PDGF-D抗体对体外破骨前体细胞分化过程影响的相关研究

目的:用外源性血小板衍生生长因子-D抗体(Platelet-derived growth factor D antibody,PDGF-DAb)体外刺激外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),观察其对破骨前体细胞分化过程的影响。方法:采集血并分离单个核细胞,将所得细胞分为三组:诱导组(PDGF-D+PBMCs)、阻断组(PDGF-D+PDGF-D Ab)和对照组(细胞培养基+PBMCs)。于第15天应用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色和骨吸收实验观察破骨样细胞(Osteoclastlike cells,OLCs)的分化及活性;Real-time PCR检测OLCs标志基因TRAP、Cathepsin K、MMP-9(Matrix metalloproteinases 9)mR-NA的表达;Western blot检测各组细胞中Cathepsin K蛋白的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞上清液中MMP-9的表达。结果:TRAP染色和骨吸收实验见诱导组有大量具有骨吸收功能的OLCs,而阻断组和对照组均未见。阻断组和对照组TRAP、Cathepsin K、MMP-9 mRNA的相对表达量均显著低于诱导组(P<0.05),且二组间无显著差异(P>0.05)。对照组和阻断组中Cathepsin K蛋白(Western blot检测)和MMP-9(ELISA检测)表达均低于诱导组(P<0.05),且两组间无显著差异(P>0.05)。结论:外源性PDGF-D抗体可阻断由PDGF-D诱导的PBMCs向OLCs分化过程。

PDGF-D/PDGFR-β在胃癌中的表达及与血管形成的关系

为了探讨PDGF-D及其受体PDGFR-β在胃癌组织中的表达及其与血管生成的关系.采用免疫组织化学法检测88例胃癌手术切除标本中癌组织、癌旁组织及正常胃粘膜中PDGF-D/PDGFR-β的表达,采用CD34标记的微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD).分析PDGF-D/PDGFR-β的表达与胃癌临床病例特征及MVD的关系.研究发现胃癌组织中的PDGF-D/PDGFR-β的表达及MVD显著高于癌旁组织及正常胃粘膜(P<0.05).PDGF-D/PDGFR-β的表达及MVD的值与胃癌的TNM分期、浸润深度及局部淋巴结转移有关(P<0.05);MVD还与胃癌的直径有关(P<0.05),PDGF-D/PDGFR-β两者的表达呈正相关性(r=0.647,P<0.05).PDGF-D/PDGFR-β阳性组的MVD平均值高于PDGF-D/PDGFR-β阴性组(P<0.05).结果提示,PDGF-D及其受体PDGFR-β在胃癌组织中呈特异性的高表达,并与胃癌的MVD有关,可能参与胃癌的血管形成,在胃癌的进展过程中起着重要作用.

Gli1和PDGF-D在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的:探讨Gli1和PDGF-D在结直肠癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学S-P法、Western blot法分别定性、定量检测54例结直肠癌组织及其对应30例癌旁正常组织中Gli1和PDGF-D蛋白表达情况并结合临床病例资料进行分析。结果:免疫组织化学结果显示Gli1和PDGF-D在结直肠癌中的阳性表达率分别为(72.22%、74.07%),与正常组织的阳性表达率(6.67%、33.33%)相比显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测Gli1和PDGF-D在癌组织中相对表达量分别为0.731±0.238和0.817±0.288,与正常组织0.196±0.041和0.236±0.060相比,两者表达也显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05);Gli1和PDGF-D的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),PDGF-D还与肿瘤分期有关(P<0.05);两者表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、侵袭深度均无明显相关性(P>0.05);Gli1和PDGF-D在结直肠癌中的表达呈正相关(P<0.05)。结论:Gli1和PDGF-D在结直肠癌中异常高表达,可能共同参与并促进结直肠癌的恶性进程。

PDGF-C、PDGF-D在大鼠肾间质纤维化过程中的作用

目的探讨血小板源性生长因子-C(PDGF-C)、血小板源性生长因子-D(PDGF-D)在大鼠肾间质纤维化模型中的表达及意义。方法将28只SD大鼠按照单侧输尿管梗阻(UUO)的方法建模,分别于造模后的3 d、1周、2周、3周分别将7只大鼠处死,取出两侧肾脏(未行手术侧的肾脏设为对照组)制作石蜡切片在光镜下观察。应用免疫组化(SABC)法检测模型大鼠肾组织中PDGF-C、PDGF-D的表达情况。结果对照组中PDGFC在肾小动脉的血管平滑肌细胞和肾小管上皮细胞中少量表达,PDGF-D主要在血管平滑肌细胞和肾小球系膜细胞表达。而模型组肾脏中PDGF-C、PDGF-D的表达显著上调,与对照组相比差异有统计学意义(P均<0.05),且肾间质及肾小管中PDGF-C、PDGF-D的表达强度与肾间质纤维化程度呈正相关(r=0.73,P<0.05;r=0.67,P<0.05)。结论 PDGF-C、PDGF-D均参与肾间质纤维化过程,并可能发挥着重要作用。

PDGF-D与MPO在大肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨血小板源性生长因子D(PDGF-D)与髓过氧化物酶(MPO)在大肠癌组织和大肠腺瘤组织中的表达及其临床意义。方法通过免疫组织化学染色法检测大肠癌组织及大肠腺瘤组织中PDGF-D与MPO的表达及其相关性。采用免疫组化染色方法检测88例大肠癌石蜡包埋组织、72例大肠腺瘤组织中PDGF-D与MPO的表达,并分析MPO和PDGF-D的表达与大肠癌临床病理特征的关系。结果大肠癌组织中PDGF-D与MPO阳性表达率分别为85.23%、63.64%,均显著高于大肠腺瘤组织(34.72%、27.78%),差异有统计学意义(P<0.01)。PDGF-D与MPO在大肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.29,P<0.05)。结论 PDGF-D与MPO可能参与了大肠癌的启动及发生过程,在大肠癌的发生、发展和转移过程中起着重要作用。

PDGF-D表达与大肠癌血管形成的关系

近年来,血管生成在肿瘤发生、发展中作用的研究备受关注。研究表明,血管生成是肿瘤生长的先决条件,它为肿瘤组织提供营养物质,新生血管形成后,肿瘤细胞会呈指数增长,不仅使肿瘤生长加速、侵袭性增强,而且增加其血行转移的机会。

外源性PDGF-DD蛋白对肝癌细胞株BEL-7402的体外作用

目的:探讨外源性PDGF-DD蛋白对PDGF-D和β-PDGFR阳性表达的人肝癌细胞株BEL-7402增殖和转移相关基因VEGF及CXCR4表达的影响。方法:浓度为0～100pg/mL PDGF-DD蛋白作用于肝癌细胞株BEL-740248h,MTT检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR检测VEGFmRNA和CXCR4 mRNA表达。结果:外源性PDGF-DD蛋白干预细胞后,可促进细胞增殖,且在0～100pg/mL范围内呈剂量依赖性;周期分布显示G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例增多;且上调VEGFmRNA和CXCR4 mRNA的表达。结论:外源性PDGF-DD能促进BEL-7402细胞增殖,上调VEGF、CXCR4 mRNA的表达。提示PDGF-D及其信号传导系统在肝癌的发生、发展及转移中可能发挥重要的作用,可作为肝癌预后预测指标和治疗靶点。

PDGF-D在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨PDGF-D在宫颈癌组织中的表达。方法:应用免疫组化SP法检测caspase-9在30例宫颈鳞癌、90例宫颈上皮内瘤样变(CIN)及30例正常宫颈组织中的表达。结果:PDGF-D在五种组织中的表达逐渐增强。其中,正常宫颈组与CIN之间表达差异无统计学意义(P>0.05),与宫颈癌组表达差异有统计学意义(P<0.05);CINⅢ级和宫颈癌组之间表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PDGF-D在宫颈癌的发生、发展起一定作用,提示新生血管的形成与宫颈癌的发生紧密相关。

绵羊PDGF-D基因多态性与尾型的关联

旨在研究血小板源性生长因子-D(platelet-derived growth factor-D, PDGF-D)与绵羊尾型的关系,寻找可用的分子标记,同时对前期的研究结果进行验证。本研究在533只绵羊(湖羊、藏羊、杜泊×湖羊杂交羊)试验群体中,选取藏羊、湖羊两个品种各30个个体的血液样本,等量混合分别构建两个DNA混池,对PDGF-D基因的外显子及其上下游1 000 bp扩增,目的片段测序分析后,采用飞行质谱方法对检测到的SNP位点进行基因分型,Haploview4.1软件对突变位点进行连锁不平衡分析,使用SPSS19.0软件对PDGF-D基因SNP位点与尾型性状进行关联分析。结果显示,在PDGF-D基因及其上下游1 000 bp共找到6个突变位点,其中rs5、rs27、rs28与尾长、尾宽及尾周长均相关,rs6、rs19仅与尾长相关,rs13与尾宽、尾周长均显著相关(P<0.05)。连锁不平衡分析结果表明,rs6～rs13之间存在强连锁;组合基因型与尾型关联分析结果显示,CCGG型个体无论是在尾长、尾宽还是在尾周长上,其平均值均显著(P<0.05)或者极显著(P<0.01)低于其他组合基因型,但在群体中的数量较少。结果表明,PDGF-D基因对绵羊的尾型有着较为显著的影响,其SNP位点作为分子标记对于绵羊尾型选育工作有着一定的指导意义,可考虑将CCGG型作为筛选小尾绵羊的潜在分子标记,但是该基因型个体在群体中所占的比重较小,可适当增强人工选育以扩大数目。

CD24mRNA和PDGF-D mRNA在结直肠癌组织中的表达及意义

目的检测CD24mRNA和PDGF-D mRNA在结直肠癌组织及切缘正常组织的表达情况,探讨两者与结直肠癌发生发展的关系。方法收集54例结直肠癌组织及其相应的切缘正常组织,用RT-PCR方法分别检测两种组织中CD24mR-NA和PDGF-D mRNA的表达水平,应用SPSS17.0统计学软件分析它们与临床病理之间的关系。结果 CD24mRNA和PDGF-D mRNA在结直肠癌组织中的表达水平高于切缘正常组织(0.8322±0.0856:0.2065±0.0871,0.8482±0.0692:0.2533±0.0716)。CD24mRNA的表达与结直肠癌的浸润程度有关(P<0.05),与年龄、肿瘤的分化程度、Duke's分期、肿瘤大小等因素无关(P>0.05)。PDGF-D mRNA的表达与年龄、肿瘤的分化程度、Dukes分期有关(P<0.05),与结直肠癌的浸润程度、肿瘤大小因素无关(P>0.05)。相关分析表明CD24mRNA和PDGF-D mRNA在结直肠癌组织中表达呈正相关(rs=0.383,P=0.004)。结论 CD24和PDGF-D在结直肠癌组织中均呈高表达,且与结直肠癌的发生发展密切相关,提示两者可能成为结直肠癌早期诊断和评价预后的新指标,并为结直肠癌的靶向治疗提供新思路。

HIF-1α及PDGF-D与前列腺癌相关性的研究进展

低氧环境是恶性肿瘤快速生长与侵袭、转移的重要因素之一,肿瘤的发生及侵袭还依赖于充足的微血管形成和血液供应。其中,缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在调节细胞内氧代谢的过程中起着重要的作用,同时,血小板源性生长因子D(PDGF-D)是重要的血管生长因子和强有力的促细胞分裂原。本文对HIF-1α和PDGF-D在前列腺癌中的最新研究进展进行综述。

PDGF-D在肿瘤生长及肿瘤靶向VEGF治疗中的研究现状

恶性肿瘤的发生发展、侵袭、转移均依赖新生血管的生成。血小板源性生长因子-D(Platelet-derived growth factor-D,PDGF-D)是重要的血管生成因子,可通过调节血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达来抵消或加强肿瘤靶向VEGF治疗的有效性,还可通过激活其他非VEGF依赖的血管生成通路,降低肿瘤靶向VEGF治疗的效果。联合PDGF-D、VEGF将为肿瘤的治疗提供新的方向。

PDGF-D和VEGF在胃癌中的表达及其意义

目的探讨血小板源性生长因子D(PDGF-D)和血管内皮生长因子(VEGF)在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系。方法用免疫组织化学(SP法)检测胃组织中PDGF-D和VEGF蛋白的表达,用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测部分胃癌组织标本PDGF-D和VEGFmRNA,分析两者之间的相关性及其与临床病理特征之间的关系。结果胃癌组织中PDGF-D和VEGF蛋白的表达显著高于癌旁组织和正常胃组织(P<0.05);PDGF-D和VEGF的表达与胃癌的TNM分期、侵袭深度及淋巴结转移有关(P<0.05),PDGF-D的表达还与胃癌的分化程度有关(P<0.05);PDGF-D和VEGF在mRNA水平和蛋白水平的表达均呈正相关(均P<0.05)。结论PDGF-D和VEGF在胃癌组织中特异性高表达,可能在胃癌的发生、发展与转移中起着重要作用。

血小板衍生生长因子D(PDGF-D)转基因鼠模型的鉴定

目的 :通过SouthernBlot的方法鉴定PDGF D转基因鼠。方法 :显微注射Alpha MyHC PDGF D质粒后 ,产生的PDGF D转基因c5 7小鼠养至 4～ 6周。取 0 5～ 1 0cm的小鼠尾巴 ,蛋白酶K消化过夜 ,提取基因组DNA。PCR方法初步筛选 ,阳性鼠进行进一步的SouthernBlot验证。紫外分光光度法定量基因组DNA ,EcoRI酶切过夜 ,酶切产物经纯化后 ,电泳 ,转膜。PCR方法制备Alpha MyHC PDGF D载体上特异的hGHPolyA探针 ,然后由32 P dCTP标记探针 ,与转好的膜相互杂交 ,- 70摄氏度在X光片上曝光约 1个月 ,得到转基因鼠鉴定的结果。结果 :SouthernBlot显示 4笼共 2 0只PDGF

PDGF-C和PDGF-D对心血管系统疾病影响的研究进展

心血管系统是发育过程中最早形成的器官之一,对其他器官和组织的形成和功能起着至关重要的作用。心血管系统的功能和稳态受到许多重要分子的精细调控,大量的研究表明血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)及其受体是心血管系统的重要调节因子。尽管PDGF-C和PDGF-D是PDGF家族中相对较新的成员,但它们作为血管生成和生存因子在心血管系统中的重要作用已得到充分证明。本文就PDGF-C和PDGF-D对心血管系统疾病的影响作一综述。

PDGF-D稳定沉默后对乳腺癌细胞SK-BR-3生物学功能的影响

目的通过慢病毒载体沉默乳腺癌细胞系SK-BR-3中血小板衍生生长因子D(PDGF-D)基因的表达,探讨PDGF-D基因沉默后对乳腺癌细胞增殖、凋亡及迁移的调控作用。方法应用RT-PCR及蛋白质印迹方法检测5种乳腺癌细胞系中PDGF-D的表达状况;设计人PDGF-D基因的shRNA慢病毒载体,在293T细胞中包装病毒并感染PDGF-D高表达的乳腺癌细胞系,运用蛋白质免疫印迹的方法鉴定其对PDGF-D基因的沉默效果;PDGF-D基因沉默后通过细胞增殖实验和软琼脂克隆形成实验检测其对细胞增殖能力的影响,并应用流式细胞技术检测细胞凋亡;运用Transwell迁移实验检测细胞的体外侵袭迁移能力。结果 PDGF-D在5种细胞系中存在差异性表达,其中具有低转移潜能的HT-29和SK-BR-3细胞与具有高转移潜能的LOVO、RKO和SW620细胞相比,具有更高的PDGFD表达水平(t=3.880,P<0.05)。选取低转移细胞株中PDGF-D表达相对较高的SK-BR-3作为研究对象,构建PDGF-D shRNA慢病毒载体沉默SK-BR-3细胞中PDGF-D的表达,蛋白质免疫印迹结果提示,PDGF-D稳定沉默的SK-BR-3细胞系构建成功;在稳定沉默PDGF-D基因后,MTT细胞增殖实验和软琼脂克隆形成实验表明SK-BR-3细胞增殖能力增强(F=75.23,P<0.001);流式细胞技术检测显示PDGF-D基因沉默后可抑制SK-BR-3细胞凋亡(F=84.44,P<0.001);细胞小室实验结果显示,PDGF-D沉默后SK-BR-3迁移能力增强(F=155.9,P<0.001)。结论 PDGF-D基因可能与乳腺癌的细胞增殖、凋亡与转移有关,进而参与了乳腺癌的发生、发展。

下调胃癌细胞PDGF-D表达对共培养HUVECs生长和功能的影响

目的:探讨通过RNA干扰下调血小板源性生长因子-D(PDGF-D)基因在胃癌SGC-7901细胞中的表达对与其共培养的脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)生长和功能的影响.方法:构建靶向PDGF-D的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,转染胃癌SGC-7901细胞后,通过RT-PCR,Western Blot检测干扰前后PDGF-D的表达;用ELISA法检测培养液上清中血管内皮生长因子(VEGF)的含量;将胃癌细胞SGC-7901与HUVECs共培养后,细胞计数法检测细胞生长变化,流式细胞术测量细胞周期变化,血管形成实验检测HUVECs的血管形成能力.结果:PDGF-D-shRNA1,PDGF-D-shRNA2重组载体均能使SGC-7901细胞中PDGF-D基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调(P<0.05),且后者抑制效果更好;干扰后胃癌细胞培养液上清中的VEGF下降;与转染后的SGC-7901细胞共培养的HUVECs生长速度明显变慢,且无管状结构形成.结论:重组真核载体能有效抑制SGC-7901细胞的PDGF-D表达,并通过减少VEGF的表达来抑制HUVECs生长和血管形成能力.

Livin、caspase-9、PDGF-D及VEGF与宫颈癌发生发展关系的研究进展

肿瘤的发生、发展不仅和细胞的增殖及凋亡失衡有关,也与血管形成关系密切。宫颈癌是近年来危害女性健康的最常见恶性肿瘤之一,现就近年来与宫颈癌发生发展相关的Livin、caspase-9、PDGF-D及VEGF研究进展综述如下。

血小板源性生长因子基因多态性与冠状动脉粥样斑块性质的相关性

目的:探讨PDGF-D rs3809021、rs7950273位点基因多态性与冠状动脉粥样硬化斑块性质的相关性。方法 :273例冠心病患者根据冠脉造影及血管内超声检查(IVUS)结果将粥样斑块分为稳定斑块组、易损斑块组、混合斑块组;应用聚合酶链反应(PCR)技术检测PDGF-D rs3809021、rs7950273基因多态性及测序鉴定,并与112例正常者对照。结果:PDGF-D基因rs3809021位点多态性在冠心病组和对照组的分布差异无统计学意义。PDGF-D基因rs7950273位点中,携带C等位基因的基因型(CG+CC)可增加总体冠心病发病风险;易损斑块组患者的C等位基因频率分布最高。结论:PDGF-D rs7950273位点基因多态性与冠状动脉粥样硬化斑块性质相关,C等位基因使易损斑块的发生率增加,rs7950273位点C等位基因可能是冠心病的遗传易感基因。

血小板衍生生长因子⁃D对器官纤维化调控作用及其抑制剂

纤维化是机体对损伤部位进行修复的重要过程,表现为细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积增加,严重者出现组织瘢痕化从而破坏组织结构造成组织和器官功能丧失。纤维形成是多种信号通路参与的细胞反应过程,多种生长因子可激活间充质细胞(成纤维细胞、周细胞以及肌成纤维细胞),促进细胞合成分泌ECM来维持病理性的纤维化进程,ECM提供组织稳定性,它通过与血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factors,PDGFs)等多种生长因子结合,调控组织稳态和促进伤口愈合。PDGFs中的血小板衍生生长因子-D(platelet-derived growth factor-D,PDGF-D)在体内和体外条件下均可促进细胞增殖,而PDGF-D促进成纤维细胞过度增殖常见于器官和组织的纤维化,并且PDGF-D在间充质来源细胞的激活、增殖、转分化以及ECM的合成与分泌发挥重要作用。本文讨论了PDGF-D信号通路在器官纤维化中的作用,以及目前特异性针对PDGF-D信号通路抑制剂的研究和应用的优缺点,结合PDGF-D激活机制与其结构的关系,提出新的靶向PDGF-D生长因子的药物研究方向,进一步探讨PDGF-D作为抗纤维化治疗靶点存在的机遇与挑战。