PDRG1(p53 and DNA-damage regulated 1)是实验室通过文库筛选发现的参与NF-kB信号通路调控的一个新基因。已知PDRG1在多种肿瘤中高表达,并参与p53信号通路;同时该基因受UV以及基因毒性等刺激调控。但其在NF-κB信号通路中作用尚未见报...PDRG1(p53 and DNA-damage regulated 1)是实验室通过文库筛选发现的参与NF-kB信号通路调控的一个新基因。已知PDRG1在多种肿瘤中高表达,并参与p53信号通路;同时该基因受UV以及基因毒性等刺激调控。但其在NF-κB信号通路中作用尚未见报道,为了深入研究PDRG1对NF-κB信号通路的调控机理,构建了稳定干涉PDRG1的HeLa细胞系。选择了基于慢病毒载体pLKO.1的感染体系,该慢病毒体系可以同时感染分裂期与非分裂期的细胞,将目的基因干涉序列稳定整合至靶细胞基因组中;再经过抗生素压力筛选后在短时间内获得稳定干涉目的基因表达的细胞株。设计合成PDRG1干涉序列并克隆至pLKO.1载体,转染病毒包装细胞293TN后收集慢病毒上清感染HeLa细胞系,进一步经过嘌呤霉素压力筛选成功获得稳定表达PDRG1干涉序列的细胞株。该稳定细胞株的建立为PDRG1的功能研究提供了必要的实验工具。展开更多
夏眠是刺参的重要生理特征;夏眠期间,刺参体重明显减轻,器官萎缩、退化,其中消化道退化明显。PDRG(p53 and DNA damage-regulated gene)是近年来研究发现与细胞凋亡具有密切联系的基因,其表达可促进细胞凋亡。本研究利用SMART RACE技术...夏眠是刺参的重要生理特征;夏眠期间,刺参体重明显减轻,器官萎缩、退化,其中消化道退化明显。PDRG(p53 and DNA damage-regulated gene)是近年来研究发现与细胞凋亡具有密切联系的基因,其表达可促进细胞凋亡。本研究利用SMART RACE技术克隆获得刺参PDRG基因的cDNA全长序列,并以此为基础,研究刺参夏眠期间PDRG基因表达与消化道退化的相关性。结果显示,刺参PDRG基因cDNA全长为1122bp,包含127bp的5’非翻译区(untranslated region,UTR),581bp的3’UTR和414bp的开放阅读框(open reading frame,ORF);ORF区编码137个氨基酸,推算的分子质量约为16.1kDu,理论等电点为7.83。研究通过25℃温度诱导刺参进入夏眠,利用实时定量PCR方法,定量检测刺参消化道PDRG基因表达,结果表明:夏眠期间刺参消化道PDRG基因mRNA表达水平与对照组相比出现显著上升,实验5d时显著上调至约2.49倍,10d时显著上调至约1.51倍,而在0、20、40 d时未检测出显著变化;与刺参消化道相对质量变化数据结合分析表明,刺参夏眠期间消化道的PDRG基因高表达与其萎缩、退化密切相关。本研究阐明刺参夏眠期间消化道组织退化过程中PDRG基因表达特征,证明刺参PDRG基因表达与消化道退化具有相关性,为进一步探讨PDRG基因在动物器官退化过程中的功能提供参考依据。展开更多
文摘PDRG1(p53 and DNA-damage regulated 1)是实验室通过文库筛选发现的参与NF-kB信号通路调控的一个新基因。已知PDRG1在多种肿瘤中高表达,并参与p53信号通路;同时该基因受UV以及基因毒性等刺激调控。但其在NF-κB信号通路中作用尚未见报道,为了深入研究PDRG1对NF-κB信号通路的调控机理,构建了稳定干涉PDRG1的HeLa细胞系。选择了基于慢病毒载体pLKO.1的感染体系,该慢病毒体系可以同时感染分裂期与非分裂期的细胞,将目的基因干涉序列稳定整合至靶细胞基因组中;再经过抗生素压力筛选后在短时间内获得稳定干涉目的基因表达的细胞株。设计合成PDRG1干涉序列并克隆至pLKO.1载体,转染病毒包装细胞293TN后收集慢病毒上清感染HeLa细胞系,进一步经过嘌呤霉素压力筛选成功获得稳定表达PDRG1干涉序列的细胞株。该稳定细胞株的建立为PDRG1的功能研究提供了必要的实验工具。
文摘夏眠是刺参的重要生理特征;夏眠期间,刺参体重明显减轻,器官萎缩、退化,其中消化道退化明显。PDRG(p53 and DNA damage-regulated gene)是近年来研究发现与细胞凋亡具有密切联系的基因,其表达可促进细胞凋亡。本研究利用SMART RACE技术克隆获得刺参PDRG基因的cDNA全长序列,并以此为基础,研究刺参夏眠期间PDRG基因表达与消化道退化的相关性。结果显示,刺参PDRG基因cDNA全长为1122bp,包含127bp的5’非翻译区(untranslated region,UTR),581bp的3’UTR和414bp的开放阅读框(open reading frame,ORF);ORF区编码137个氨基酸,推算的分子质量约为16.1kDu,理论等电点为7.83。研究通过25℃温度诱导刺参进入夏眠,利用实时定量PCR方法,定量检测刺参消化道PDRG基因表达,结果表明:夏眠期间刺参消化道PDRG基因mRNA表达水平与对照组相比出现显著上升,实验5d时显著上调至约2.49倍,10d时显著上调至约1.51倍,而在0、20、40 d时未检测出显著变化;与刺参消化道相对质量变化数据结合分析表明,刺参夏眠期间消化道的PDRG基因高表达与其萎缩、退化密切相关。本研究阐明刺参夏眠期间消化道组织退化过程中PDRG基因表达特征,证明刺参PDRG基因表达与消化道退化具有相关性,为进一步探讨PDRG基因在动物器官退化过程中的功能提供参考依据。