聚乙二醇双脂肪酸酯(PEG 8000DS)

聚乙二醇（８０００）双脂肪酸酯（代号ＰＥＧ８０００ＤＳ）分子由疏水－亲水－疏水部分组成，在稀表面活性剂水溶液中形成三元水合网，将表面活性剂束围在其中，胶束由球状转变成棒状，从而使粘度增加，因而它最重要的用途是用于增稠剂。使用时一般先用５０～２０倍的高...

PEG-8000胁迫下马铃薯组培苗抗旱性鉴定与评价

干旱是马铃薯生产的主要限制因子之一。本试验利用15%PEG-8000培养基模拟干旱胁迫,测定18份马铃薯组培苗材料的各项生长指标变化。通过测定根干重、根鲜重、茎干重、茎鲜重、株高和根长这6项生长指标,计算抗旱系数,并利用主成分分析法和隶属函数法对18份马铃薯组培苗材料进行抗旱性综合评价。结果表明,根鲜重、根干重、茎干重和根长的抗旱系数可作为马铃薯组培苗抗旱性的主要评价指标。BFL10、BFL12、BFL13、BFL17这4份马铃薯组培苗材料属耐旱性较强材料;BFL1、BFL2、BFL3、BFL4、BFL5、BFL6、BFL8、BFL18这8份马铃薯组培苗材料综合评价值较低,属于抗旱性较弱材料;BFL7、BFL9、BFL11、BFL14、BFL15、BFL16这6份马铃薯组培苗材料的抗旱性介于中间。

PEG-8000模拟干旱胁迫对11个马铃薯品种的组培苗生长指标的影响

为了明确聚乙二醇(PEG-8000)模拟干旱胁迫对马铃薯组培苗的影响,以11个马铃薯主栽品种的脱毒组培苗为试验材料,研究比较了在固体培养基中分别添加5%,10%,15%,20%的PEG-8000模拟干旱胁迫和对照处理下(不含PEG-8000)组培苗生长指标的变化,对供试品种组培苗的株高、最大根长、茎鲜质量、根鲜质量、茎干质量、根干质量和植物水分含量共7个生长指标进行测定和分析。结果表明,随着胁迫处理PEG-8000浓度的增加,所有材料的组培苗表现出受干旱胁迫现象越严重,当固体培养基中PEG-8000浓度为15%时,11个品种间的差异最大,所测的7个指标值均显著低于对照,是鉴定马铃薯品种组培苗对干旱胁迫反应的最佳浓度。在该胁迫浓度下,供试马铃薯材料的平均相对根鲜质量为26.9%,变异系数为50.6%,是下降幅度和变异系数最大的一个指标,表明根鲜质量更易受到干旱胁迫的影响。利用6个相对指标值,对11个马铃薯品种的干旱敏感性进行聚类分析,在欧氏距离为40处,11个马铃薯品种可分为3类,Ⅰ类包括坝薯10号、高原7号、克新1号和晋薯2号;Ⅱ类包括中薯2号和中薯20号;Ⅲ类包括中薯3号、大西洋、夏坡蒂、费乌瑞它和疫不加,3个类群受干旱胁迫的影响逐渐加重。综合聚类分析和植株含水量的结果,筛选到坝薯10号和高原7号2个耐旱品种。

PEG-8000模拟干旱胁迫对马铃薯组培苗叶绿素和类胡萝卜素含量的影响

为了明确聚乙二醇(PEG-8000)模拟干旱胁迫对彩色和常规马铃薯组培苗叶绿素和类胡萝卜素含量的影响,以6个马铃薯品种(系)的脱毒组培苗为试验材料,研究比较了在固体培养基中分别添加5%,10%,15%和20%PEG-8000模拟干旱胁迫和对照处理下(不含PEG-8000)培养50d后组培苗生长生理指标(叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素)的变化。结果表明,在0~20%PEG浓度下,马铃薯茎叶中色素含量变化复杂,彩色马铃薯品种色素相关指标较常规品种对干旱更敏感。叶绿素a较叶绿素b对干旱的反应更为敏感,类胡萝卜素含量对干旱胁迫的反应较叶绿素更敏感。叶绿素b/a值较其他指标在干旱胁迫下更稳定。在轻度干旱胁迫下,叶绿素a、b,总叶绿素含量及类胡萝卜素含量降低,在中度干旱胁迫下,叶绿素a、b,总叶绿素含量及类胡萝卜素含量增加,彩色马铃薯较常规马铃薯增幅更大,因此在进行抗旱评价时不宜单采用色素指标。干旱影响导致的色素变化由强到弱为‘D613’>‘东农303’>‘200902’>‘渭薯1号’>‘春薯2号’>‘青薯9号’。

PEG模拟干旱胁迫对冬樱花幼苗叶片生理特性的影响

【目的】探明冬樱花在干旱胁迫下的适应性。【方法】通过5%、10%和20%的PEG-8000模拟干旱胁迫,每隔2 d对冬樱花幼苗叶片生理指标进行测定。【结果】随PEG质量分数的增加和胁迫时间的延长,叶片电解质外渗率持续上升,重度干旱胁迫(20%)的上升趋势最明显,第8天时比第0天上升了189.21%,差异显著(P<0.05);丙二醛含量总体上升,轻度干旱胁迫(5%)上升趋势较缓慢,中度干旱胁迫(10%)和重度干旱胁迫(20%)上升明显,第8天时分别比第0天上升了25.59%、55.78%和145.25%;可溶性糖含量出现不同程度的上升,轻度干旱胁迫的上升趋势最慢,重度干旱胁迫的上升趋势最明显,第8天时分别比第0天上升31.26%和87.78%;叶片相对含水量在胁迫过程中不断下降,重度干旱胁迫时下降最明显,第8天时比第0天下降了41.62%。相关性分析表明:电解质外渗率、丙二醛含量和可溶性糖含量之间呈极显著正相关,叶片相对含水量与电解质外渗率、丙二醛、可溶性糖均呈极显著负相关。【结论】冬樱花叶片的生理变化说明其幼苗抗旱性较差。

非有机溶剂液-固萃取体系提取血红蛋白研究

用聚乙二醇 ( PEG80 0 0 )修饰物混合吐温 80 -磷酸钾盐液 -固萃取体系从血液中直接提取血红蛋白 ,考察了 PEG80 0 0修饰物、磷酸钾盐和吐温 80的浓度及酸度和温度等因素对血红蛋白分离纯化的影响 .结果表明 ,采用该体系的一次固相萃取率大于 99% ,一次反萃取率达到 75 % .所得到的血红蛋白干粉的纯度为99% .该方法不使用有机溶剂 ,无毒性 ,对蛋白质具有稳定和保护作用 ,易于放大规模使用 .

引发对马尾松种子细胞周期和发芽率的影响

采用流式细胞术研究不同引发处理下马尾松种子胚细胞DNA含量的差异,测定不同引发处理下马尾松种子的发芽率。结果表明:(1)PEG 8000溶液引发处理能促进胚细胞DNA的复制,4倍体细胞的比例增加,其中以20%PEG 8000溶液引发3～4 d的处理对种子胚细胞DNA合成的促进作用最明显。(2)胚细胞增殖指数最高的引发处理是20%PEG 8000溶液在15℃时引发3～4 d。(3)较高浓度的PEG 8000溶液和较长的引发时间有利于提高马尾松种子发芽率。(4)在一定范围内,胚细胞增殖指数与种子发芽率呈显著正相关。

干旱胁迫对春小麦不同品种(系)苗期生理生化指标的影响

为了比较不同小麦品种(系)的抗旱性,采用不同浓度PEG-8000溶液对7个春小麦品种(系)材料进行不同程度的水分胁迫处理,研究不同胁迫浓度(0,10%,20%,30%)和时间(第1天,第3天,第5天)对春小麦材料生理生化指标的影响。结果表明:随着干旱胁迫程度的增加和时间的延长,‘新春6号’的过氧化物酶活性较高和丙二醛含量积累速度较慢;‘4701’的脯氨酸含量积累速度较快;‘4501’在第5天的30%浓度PEG-8000处理条件下可溶性糖含量最高。最终筛选出‘新春6号’、‘4701’和‘4501’更适应干旱胁迫环境,为新疆春小麦苗期抗旱品种(系)的筛选提供理论基础。

牛结核杆菌DNA疫苗的纯化工艺研究及质量鉴定

为获得纯度较高,能进行动物免疫试验的DNA疫苗,在高密度发酵工程菌的基础上,通过传统的碱裂解,获得粗提的质粒;用氯化钙去除裂解液中的大部分RNA,并用Sartobran P囊式过滤器获得了澄清的溶液。用聚乙二醇法沉淀超螺旋质粒DNA,去除大部分菌体蛋白和宿主DNA。最后用source 30Q阴离子交换色谱填料去除几乎全部的内毒素并浓缩了质粒。本试验纯化的DNA疫苗经质量检验达到了转染动物的要求。该工艺实现了一步色谱纯化DNA疫苗的目的,具有工艺简单、快速的优点。

苏丹草生长早期耐旱性评价方法及种质耐旱性筛选

本研究采用Hoagland营养液砂培法,以PEG-8000为水分胁迫物,建立了苏丹草(Sorghum sudanense)生长早期耐旱性评价方法,并评价了22份苏丹草种质材料的耐旱性。结果表明:不耐旱基因型‘06-222'能忍受的PEG-8000的最高浓度为-0.675 MPa。当PEG-8000的浓度为-0.600和-0.700 MPa时,22份苏丹草种质材料在相对存活率、相对株高及相对地上部干质量3个性状上的差异均达极显著水平。按照耐旱指数,将22份苏丹草种质材料分为5类,其中,‘内农1号'、‘89-105'及‘TS185'的耐旱性最强,而‘06-222'最弱。相对存活率和相对地上部干质量均与相对株高间存在较强的相关性。因此,对苏丹草进行生长早期耐旱性评价时PEG-8000的最高浓度应在-0.675 MPa左右;在评价苏丹草早期的耐旱性时考察相对存活率和相对地上部干质量2个性状即可。

利用隶属函数法评价马铃薯组培苗的抗旱性

为了建立马铃薯组培苗抗旱性评价体系,以6个马铃薯品种(系)的脱毒组培苗为试验材料,研究比较了在固体培养基中分别添加5%,10%,15%和20%PEG-8000模拟干旱胁迫和对照处理下(不含PEG-8000)培养50 d后组培苗生长生理指标的变化。结果表明,在0～20%PEG浓度,随着胁迫处理PEG浓度的增加,所有材料的组培苗表现出受干旱胁迫越严重的现象,生长指标下降,干物质含量逐渐升高,脯氨酸、可溶性蛋白、可溶性糖、丙二醛含量升高。不同品种(系)对干旱的反应不同,当固体培养基中PEG浓度为5%时,供试品种(系)间的差异最大。单采用某一胁迫强度下的生理指标数据不能准确评价植物的抗旱性。以生长指标和丙二醛含量在不同浓度PEG下的变异系数为抗旱评价指标,利用隶属函数法综合分析,6个品种(系)的抗旱性由强到弱为:‘渭薯1号’>‘青薯9号’>‘春薯2号’>‘东农303’>‘200902’>‘D613’。

融合蛋白ELP30-Trx的表达及PEG8000对其相变温度的影响

目的:研究不同浓度的PEG8000对融合蛋白ELP30-Trx相变温度的影响。方法:将硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)基因克隆到pET28-ELP30-Trx表达载体中,经IPTG诱导在宿主菌E.coli BLR(DE3)中表达ELP30-Trx,通过可逆相变循环(Inverse transition cycling,ITC)纯化融合蛋白。测量相变温度(T t),并检测不同浓度的PEG8000对ELP30-Trx T t的影响。结果:经酶切及测序鉴定证实成功构建了ELP30-Trx表达载体,经Westen-Blot检测表明成功表达ELP30-Trx融合蛋白。经ITC纯化后的ELP30-Trx纯度可达95%以上。5%、10%、15%、20%的PEG8000(W/V)使终浓度为25μmol/L ELP30-Trx的T t从37.9℃分别降低至34.6℃、28.5℃、14.0℃、6.0℃。结论:成功构建、表达融合蛋白ELP30-Trx,PEG8000能显著降低ELP30-Trx相变温度。通过对类弹性蛋白的研究,为类弹性蛋白的扩大应用提供理论依据。

不同制剂对茖葱种子发芽和直接分化不定芽诱导的影响

为探索茖葱种子萌发条件及其对PEG-8000处理的响应,同时测定不同生长调节剂配方对茖葱不定芽分化的影响。以前一年和当年茖葱种子为材料,采用培养皿滤纸卷法进行种子萌发试验;以茖葱鳞茎为外植体进行不定芽诱导分化。结果表明,10%(w)的PEG-8000处理可明显促进前一年茖葱陈种子发芽,发芽率94.00%、发芽指数0.89。随PEG-8000质量分数的增加,茖葱种子的发芽率、发芽势及发芽指数有所降低;低温层积50 d及PEG-8000浸种能显著促进茖葱当年新种子萌发,沙藏层积50 d,再用200 mg·L^(-1)PEG-8000浸种4 h,发芽启动时间及发芽高峰期提前最多,发芽持续时间缩短10 d左右,与CK相比,发芽势、发芽率及发芽指数分别提高了475.00%、65.52%及93.75%,对促进茖葱种子发芽的效果最好,同时PEG-8000浸种能显著减少种子层积后的烂种数。筛选出MS+6-BA 1.5 mg·L^(-1)+2,4-D 1.0 mg·L^(-1)+KT 0.1 mg·L^(-1)为供试方案中的最优培养基配方,分化率为56.56%。

重组人乙酰胆碱受体原核表达条件的优化及初步应用

在已建立的重组人乙酰胆碱受体表达质粒的基础上进一步优化试验条件,初步应用于ELISA分析实验性重症肌无力模型(EAMG)中抗体的滴度。取构建好的pET28a(+)-hAChRα1-210经小规模诱导,确定IPTG诱导的最佳浓度为0.006mmol/L,最佳时间为5h,最佳温度为37℃;大规模诱导培养后离心,超声得到菌体沉淀,1mol/L尿素洗涤后8mol/L尿素溶解,过Ni2+亲和层析柱,紫外吸收及Folin酚法确定表达量较多而蛋白最纯的4℃透析过夜,PEG8000浓缩后免疫雌性近交系Lewis鼠构建EAMG,ELISA检测分析模型大鼠血清中抗体的效价。结果表明,制备了大量较纯的rhAChR,并成功应用于ELISA法分析EAMG模型中抗体的滴度。因此,获得的纯化rhAChR可用于构建EAMG模型及鉴定。

培养基成分对黑松体胚发育成熟的影响

【目的】对日本抗性黑松体细胞胚成熟的影响因子进行研究,探究各因素在体细胞胚发生过程中的作用,为进一步提高体细胞胚发生的质量和数量提供理论依据。【方法】胚性细胞团在固体增殖培养基上继代生长10天,使用灭菌(75%乙醇擦拭、紫外灭菌30 min)的电子天平称量1 g胚性细胞团,采用50 mL无菌量筒(紫外灭菌30 min)量取30 mL培养液中于100 mL的三角瓶中,将1 g胚性细胞团转至100 mL的三角瓶中,手动搅拌至细胞团分散,置于90 r·min^(-1)摇床上,25℃黑暗培养7～8天。随后,取3 mL沉淀悬浮细胞进行继代增殖,每星期继代增殖一次至胚性细胞全部均匀散落于培养液。将继代4次的胚性细胞充分摇匀,取2 mL(鲜质量约200 mg)胚性悬浮细胞喷洒在不同组分麦芽糖(30、45、60 g·L^(-1))、脱落酸(ABA)(0、5、10、20、30、50 mg·L^(-1))、聚乙二醇(PEG8000)(0、50、75、100、125、150 g·L^(-1))、活性炭(AC)(1、2、3 g·L^(-1))、琼脂(琼脂6、8、10、12 g·L^(-1),植物凝胶2、2. 5、3、3. 5 g·L^(-1))以及麦芽糖、ABA、PEG 3因素的组合固体成熟培养基上。【结果】以#1337为材料的体细胞胚成熟发育过程中,麦芽糖45 g·L^(-1),获得的体细胞胚数量显著增多。ABA浓度为5～20 mg·L^(-1),体细胞胚数量呈显著上升趋势,ABA为20 mg·L^(-1)时,获得的体细胞胚最多。125 g·L^(-1)PEG8000为体胚发生最佳浓度; AC 2 g·L^(-1)时,胚性细胞形成结构完整、数量较多的成熟体胚;成熟培养基中添加琼脂粉,培养基不能凝固,植物凝胶更适合作为成熟培养基凝固剂。3 g·L^(-1)植物凝胶为抗性黑松体胚发育成熟的最佳浓度。在设计的9种成熟培养基组合中(胚性细胞#1337、#1537、#1637),胚性细胞产生体细胞胚最多的成熟培养基组合为麦芽糖45 g·L^(-1)、ABA 10 mg·L^(-1)、PEG8000 125 g·L^(-1)。在不同的麦芽糖、ABA和PEG组合中,不同无性系生产体细胞胚数量呈现出不同的变化趋势:胚性细胞系#1337体胚发育成熟的最佳组合为麦芽糖45 g·L^(-1)+ABA 10 mg·L^(-1)+PEG 125 g·L^(-1);#1537和#1637体胚发育成熟的最佳组合为麦芽糖30 g·L^(-1)+ABA 10 mg·L^(-1)+PEG 125 g·L^(-1);在3个无性系中PEG的极差最大,对抗性黑松体细胞胚发育成熟的影响最大。【结论】抗性黑松体胚发育成熟过程中,麦芽糖45 g·L^(-1)、ABA20～30 mg·L^(-1)、PEG8000 125 g·L^(-1)、AC 2 g·L^(-1)和植物凝胶3 g·L^(-1)对体细胞胚成熟都具有促进作用。30 g·L^(-1)麦芽糖、10 mg·L^(-1)ABA、125 g·L^(-1)PEG为抗性黑松体胚发育成熟的最佳组合。

番茄愈伤组织筛选及抗逆突变体的获得

以番茄叶柄为外植体,建立番茄愈伤组织再生体系,并以PEG-8000筛选番茄愈伤组织突变细胞,同时诱导愈伤组织细胞再生,从中筛选生长势强的具有抗逆性的再生植株。结果显示,在MS+1.0 mg/L BA+2.0 mg/L 2,4-D培养基上可诱导出质地较硬、结构松散的胚性愈伤组织;将愈伤组织转接到MS+1.0 mg/L BA培养基上,不定芽分化率达100%;将愈伤组织接种到含有PEG-8000的最佳分化培养基上可筛选获得生长健壮、抗逆性强的突变体,在PEG-8000浓度为5%时筛选效果最理想。本试验通过对愈伤组织突变细胞进行定向筛选获取抗逆性再生植株,可为植物抗性育种提供参考。

果蔬样品中诺如病毒快速检测方法的研究

目的建立果蔬样品表面诺如病毒快速有效的检测方法,评价酸吸附-碱洗脱-PEG沉淀法对果蔬样品表面诺如病毒分离富集的适用性,为诺如病毒疫情的控制和食源性疾病的溯源提供可靠的实验室依据。方法在北京地区采集草莓样品,采用酸吸附-碱洗脱-PEG方法分离富集样品表面病毒颗粒,设计GⅠ和GⅡ的特异性引物和探针,以实时定量RT-PCR法检测病毒核酸。同时优化病毒提取方法,以Mengo病毒做为过程控制对照,制作不同浓度的标准曲线,计算病毒回收率。结果酸吸附-碱洗脱-PEG法病毒回收率为2.36%,符合病毒检测回收率的要求,与其他食源性病毒没有交叉反应,能够应用于日常检测。结论酸吸附-碱洗脱-PEG方法病毒回收率较高,灵敏度和重复性较好,进一步优化后可以应用于果蔬样品的日常检测。