肝癌组织中遗传印记基因PEG10表达的特异性及其意义

目的:研究PEG10在肝癌组织中表达的特异性,为其作为一个潜在的肝癌基因治疗的新的分子靶点提供实验依据.方法:从来自不同器官组织的肿瘤细胞系(人肝癌细胞株HepG2、人胃癌细胞株SGC7901、人结肠癌细胞株Lovo、人胰腺癌细胞株PC3、人黑色素瘤细胞株A375、人T淋巴瘤细胞株Jurkat)、正常人胎肝细胞株L02、32例肝癌患者的肝癌组织、癌旁组织、10例良性肝病患者肝组织、10例正常人外周血单个核细胞中抽提总RNA,经RT逆转录合成cDNA,再以PCR方法检测PEG10的表达.同时,肝癌组织和癌旁组织标本经RT-PCR检测AFP的表达.结果:经RT-PCR扩增的PEG10基因片段为455bp,AFP基因的扩增片段为140bp,与原设计一致;PEG10在人肝癌细胞株HepG2中明显表达,人胃癌细胞株SGK7901、人结肠癌细胞株Lovo、人胰腺癌细胞株PC3中弱表达,而正常人胚胎肝细胞株LO2和其他肿瘤细胞株(人T淋巴细胞瘤、人黑色素瘤)中表达均为阴性雇32例肝癌及相应癌旁组织中,PEG10的表达阳性率分别为78.1%和0%;而AFP基因的阳性率分别为93.8%和59.4%.经McNemar检验,显示PEG10基因在肝癌组织中表达的敏感性与AFP表达敏感性之间无显著性差异(X20.01,1=1.78,P>0.05);而癌旁组织中PEG10表达率(0/32)明显低于AFP表达率(19/32)(X20.01,1=17.05,P<0.01).另外10例良性肝病患者(肝硬化4例,自身免疫性肝病2例,肝血管瘤2例,丙型肝炎1例,血色素病1例)肝组织标本及正常人的外周血细胞进行PEG10基因检测,结果均为阴性.结论:PEG10的表达不但具有比AFP更高的肝癌组织特异性,而且具有相对器官组织特异性.本实验为PEG10作为一个新的肝癌标志物和基因治疗的分子靶点提供了实验依据.

猪PEG1基因多态性及其遗传印记

PEG1基因影响动物胚胎生长及母性行为,多数动物PEG1为父方表达的遗传印记特征,但出生后猪的PEG1印记表达尚不清楚。因此,文章选取长白、大白和蓝塘3个品种共166头纯种猪,在猪的PEG1基因外显子12区域内寻找SNP,采用PCR-SSCP方法对其多态性进行检测和基因频率分析;取带有PEG1基因该位点SNP为杂合的仔猪3头,对其胃、胸腺、胰、脾、肺、肌肉、肝、舌、肾、脑、膀胱、心脏等组织器官和胎盘的mRNA产物分别进行RT-PCR-SSCP分析,结果表明:PEG1基因外显子12存在一个由G突变为A的单核苷酸多态性位点;PEG1的外显子12在3头仔猪的主要组织器官仅表达父亲来源的等位基因,表明猪的PEG1基因呈母方印记、父方表达的遗传特征。

二至天癸颗粒和右归丸对肾虚小鼠卵细胞Snrpn和Peg1/Mest甲基化状态的影响

目的探讨二至天癸颗粒和右归丸改善体外受精-胚胎移植结局的疗效机制。方法将175只雌性小鼠随机分为正常组(生理盐水0.5ml灌胃)、肾阴虚模型组(甲状腺片按300mg/kg灌胃,连用10天)、肾阴虚治疗组(造模同时每天予二至天癸颗粒0.5ml灌胃)、肾阳虚模型组(氢化可的松注射液按25mg/kg肌肉注射,连用10天)、肾阳虚治疗组(造模同时每天予右归丸0.5ml灌胃),每组35只。实验至第11天进行超排卵,每组30只小鼠取卵,观察卵细胞印迹基因Snrpn和Peg1/Mest甲基化状态,另5只雌鼠和5只雄鼠合笼后取受精卵,观察受精卵数目、卵裂率、成胚率。结果正常组小鼠卵细胞Snrpn和Peg1/Mest基因完全甲基化;肾阴虚、肾阳虚模型组小鼠卵细胞Snrpn和Peg1/Mest基因发生了明显的去甲基化;肾阴虚、肾阳虚治疗组小鼠卵细胞Snrpn和Peg1/Mest基因的去甲基化状态得到了部分纠正。肾阴虚、肾阳虚模型组受精卵数目、卵裂率、囊胚形成率明显低于正常组(P<0.05),肾阴虚、肾阳虚治疗组受精卵数目、卵裂率、囊胚形成率均高于相应的模型组(P<0.05)。结论肾虚可致卵细胞印迹基因Snrpn和Peg1/Mest发生异常去甲基化,二至天癸颗粒和右归丸可防止印迹丢失的发生,改善肾虚小鼠的卵裂率、囊胚形成率,从而发挥补肾治疗不孕症作用。

超促排卵和体外成熟人卵子中印迹基因H19和PEG1的甲基化状态

目的:探讨超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)和未成熟卵母细胞体外培养(in vitro maturation,IVM)是否引起印迹基因甲基化异常。方法:采用单细胞低熔点琼脂糖包埋亚硫酸氢钠处理、半巢式PCR扩增及克隆测序的方法,检测人单个卵子印迹基因H19和PEG1的甲基化状态。结果:共检测分析了94个(58个来自COH,36个来自IVM)处于不同成熟阶段的卵子中H19基因和PEG1(MEST)基因的甲基化状态,分别有6个COH卵子和2个IVM卵子出现H19或PEG1的1～2个CpG位点甲基化异常。绝大多数COH卵子的H19(91.4%,53/58)和PEG1(91.7%,33/36)的所有检测CpG位点甲基化正常,H19和PEG1所有CpG位点的甲基化率分别为0.8%(8/1044)和99.4%(859/864)。结论:经超促排卵和体外成熟培养卵子的印迹基因H19和PEG1甲基化状态是正常的,1～2个CpG位点甲基化异常的卵子是否导致胚胎的基因印迹异常需进一步研究。

PGE_1控制性降压对脑动脉瘤夹闭术病人血浆皮质醇醛固酮β_2微球蛋白血糖变化的影响

目的与方法：２０例脑动脉瘤夹闭术病人，采用神经安定复合异氟醚麻醉，随机分为ＰＧＥ１组和对照组，每组１０例。ＰＧＥ１组行控制性降压，输注０．０００２％ＰＧＥ１使平均动脉压降低２０％～３０％，对照组不采取降压措施，观察麻醉过程中病人血浆皮质醇、醛固酮、β２微球蛋白（β２－ＭＧ）、血糖的变化。结果与结论：两组病人上述各项指标均升高，但两组间相应时点变化比较无显著差异（Ｐ＞０．０５），表明ＰＧＥ１控制性降压对脑动脉瘤夹闭术病人血浆皮质醇、醛固酮、β２－ＭＧ、血糖的变化没有影响。

脂微球前列腺素E1与丹参对2型糖尿病患者NO、ET的对比研究

目的:比较2型糖尿病(type 2 Diabetics,T2DM)患者应用脂微球前列腺素E1(Lipo PGE1)和丹参后其血浆一氧化氮(nitric oxide,NO)、内皮素(endothelin,ET)的变化。方法:66例糖尿病患者,按1999年WHO糖尿病诊断标准确认,随机分为两组:Lipo PGE1组和丹参组。两组患者临床检查均无严重心、肾、脑等并发症。ET 1 以放射免疫法测定,NO以硝酸还原法测定。结果:(1)两组T2DM患者的年龄、病程、体重指数(BMI)、收缩压、舒张压、胆固醇、甘油三酯、尿素氮、肌酐、空腹及餐后2h胰岛素、C 肽值均无显著差异。(2)两组T2DM患者用药前空腹及餐后2h血糖无显著差异,治疗2 周后两组空腹及餐后2h血糖亦无显著差异,但均比用降糖药前明显下降,有显著差异。治疗前,PEG1 组无论空腹还是餐后2 hET值均高于丹参组,而NO水平低于丹参组。经2周治疗后,丹参组ET值仅见餐后2 h有显著下降, P<0.05,余未见变化;而PEG1 组不论空腹,还是餐后2hET值均见有极显著下降, P均<0.001,且NO水平也显著升高,P均<0.05。结论:两组T2DM患者在降糖幅度相当的前提下,应用Lipo PGE1在糖尿病患者中能降低ET水平,提高NO浓度,丹参针剂未见相同结果,提示该药物不仅能直接扩张血管作用,而且还能调节ET及NO水平的间接效果,Lipo PGE1明显优于丹参针剂。

体外补救成熟法对人卵细胞印记基因DNA甲基化的影响

目的:探讨体外补救成熟的人卵细胞印记基因H19和PEG1的DNA甲基化状态,初步评价卵细胞体外补救成熟的表观遗传学风险。方法:选择卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)助孕治疗的不孕症患者54例,长方案超排卵取卵术后收集240个未成熟MⅠ期卵细胞,经体外补救培养24 h后,获得130个成熟MⅡ期卵细胞,采用结合重亚硫酸盐限制性酶分析法(COBRA)检测其中62个卵细胞H19基因和68个卵细胞PEG1基因的DNA甲基化状态。结果:23个卵细胞H19基因经bisulfite-PCR扩增成功,成功率37.0%(23/62),其中5个卵细胞(21.7%,5/23)出现H19异常高甲基化模式;30个卵细胞经bisulfite-PCR扩增成功,成功率44.1%(30/68),其中1个卵细胞(3.3%,1/30)出现PEG1异常低甲基化模式。结论:使用体外补救成熟卵细胞可能增加DNA甲基化缺陷的风险。

前列地尔脂微球注射液临床超说明书用药干预分析

目的调查第二军医大学附属长海医院前列地尔脂微球注射液的应用情况,分析其临床应用合理性,评价医院行政干预在促进临床合理用药中的作用。方法以2016年7月28日医院行政干预为界限,对2016年7月和8月共计1 351例使用本品的患者,统计其所在科室、临床诊断、前列地尔的用法用量。结果本品在医院各科室广泛应用,65.41%的病例出现了超适应证用药的情况,99.85%的病例存在超说明书用法用量的情况,0.39%的病例出现了禁忌证用药的情况,医院行政干预前后结果近乎一致。结论超说明书应用本品的情况在临床广泛存在,应当引起临床重视,仅实施行政干预的效果较差。

前列腺素E1尿激酶在急性脑梗死的临床探讨

目的研究探索一种联合用药方法,对急性脑梗死患者进行静脉给药的临床疗效观察。方法将急性脑梗死患者,随机分为两组进行用药观察,联合用药组(46例)和常规单一用药组(37例)进行临床治疗及结论分析。两组年龄,性别,发病及用药时间均无差异。结果联合用药组及常规用药组,两组治疗的临床疗效均达95%,联合组的显著效果明显高于常规组的显著效果。两组结果相比,有显著差异(p<0.05),两组均未发生大量脑出血及严重其它部位出血。结论静脉内联用uk及PGE1对急性脑梗死患者能降低病死率、致残率,可减少并发症的发生率,此治疗方法是一种疗效高、副作用小且安全可靠的治疗方法。