稳定表达FIP1L1-PDGFRA及其突变体细胞株的构建和耐药性评价

目的构建能稳定表达FIP1L1-PDGFRA融合基因(F/P)及其T674I和D842V突变体的小鼠原B细胞株BaF3-F/P、BaF3-F/P-T674I和BaF3-F/P-D842V,并通过考察它们对酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)的响应以评价其活性。方法用慢病毒感染技术将目的基因导入BaF3细胞;RT-qPCR检测mRNA表达;CCK-8法检测TKIs对稳转细胞株增殖的抑制作用。结果构建的BaF3-F/P、BaF3-F/P-T674I和BaF3-F/P-D842V细胞株均能转录FIP1L1和PDGFRA mRNA,并表现出不依赖IL-3增殖的恶性表型特征以及对相应TKIs的敏感性。结论成功构建了能稳定表达F/P及其T674I、D842V突变体的小鼠原B细胞株,为开发以此为靶点的化合物提供良好的细胞模型。

胃肠道间质瘤KIT及PDGFRA基因突变的检测及分析

目的:检测胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GISTs)KIT及PDGFRA基因的突变位点及类型,探讨其在GIST发病机制中的作用。方法:收集西京医院病理科2006年10月至2010年10月胃肠道间质瘤病例38例,男性20例(52.6%),女性18例(47.4%),从福尔马林固定石蜡包埋(formalin-fixed paraffin-embedded,FFPE)组织中提取基因组DNA。通过PCR扩增目的片段后测序,检测38例样本的KIT和PDGFRA基因突变类型。结果:在38例样本中共检测出KIT基因突变34例,其中32例发生在外显子1 1,突变形式有点突变、插入突变与缺失突变;2例发生在外显子9,均为重复性突变。同时还检出PDGFRA基因突变1例,其余3例样本为野生型。结论:大多数GISTs中存在KIT基因的突变,PDGFRA基因突变可见于部分缺乏KIT突变的GIST中。

胃肠道间质瘤KIT/PDGFRA基因突变类型及其与临床病理特征的关系

目的:分析胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)患者KIT和血小板源性生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptor alpha,PDGFRA)基因突变类型及其与临床病理特征的关系。方法:收集经病理学确诊的199例GIST患者的临床病理资料并进行回顾性分析,采用荧光PCR-毛细管电泳测序法检测肿瘤组织标本KIT基因(外显子9、11、12、13、14、17和18)与PDGFRA基因(外显子12、14和18),分析GIST的基因突变类型及其与临床病理特征的关系。结果:199例GIST患者中KIT基因突变169例(84.9%),PDGFRA基因突变11例(5.5%),KIT/PDGFRA野生型(WT-GIST)19例(9.5%)。KIT基因外显子11突变中有2例为纯合突变型。WT-GIST中有2例PDGFRA基因外显子12的上游内含子检测出突变。小肠GIST患者的KIT基因突变率明显高于胃GIST(P<0.05)。高危组和中危组(NIH危险度分级)GIST患者的KIT基因突变率显著高于极低危组(P<0.01)。KIT基因突变率在不同性别、年龄、肿瘤组织大小、肿瘤组织学形态、肿瘤细胞核分裂象和Ki67指数组间无明显差异。年龄≤50岁的GIST患者PDGFRA基因突变率明显高于年龄>50岁的GIST患者(P<0.05)。胃和结直肠GIST患者的PDGFRA基因突变率均明显高于小肠(均P<0.01)。上皮样细胞型GIST患者的PDGFRA基因突变率显著高于梭形细胞型(P<0.01)。不同性别、肿瘤组织大小、肿瘤细胞核分裂象、NIH分级和Ki67指数组间的PDGFRA基因突变率无明显差异。结论:KIT基因突变是GIST患者的主要突变类型,小肠GIST和中、高危GIST患者KIT基因突变率较高;年龄≤50岁、胃、结直肠、上皮样细胞型的GIST患者PDGFRA基因突变率较高。

应用FISH技术检测嗜酸性粒细胞增多症PDGFRA基因异常表达

本研究通过荧光原位杂交(FISH)检测,观察PDGFRA基因在嗜酸性粒细胞增多症中的异常表达情况。应用FISH技术和4q12三色重排探针,检测13例嗜酸性粒细胞增多患者PDGFRA基因的重排形式,同时选择15例正常对照用于确定4q12探针异常荧光信号的正常阈值。结果表明:13例患者中有1例纠正诊断为慢性粒细胞白血病,其余12例中有2例检出FIP1L1-PDGFRA(F/P)融合基因,检出率为17%,但本研究未发现累及PDGFRA基因的其他易位形式。结论:利用4q12三色探针的FISH检测可同时观察PDGFRA基因的多种易位情况,为嗜酸性粒细胞增多症的诊断以及治疗方案的选择提供重要信息。

胃肠道间质瘤c-Kit及PDGFRA基因突变与临床病理特征、免疫表型及预后的关系

目的探讨胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST)中c-Kit/PDGFRA基因突变与临床病理特征、免疫表型及预后的关系。方法采用直接测序法检测185例GIST标本中c-Kit和PDGFRA基因突变类型。结果 c-Kit基因突变中,外显子11突变最常见,以缺失突变、点突变及混合突变为主,并见3例双外显子突变。外显子9在小肠GIST中的突变率显著高于胃GIST,且均为A502-Y503串联重复突变,提示小肠GIST有独特的基因型。PDGFRA在上皮样细胞型和混合细胞型GIST中的突变率显著高于梭形细胞型GIST。c-Kit基因外显子11缺失突变的中高危GIST易出现术后复发转移,且复发转移患者中发生二次突变率较高,表现为c-Kit基因外显子13、14、17或18点突变,以13号外显子V654A最为常见。CD117和DOG1的表达与基因突变之间无相关性,不能作为预测疾病基因突变的指标。单因素分析结果显示,肿瘤直径、核分裂象、Ki-67增殖指数、危险程度分级、术后复发和转移是影响GIST预后的重要因素,术后靶向药物治疗可一定程度改善预后。c-Kit基因外显子11缺失突变和外显子9突变的GIST患者预后较差。结论 c-Kit基因9号外显子在小肠GIST中突变率较高,PDGFRA基因在上皮样细胞型和混合细胞型GIST中突变率较高。c-Kit基因外显子11缺失突变的中高危GIST易发生二次突变导致术后复发转移,外显子11缺失突变可作为GIST预后不良的独立影响因素之一。

胃肠道间质瘤中c-kit和PDGFRA基因的突变及其意义

背景与目的:胃肠道间质瘤(GIST)是最常见的胃肠道间叶源性肿瘤,GIST中c-kit和PDGFRA基因突变及突变位点与甲磺酸伊马替尼(格列卫)治疗疗效有关,而突变与生物学行为的关系一直存有争议。本研究探讨GIST中c-kit和PDGFRA基因的突变情况及意义。方法:用PCR扩增和直接测序方法检测50例GIST中c-kit外显子9、11、13、17及PDGFRA基因外显子12、18的突变。结果:50例GIST中仅检测出c-kit外显子11突变,突变率为54%(27/50),均为杂合性突变。其中缺失性突变16例(59%)、点突变10例(37%),伴有点突变的缺失性突变1例。突变位点几乎均集中在5'端"热点"区(96%)。CD117阴性的2例GIST中1例检测到c-kit外显子11突变。外显子11突变在不同组织学类型之间比较,差异有显著性(P<0.05),而在不同原发部位及不同侵袭危险性之间比较,差异均无显著性(P>0.05)。结论:c-kit突变是GIST的普遍现象,突变位点有集中趋势,以梭形细胞型突变最常见。突变检测不能作为生物学行为判断参考指标。

胃肠道间质瘤中c-kit和PDGFRA基因突变多态性分析

目的探讨胃肠道间质瘤(gastrointestinal stomal tumors,GIST)中c-kit基因和PDGFRA基因的突变多态性。方法对93例GIST标本采用PCR扩增和基因测序的方法检测c-kit基因9、11、13、17号外显子和PDGFRA基因12、18号外显子序列。结果在93例GIST中共检测到c-kit基因突变64例(68.82%),其中11号外显子突变56例,占全部病例的60.22%(56/93);9号外显子突变4例,占全部病例的4.30%(4/93);13号外显子突变3例,占全部病例的3.23%(3/93);17号外显子突变1例,为与11号外显子共突变,占全部病例的1.08%(1/93)。11号外显子突变方式以缺失突变最常见,占55.36%(31/56),其次是点突变(26.79%,15/56)和插入突变(串联重复)(14.29%,8/56),再次是伴点突变的缺失突变(3.57%,2/56);突变绝大多数为杂合性突变,少数为纯合性突变。突变位点多集中在5'端的经典热点,其次为3'端的框内串联重复。PDGFRA基因突变共检测到4例,其中1例为与c-kit共突变,其余3例占无c-kit突变病例的10.34%(3/29),占CD117阴性病例的37.5%(3/8),且均为18号外显子突变。结论大部分GIST中存在c-kit或PDGFRA基因的突变,少部分病例存在c-kit基因不同外显子双突变或c-kit基因和PDGFRA基因双突变共存型,其基因突变分型能指导伊马替尼的肿瘤靶向治疗。

老年人胃肠道间质瘤的c-kit和PDGFRa基因突变检测

目的研究老年人胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST) c-kit和PDGFRa基因突变及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学技术并结合PCR扩增和测序技术,检测医院病理科2005-01至2017-12存档的老年GIST患者标本共79例,统计并分析免疫表型特征及c-kit和PDGFRa基因突变情况。结果 79例老年GIST患者,高发年龄为65～75岁,c-kit基因突变率为88. 6%(70/79),PDGFRa基因突变率为8. 9%(7/79),野生型GIST2. 5%(2/79);其中c-kit基因11号外显子突变为最常见,占83. 5%(65/77)。结论多数老年人GIST患者携有特征性c-kit/PDGFRa基因突变,为GIST的确诊和生物靶向治疗提供了重要依据。

胃肠道间质瘤c-Kit/PDGFRA基因Sanger法测序套峰产生的原因及解决方案

目的探讨胃肠道间质瘤c-Kit/PDGFRA基因Sanger法测序套峰产生的原因及解决方案。方法提取111例胃肠道间质瘤石蜡样本的基因组DNA,采用PCR-Sanger测序法检测其c-Kit基因(外显子9、11、12、13、14、17和18)与PDGFRA基因(外显子12、14和18)序列。选择套峰出现频率较高的c-Kit基因18号外显子作为实验对象,将其PCR扩增产物分为甲、乙两组(甲组将111例PCR扩增产物5μL加入2μL SAP-ExoI中,乙组将111例PCR扩增产物1μL加入2μL SAP-ExoI中)进行酶解纯化,并行Sanger法测序,比较两组测序结果中出现套峰例数及突变例数的差异性。结果甲组c-Kit基因18号外显子测序结果中有95例(95/111,85.59%)出现明显套峰;乙组中有8例(8/111,7.21%)出现明显套峰;两组套峰例数差异有统计学意义(P<0.001)。甲、乙两组111例c-Kit基因18号外显子测序结果中均有1例检测到突变,且突变位置及突变类型相同。结论充分酶解PCR扩增产物能够显著优化测序结果,降低套峰出现频率,且对突变检测未见明显影响,为胃肠道间质瘤的c-Kit/PDGFRA基因的准确测序奠定基础。

牛PDGFRA基因克隆及过表达载体构建的研究

为了研究血小板衍生生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptor alpha,PDGFRA)基因对牛睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)的增殖作用,试验采用RT-PCR方法扩增PDGFRA基因CDs区,TA克隆并测序,然后用T4 DNA连接酶构建pBI-CMV3-PDGFRA过表达载体,并进行酶切和测序鉴定,最后应用转染试剂FuGene HD将过表达载体转染到SCs中进行荧光观察。结果表明:PCR扩增得到的PDGFRA基因CDs全长为3 276 bp,经NCBI BLAST生物信息学软件对比TA克隆测序序列同源性为100%,构建的pBI-CMV3-PDGFRA过表达载体经鉴定得到的片段和序列结果正确,转染SCs 24 h后在荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白。说明试验成功构建出过表达载体pBI-CMV3-PDGFRA,并在SCs中正常表达。

嗜酸性粒细胞增多患者的细胞遗传学和分子生物学特征的研究

本研究旨在探讨嗜酸性粒细胞增多患者的细胞遗传学和分子生物学特征。通过间期荧光原位杂交(FISH)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法对79例嗜酸性粒细胞增多(嗜酸性粒细胞计数≥1.5×109/L)患者的PDGFRA/B和FGFR1基因重排进行检测,并对44例患者的T细胞受体(TCR)基因重排进行了检测。结果显示:79例患者中检出FIP1L1/PDGFRA(F/P)融合基因阳性19例,检出CHIC2缺失19例,检出PDGFRB基因重排4例,未检测到FGFR1基因重排患者。按照2008年WHO分类修订诊断后,有42%(20/48)的高嗜酸性粒细胞综合征(HES)和83%(5/6)的慢性嗜酸性粒细胞白血病(CEL)患者更正诊断为伴PDGFRA/B重排的髓系肿瘤,17%(1/6)的CEL更正诊断为慢性嗜酸性粒细胞白血病,非特指型(CEL-NOS)。染色体核型分析检出克隆性细胞遗传学异常4例,1例为CEL-NOS,3例为伴PDGFRB重排的髓系肿瘤,所有21例伴PDGFRA重排的患者均未检测出4q12异常。伴PDGFRA/B重排的髓系肿瘤、HES和继发性嗜酸性粒细胞增多3组患者的克隆性TCR基因重排检出率分别为33%(5/15)、40%(6/15)和36%(5/14),3组间无明显差异。结论:在既往诊断HES和CEL的患者中存在较高比例的PDGFRA/B基因重排,通过间期FISH和PCR方法可以提高伴PDGFRA/B重排的髓系肿瘤的诊断。

高嗜酸性粒细胞综合征2例报告并文献复习

目的:探讨高嗜酸性粒细胞综合征的诊断及治疗。方法:选取高嗜酸性粒细胞综合征患者2例,对其FIP1L1-PDGFRA融合基因进行检测,结合临床资料进行分析,并复习相关文献。结果:2例中第1例FIP1L1-PDGFRA融合基因为阳性,确诊为慢性嗜酸性粒细胞白血病(CEL),应用甲磺酸伊马替尼治疗效果好,另1例FIP1L1-PDGFRA融合基因阴性,诊断为特发性嗜酸性粒细胞综合征,用糖皮质激素治疗有效。结论:对FIP1L1-PDGFRA融合基因的检测,并结合临床,有助于高嗜酸性粒细胞综合征的诊断及鉴别诊断,并对指导治疗有一定的意义。

胃肠道间质瘤靶向药物治疗相关基因突变临床分析

目的探讨靶向药物治疗相关基因(C-KIT和PDGFRA)在治疗胃肠道间质瘤中的作用.方法收集福建省立医院确诊的胃肠道间质瘤240例,采用Sanger测序法检测基因突变情况(C-KIT基因9、11、13、17、18号外显子,PDGFRA基因12、18号外显子),分析其与临床特征的关系.结果1)C-KIT基因突变率为79.2%,其11、9及13号外显子的突变率分别为80.5%、10%、4.2%,11号外显子以缺失突变及点突变多见.2)PDGFRA基因突变率为6.7%,其18号外显子突变率93.75%,D842V点突变多见.3)C-KIT基因11号外显子突变在胃部发生率高,以中高危级别多见,组织学以梭形细胞型多见.PDGFRA基因18号外显子突变在胃部发生率高,以极低危、低危级别多见,组织学以上皮细胞型为主.结论胃肠道间质瘤患者发生C-KIT/PDGFRA基因突变的频率很高,突变位点及形式多样,建议临床治疗前进行C-KIT/PDGFRA基因联合检测,为靶向药物治疗提供依据.

270例胃肠间质瘤基因突变谱及与临床病理特征关系

目的 :分析研究270例胃肠间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)患者c-kit及血小板源性生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptorα,PDGFRA)基因突变特点及与临床病理特征的关系。方法 :回顾性收集2016年6月至2019年1月重庆医科大学附属第一医院收治的270例GIST患者基因检测结果和临床病理资料,分析两者之间的关系。结果 :(1)270例患者中220例检测到c-kit突变,突变最常发生于11号外显子,其次为9号外显子。9号外显子均为A502-Y503重复突变。11号外显子主要为缺失突变和点突变,最常发生于557~560位点。7例PDGFRA突变中以D842V突变最常见。(2)c-kit 11突变中点突变和混合突变发生在胃上的概率小于其他类型突变(P=0.022)。c-kit 11突变患者中大于50岁的频率高于其他c-kit突变(P=0.040)。c-kit 9突变发生在小肠上的频率大于其他突变(P=0.000)。PDGFRA突变与野生型患者核分裂象<5/50 HPF的比例大于c-kit突变的患者(P=0.027)。c-kit突变患者CD117阳性率大于PDGFRA突变与野生型(P=0.000)。野生型患者平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,SMA)阳性率高于突变型(P=0.002)。结论:GIST患者发生c-kit/PDGFRA突变的频率高,且突变位点、类型多样与临床病理特征关系密切,是GIST患者个体化治疗的重要依据。

ALK阳性肺腺癌脑转移个例诊治分析

目的探讨KIT/PDGFRA基因扩增导致1例ALK阳性肺腺癌脑转移的临床表现和治疗方法。方法报道KIT/PDGFRA基因扩增导致1例ALK阳性肺腺癌脑转移的临床诊断与治疗。结果患者脑转移瘤手术组织采用第2代基因测序(NGS)方法检测,结果示KIT和PDGFRA基因扩增。治疗上克唑替尼联合KIT/PDGFRA酪氨酸激酶抑制剂(TKI),获得良好疗效。结论 ALK阳性肺腺癌患者脑转移发生机制尚未明确,可以选择克唑替尼联合颅脑放疗或第2代ALK-TKI治疗。如患者治疗时单独出现颅内进展,可行组织活检,明确分子病理状态,指导治疗。

高嗜酸性粒细胞综合征FIP1L1-PDGFRA融合基因和转录活化因子5蛋白检测

目的 确定高嗜酸性粒细胞综合征 (HES)患者是否存在FIP1L1 PDGFRA融合基因 ,分析该融合基因与HES临床表型之间的关系 ;观察并揭示信号转导及转录活化因子 5 (STAT5)在HES患者粒细胞中的表达及意义。方法 HES根据Chusid标准诊断 ,抽提患者粒细胞总RNA并逆转录为cDNA ,再用筑巢式聚合酶链反应扩增目的基因 ;对阳性PCR产物进行直接核苷酸测序 ;用Western印迹技术对HES患者粒细胞中的STAT5进行检测。结果 4例HES中的 3例存在异常的FIP1L1 PDGFRA融合基因 ,融合基因在PDGFRA基因上的断裂点均位于 12号外显子 ;而在FIP1L1基因上的断点易变 ,分别位于 8a号外显子 ,8a号内含子和 8号外显子。具有FIP1L1重排者似乎容易出现心脏受累并发症。有FIP1L1 PDGFRA融合基因的 3例HES患者STAT5的表达显著上调 ,而 1例FIP1L1 PDGFRA阴性者则无STAT5表达。结论 FIP1L1 PDGFRA融合基因对于HES具有普遍性意义 ,FIP1L1 PDGFRA基因鉴定不仅可作为HES诊断的分子标志和格列卫治疗的分子靶标 ;而且 。

胃肠道间质瘤c—kit及PDGFRA基因突变及其临床意义

目的探讨胃肠道间质瘤（GIST）中c-kit及PDGFRA基因突变的分子生物学特点及与临床参数间的关系。方法对141例GIST进行基因检测，用PCR扩增和基因测序的方法检测肿瘤c-kit基因第9、11、13和17外显子及PDGFRA基因第12和18外显子的序列，分析基因突变与GIST临床参数之间的关系。结果在141例GIST中共检测到c—kit基因突变108例（76．6％），其中11号外显子突变99例（70．2％，99／141）；9号外显子突变8例（5．7％，8／141）；13号外显子突变1例（0．7％，1／141）；未检测到17号外显子突变病例。97．0％为杂合性突变，3．0％为纯合性突变，11外显子突变方式以缺失突变最常见65．7％（65／99），其次为点突变（24．2％）和插入突变（串联重复）（10．1％）；突变位点多集中在5’端的经典热区，其次为3’端的框内串联重复。共检测到4例PDGFRA基因的突变．占无c—kit突变病例的12．1％（4／33），占CD117阴性GIST的40％（4／10），均为外显子18的突变。基因突变的发生率在GIST不同原发部位间差异有统计学意义（χ^2=7．229，P=0．027；χ^2=7．000，P=0．03），而与患者年龄、性别、肿瘤大小、核分裂、恶性潜能分级等均差异无统计学意义。结论GIST中存在c-kit及PDGFRA基因的突变；基因突变的发生率在不同原发部位间有差异。

KIT/PDGFRA基因“纯合性”突变胃肠间质瘤的临床病理特征及预后分析:一项多中心回顾性队列研究

目的探讨具有KIT/PDGFRA基因“纯合性”突变胃肠间质瘤(GIST)患者的临床病理特征、靶向药物治疗效果及预后。方法采用回顾性队列研究和倾向性评分匹配方法。“纯合性”突变定义为应用一代测序法检测GIST的KIT/PDGFRA基因的状态时,表现为测序图中只有突变型基因序列,缺乏野生型序列或突变型基因序列的峰高远高于野生型基因序列(>3倍);“杂合性”突变定义为在测序图中表现为突变型基因序列与野生型基因序列同时存在,且峰高相近(≤3倍)。收集2008年1月至2021年5月上海4家医院[上海交通大学医学院附属仁济医院(70例)、复旦大学附属中山医院(14例)、海军军医大学附属长海医院(6例)、上海交通大学医学院附属瑞金医院(2例)]确诊为GIST并具有KIT/PDGFRA基因“纯合性”突变的92例患者的临床病理资料及随访信息。排除围手术期死亡、合并其他恶性肿瘤以及临床病理资料不完整的患者。观察分析患者的临床病理特征和靶向药物治疗效果,疗效评价采用Choi标准,分为肿瘤完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定病变(SD)和肿瘤进展(PD)。纳入同期经过手术完整切除的KIT基因11外显子“杂合性”突变高危GIST患者230例,以及应用伊马替尼(IM)治疗的复发或转移性“杂合性”KIT基因11外显子突变GIST病例117例,采用倾向评分匹配法,将KIT基因11外显子“杂合性”突变与“纯合性”突变的GIST患者组成1∶1配对进行生存分析,比较经手术完整切除的两组高危GIST患者的无病生存期(DFS),以及复发或转移性的两组GIST患者的无进展生存期(PFS)。结果在92例具有KIT/PDGFRA基因“纯合性”突变的GIST病例中,男性58例,女性34例,发病中位年龄62(31~91)岁;原发性GIST 83例。原发高危GIST(53例)、转移性GIST(21例)及复发性GIST(9例)占比90.2%(83/92)。KIT基因“纯合性”突变有90例(88例外显子11,1例外显子13,1例外显子17),PDGFRA基因“纯合性”突变2例(分别为外显子12和外显子18)。全组中位随访时间49(8~181)个月。在经手术完整切除的61例原发局限性GIST中,2例为中危GIST、5例为低危GIST、1例为极低危GIST,其中1例中危GIST术后加用了1年IM辅助治疗,随访期间均未出现肿瘤复发;其余53例为高危GIST,50例获得随访资料,其中22例在随访期间出现肿瘤复发。在9例直接采用新辅助靶向治疗(IM或阿伐替尼)的病例中,有5例具有完整影像学随访资料,患者的疗效评价均达到过PR。在所有92例具有KIT/PDGFRA基因“纯合性”突变的GIST病例中,50例(54.4%)伴有肿瘤转移或在随访期间出现肿瘤复发或进展,12例(13.0%)因肿瘤死亡。匹配后的生存分析显示:在100例手术完整切除的高危GIST中,KIT基因11外显子“纯合性”突变的GIST比KIT基因11外显子“杂合性”突变的GIST的DFS更短(中位DFS:72个月比148个月,P=0.015);在60例复发或转移性的具有KIT基因11外显子突变的GIST中,“纯合性”突变的GIST比“杂合性”突变的GIST的PFS更短(中位PFS:38个月比69个月,P=0.044),差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论KIT/PDGFRA基因“纯合性”突变与GIST的疾病进展有关。相应靶向治疗药物对于具有KIT/PDGFRA基因“纯合性”突变的GIST仍然有效。相比KIT基因11外显子“杂合性”突变的GIST患者,KIT基因11外显子“纯合性”突变的GIST患者手术切除后更容易复发,且复发转移者IM有效控制时间短,预后更差。因此对于这部分病例,仍然有必要寻找更有效的治疗方法。

41例胃肠间质瘤c-Kit及PDGFRa基因突变分析

[目的]探讨胃肠间质瘤(GIST)c-Kit、PDGFRa基因突变特点。[方法]收集41例GIST石蜡标本,采用直接测序法检测c-Kit外显子9、11、13、17,PDGFRa外显子12、18突变状态。[结果]41例GIST样本中34例(82.9%)检测到c-Kit或PDGFRa突变。其中c-Kit外显子9突变6例(14.6%),外显子11突变24例(58.5%),外显子13突变2例(4.9%),PDGFRa外显子18突变2例(4.9%)。c-Kit外显子9突变均发生在小肠,PDGFRa外显子18突变则主要见于胃。小肠间质瘤中c-Kit外显子9突变型占31.6%,显著高于其它部位(P<0.05),而外显子11突变型占36.8%,显著低于其它部位(P<0.05)。[结论]c-Kit/PDGFRa基因突变类型与GIST发生部位有关。约1/3小肠GIST患者存在c-Kit外显子9突变,在选择靶向药物治疗前应进行基因突变检测。

胃肠道间质瘤C-kit及PDGFRA基因突变检测及分析

目的检测胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST)患者中酪氨酸激酶受体基因C-kit及血小板源性生长因子受体A(platelet derived growth factor receptor A,PDGFRA)基因突变情况,探讨其与GIST发病的相关性。方法从武汉大学人民医院及武汉大学中南医院收集的102例GIST患者石蜡肿瘤切片样本中提取DNA,采用PCR技术扩增特异性目的片段,并直接进行序列测定,分析样本中C-kit及PDGFRA基因突变情况。结果在102份石蜡肿瘤切片样本中共检出C-kit基因突变76例,其中大多数突变发生于第11号外显子上,共65例,包括缺失突变43例,占66.15%(43/65),点突变12例,占18.46%(12/65),插入突变4例,占6.15%(4/65),点突变伴随缺失突变6例,占9.23%(6/65);7例样本存在第9号外显子突变;3例样本存在第13号外显子突变;2例样本检测出第17号外显子突变。共检出PDGFRA基因突变4例,其中第12号外显子突变的有3例,第18号外显子突变仅检出1例。结论大多数GIST患者中存在C-kit基因的突变,且主要突变位置在第11号外显子;PDGFRA基因突变存在于C-kit未突变患者中。