益气活血通络汤与低分子肝素抗凝对大鼠骨折愈合、血液流变学及TGF-β1表达的影响

目的探究益气活血通络汤与低分子肝素抗凝对大鼠骨折愈合、血液流变学及转化生长因子(TGF)-β1表达的影响。方法选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(A)组、模型(B)组、益气活血通络汤(C)组、低分子肝素(D)组、益气活血通络汤联合低分子肝素(E)组,每组10只,对B、C、D、E组采用骨钳截断加克氏针髓内固定法建立胫骨骨折模型,A组不建立该模型,建模成功后,C组4 g/kg益气活血通络汤灌胃,D组500 U/kg低分子肝素灌胃,E组给予益气活血通络汤联合低分子肝素治疗,A组、B组同期灌胃同体积生理盐水,X线摄片检测骨折愈合程度,苏木素-伊红(HE)染色法检测骨组织病理形态,全自动血流变仪检测血液流变学相关指标,免疫组化法检测骨组织中TGF-β1蛋白表达。结果与A组相比,B组骨折线清晰,且没有形成明显骨痂;与B组相比,C、D、E组骨愈合速度明显加快,C、D组骨折线仍可见但折断端边缘趋于模糊,且形成明显骨痂,而E组骨折基本消失,髓腔再通,外骨痂减少,可见大部分骨痂长入骨折线,已有骨外膜形成并可见骨连接形成;A组骨组织形态完整,骨小梁生长旺盛,排列规则有序,且无坏死区域;B组骨组织形态紊乱,出现部分坏死区域,并可见少量纤维组织;C、D组骨痂组织中可见大量肉芽组织、纤维组织长入,成软骨细胞增生活跃,并有网状交织的骨小梁;E组骨组织形态已趋于完整,排列有序且部分已被正常组织替代,骨小梁排列相对规则,可见部分成熟板状骨形成;与A组比较,B、C、D、E组软骨比例、胫骨组织TGF-β1蛋白表达显著降低,纤维性骨痂比例、全血低切黏度、中切黏度、高切黏度及血浆黏度显著升高(P<0.05);与B组比较,C、D、E组软骨比例、胫骨组织TGF-β1蛋白表达显著升高,纤维性骨痂比例、全血低切黏度、中切黏度、高切黏度及血浆黏度显著降低(P<0.05);与C、D组相比,E组上述指标变化显著(P<0.05),而各组骨性骨痂相比无明显差异(P>0.05)。结论益气活血通络汤联合低分子肝素抗凝具有显著疗效,其可显著促进骨折愈合,改善血液流变学,并促进TGF-β1表达。

miR-141-3p对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的抑制和改善作用

背景:研究表明,胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子有抑制纤维环细胞凋亡的作用。miR-141-3p微小RNA在骨髓基质细胞中随着年龄的增加而增加,且与炎症信号通路的活化存在一定关系,提示其可能成为腰椎间盘突出症的治疗靶点。目的:探究miR-141-3p通过调控胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的影响。方法:选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组、miR-141-3p mimics组,每组10只。除正常组外,其余大鼠采用自体髓核移植法进行腰椎间盘突出症建模。建模成功后,对miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组和miR-141-3p mimics组大鼠鞘内分别注射10μL 20μmol/L miR-NC,miR-141-3p inhibitor,miR-141-3p mimics,均每天注射1次,连续注射28 d;正常组、模型组同期同位置注射同体积生理盐水。采用热缩足潜伏期阈值评价大鼠下肢疼痛,实时荧光定量PCR检测背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达,ELISA法检测背根神经节组织炎症因子,免疫印迹法检测背根神经节组织胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子蛋白表达,并分析miR-141-3p与胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子的相关性。结果与结论:miR-NC组各项指标与模型组比较,差异均无显著性意义。①大鼠热缩足潜伏期阈值:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。②背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。③背根神经节组织肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素1含量:模型组明显高于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显高于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显低于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。④背根神经节组织胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子蛋白表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。⑤胰岛素样生长因子1与miR-141-3p呈正相关(r=0.904,P<0.001),血小板源性生长因子与miR-141-3p呈正相关(r=0.879,P<0.001)。⑥结论:miR-141-3p可显著改善腰椎间盘突出症大鼠下肢疼痛,抑制背根神经节炎症,其机制可能与促进胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子表达有关。

老年病毒性心肌炎患者外周血NLRP3-ASC-Caspase-1-IL-18/IL-1β-TGF-β信号通路的变化及意义

目的探究老年病毒性心肌炎患者外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3-凋亡相关斑点样蛋白(ASC)-半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-1-白细胞介素(IL)-18/IL-1β-转化生长因子(TGF)-β信号通路的变化及意义。方法选择140例老年病毒性心肌炎患者,根据病程分为急性期和恢复期,另选择同期50例健康体检者,均采用聚合酶链反应检测外周单个核细胞(PBMCs)中NLRP3炎性小体、ACS、Caspase-1 mRNA水平,Western印迹检测上述三者蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附试验检测外周血IL-18、IL-1β和TGF-β水平,分析检测结果。结果140例患者检出病毒140株,其中RNA病毒86株,DNA病毒54株,主要病毒为柯萨奇病毒B、柯萨奇病毒A和疱疹病毒1型;病毒性心肌炎急性期患者NLRP3、ACS、Caspase-1 mRNA及其蛋白表达水平和血清IL-18、IL-1β、TGF-β水平均显著高于恢复期和对照组(P<0.05),恢复期和对照组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05);病毒性心肌炎急性期患者NLRP3 mRNA及其蛋白表达与ACS、Caspase-1 mRNA表达和ACS、Caspase-1蛋白表达及血清IL-18、IL-1β、TGF-β水平均呈正相关(P<0.05)。结论老年病毒性心肌炎急性期患者NLRP3-ASC-Caspase-1-IL-18/IL-1β-TGF-β信号通路被激活,参与病理过程,可为疾病诊疗提供指导。

芪倍合剂对UC小鼠模型TGF-β1/Smad2信号通路及Th17/Treg平衡、炎性细胞因子表达的影响

目的探究芪倍合剂对溃疡性结肠炎(UC)小鼠模型转化生长因子(TGF)-β1/Smad2信号通路及T辅助细胞(Th)17/调节T细胞(Treg)平衡、炎性细胞因子表达的影响。方法30只小鼠随机分为对照组、UC组和UC+芪倍合剂组,每组10只。UC组和UC+芪倍合剂组通过葡聚糖硫酸钠构建UC模型,UC+芪倍合剂组通过芪倍合剂灌肠。比较两组结肠黏膜病变情况、外周血炎性细胞因子Th17、Treg和TGF-β1/Smad2信号通路水平。结果与对照组比较,UC组干预后每日疾病活动指数(DAI)评分、结肠病变程度、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1、Th17、Treg、Th17/Treg及结肠黏膜和淋巴细胞中的TGF-β1/Smad2通路水平显著升高,IL-4水平显著降低(P<0.05)。UC+芪倍合剂组干预后DAI评分、结肠病变程度、TNF-α、IL-1、Th17、Treg、Th17/Treg及结肠黏膜和淋巴细胞中TGF-β1/Smad2通路水平显著低于UC组,IL-4水平显著高于UC组(P<0.05)。结论芪倍合剂可以通过抑制结肠黏膜和淋巴细胞中TGF-β1/Smad2通路抑制炎性反应和调节Treg/Th17细胞平衡,从而起到缓解UC的作用。

NLRP6诱导胶质瘤细胞生物活性及对TGF-β1/Smad蛋白的作用

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体(NLR)P6诱导胶质瘤细胞生物活性及对转化生长因子(TGF)-β1/Smad蛋白的作用。方法将胶质瘤细胞U251分为正常组(U251细胞)、NC组(U251细胞+NC-空转)和干预组(U251细胞+NLRP6-shRNA),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测24、48和72 h U251细胞增殖,Transwell小室法、流式细胞法、Western印迹和聚合酶链反应(PCR)法分别检测24 h后U251细胞迁移数目、凋亡率、TGF-β1/Smad蛋白和mRNA表达。结果与正常组比较,NC组及干预组细胞侵袭数目、TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平显著降低;细胞凋亡率、Smad4 mRNA及蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。与NC组比较,干预组细胞侵袭数目、TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平显著降低;细胞凋亡率、Smad4 mRNA及蛋白水平显著升高(均P<0.05)。结论沉默NLRP6能够降低胶质瘤细胞U251细胞活性,其作用机制可能与抑制TGF-β1水平及激活Smad4水平相关。

沉默HSF1基因诱导TGF-β/Smad信号通路对口腔癌细胞放疗抵抗的作用机制

目的探讨沉默热休克因子(HSF)1基因诱导转化生长因子(TGF)-β/Smad信号通路对口腔癌细胞放疗抵抗的作用机制。方法构建放疗抵抗细胞株SCC-9R,将细胞分为空白组、阳性慢病毒(NC)组和HSF1组。比较HOEC细胞和SCC-9细胞中HSF1表达[实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测]、细胞克隆细胞数、侵袭能力(Transwell小室法检测)、凋亡能力(流式细胞仪检测)及细胞中TGF-β1和Smad7蛋白表达(Western印迹检测)。结果HSF1在正常人口腔上皮细胞HOEC中表达较低,和HOEC细胞相比,人口腔鳞状细胞癌SCC-9细胞和抵抗细胞SCC-9R细中HSF1表达显著增加,且抵抗细胞SCC-9R中HSF1表达明显高于SCC-9细胞(P<0.05)。HSF1组CC-9/SCC-9R细胞中HSF1表达均明显少于空白组和NC组,且沉默HSF1可降低CC-9/SCC-9R细胞中HSF1表达(P<0.05)。克隆实验结果显示,空白组和NC组SCC-9和SCC-9R细胞克隆形成数均无明显差异(均P>0.05);HSF1组SCC-9和SCC-9R细胞克隆形成数较空白组和NC组显著减少(P<0.05)。细胞侵袭实验结果显示,空白组和NC组SCC-9和SCC-9R细胞侵袭能力无显著差异(P>0.05);HSF1组细胞侵袭能力较空白组和NC组明显降低(P<0.05)。细胞凋亡结果显示,空白组和NC组SCC-9和SCC-9R细胞凋亡能力无显著差异(P>0.05);HSF1组SCC-9和SCC-9R细胞的凋亡能力较空白组和NC组细胞明显增加(P<0.05)。HSF1组CC-9/SCC-9R细胞中TGF-β1、Smad7蛋白表达明显低于空白组和NC组(P<0.05)。结论沉默HSF1可抑制口腔鳞状细胞癌中TGF-β1、Smad7表达,可逆转放疗抵抗口腔癌细胞对放疗的抵抗作用。

TGF-β1、PDGF、CTGF在尘肺病患者血清中的表达水平变化及意义

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板源性生长因子(PDGF)、结缔组织生长因子(CTGF)在尘肺病发生、发展中表达水平的变化及其意义。方法采用双抗体夹心法,测定70例尘肺病患者(其中包括29例矽肺病患者和41例煤工尘肺病患者)和77例健康对照者血清TGF-β1、PDGF、CTGF的表达水平。结果尘肺病患者血清TGF-β1、PDGF、CTGF含量分别为(44.95±23.72)ng/mL、(56.95±55.68)ng/mL、(346.70±259.49)pg/mL,对照组则分别为(6.81±4.99)ng/mL、(30.96±21.63)ng/mL、(307.49±235.40)pg/mL,病例组与对照组血清TGF-β1、PDGF含量差异均有统计学意义(P<0.05),血清CTGF含量在两组间差异无统计学意义(P>0.05);矽肺病患者血清TGF-β1、PDGF含量均高于煤工尘肺病患者,差异有统计学意义(P<0.05);尘肺病患者血清TGF-β1、PDGF含量随着期别的增加而降低,差异有统计学意义(P<0.05);两变量相关分析显示TGF-β1与PDGF、CTGF与PDGF呈正相关关系(P<0.05)。结论血清TGF-β1、PDGF表达水平与尘肺病的发生发展、病理类型及严重程度密切相关。

基于“肝肾同源”探讨DN大鼠肝中TGF-β1、Smad-4、α-SMA和PDGF在中药治疗前后的变化

目的:基于中医"肝肾同源"理论,观察中药方剂加味消渴康对糖尿病肾病(diabetic nephropahy,DN)大鼠肝组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad-4蛋白(drosophila mothers against decapentaplegic protein-4)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,a-SMA)和血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)表达的影响。方法:采用单侧肾切除加链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠模型,将造模成功后的DN大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、西药组和中药小、中、大剂量组。其中西药组给予氯沙坦灌胃,中药组给予加味消渴康灌胃,正常组及模型组每日灌服等量蒸馏水共12周。各组大鼠于第12周末处死取出肝脏,运用ELISA法观察大鼠肝组织TGFβ1、Smad-4、a-SMA和PDGF的表达。结果:与正常组比较,各组大鼠肝中TGFβ1、Smad-4、a-SMA和PDGF的表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。中药治疗后,各组大鼠TGFβ1、Smad-4、a-SMA和PDGF的表达有一定程度的降低,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:加味消渴康对DN大鼠的肝损伤均有保护作用。

通心络对老年高血压病肾损害患者血清TGF-β1和PDGF的影响

目的:观察通心络对老年高血压病肾损害患者血清TGF-β1和PDGF的影响,初步探讨老年高血压病肾损害的发病机制,为临床上寻找新的疗效观察指标和治疗途径提供一定的试验依据。方法:将符合本研究纳入和排除标准的60例患者随机分为通心络组和安慰剂组各30例。两组均起始接受厄贝沙坦片控制血压达标(130/80 mmHg),达目标血压后通心络组和安慰剂组在原有治疗基础上分别加服通心络胶囊和安慰剂。两组在加服通心络胶囊和安慰剂之前均需测定TGF-β1、PDGF和肾功能指标,其中肾功能指标包括内生肌酐清除率(Ccr)、尿微量白蛋白(UmALB)、尿β2-微球蛋白(Uβ2-MG)。两组加服后持续治疗12周再次检查上述项目。结果:通心络组TGF-β1和PDGF治疗前后组内比较有显著性差异(P<0.05);安慰剂组TGF-β1和PDGF治疗前后组内比较无显著性差异(P>0.05);两组肾功能指标治疗前后组内比较均有显著性差异(P<0.05);两组TGF-β1、PDGF和肾功能指标治疗后组间比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:通心络可协同厄贝沙坦进一步改善老年高血压病肾损害患者的肾功能,并且这种作用可能与抑制TGF-β1和PDGF的表达有关。

血管紧张素-(1-7)对糖尿病大鼠肾脏PDGF、TGF-β的影响

目的:通过观察血管紧张素-(1-7)(Ang-(1-7))作用后糖尿病大鼠肾脏PDGF(血小板源性生长因子)、TGF-β1(转化生长因子β1)的变化,研究其对糖尿病大鼠肾脏的作用。方法:将SD大鼠分为单肾切除对照组(C组)、糖尿病模型Ang-(1-7)干预组(T组)及糖尿病模型对照组(D组)三组进行研究。分别检测空腹血糖、血尿素氮、血肌酐,24h尿总蛋白;同时用1000倍显微镜观察肾脏组织改变情况及用RT-PCR法检测肾脏组织内PDGF、TGF-β1的基因表达水平。结果:T组肾重体重比(RW/BW)、尿蛋白定量、mRNA表达水平等指标明显下降,与D组相比具有非常显著性差异(P<0.01),肾脏组织光镜下差别显著,D、T组较C组大鼠肾小球体积增大,且以D组病变明显。结论:Ang-(1-7)具有延缓糖尿病大鼠肾脏病变病发生、发展的作用。

夏枯草总三萜对PDGF-BB干预的肝星状细胞中TGF-β_1/Smad通路调控作用

目的:观察夏枯草总三萜(TTP)对血小板衍生因子(PDGF-BB)干预的肝星状细胞(HSCT6)中TGF-β1/Smad通路调控以及其抑制HSC增殖的作用。方法:用不同浓度的TTP(10、30、100、300、1 000μg/mL)及PI3K抑制剂(LY294002,10μmol/L)对PDGF-BB刺激的HSC-T6进行处理,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;RT-PCR和Western blot法检测HSC-T6中TGF-β1信号转导通路下游中介分子smad2、smad3、smad7表达。结果:TTP给药组可抑制PDGF诱导的HSC-T6增殖,下调smad2、smad3表达,升高smad7表达。结论:TTP对PDGF-BB刺激的HSC-T6增殖具有较好的抑制作用,其机制可能与阻断TGF-β1/Smad信号通路传导有关。

EGR-1基因转染对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞TGF-β及PDGF-B表达的影响

目的:观察EGR-1基因转染对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞TGF-β及PDGF-B表达的影响,探讨EGR-1在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法:高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,采用LipofectamineTM2000瞬时转染EGR-1质粒,于培养12、24、48小时末,应用MTT法检测细胞增殖程度,免疫细胞化学和Western印迹法检测系膜细胞EGR-1、TGF-β及PDGF-B蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度。结果:高糖环境中肾小球系膜细胞EGR-1、TGF-β及PDGF-B表达增强,细胞增殖明显,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高,EGR-1基因转染后上述变化较高糖组更加显著。结论:EGR-1可上调TGF-β及PDGF-B表达,促进系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,是加速肾小球硬化的可能机制之一。

螺内酯对实验大鼠肝组织TGFβ1、PDGF-BB及α-SMA表达的影响

目的 探讨螺内酯预防肝纤维化的作用机制。方法 SD大鼠 90只 ,随机分为 3组。正常对照组 (8只 ) :正常饮食 ,皮下注射花生油 ;模型组 (42只 ) :复合因素制成肝纤维化模型 ;螺内酯预防组 (40只 ) :造模方法同模型组 ,螺内酯 10 0mg·kg- 1·d- 1灌胃。分别于第 2周、4周、6周、8周末随机处死 8只大鼠 ,取肝组织用免疫组化法检测各组肝组织内转化生长因子 β1(TGFβ1)、血小板衍生生长因子 (PDGF BB)及α 平滑肌动蛋白 (α SMA)含量。结果 螺内酯预防组TGFβ1、PDGF BB及α SMA在肝组织中的表达均较模型组明显减少 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。 结论 螺内酯可通过降低TGFβ1、PDGF

PDGF-BB、TGF-β1与肝纤维化的相关性研究

目的研究血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)、转化生长因子-β1(TGF-β1)与肝纤维化的关系及对肝纤维化的诊断价值。方法以56例正常体检人员为对照组,123例慢性乙肝患者为观察组,比较两组PDGF-BB、TGF-β1血清标志物水平并比较观察组中不同肝纤维化程度PDGF-BB、TGF-β1血清标志物水平。结果观察组PDGF-BB、TGF-β1血清水平均高于对照组(P<0.001);观察组中PDGF-BB在不同肝纤维化分期两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);TGF-β1在不同肝纤维化分期两两比较S2、S3、S4期差异无统计学意义(P>0.05),其他两两比较差异有统计学意义(P<0.05);PDGF-BB、TGF-β1与肝纤维化分期呈正相关。结论 PDGF-BB、TGF-β1在肝纤维化的早期诊断及病情评估上有重要的临床意义。

PDGF-BB、IL-13和TGF-β1诱导真皮成纤维细分泌Ⅰ型胶原蛋白的比较

目的用不同浓度的白介素13(IL-13)、转化生长因子β1(TGF-β1)和血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)在体外诱导真皮成纤维细胞,以甄选促进诱导Ⅰ型胶原蛋白高分泌的细胞因子。方法选用出生2d的SD大鼠背部皮肤进行真皮成纤维细胞原代培养,采用免疫荧光技术对其进行纯度鉴定。实验分为4组:PDGF-BB(30ng/mL)组、IL-13(100ng/m)组、TGF-β1(10ng/mL)组和不加任何处理因素的阴性对照组,用MTT法、ELISA检测在24h、48h、72h时的真皮成纤维细胞的增殖情况及培养液中Ⅰ型胶原蛋白的浓度。结果原代培养真皮成纤维细胞的纯度达90%以上。PDGF-BB、IL-13、TGF-β1均能促进真皮成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原蛋白分泌,在48h、72h时PDGF-BB组的培养液中Ⅰ型胶原蛋白浓度明显高于IL-13组、TGF-β1组及阴性对照组(P<0.05)。结论浓度为30ng/mL的PDGF-BB促进真皮成纤维细胞增殖和分泌Ⅰ型胶原蛋白的作用更为显著。

矽肺患者血清TGF-β1和PDGF蛋白的检测及临床意义

目的探讨矽肺患者血清TGF-β1和PDGF蛋白水平的变化及意义。方法应用ELISA方法测定了19例Ⅰ期、15例Ⅱ期、8例Ⅲ期矽肺患者和32例健康人血清中TGF-β1和PDGF蛋白水平的变化。结果与对照组相比,矽肺组血清中TGF-β1和PDGF水平均明显升高(P<0.01);矽肺患者血清TGF-β1水平随着矽肺分期的增加而明显增加(P<0.05,P<0.01),两变量相关分析显示TGF-β1和PDGF呈正相关(P<0.05)。结论检测矽肺患者血清TGF-β1和PDGF水平对了解患者病情的发生和发展、临床诊断和预后判断具有重要的临床意义。

补阳还五汤对失神经大鼠骨骼肌纤维化及TGF-β1/Smad3信号通路的影响

目的研究补阳还五汤(BHD)对失神经大鼠骨骼肌纤维化及转化生长因子(TGF)-β1/Smad3信号通路的影响,探讨其延缓肌萎缩的作用机制。方法32只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、弥可保组、BHD组,每组8只。采用坐骨神经截断的方法建立失神经肌萎缩模型。各组采用相应干预连续21 d。完整取下双侧腓肠肌计算肌湿重比值,苏木素-伊红(HE)染色观察肌萎缩和纤维化情况并测定肌纤维横截面积,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测腓肠肌组织中TGF-β1、Smad3、MyoD1、Pax7 mRNA含量,生物信息学分析TGF-β1、Smad3、MyoD1、Pax7蛋白之间的相互关系,Western印迹检测腓肠肌组织中TGF-β1、p-Smad3蛋白表达。结果与模型组相比,BHD组肌湿重比和横截面积明显升高(P<0.05);光镜下见模型组肌细胞明显萎缩、皱缩,细胞间隙大量结缔组织增生,纤维化明显,肌纤维束排列结构紊乱,BHD组肌细胞虽有萎缩,但肌纤维束排列结构有序,未见明显紊乱,肌细胞萎缩程度和纤维化程度均明显低于模型组;与模型组相比,BHD组TGF-β1、Smad3 mRNA表达水平和TGF-β1、p-Smad3蛋白表达水平明显降低,而MyoD1、Pax7 mRNA表达水平明显升高(均P<0.05);生物信息学分析结果显示,TGF-β1、Smad3、MyoD1、Pax7蛋白之间的关系基本呈流水线式的一一对应关系,TGF-β1首先作用于Smad3,再依次对MyoD1和Pax7进行调控。结论BHD可通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路转导途径,降低骨骼肌纤维化程度,进而延缓失神经肌萎缩的进程。

基于TGF-β1/Smad信号通路初步探讨虎杖醇提物对腺嘌呤诱导小鼠肾间质纤维化的改善作用

目的研究虎杖醇提物(ethanolic extract of Polygonum cuspidatum,PCE)对小鼠肾间质纤维化的保护作用及其潜在分子机制。方法将50只雄性C57BL/6N小鼠随机分为5组(n=10):正常对照组、模型组、虎杖醇提物低、中、高(75、150、300 mg/kg)剂量组。除正常对照组外,其他各组灌胃腺嘌呤构建肾间质纤维化模型,虎杖醇提物低、中、高剂量组同时灌胃给予不同剂量的虎杖醇提物混悬液。各组经灌胃给药42 d后用生化试剂盒测定血清肌酐(serum creatinine,Scr)和尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平,通过苏木精伊红染色和Masson三色染色分别观察小鼠肾组织病理学变化及胶原沉积情况,采用Western Blot法检测小鼠肾组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad6、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原蛋白(Collagen I)的表达情况。结果与正常对照组比较,模型组小鼠BUN、Scr水平显著增高(P<0.01)。肾组织病理学HE染色可见肾小管结构破坏,炎细胞浸润肾间质,完整的健存肾单位明显减少;Masson染色可见胶原纤维蓝色阳性染色面积明显增多。肾组织TGF-β1的表达明显增多(P<0.01),而TGF-β/Smad通路的负调节因子Smad6的表达显著下调(P<0.01)。上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)标志蛋白之一α-SMA、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)蛋白之一Collagen I的表达明显增加(P<0.01)。与模型组相比,虎杖醇提物各给药组BUN、Scr水平以及肾组织TGF-β1、α-SMA及Collagen I的蛋白表达水平呈剂量依赖性降低,Smad6的表达水平呈剂量依赖性升高。肾组织的病理改变及纤维沉积面积均有不同程度的改善。结论虎杖醇提物能减轻腺嘌呤诱导的小鼠肾功能损伤,改善肾间质纤维化,其机制与干预TGF-β1/Smad信号通路,抑制EMT及ECM蛋白沉积有关。

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1、PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的观察清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)mRNA基因表达的影响。方法以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,制备清肺口服液含药血清,作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测TGF-β1、PDGF-BBmRNA基因的表达,进行各组间比较。结果病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1、PDGF-BBmRNA表达均明显升高(P<0.01),含药血清组对3I、7b型攻击后的TGF-β1、PDGF-BBmRNA表达均有显著降低作用(P<0.01)。结论清肺口服液可下调TGF-β1、PDGF-BBmRNA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。