PDGF-AB对成纤维细胞增殖及DNA合成的影响

目的：探讨ＰＤＧＦ－ ＡＢ促进伤口愈合及其在瘢痕增生中的作用机理。方法：取体外培养的人正常皮肤及增生性瘢痕成纤维细胞（ｎｏｒｍａｌｓｋｉｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＮｓＦｂ，ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｓｃａｒｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＨＴｓＦｂ） ，用ＭＴＴ和３Ｈ－ ＴｄＲ掺入法观察ＰＤＧＦ－ ＡＢ对两种细胞增殖及ＤＮＡ合成的影响。结果：ＰＤＧＦ－ ＡＢ对两种成纤维细胞增殖及ＤＮＡ合成均有明显刺激作用，且均呈剂量依赖性关系，但作用有差异。结论：ＰＤＧＦ－ ＡＢ可能通过刺激成纤维细胞增殖及ＤＮＡ合成促进伤口愈合，但同时在瘢痕增生性疾病中可能起重要促进作用。

PDGF-AB对体外培养的成纤维细胞超微结构的影响

目的：观察PDGF－AB对体外培养的成纤维细胞超微结构的影响，探讨PDGF－AB促进创面愈合的机制．方法：取第3～6代培养的成纤维细胞，用0μg／L，12．5μg／L，50μg／L的PDGF－AB分别作用48h，然后用扫描电镜和透射电镜观察．结果：PDGF－AB明显增加成纤维细胞表面突起和纤维样物质，以及增强成纤维细胞的合成功能．结论：PDGF－AB可能通过激活、趋化成纤维细胞、增强细胞合成功能来促进创面愈合．

PDGF-AB对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨ＰＤＧＦ－ＡＢ促进伤口愈合的作用机理及其在瘢痕增生中的作用．方法：取体外培养的人正常皮肤及增生性瘢痕成纤维细胞（ｎｏｒｍａｌｓｋｉｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＮＳＦＢ；ｈｙｐｅｒ－ｔｒｏｐｈｉｃｓｃａｒｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＨＴＳＦＢ）测定生长曲线，用ＭＴＴ法观察ＰＤＧＦ－ＡＢ对其增殖影响的差异．结果：两种细胞生长曲线存在差异，ＰＤＧＦ－ＡＢ对两种成纤维细胞增殖均有明显刺激作用，且均呈剂量依赖性关系，但作用有差异．结论：ＰＤＧＦ－ＡＢ可能通过刺激成纤维细胞增殖促进伤口愈合。

PDGF-AB对成纤维细胞表达α-SM actin的影响

目的:研究PDGF-AB对成纤维细胞表达-αSM ac-tin的影响,探讨PDGF-AB促进伤口愈合的作用机制.方法:取体外培养的人正常皮肤成纤维细胞,用免疫组化(SABC)观察PDGF-AB对成纤维细胞表达α-SM actin的影响.结果:PDGF-AB能诱导成纤维细胞表达-αSM actin,且呈剂量依赖性关系.结论:PDGF-AB可能通过刺激成纤维细胞表达α-SM actin,促进成纤维细胞向肌成纤维细胞转化,增加伤口收缩,促进伤口愈合.

益气解毒通络颗粒对乙肝肝硬化患者肝星状细胞标记物VEGF和PDGF-AB的影响

目的:探讨益气解毒通络颗粒剂治疗乙肝肝硬化好转的分子机制,完善该方治疗乙肝肝硬化的理论基础。方法:选取2015年6月至2017年10月在北京中医药大学东直门医院,采用简单随机化分组方法,随机选择符合入排标准的体检中心体检健康者15例,肝炎门诊就诊的乙肝肝硬化患者42例。乙肝肝硬化患者均已规范使用抗病毒药恩替卡韦分散片治疗,入组后予益气解毒通络颗粒治疗6个月;对健康者,乙肝肝硬化患者治疗前、治疗6个月后,分别采集血样,待标本集中后采用酶联免疫吸附法成批检测VEGF、PDGF-AB含量。并将测定结果进行统计分析。结果:结果显示,血清VEGF水平乙肝肝硬化患者治疗前较健康者轻度升高,治疗后较治疗前及健康者均有所下降,但组间比较无统计学意义(P>0. 05);血清PDGF-AB水平乙肝肝硬化患者治疗前较健康者显著降低(P <0. 001),治疗后较治疗前有所升高(P <0. 05)但仍低于健康者(P <0. 05)。结论:VEGF和PDGF-AB水平的变化与乙肝后肝硬化的发病相关,益气解毒通络颗粒能够改善乙肝肝硬化患者血清VEGF和PDGF-AB水平,这可能是其治疗乙肝肝硬化的作用机制之一。

PDGF-AB对人正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞胶原网收缩影响的差异

目的:研究血小板衍生生长因子(PDGF) AB对人 正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞 胶原网(FPLC)收缩影响 的差异,探讨PDGF AB促进伤口愈合的作用机制及其在瘢痕 增生中的作用.方法:取体外培养的人正常皮肤(NsFb)及增 生性瘢痕成纤维细胞(HTsFb),建立成纤维细胞 胶原网模型, 比较PDGF AB对两种成纤维细胞 胶原网收缩影响的差异. 结果:PDGF AB对两种成纤维细胞 胶原网收缩均有明显促 进作用,且均呈剂量依赖性关系,但作用有差异.结论: PDGF AB可能通过刺激伤口收缩促进创面愈合,同时可能在 瘢痕挛缩性疾病中起重要作用.

富血小板纤维蛋白体外释放TGF-β和PDGF-AB影响因素的探讨

目的探讨不同方法对制备的富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)释放生长因子的影响。方法对志愿者进行静脉采血,分别以不同离心速度(2500r/min、3000r/min、3500r/min)、离心时间(10min、15min、20min)和除水方法(快速除水和缓慢除水)制备PRF,收集PRF所释放的生长因子,通过ELISA法比较不同方法所获得的PRF释放的TGF-β和PDGF-AB的浓度差异。结果以3000r/min的离心速度制备的PRF释放TGF-β和PDGF-AB含量显著高于其他两组;10min组和15min组制备的PRF释放TGF-β含量高于20min组,而PDGF-AB含量10min组显著高于其他两组;两种除水方法制备的PRF释放TGF-β和PDGF-AB含量无统计学差异(P>0.05)。结论不同离心速度、离心时间对PRF的特性存在一定的影响,而快速除水和缓慢除水对PRF特性的影响无显著性差异。

益气解毒通络颗粒对乙肝肝硬化肝星状细胞标记物PDGF-AB、PDGF-BB的影响

目的观察益气解毒通络颗粒剂治疗乙肝肝硬化好转的分子机制,完善该方治疗乙肝肝硬化的理论基础。方法随机选择我院体检中心体检健康者15例,肝炎门诊就诊的乙肝肝硬化患者42例,乙肝肝硬化患者均已规范使用抗病毒药恩替卡韦分散片治疗,入组后予益气解毒通络颗粒治疗6个月;对健康者,分别在乙肝肝硬化患者治疗前、治疗6个月后采集血样,待标本集中后采用酶联免疫吸附法成批检测血小板衍生生长因子-AB(PDGF-AB)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)的含量。并将测定结果进行统计分析。结果结果显示,乙肝肝硬化患者血清PDGF-AB水平治疗前较健康者差异显著(<0.01),治疗后较治疗前有所升高(<0.05),但仍低于健康者(<0.05);乙肝肝硬化患者血清PDGF-BB水平治疗前及治疗后与健康者差异显著(<0.01),治疗后较治疗前有所升高,但无统计学意义(>0.05);与治疗前比较,肝功能改善效果明显(<0.05)。结论 PDGF-AB和PDGF-BB水平的变化与乙肝后肝硬化的发病相关,益气解毒通络颗粒能够改善乙肝肝硬化患者血清PDGF-AB和PDGF-BB水平,但对于PDGF-AB的影响更甚。

PRF及所含三因子对大鼠脂肪干细胞增殖和黏附的影响

目的：研究富血小板纤维蛋白（PRF）及其所含三因子TGF-β1、PDGF-AB、VEGF分别对大鼠脂肪干细胞（ADSCs）增殖和黏附的影响。方法：将ADSCs培养在含有PRF膜和不同浓度的PDFG-AB、TGF-β1、BEGF中,细胞黏附实验检测培养2 h后细胞黏附能力,CCK-8法检测培养1~7 d细胞增殖。结果：黏附实验显示,PRF组的黏附细胞数显著高于阴性对照组（P〈0.05）;不同浓度的PDGF-AB组内黏附细胞数的差异无统计学意义（P〉0.05）;不同浓度的TGF-β1、VEGF组内黏附细胞数的差异有统计学意义（P〈0.05）。CCK-8实验表明,PRF组的细胞增殖在各个时间点（1、3、5、7 d）显著高于阴性对照组（P〈0.05）;不同浓度的PDGF-AB、VEGF组内细胞的增殖差异有显著性（P〈0.05）;不同浓度的TGF-β1组细胞增殖的差异无显著性（P〉0.05）。结论：PRF能提高ADSCs的增殖和黏附的能力。PDGF-AB和VEGF可促进ADSCs的增殖;TGF-β1和VEGF均可促进ADSCs的黏附,并呈一定的量效正相关。

血小板源生长因子-AB对成纤维细胞周期及DNA合成的影响

目的：探讨血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）－ＡＢ在创面愈合及瘢痕增生过程中的作用机制；方法：取第３代～６代体外培养的人正常皮肤成纤维细胞（ＮｓＦｂ）及增生性瘢痕成纤维细胞（ＨＴｓＦｂ），经ＰＤＧＦ－ＡＢ作用后，用３Ｈ－ＴｄＲ参入法测定ＤＮＡ合成的变化，用流式细胞术测定细胞周期的变化．结果：ＰＤＧＦ－ＡＢ作用后，两种细胞ＤＮＡ合成均明显增加，Ｓ期细胞数百分比均明显增高，Ｇ１期细胞不断进入Ｓ期，但作用有差异．结论：ＰＤＧＦ－ＡＢ能加快细胞分裂增殖，加速创面愈合，在瘢痕增生中可能起重要作用．

成纤维细胞生长因子-10对3种与修复有关内源性生长因子表达的调控作用

目的 观察成纤维细胞生长因子 (FGF 10 )对人角朊细胞表达转化生长因子 α(TGFα)、血小板源性生长因子 AB(PDGF AB)和血管内皮细胞生长因子 (VEGF)的作用。方法 FGF 10工作浓度为4、16、12 5和 5 0 0 μg/ L,不含 EGF和含 EGF的无血清角朊细胞培养液分别作为阴性和阳性对照。细胞接种密度为 2 5 0 0和 375 0 0 0细胞 / cm2 ,2 4、4 8和 72 h进行培养上清中的细胞计数 ,TGFα、PDGF AB和 VEGF的含量用酶联免疫吸附法 (EL ISA)测定。结果 1低接种密度、细胞处于未融合生长状态时 ,各组 2 4 h培养上清中 TGFα含量均较低 ,4 8h的 16μg/ L以上组及 72 h各浓度组培养上清中 TGFα的分泌量均显著高于阴性对照组单个细胞的 TGFα分泌量。高接种密度、细胞处于融合生长状态时 ,2 4 h的培养上清中未检测到 PDGF AB;4 8和 72 h的培养上清中 ,12 5和 5 0 0 μg/ L 的 FGF 10组 PDGF AB浓度及每 10 6 细胞的分泌量显著高于阴性对照组 ,且 PDGF AB的分泌呈 FGF 10剂量依赖性。 2低接种密度时 ,FGF 10各组VEGF浓度及每 10 6细胞 VEGF分泌量在各时间点均与阴性对照组无明显差异 ,而阳性对照 EGF组 VEGF分泌显著高于其它各组。结论 FGF 10上调角朊细胞分泌 PDGF AB、TNFα可能与 FGF 10间接作用于成纤维细胞、?

PDGF-D抗体对体外破骨前体细胞分化过程影响的相关研究

目的:用外源性血小板衍生生长因子-D抗体(Platelet-derived growth factor D antibody,PDGF-DAb)体外刺激外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),观察其对破骨前体细胞分化过程的影响。方法:采集血并分离单个核细胞,将所得细胞分为三组:诱导组(PDGF-D+PBMCs)、阻断组(PDGF-D+PDGF-D Ab)和对照组(细胞培养基+PBMCs)。于第15天应用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色和骨吸收实验观察破骨样细胞(Osteoclastlike cells,OLCs)的分化及活性;Real-time PCR检测OLCs标志基因TRAP、Cathepsin K、MMP-9(Matrix metalloproteinases 9)mR-NA的表达;Western blot检测各组细胞中Cathepsin K蛋白的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞上清液中MMP-9的表达。结果:TRAP染色和骨吸收实验见诱导组有大量具有骨吸收功能的OLCs,而阻断组和对照组均未见。阻断组和对照组TRAP、Cathepsin K、MMP-9 mRNA的相对表达量均显著低于诱导组(P<0.05),且二组间无显著差异(P>0.05)。对照组和阻断组中Cathepsin K蛋白(Western blot检测)和MMP-9(ELISA检测)表达均低于诱导组(P<0.05),且两组间无显著差异(P>0.05)。结论:外源性PDGF-D抗体可阻断由PDGF-D诱导的PBMCs向OLCs分化过程。

2种方法制备的血小板凝胶释放PGFs含量及生物活性的初步研究

目的了解血小板凝胶(PG)释放血小板生长因子(PGFs)的动力学过程及其对细胞增殖作用的影响,比较凝血酶-Ca和CaCl22种PG制备方法。方法将8份浓缩血小板每份分为2份组成2组,分别加入凝血酶-Ca和CaCl2处理,并在处理前(0点)以及处理后的1、2、4和6 h分别取样,用ELISA方法检测其中PGFs的含量;将L929细胞在含有1%、5%、10%、20%和30%、40%的PG上清的培养基中培养,无血清培养基为阴性对照,10%FBS为阳性对照,分别在培养的24、48和72 h应用CCK-8试剂盒测定细胞数量,考察2种方法处理6 h的样品对细胞增殖的影响。结果 CaCl2和凝血酶-Ca法制备的PG在6 h释放的PDGF-AB含量分别为(101.37±26.09)vs(127.64±33.81)ng/ml,TGF-β1含量分别为(101.08±20.36)vs(107.09±13.72)ng/ml;PG上清对细胞增殖具有明显的促进作用,细胞培养72 h相对于阴性对照的细胞增殖倍数,CaCl2组由1%～40%浓度分别为(1.53±0.24)、(1.88±0.21)、(1.92±0.50)、(1.73±0.61)、(1.71±0.50)、(1.39±0.67)倍,凝血酶-Ca组分别为(1.68±0.29)、(1.90±0.19)、(1.88±0.70)、(1.53±0.65)、(1.51±0.59)、(1.09±0.55)倍,2组不同浓度的上清细胞增殖促细胞增殖作用均高于阴性对照组(P<0.05),同一时间点,2组PG上清浓度从1%增至10%,促作用随之增加,当浓度达到20%时,促细胞增殖作用开始下降。结论凝血酶-Ca法和CaCl2法制备的PG均在1 h内基本完全释放PDGF-AB、TGF-β1 2种主要PGFs;2种方法制备的PG上清均在一定的浓度范围内对细胞增殖具有促进作用。

PRF及所含三因子对大鼠脂肪干细胞迁移的影响

目的 :研究富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)及所含三因子TGF-β1、PDGF-AB、VEGF对培养的大鼠脂肪干细胞(adipose tissue-derived stem cell,ADSCs)迁移的影响,并初步探讨其机制。方法:无菌切除SD大鼠腹股沟处的白色脂肪组织,采用酶消化法原代培养SD大鼠ADSCs,多向诱导分化法鉴定ADSCs,一次离心法提取制备PRF膜。采用划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移能力,实时荧光定量PCR分析迁移相关因子MT1-MMP和MMP-2 m RNA的表达情况。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果 :Transwell实验显示,PRF组的迁移细胞数显著高于阴性对照组(P<0.05)和抑制剂组(P<0.05);不同浓度的TGFβ1、PDGF-AB、VEGF组的组内迁移细胞数的差异显著(P﹤0.05)。经PCR检测,PRF组细胞基因MMP2和MT1-MMP较对照组的表达显著上调(P<0.05),TGF-β1、PDGF-AB和VEGF的细胞基因MMP2和MT1-MMP较对照组表达均上调,组间差异显著(P<0.05)。结论 :PRF促进了ADSCs的迁移,PRF所分泌的三因子均可不同程度地促进ADSCs的迁移,并呈一定的量-效关系,其迁移能力的增加可能与MT1-MMP和MMP-2 m RNA的上调密切相关。

离心速度对富血小板纤维蛋白生物学特性的影响

目的探讨离心速度的不同对制备的富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)结构、白细胞与血小板回收率及生长因子释放量的影响。方法分别采用3种离心速度(2500rpm;3000rpm;4000rpm)制备PRF,使用组织学和扫描电镜观察PRF凝胶结构;血细胞分析仪检测白细胞、血小板浓度;酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测TGF-β1、PDGF-AB的浓度。结果 3种PRF凝胶的主体结构为纤维蛋白聚集形成的立体网状结构,血小板与白细胞主要集中在PRF凝胶的白膜层。2500rpm与3000rpm制备的PRF,血小板与白细胞回收率及TGF-β1、PDGF-AB的释放量高于4000rpm(P<0.05),2500rpm与3000rpm间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论离心速度的不同会在一定程度上影响PRF的生物学特性,2500rpm与3000rpm是制备PRF较为理性的转速。

血小板衍生生长因子对成纤维细胞合成胶原的影响

目的 探讨血小板衍生生长因子 (PDGF AB)促进伤口愈合的作用机理及其在瘢痕增生中的作用。方法 取体外培养的人正常皮肤及增生性瘢痕成纤维细胞 ,用原位杂交法观察PDGF对两种细胞表达Proα1(Ⅲ )mRNA的影响。结果 PDGF AB对两种成纤维细胞表达Proα1(Ⅲ )mRNA均有明显促进作用 ,且均呈剂量依赖性关系 ,但作用有差异。结论 PDGF AB可能通过刺激成纤维细胞合成胶原等细胞外基质促进伤口愈合 ,同时也可导致胶原等细胞外基质的沉积 ,从而促进瘢痕增生。