PDCD4发生了甲基化,PAQR3基因甲基化水平与年龄、分化程度、有无淋巴结转移、肿瘤浸润深度有关,PDCD4甲基化水平与分化程度、有无淋巴结转移、肿瘤浸润深度有关。

miR-21通过PDCD4调控肝癌细胞的生长和侵袭

目的探讨miR-21在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织和细胞中的表达及其可能调控的靶基因。方法检测miR-21在HCC组织和细胞系中的表达,使用miR-21抑制剂后,观察HCC细胞活力和侵袭能力的变化;运用生物信息学分析预测miR-21可能的靶基因。应用miR-21抑制剂后,双荧光素酶报告基因系统检测其对靶基因活性的影响。结果HCC组织中miR-21表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05);HCC细胞中miR-21的表达水平显著高于肝细胞(P<0.01)。抑制miR-21后,HCC细胞的活力和侵袭能力降低(P<0.01)。抑癌基因程序性死亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)在HCC组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.01),在肝癌细胞中的表达水平显著低于肝细胞(P<0.01)。干扰PDCD4后,肝癌细胞的活力和侵袭能力提高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示,使用miR-21抑制剂后,PDCD4表达上调(P<0.01),肝癌细胞的侵袭和增殖能力降低(P<0.01)。干扰PDCD4后,肝癌细胞的侵袭和增殖能力升高(P<0.001)。结论miR-21可通过PDCD4调控肝癌细胞的生长和侵袭。

SOX2、PDCD4在垂体腺瘤组织中的表达及其意义

目的探讨垂体腺瘤组织中区Y框蛋白2(SOX2)、程序性细胞死亡因子(PDCD4)的表达及其意义。方法选取2018-06至2022-03武警重庆总队医院神经外科收治的垂体腺瘤患者120例,其中侵袭性垂体腺瘤52例(侵袭组),非侵袭性垂体腺瘤68例(非侵袭组)。免疫组化检测组织SOX2、PDCD4表达情况;随机选取两种腺瘤组织各10例,用western-blot检测蛋白表达水平。ROC曲线分析SOX2、PDCD4鉴别侵袭性垂体腺瘤和非侵袭性垂体腺瘤的价值,计算曲线下面积(AUC)。用二元Logistic回归模型分析影响垂体腺瘤侵袭性的因素。结果侵袭组SOX2高表达率及蛋白表达水平分别为65.38%、(1.32±0.13),均高于非侵袭组[27.94%和(0.38±0.08),P<0.05]。侵袭组PDCD4高表达率及蛋白表达水平分别为32.69%和(0.47±0.10),均低于非侵袭组[51.47%和(1.09±0.11),P<0.05]。肿瘤直径、Ki-67增殖指数、SOX2高表达、PDCD4低表达是垂体腺瘤侵袭的独立影响因素(P<0.05)。SOX2鉴别侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤的AUC为0.854,PDCD4为0.783,二者联合可将AUC提高至0.899。结论侵袭性垂体腺瘤组织中SOX2表达水平较高,而PDCD4表达水平较低,二者对预测垂体腺瘤侵袭性有一定价值。

大肠癌组织中PDCD4表达的临床病理学意义及其对预后的影响(英文)

目的检测肿瘤抑制基因PDCD4在大肠癌组织中的表达,探讨其在大肠癌发生发展中的作用及对预后的影响。方法应用western印迹分析和免疫组织化学染色方法,检测了大肠癌及癌旁的正常组织中PDCD4的表达,观察其与大肠癌患者临床病理学参数之间的关系,并分析其对预后的影响。结果Western印迹分析和免疫组化染色均显示,与癌旁的正常大肠组织相比,癌组织中PDCD4的表达明显下降。免疫组化染色显示,在65例大肠癌组织中,高、中、低分化腺癌分别占49.2%(32/65)、33.9%(22/65)和16.9%(11/65)。在高、中、低分化腺癌中,PDCD4(+)表达率分别为81.3%(26/32)、50.0%(11/22)和18.2%(2/11)。相关分析显示,PDCD4的表达水平与大肠癌的程度密切相关,分化越差,表达越低。Kaplan-Meier生存分析显示,PDCD4的表达水平与预后有关,PDCD4阴性者预后差。应用Cox比例风险模型进行多因素分析,结果显示,本组资料中,Dukes分期、PDCD4表达水平以及术后是否进行化疗影响大肠癌的预后。结论本研究显示,大肠癌组织中PDCD4的表达下降,并与肿瘤的分化程度和不良预后相关。作为一种肿瘤抑制基因,PDCD4可能在大肠癌的发生发展中起重要作用。PDCD4还可能作为有效的预后因子,有助于判断预后。

循环miR-155/PDCD4水平与冠状动脉病变严重程度关联研究

目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病,CAD)患者外周循环血CD4+T细胞miR-155和程序性死亡因子4(PDCD4)基因表达水平变化及其与冠状动脉(冠脉)病变严重程度的关系。方法选取2017年6月至2018年5月于漯河市中心医院心血管内科进行冠状动脉造影术(CAG)并住院接受治疗的CAD患者285例。另外选择非冠心病受试对象50例作为对照组。比较不同亚组CAD患者一般临床资料、CD4+T细胞miR-155和PDCD4mRNA的表达量,采用多因素Logistic回归分析CAD发病的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-155和PDCD4对重度冠状动脉病变的早期诊断价值。结果与对照组受试者相比,CAD组患者三酰甘油(TG)、尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCr)、空腹血糖及CD4+T细胞miR-155、PDCD4mRNA水平均较高,存在统计学差异(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析,外周循环血CD4+T细胞miR-155和PDCD4水平、TG水平、空腹血糖水平是影响CAD发生的独立危险因素(P<0.05)。三支病变亚组CAD患者CD4+T细胞miR-155/PDCD4mRNA表达量和Gensini评分明显高于单支病变和双支病变患者(P<0.05)。冠脉重度狭窄亚组CAD患者CD4+T细胞miR-155/PDCD4mRNA表达量和Gensini评分明显高于轻中度狭窄亚组患者(P<0.05)。重度冠脉病变亚组CAD患者CD4+T细胞miR-155/PDCD4mRNA表达量明显高于轻中度病变亚组患者(P<0.05)。经ROC曲线分析,miR-155、PDCD4以及miR-155/PDCD4诊断重度冠脉病变的AUC分别为0.766(95%CI:0.631~0.908)、0.714(95%CI:0.594~0.875)、0.897(95%CI:0.732~0.981)(P<0.05)。结论外周循环血CD4+T细胞miR-155和PDCD4表达水平与冠状动脉病变程度密切相关,可作为诊断重度冠脉病变的参考指标。

PDCD4基因在过氧化氢诱导喉癌细胞凋亡中的作用

目的探讨过氧化氢诱导喉癌细胞Hep-2凋亡过程中PDCD4基因表达的变化。方法以体外培养的喉癌细胞Hep-2为实验材料,不同浓度的过氧化氢作用于Hep-2细胞,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞生存率,采用吖啶橙染色、Ho33342/PI荧光双染进行形态学观察,RT-PCR及Western blot检测PDCD4 mRNA水平及蛋白表达的变化,评价在过氧化氢诱导喉癌细胞Hep-2凋亡过程中PDCD4基因的作用。结果过氧化氢(200μmol/L)作用Hep-2细胞24h,能够显著抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡,同时引起pdcd4 mRNA水平显著上调,PDCD4蛋白表达显著增加。结论本研究首次报道PDCD4基因可能在氧化胁迫诱导喉癌细胞凋亡中起关键作用。

PDCD4在Hela细胞中过表达致抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调机制探讨

目的:探讨程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的抑癌机制。方法:以含有全长PDCD4的c DNA为模板,扩增PDCD4全长基因,融合PDCD4-GFP融合基因真核表达载体,将其转染Hela细胞,采用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白在细胞中的表达,以荧光定量PCR和Western-blot检测PDCD4在细胞内的表达以及抗凋亡基因Bcl-2的表达情况。结果:经酶切图谱分析、PCR扩增及DNA测序证实融合基因真核表达载体构建正确;荧光显微镜可观察到细胞内PDCD4-GFP融合蛋白的表达;RT-PCR证实经PDCD4基因转染的细胞内PDCD4 mRNA表达增高。PDCD4的过表达能够导致Bcl-2基因表达下调。结论:PDCD4基因表达于宫颈癌细胞核和胞浆内,并且PDCD4能够抑制Bcl-2基因的表达水平。

下调miR-21通过PDCD4抑制人增生性瘢痕成纤维细胞增殖并抑制PI3K/Akt信号通路

目的:探讨microRNA-21(miR-21)对人增生性瘢痕成纤维细胞中程序性细胞死亡因子(PDCD4)表达和细胞增殖的影响及机制。方法:利用荧光定量PCR检测正常皮肤成纤维细胞GM0639和人增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)中miR-21的表达。构建含有PDCD4-p GC-Fu-GFP慢病毒和空载体对照慢病毒p GC-Fu-GFP感染HSF细胞。将HSF细胞按照不同处理方法分为:空白对照组、转染非特异miRNA的阴性对照组、转染miRNA-21抑制物的mir21 Inhibitor组、转染miR-21质粒的miR-21 mimic组、PDCD4-p GC-Fu-GFP组、pGC-Fu-GFP组和Ly294002组。转染后48h收集细胞,MTT检测细胞增殖情况。采用免疫荧光技术、荧光定量PCR和Western blot检测空白对照组、阴性对照组、miR-21 mimic组和miR-21 Inhibitor组细胞中PDCD4的表达以及基因和蛋白水平。采用荧光定量PCR和Western blot检测PDCD4-p GC-Fu-GFP组、p GC-Fu-GFP组和Ly294002组细胞周期相关蛋白C-MYC,CCND1以及通路相关蛋白p-Akt、JNK1的蛋白表达。结果:HSF细胞中miR-21呈现高表达。与空白对照组相比,抑制miR-21表达可以抑制HSF细胞增殖,上调PDCD4表达。过表达PDCD4可以抑制细胞增殖,下调细胞周期相关蛋白C-MYC,CCND1的表达,同时抑制通路蛋白p-Akt和JNK1的表达。结论:下调miR-21的表达能够促进PDCD4表达,抑制HSF细胞增殖以及PI3K/AKt信号通路。

胃癌组织中MicroRNA-21与PDCD4的表达及意义

目的探讨MicroRNA-21及PDCD4在胃癌组织中的表达情况及其相互作用。方法采用免疫组化检测50例胃癌组织及正常组织中PDCD4蛋白表达情况;实时定量PCR方法检测PDCD4 mRNA及MicroRNA-21的表达,并分析两者之间的相关性及其与胃癌临床病理特征关系。结果免疫组化结果显示50例胃癌组织中有41例(82%)PDCD4蛋白含量降低或无表达,实时定量PCR结果显示35例(70%)胃癌组织中PDCD4 mRNA含量降低,显著低于正常组织(P<0.05),33例(66%)胃癌组织中MicroRNA-21含量升高,高于正常组织(P<0.05),MicroRNA-21和PDCD4 mRNA表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、浸润深度、TNM分期及淋巴结转移都无统计学意义(P>0.05),MicroRNA-21和PDCD4 mRNA的变化无相关性(r=0.009,P>0.05)。结论 MicroRNA-21高表达或PDCD4低表达在胃癌的发生发展中起着重要作用,但对胃癌的分化类型及病理分期无明显影响。

PDCD4重组慢病毒载体的构建、包装及其对前列腺癌细胞增殖的影响

目的构建表达程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的慢病毒表达载体,建立能够稳定表达目的基因的前列腺癌PC3细胞亚株。研究PDCD4分子对前列腺癌细胞增殖的影响。方法利用PCR扩增PDCD4编码区片段,克隆入pENTRA-3C入门载体,利用LR clonaseⅡ重组酶将目的基因片段转接入pLenti-6.3慢病毒表达载体并包装相应的慢病毒,以表达红色荧光蛋白mCherry的pLenti-6.3-mCherry慢病毒载体包装的慢病毒为对照,感染人前列腺癌PC3细胞,通过杀稻瘟素(blasticidin)筛选出能够稳定过表达PDCD4蛋白的细胞亚株。利用Western blot法检测PDCD4蛋白的表达量,MTT法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化。结果构建了重组慢病毒载体pLenti6.3-PDCD4。利用重组慢病毒表达系统筛选稳定过表达PDCD4蛋白的细胞亚株,并用Western blot法进行了验证。MTT法及平板克隆形成实验结果显示PDCD4高表达的PC3细胞亚株的增殖能力受到抑制。结论成功构建了表达PDCD4分子的慢病毒表达载体,筛选出稳定表达PDCD4的PC3细胞株。过表达的PD-CD4分子可以显著抑制PC3前列腺癌细胞的增殖。

抑癌基因Pdcd4在肾透明细胞癌中的表达及生物学意义

目的研究Pdcd4 mRNA及蛋白在肾透明细胞癌中的表达及探讨其与肾肿瘤分期分级的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应（半定量RT-PCR）及免疫组织化学方法同时检测肾脏透明细胞癌及癌旁正常组织Pdcd4 mRNA及蛋白的表达情况。结果 Pdcd4 mRNA在肾癌及癌旁正常组织中均有表达,透明细胞癌中的表达低于癌旁正常组织。肾透明细胞癌Pdcd4蛋白表达阳性率为37.5%（15/40）,显著低于癌旁正常肾脏组织阳性表达率90%（18/20）,G1~G2期Pdcd4蛋白表达阳性率为56.5%（13/23）高于G3~G4期Pdcd4蛋白表达阳性率为11.7%（2/17）,两者差异有显著性（P〈0.05）。结论 Pdcd4基因在肾透明细胞癌中呈低表达,与肾癌的发生及恶性分化程度相关,作为抑癌基因,Pdcd4蛋白表达可作为判定肾透明细胞癌生物学行为的客观指标。