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题名重组人乙酰胆碱受体原核表达条件的优化及初步应用
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作者
陈利春
汪凌云
孙玉秀
陈兵
徐从贞
鲁云霞
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机构
安徽省合肥市妇幼保健院
安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室
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出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第8期109-113,共5页
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文摘
在已建立的重组人乙酰胆碱受体表达质粒的基础上进一步优化试验条件,初步应用于ELISA分析实验性重症肌无力模型(EAMG)中抗体的滴度。取构建好的pET28a(+)-hAChRα1-210经小规模诱导,确定IPTG诱导的最佳浓度为0.006mmol/L,最佳时间为5h,最佳温度为37℃;大规模诱导培养后离心,超声得到菌体沉淀,1mol/L尿素洗涤后8mol/L尿素溶解,过Ni2+亲和层析柱,紫外吸收及Folin酚法确定表达量较多而蛋白最纯的4℃透析过夜,PEG8000浓缩后免疫雌性近交系Lewis鼠构建EAMG,ELISA检测分析模型大鼠血清中抗体的效价。结果表明,制备了大量较纯的rhAChR,并成功应用于ELISA法分析EAMG模型中抗体的滴度。因此,获得的纯化rhAChR可用于构建EAMG模型及鉴定。
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关键词
pET28a(+)-hAChRα1-210
IPTG
Ni2+亲和层析
peg8000
EMAG
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Keywords
pET28a( + )-hAChRctl-210 IPTG Ni2 + affinity chromatography peg8000 EMAG
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分类号
R746.1
[医药卫生—神经病学与精神病学]
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题名果蔬样品中诺如病毒快速检测方法的研究
被引量:1
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作者
张寻
陈倩
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机构
北京市疾病预防控制中心营养与食品卫生所
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出处
《中国卫生检验杂志》
CAS
2017年第9期1256-1258,共3页
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基金
基金项目:北京市售食品中诺如病毒污染
流行变异及风险评估研究(5141002)
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文摘
目的建立果蔬样品表面诺如病毒快速有效的检测方法,评价酸吸附-碱洗脱-PEG沉淀法对果蔬样品表面诺如病毒分离富集的适用性,为诺如病毒疫情的控制和食源性疾病的溯源提供可靠的实验室依据。方法在北京地区采集草莓样品,采用酸吸附-碱洗脱-PEG方法分离富集样品表面病毒颗粒,设计GⅠ和GⅡ的特异性引物和探针,以实时定量RT-PCR法检测病毒核酸。同时优化病毒提取方法,以Mengo病毒做为过程控制对照,制作不同浓度的标准曲线,计算病毒回收率。结果酸吸附-碱洗脱-PEG法病毒回收率为2.36%,符合病毒检测回收率的要求,与其他食源性病毒没有交叉反应,能够应用于日常检测。结论酸吸附-碱洗脱-PEG方法病毒回收率较高,灵敏度和重复性较好,进一步优化后可以应用于果蔬样品的日常检测。
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关键词
诺如病毒
草莓
peg-8000沉淀
荧光定量PCR
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Keywords
Norovirus
Strawberry
peg - 8000 deposition
Fluorescent quantitative real - time PCR
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分类号
R446.5
[医药卫生—诊断学]
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