稳定表达FIP1L1-PDGFRA及其突变体细胞株的构建和耐药性评价

目的构建能稳定表达FIP1L1-PDGFRA融合基因(F/P)及其T674I和D842V突变体的小鼠原B细胞株BaF3-F/P、BaF3-F/P-T674I和BaF3-F/P-D842V,并通过考察它们对酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)的响应以评价其活性。方法用慢病毒感染技术将目的基因导入BaF3细胞;RT-qPCR检测mRNA表达;CCK-8法检测TKIs对稳转细胞株增殖的抑制作用。结果构建的BaF3-F/P、BaF3-F/P-T674I和BaF3-F/P-D842V细胞株均能转录FIP1L1和PDGFRA mRNA,并表现出不依赖IL-3增殖的恶性表型特征以及对相应TKIs的敏感性。结论成功构建了能稳定表达F/P及其T674I、D842V突变体的小鼠原B细胞株,为开发以此为靶点的化合物提供良好的细胞模型。

CD117、PDGFRA蛋白单独及联合DOG1检测在胃肠道间质瘤中的诊断价值

目的:探讨组织中CD117、PDGFRA两种蛋白表达在胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST)中的诊断价值及联合DOG1蛋白检测的意义。方法:回顾性对99例GIST和25例非GIST肿瘤标本进行CD117、PDGFRA和DOG1蛋白表达进行检测并进行相关性分析。结果:GIST组CD117、PDGFRA和DOG1蛋白表达率分别为93.94%(93/99)、53.54%(53/99)和90.91%(90/99),非GIST组分别为4.00%(1/25)、4.00%(1/25)和12.00%(3/25),组间比较均有统计学意义(P<0.05);GIST组性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、组织学类型和危险度分级等临床病理参数与CD117、PDGFRA和DOG1蛋白表达无统计学意义(P>0.05);CD117、PDGFRA、DOG1、CD117和DOG1联合、PDGFRA和DOG1联合及三者联合判断GIST的敏感性分别为0.989、0.981、0.968、0.960、0.933和0.961,特异性分别为0.800、0.343、0.710、0.840、0.947和0.955,ROC曲线下面积(AUC)分别为0.945、0.748、0.895、0.895、0.840和0.975。结论:GIST中CD117、PDGFRA及DOG1蛋白表达在胃肠道间质瘤中的优势人群有待进一步研究;CD117、PDGFRA蛋白单独及联合DOG1检测可提高对GIST诊断的准确度。

胃肠道间质瘤KIT及PDGFRA基因突变的检测及分析

目的:检测胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GISTs)KIT及PDGFRA基因的突变位点及类型,探讨其在GIST发病机制中的作用。方法:收集西京医院病理科2006年10月至2010年10月胃肠道间质瘤病例38例,男性20例(52.6%),女性18例(47.4%),从福尔马林固定石蜡包埋(formalin-fixed paraffin-embedded,FFPE)组织中提取基因组DNA。通过PCR扩增目的片段后测序,检测38例样本的KIT和PDGFRA基因突变类型。结果:在38例样本中共检测出KIT基因突变34例,其中32例发生在外显子1 1,突变形式有点突变、插入突变与缺失突变;2例发生在外显子9,均为重复性突变。同时还检出PDGFRA基因突变1例,其余3例样本为野生型。结论:大多数GISTs中存在KIT基因的突变,PDGFRA基因突变可见于部分缺乏KIT突变的GIST中。

PAX-5、CD117、PDGFRA在胃肠道神经内分泌肿瘤中的表达及意义

目的研究PAX-5、CD117、PDGFRA在胃肠道神经内分泌肿瘤中的表达,并分析与肿瘤生物学特点及患者生存时间的关系。方法应用组织芯片及免疫组化法,对96例胃肠道神经内分泌肿瘤的免疫表型和预后进行分析。结果 PAX-5、CD117、PDGFRA蛋白的阳性率分别为31.3%、19.8%、53.1%。PAX-5和PDGFRA表达与胃肠道神经内分泌肿瘤类型、肿瘤大小、TNM分期及淋巴结转移有显著相关性,CD117表达与TNM分期及淋巴结转移有显著相关性。TNM分期、淋巴结转移、肿瘤大小、CD117、P53、Ki-67表达与生存时间呈负相关,但只有TNM分期、CD117表达和Ki-67高表达为影响预后的独立因素。结论 PAX-5、CD117、PDGFRA的表达可能与胃肠道神经内分泌肿瘤的发生发展有关,CD117表达和Ki-67高表达是独立预后因子,PAX-5可以作为潜在的分子治疗靶点。

胃肠间质瘤患者肿瘤组织中c-Kit基因和PDGFRA基因突变的分子病理检测分析

目的:探讨胃肠间质瘤(gastrointestinal stomal tumors,GIST)患者肿瘤组织中c-Kit和PDGFRA基因各亚型突变情况的研究。方法:应用直接测序方法检测65例GIST石蜡组织中c-Kit基因9、11、1 3和1 7外显子和P D G F R A基因1 2和1 8外显子突变情况。结果:G I ST肿瘤组织中c-K i t基因总突变率为63.08%(41/65),外显子9、11、13和17的突变率分别为23.08%(15/65)、35.38%(23/65)、1.54%(1/65)和3.08%(2/65);c-Kit基因各外显子之间双重突变共2例(3.08%),其中9外显子与11外显子双重突变1例(1.54%),11外显子与17外显子双重突变1例(1.54%);c-Kit基因11号外显子内双重突变2例(3.08%),三重突变1例(1.54%)。PDGFRA基因总突变率为3.08%(2/65),均为外显子18突变。c-Kit基因和PDGFRA基因双突变共存型1例(1.54%),为c-Kit基因13外显子V654L点突变和PDGFR A基因18外显子D842V点突变。结论:GIST患者中c-Kit基因存在较高的突变率,尤其为9和11外显子突变,其基因突变亚型分类能指导精准医学下伊马替尼的肿瘤靶向治疗,PD GF R A基因突变率和存在两种及其以上突变发生的发生概率虽低但不容忽视。

CD117和PDGFRa在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的:本研究拟检测CD117和PDGFRa在ENKCL组织中的表达情况,并结合临床病理资料,探讨其临床预后意义。方法:37例临床、病理及预后资料详尽的ENKCL病例纳入本研究。采用免疫组化二步法检测CD117和PDGFRa蛋白的表达并结合染色强度和染色细胞的比例对标记结果进行评价。相关分析采用四格表精确概率检验法,生存分析采用Kaplan-Meier法。结果:37例ENKCL中CD117和PDGFRa的阳性率分别为41%和78%,而CD117和PDGFRa的表达与患者的各项临床特点及预后均无明显相关性。结论:部分ENKCL中存在CD117和PDGFRa过表达的现象,提示上述蛋白可能参与了ENKCL的发生、发展过程,但其确切的机制尚不清楚。ENKCL是靶向治疗药物STI571潜在的适应症,值得进一步研究。

应用FISH技术检测嗜酸性粒细胞增多症PDGFRA基因异常表达

本研究通过荧光原位杂交(FISH)检测,观察PDGFRA基因在嗜酸性粒细胞增多症中的异常表达情况。应用FISH技术和4q12三色重排探针,检测13例嗜酸性粒细胞增多患者PDGFRA基因的重排形式,同时选择15例正常对照用于确定4q12探针异常荧光信号的正常阈值。结果表明:13例患者中有1例纠正诊断为慢性粒细胞白血病,其余12例中有2例检出FIP1L1-PDGFRA(F/P)融合基因,检出率为17%,但本研究未发现累及PDGFRA基因的其他易位形式。结论:利用4q12三色探针的FISH检测可同时观察PDGFRA基因的多种易位情况,为嗜酸性粒细胞增多症的诊断以及治疗方案的选择提供重要信息。

胃肠道间质瘤c-Kit及PDGFRA基因突变与临床病理特征、免疫表型及预后的关系

目的探讨胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST)中c-Kit/PDGFRA基因突变与临床病理特征、免疫表型及预后的关系。方法采用直接测序法检测185例GIST标本中c-Kit和PDGFRA基因突变类型。结果 c-Kit基因突变中,外显子11突变最常见,以缺失突变、点突变及混合突变为主,并见3例双外显子突变。外显子9在小肠GIST中的突变率显著高于胃GIST,且均为A502-Y503串联重复突变,提示小肠GIST有独特的基因型。PDGFRA在上皮样细胞型和混合细胞型GIST中的突变率显著高于梭形细胞型GIST。c-Kit基因外显子11缺失突变的中高危GIST易出现术后复发转移,且复发转移患者中发生二次突变率较高,表现为c-Kit基因外显子13、14、17或18点突变,以13号外显子V654A最为常见。CD117和DOG1的表达与基因突变之间无相关性,不能作为预测疾病基因突变的指标。单因素分析结果显示,肿瘤直径、核分裂象、Ki-67增殖指数、危险程度分级、术后复发和转移是影响GIST预后的重要因素,术后靶向药物治疗可一定程度改善预后。c-Kit基因外显子11缺失突变和外显子9突变的GIST患者预后较差。结论 c-Kit基因9号外显子在小肠GIST中突变率较高,PDGFRA基因在上皮样细胞型和混合细胞型GIST中突变率较高。c-Kit基因外显子11缺失突变的中高危GIST易发生二次突变导致术后复发转移,外显子11缺失突变可作为GIST预后不良的独立影响因素之一。

胃肠道间质瘤中c-kit和PDGFRA基因的突变及其意义

背景与目的:胃肠道间质瘤(GIST)是最常见的胃肠道间叶源性肿瘤,GIST中c-kit和PDGFRA基因突变及突变位点与甲磺酸伊马替尼(格列卫)治疗疗效有关,而突变与生物学行为的关系一直存有争议。本研究探讨GIST中c-kit和PDGFRA基因的突变情况及意义。方法:用PCR扩增和直接测序方法检测50例GIST中c-kit外显子9、11、13、17及PDGFRA基因外显子12、18的突变。结果:50例GIST中仅检测出c-kit外显子11突变,突变率为54%(27/50),均为杂合性突变。其中缺失性突变16例(59%)、点突变10例(37%),伴有点突变的缺失性突变1例。突变位点几乎均集中在5'端"热点"区(96%)。CD117阴性的2例GIST中1例检测到c-kit外显子11突变。外显子11突变在不同组织学类型之间比较,差异有显著性(P<0.05),而在不同原发部位及不同侵袭危险性之间比较,差异均无显著性(P>0.05)。结论:c-kit突变是GIST的普遍现象,突变位点有集中趋势,以梭形细胞型突变最常见。突变检测不能作为生物学行为判断参考指标。

胃肠间质瘤c-Kit和PDGFRA基因突变分析

目的分析胃肠间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)跨膜酪氨酸激酶受体c-Kit和血小板源性生长因子受体(platelet-derived growth factor,PDGFRA)基因的突变特征。方法对57例GIST石蜡标本进行DNA提取、PCR扩增和直接测序,检测c-Kit外显子9、11、13、17和PDGFRA外显子12、18突变状态。结果 57例GIST标本中共检出44例(77.2%)c-Kit/PDGFRA基因杂合性突变,未检测到纯合性突变。其中,c-Kit exon9突变9例(15.8%),c-Kit exon11突变32例(56.1%),c-Kit exon13突变2例(3.5%),PDGFRA 18突变1例(1.8%),c-Kit/PDGFRA均未检测到突变的13例(22.8%)。结论中国人群c-Kit/PDGFRA突变比例高,突变类型多样,其中c-Kit外显子11比例高,进行c-Kit/PDGFRA基因分型有助于靶向药物伊马替尼的选择和剂量估计。

PDGFRA在胃肠道间质瘤中的表达及意义

目的探讨血小板源性生长因子受体(platelet-derived growth factor receptor alpha,PDGFRA)在胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST)中的表达情况及其临床应用价值。方法用免疫组化SP法检测78例GIST中PDGFRA及CD117的表达情况,同时观察PDGFRA在其它GI MT中的表达情况。结果PDGFRA及CD117在GIST中阳性表达率分别为51%(40/78)及92%(72/78);PDGFRA在CD117阴性GIST中表达率为83%(5/6),在CD117阳性GIST中的表达率为49%(35/72)。PDGFRA及CD117的表达分别在组织学分型之间比较差异均有显著性(P<0.05),而在不同原发部位及生物学行为分组之间比较差异均无显著性(P>0.05)。PDGFRA在7例消化道神经鞘瘤中3例呈阳性表达,在4例胃肠道平滑肌瘤、9例平滑肌肉瘤、2例横纹肌肉瘤、2例纤维瘤病中均为阴性表达。结论PDGFRA可作为GIST诊断的有用标记物,尤其是在CD117阴性GIST的诊断及鉴别诊断中具有重要的临床意义。

胸腺上皮性肿瘤中PDGFRA基因突变和蛋白表达的研究

目的研究血小板源性生长因子受体α多肽(PDGFRA)基因突变在胸腺上皮性肿瘤(TETs)中的临床应用价值。方法采用Sanger测序法和免疫组化方法分别检测47例TETs中PDGFRA基因突变和蛋白表达。结果47例TETs中,发生PDGFRA基因突变16例,均发生在第18号外显子,突变率为34.04%(16/47);将B3型胸腺瘤与胸腺癌合并统计,其PDGFRA基因突变率为60%(9/15),显著高于其他类型胸腺瘤的阳性突变率21.86%(7/32),两组比较差异显著(P<0.05)。结论PDGFRA基因有可能成为TETs靶向治疗、预测进展、分子分型及预后的新分子标记物,为下一步机制的研究和指导临床用药提供新的理论基础。

EGFR VEGFR-3 PDGFRa在三阴乳腺癌中的表达及其临床意义

近年来，寻找三阴乳腺癌（triple negative breast cancer，TNBC）新的治疗靶点成为国际上乳腺癌研究的新热点，表皮生长因子受体（EGFR）、血管内皮生长因子受体3（VEGFR-3）、血小板源性生长因子受体a（PDGFRa）等是被广泛研究的具有受体酪氨酸激酶（PTK）活性的受体。

DOG1和PDGFRA在胃肠道间质瘤中的表达及意义

目的:研究DOG1和PDGFRA在CD117阴性的胃肠道间质细胞瘤中的表达和意义。方法:用DOG1和PDGFRA抗体对46例CD117阴性的胃肠道间质细胞瘤进行免疫组织化学SP法染色。结果:DOG1和PDGFRA在CD117阴性的胃肠道间质细胞瘤中呈阳性表达,分别为95.7%(44/46)和91.3%(42/46)。结论:DOG1和PDGFRA可以成为一种辅助诊断GIST的新的标志物。

胃肠道间质瘤中c-kit和PDGFRA基因突变多态性分析

目的探讨胃肠道间质瘤(gastrointestinal stomal tumors,GIST)中c-kit基因和PDGFRA基因的突变多态性。方法对93例GIST标本采用PCR扩增和基因测序的方法检测c-kit基因9、11、13、17号外显子和PDGFRA基因12、18号外显子序列。结果在93例GIST中共检测到c-kit基因突变64例(68.82%),其中11号外显子突变56例,占全部病例的60.22%(56/93);9号外显子突变4例,占全部病例的4.30%(4/93);13号外显子突变3例,占全部病例的3.23%(3/93);17号外显子突变1例,为与11号外显子共突变,占全部病例的1.08%(1/93)。11号外显子突变方式以缺失突变最常见,占55.36%(31/56),其次是点突变(26.79%,15/56)和插入突变(串联重复)(14.29%,8/56),再次是伴点突变的缺失突变(3.57%,2/56);突变绝大多数为杂合性突变,少数为纯合性突变。突变位点多集中在5'端的经典热点,其次为3'端的框内串联重复。PDGFRA基因突变共检测到4例,其中1例为与c-kit共突变,其余3例占无c-kit突变病例的10.34%(3/29),占CD117阴性病例的37.5%(3/8),且均为18号外显子突变。结论大部分GIST中存在c-kit或PDGFRA基因的突变,少部分病例存在c-kit基因不同外显子双突变或c-kit基因和PDGFRA基因双突变共存型,其基因突变分型能指导伊马替尼的肿瘤靶向治疗。

老年人胃肠道间质瘤的c-kit和PDGFRa基因突变检测

目的研究老年人胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST) c-kit和PDGFRa基因突变及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学技术并结合PCR扩增和测序技术,检测医院病理科2005-01至2017-12存档的老年GIST患者标本共79例,统计并分析免疫表型特征及c-kit和PDGFRa基因突变情况。结果 79例老年GIST患者,高发年龄为65～75岁,c-kit基因突变率为88. 6%(70/79),PDGFRa基因突变率为8. 9%(7/79),野生型GIST2. 5%(2/79);其中c-kit基因11号外显子突变为最常见,占83. 5%(65/77)。结论多数老年人GIST患者携有特征性c-kit/PDGFRa基因突变,为GIST的确诊和生物靶向治疗提供了重要依据。

急性髓系白血病中FIP1L1-PDGFRA基因突变的检测及临床价值

目的:探讨急性髓系白血病患者FIP1L1-PDGFRA基因突变的检测情况及临床意义。方法:应用巢式PCR检测86例急性髓系白血病患者外周血中FIP1L1-PDGFRA基因突变情况。结果:共6例急性髓系白血病患者检测到FIP1L1-PDGFRA基因突变,其中M4EO 3例,M2 2例,M5 1例。结论:FIP1L1-PDGFRA基因突变可在急性髓系白血病患者检测出,以M4EO多见。

胃肠道间质瘤c-KIT,PDGFRA基因突变及CD117,DOG-1蛋白的表达情况

目的:回顾性研究分析133例胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)患者中c-KIT及PDGFRA基因突变情况及其中94例的CD117,DOG-1蛋白表达情况。方法:用下一代测序(next generation sequencing,NGS)及免疫组织化学方法分别检测以甲醛固定石蜡包埋的标本中c-KIT,PDGFRA基因突变及CD117,DOG-1蛋白表达情况,探讨不同基因突变形式与病变原发部位的相关性,并分析基因突变与蛋白表达之间的相关性。结果:133例GIST患者中男74例,女59例,发病年龄以40岁以上为主。原发于胃的57例,小肠59例,腹腔8例,直肠5例,肠系膜2例,盆腔2例。97例(72.9%)检测到c-KIT突变,其中79例(59.4%)存在11号外显子突变,13例(9.8%)9号外显子突变,4例(3.0%)13号外显子突变,5例(3.8%)17号外显子突变,全为双突变。9号外显子插入突变主要见于小肠;11号外显子W557_K558缺失突变主要见于胃。11例(8.3%)检测到PDGFRA突变,其中8例(6.0%)为18号外显子突变,3例(2.3%)为12号外显子突变。PDGFRA突变病例均为胃原发。94例GIST患者中,89例(94.7%)CD117阳性,92例(97.9%)DOG-1阳性;双阳性表达88例(74例c-KIT突变,4例PDGFRA突变),CD117单独阳性1例(野生型),DOG-1单独阳性4例(1例c-KIT突变,3例PDGFRA突变),双阴性1例(c-KIT突变)。CD117与DOG-1蛋白表达之间呈显著相关,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:GIST中c-KIT,PDGFRA基因突变率高。c-KIT及PDGFRA基因突变形式与GIST原发部位有关。绝大多数GIST病例CD117与DOG-1双表达,CD117与DOG-1双阴性及CD117单阳性GIST病例均十分罕见,DOG-1单阳性表达病例主要见于PDGFRA突变。对于单阳性及双阴性病例的确诊,依赖于基因检测。

胃肠道间质瘤c-Kit/PDGFRA基因Sanger法测序套峰产生的原因及解决方案

目的探讨胃肠道间质瘤c-Kit/PDGFRA基因Sanger法测序套峰产生的原因及解决方案。方法提取111例胃肠道间质瘤石蜡样本的基因组DNA,采用PCR-Sanger测序法检测其c-Kit基因(外显子9、11、12、13、14、17和18)与PDGFRA基因(外显子12、14和18)序列。选择套峰出现频率较高的c-Kit基因18号外显子作为实验对象,将其PCR扩增产物分为甲、乙两组(甲组将111例PCR扩增产物5μL加入2μL SAP-ExoI中,乙组将111例PCR扩增产物1μL加入2μL SAP-ExoI中)进行酶解纯化,并行Sanger法测序,比较两组测序结果中出现套峰例数及突变例数的差异性。结果甲组c-Kit基因18号外显子测序结果中有95例(95/111,85.59%)出现明显套峰;乙组中有8例(8/111,7.21%)出现明显套峰;两组套峰例数差异有统计学意义(P<0.001)。甲、乙两组111例c-Kit基因18号外显子测序结果中均有1例检测到突变,且突变位置及突变类型相同。结论充分酶解PCR扩增产物能够显著优化测序结果,降低套峰出现频率,且对突变检测未见明显影响,为胃肠道间质瘤的c-Kit/PDGFRA基因的准确测序奠定基础。

原发、复发及转移胃肠道间质瘤KIT及PDGFRA突变与临床病理特征间的关系

目的:探讨原发、复发及转移性胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)中的KIT及PDGFRA基因突变与免疫表型、临床病理学特征之间的相关性。方法:收集2004年到2020年本院167例资料完整的原发GIST患者,其中复发及转移患者22例。运用免疫组织化学(免疫组化)染色及第一代测序技术对167例原发GIST病灶及22例复发或转移转移灶进行CD117、DOG1、CD34和Ki-67增殖指数检测,以及KIT基因第9、11、13、17号外显子和PDGFRA基因第12、18号外显子测序。结果:167例原发GIST中KIT和PDGFRA基因的突变率分别为83.8%(140/167)和3.0%(5/167)。KIT外显子11突变率为74.9%(125/167),外显子9突变率为8.4%(14/167),外显子17突变率为0.6%(1/167)。5例GIST原发灶中存在PDGFRA基因外显子18突变,其中4例为D842V突变。KIT外显子突变类型包括点突变(34.3%,48/140)、缺失突变(40.7%,57/140)、重复突变(3.6%,5/140)、混合突变(插入合并缺失,12.1%,17/140),其中携带KIT外显子11非点突变的GIST(n=76)Ki-67增殖指数(10.7%)高于携带外显子11点突变(n=45)的GIST(8.1%)(P=0.005 2)。22例复发及转移GIST病灶中,KIT双外显子突变共有9例,其中6例为外显子11和17双突变,2例为外显子11和13双突变,1例为外显子9和13双突变。在22例复发、转移GIST患者中,与KIT单突变(中位时间60个月)及野生型(中位时间30个月)相比,KIT双外显子突变患者的无疾病进展时间显著延长(中位时间为108个月,P=0.029 9和P=0.011 1),而Ki-67表达值、CD117、DOG1、CD34、肿瘤直径及核分裂象与前二者间差异无统计学意义。结论:原发GIST灶中,以KIT基因外显子11突变为主,缺失突变最多,占40.7%;原发灶KIT基因外显子11非点突变的肿瘤患者,其Ki-67表达值高于点突变类型患者,可能提示该类患者的肿瘤生物学行为更差。与原发灶KIT基因突变模式均为单外显子突变不同,复发及转移灶存在KIT基因双外显子突变,且占比较高(9/22)。在肿瘤转移、复发患者中,与野生型及单突变者相比,KIT基因双外显子突变者无疾病进展时间较长。